Tie2＋单核细胞在胃癌中的表达以及对裸鼠移植瘤微血管生成的作用

目的探讨Tie2+单核细胞(Tie2-expressing monocytes,TEMs)在人胃癌间质组织中的表达情况和TEMs在裸鼠的胃癌细胞移植瘤中对肿瘤增殖以及肿瘤的微血管生成的作用。方法免疫组化检测不同分期的人胃癌间质组织中Tie2+单核细胞表达;分离并培养人外周血的单核细胞,经流式分选出Tie+单核和Tie2-单核细胞,分别将人胃癌细胞(SGC7901)与Tie2+单核细胞按1:20、1:200的比例混匀、Tie2-单核细胞与人胃癌细胞按1:20比例混匀注入裸鼠皮下,单独的胃癌细胞注入裸鼠皮下作为对照,观察移植肿瘤的成瘤时间以及大小;免疫组化检测并比较各组移植瘤中CD34的表达。结果 TEMs在胃癌间质中的阳性表达率为67.3%,在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的阳性率分别为0%、50.0%、78.6%、100%。其浸润的程度与胃癌TNM分期相关(P<0.05);在裸鼠移植瘤中,1:20的Tie2+单核细胞组成瘤时间快,肿瘤体积以及瘤体内CD34的表达明显大于其余浓度的Tie2+单核细胞组、Tie2-单核细胞组和单独的胃癌细胞组(P<0.05)。结论 TEMs能促进肿瘤的增殖,其促进肿瘤增殖的作用与促进肿瘤的微血管生成有关。TEMs在胃癌间质中的浸润与肿瘤分期呈正相关;胃癌组织中TEMs的浸润是不良预后的重要指标。

Tie2基因过表达对单核细胞功能的影响

目的:探讨过表达Tie2基因后单核细胞功能的变化及对内皮细胞增殖、迁移、小管形成的影响,初步研究TEMs(Tie2-expressing monocytes)促血管生成的机制。方法:建立过表达Tie2单核细胞系,荧光倒置显微镜下观察U937细胞的感染情况,RT-PCR、Western blot分别检测感染后U937细胞Tie2 mRNA和蛋白水平的表达情况;实时定量PCR检测感染后空载组NC-L.V-U937和实验组TEK-L.V-U937细胞mRNA水平表达的差异;ELISA检测NC-L.V-U937和TEK-L.V-U937细胞上清中细胞因子分泌的异同;增殖、迁移、小管形成实验分别观察TEK-L.V-U937细胞对内皮细胞增殖、迁移、小管形成的影响。结果:首次建立了转染Tie2基因的单核细胞系;RT-PCR及Western blot结果显示,与空载组NC-L.V-U937细胞相比,实验组TEK-L.V-U937细胞在mRNA和蛋白水平Tie2的表达显著增加,而NC-L.V-U937细胞几乎不表达Tie2;Real time-PCR结果显示,TEK-L.V-U937细胞IL-8的表达较空载组显著增加(P<0.01),IL-10的表达也有所上升(P>0.05);与空载组相比,TEK-L.V-U937细胞IL-8蛋白分泌明显增多(P<0.05),VEGFA蛋白分泌量也有上升的趋势(P>0.05),但两组细胞几乎都无EGF的分泌;TEK-L.V-U937的条件培养基刺激内皮细胞形成的小管数较多,IL-8中和抗体能抑制内皮小管的形成;NC-L.V-U937、TEK-L.V-U937饥饿培养上清对内皮细胞的迁移作用不明显(P>0.05);增殖的第3天,与空载组相比,TEK-L.VU937的条件培养基能显著地引起内皮细胞的增殖(P<0.05)。结论:过表达Tie2基因后显著地增加U937单核细胞系IL-8的表达,并进一步促进了内皮细胞的增殖与小管形成。

表达Tie2单核巨噬细胞在肿瘤进展中的作用

骨髓来源的髓系细胞在肿瘤的转移及血管生成的过程中发挥重要作用,其中一类表达Tie2的单核/巨噬细胞（Tie2＋monocyte/macrophage,TEM）是最近被发现,并引起关注的髓系细胞。在小鼠、人外周血和多个实体肿瘤组织等部位发现了TEMs的存在依据,并且通过与血管内皮细胞的相互作用,参与调节肿瘤微环境中血管的生成。

Tie2阳性表达的单核细胞在肿瘤血管生成中的作用

肿瘤的转移和复发与肿瘤血管的生成密切相关，肿瘤新生血管的发生机制以及相关的抗肿瘤治疗策略已成为近期的研究热点。何胜利等[1]研究表明，Tie2／血管生成素（angiopoietin，Ang）体系在肿瘤血管生成中发挥重要作用。Ang是一种分泌型的生长因子家族，该家族主要由4种因子组成，其中Ang-1、Ang-2和它们共同的受体Tie2与血管生成密切相关。

