补阳还五汤合参芪地黄汤化裁调控VEGF-C/VEGFR3通路抑制淋巴管新生对糖尿病肾病小鼠的保护作用

目的基于调控VEGF-C/VEGFR3通路抑制淋巴管新生探讨补阳还五汤合参芪地黄汤化裁对糖尿病肾病(DKD)小鼠的保护作用及机制。方法将24只雄性db/db小鼠随机分为模型组、中药组(补阳还五汤合参芪地黄汤化裁,生药量24.44 g·kg-1)和西药组(厄贝沙坦,13.5 mg·kg-1),每组8只,另外取8只db/m小鼠作为对照组。灌胃给药,每日1次,连续12周。检测小鼠血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、尿白蛋白/肌酐比值(ACR)及肾脏指数;采用HE、Masson染色法观察肾脏组织病理变化;免疫组化法检测肾脏组织纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、波形蛋白(Vimentin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)、淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)、平足蛋白(PDPN)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的表达;Western Blot法检测肾脏组织ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达;Real-time PCR法检测肾脏组织FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1βmRNA表达。结果与对照组比较,模型组小鼠的血清FBG、TG、TC、ACR水平及肾脏指数均明显升高(P<0.05);肾小球肥大,系膜外基质增加,基底膜增厚,囊腔变窄,肾小管上皮细胞变性、坏死,间质有大量炎性细胞浸润,肾小管萎缩,纤维化水平明显升高(P<0.05);肾间质中FN、ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达,胞质中VEGF-C蛋白表达及肾小管毛细血管周围VEGFR3、PDPN蛋白表达均明显上调(P<0.05);肾脏组织中ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达均明显上调(P<0.05);肾脏组织中FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1βmRNA表达水平均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,中药组小鼠的血清TG、TC、ACR水平均明显降低(P<0.05);肾脏组织损伤有不同程度好转,炎性细胞浸润有一定程度减轻,纤维化水平明显降低(P<0.05);肾间质中FN、ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达,胞质中VEGF-C蛋白表达及肾小管毛细血管周围VEGFR3、PDPN蛋白表达均明显下调(P<0.05);肾脏组织中ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达均明显下调(P<0.05);肾脏组织中FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1βmRNA表达水平均明显降低(P<0.05)。结论补阳还五汤合参芪地黄汤化裁可降低DKD小鼠肾脏组织炎症及纤维化水平,其机制可能与调控VEGF-C/VEGFR3通路抑制淋巴管新生有关。

补阳还五汤合参芪地黄汤化裁对糖尿病肾病小鼠肾小管间质纤维化的作用及机制研究

目的研究补阳还五汤合参芪地黄汤化裁对糖尿病肾病小鼠肾小管间质纤维化的作用及机制。方法取8只db/m小鼠作为对照组,16只db/db小鼠随机分为模型组和中药组,给予补阳还五汤合参芪地黄汤化裁干预12周,留尿,检测各组小鼠尿白蛋白/肌酐比值(albumin/creatinineratio,ACR);取肾组织,进行苏木素-伊红(HE)、高碘酸希夫(PAS)和天狼猩红(Pmicrosirius-Red)染色,检测肾组织病理损伤和纤维化程度;采用免疫组化法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscle actin,α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达;采用qRT-PCR法检测肾组织Ⅲ型胶原(collagen-Ⅲ,Col-Ⅲ)和纤黏蛋白(fibronectin,FN) mRNA表达;采用Westemblotting法检测肾组织Col-Ⅲ、FN、α-SMA、E-cadherin及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达。结果与模型组比较,中药组小鼠ACR水平明显降低(P<0.05);肾脏病理损伤和纤维化减轻;α-SMA蛋白在肾间质的表达减少,E-cadherin蛋白在肾小管上皮细胞的表达增加;肾组织Col-Ⅲ和FNmRNA表达水平明显降低(P<0.05);肾组织Col-Ⅲ、FN、α-SMA、Wnt4、磷酸化糖原合酶激酶3β(phosphorylated glycogen synthase kinase 3β,p-GSK3β)、β-catenin和转化生长因子-β1 (thansforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)蛋白表达水平显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论补阳还五汤合参芪地黄汤化裁可以减轻糖尿病肾病小鼠的肾组织病理损伤,减轻肾小管间质纤维化程度,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路及其介导的肾小管上皮细胞向间充质转化有关。