霉酚酸酯对2型糖尿病大鼠肾脏单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的:探讨霉酚酸酯对2型糖尿病大鼠肾脏单核细胞趋化蛋白- 1(monocytechemoattractantprotein - 1,MCP - 1)表达的影响。方法:将实验动物分为正常对照组、糖尿病组及霉酚酸酯治疗组。霉酚酸酯治疗组给予霉酚酸酯(mycophenolatemofetil,MMF ;15mg·kg-1·d-1)治疗。13周后检测各组大鼠尿白蛋白排泄率、内生肌酐清除率、血糖、血脂、血胰岛素;HE及PAS染色观察肾脏病理改变;用免疫组化方法检测肾组织中MCP - 1及单核/巨噬细胞(ED - 1)的表达。结果:MMF可以减少2型糖尿病大鼠2 4h尿蛋白排泄率及内生肌酐清除率,使大鼠肾脏组织中MCP - 1和ED - 1的表达降低,并改变肾脏病理结构。结论:霉酚酸酯对2型糖尿病大鼠肾脏有部分保护作用,其机制可能通过部分下调2型糖尿病大鼠肾脏MCP - 1的表达来实现的。

急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞环氧合酶2mRNA表达及阿托伐他汀的作用

为检测急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞中环氧合酶 2表达及阿托伐他汀的影响 ,探讨环氧合酶 2在动脉粥样硬化中的作用和他汀类药物的抗炎机制。采用逆转录聚合酶链反应半定量的方法 ,观察 4 2例急性冠状动脉综合征患者和 18例健康自愿者外周血单核细胞环氧合酶 2的表达 ,同时观察急性冠状动脉综合征组单核细胞在不同浓度阿托伐他汀 (0～ 10 μmol L)干预 2 4h后环氧合酶 2表达的变化。结果发现 ,急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞中环氧合酶 2的表达明显高于健康对照组 (1.6 4± 0 .2 5比 0 .5 9± 0 .2 1,P <0 .0 5 )。阿托伐他汀在体外明显抑制急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞环氧合酶 2的表达 (P <0 .0 5 ) ,且呈浓度依赖性。结果提示 ,环氧合酶 2在动脉粥样硬化炎症中起作用 ,阿托伐他汀明显降低急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞环氧合酶 2的表达 ,环氧合酶 2可能是阿托伐他汀发挥降脂外抗炎作用的靶点之一。

1-(5-异喹啉磺酰基)-2-甲基哌嗪(H-7)对肺纤维化大鼠肺单核细胞趋化蛋白-1 mRNA表达的影响

研究蛋白激酶C(PKC)抑制剂 1 (5 异喹啉磺酰基 ) 2 甲基哌嗪 (H 7)对肺纤维化大鼠单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)mRNA表达的影响 ,为临床治疗肺纤维化提供理论基础 .博来霉素致大鼠肺纤维化动物模型 ,腹腔注射H 7后 ,定量RT PCR方法检测其对肺组织MCP 1mRNA表达的影响 ;测定实验组和对照组肺组织匀浆内羟脯氨酸的含量 ,观察肺组织病理学变化并计数单核细胞 .结果发现 ,H 7能显著抑制大鼠肺纤维化组织MCP 1mRNA表达和单核细胞的聚集以及羟脯氨酸的含量 .结果表明 ,H 7通过抑制肺组织MCP 1mRNA的表达 ,对博来霉素致肺纤维化有明显的防治作用 .

2型糖尿病患者外周血单核细胞中血红素氧化酶-1表达及其与颈动脉内膜早期粥样斑块厚度的关系

[论文特点介绍]本研究用RT-PCR技术探讨2型糖尿病（T2DM）患者外周血单核细胞中血红素氧化酶（HO）-1的表达情况，同时评价HO-1表达与颈动脉内膜中层厚度（IMT）的相关性，从临床角度评价氧化应激在糖尿病及其并发症中的作用。

人类肿瘤中Tie2阳性单核巨噬细胞研究进展

Tie2阳性单核巨噬细胞(TEMs)是一类表达酪氨酸激酶受体Tie2的单核细胞或巨噬细胞,在人类和鼠类中均有发现,可存在于外周血和组织中,参与肿瘤血管生成、淋巴管生成和免疫抑制等肿瘤微环境的形成。现有研究发现TEMs对于多种肿瘤具有潜在的临床诊断及预后指导意义,有望为肿瘤治疗提供新的靶向策略,本文就TEMs在肿瘤中的研究进展作一综述。

重组人内皮单核细胞活化多肽Ⅱ原对Saos-2细胞基因的表达调控

目的:将重组人内皮单核细胞活化多肽Ⅱ原(pro-EMAPⅡ)作用于Saos-2细胞,研究后者相关基因表达水平的变化。方法:在大肠杆菌中表达重组人pro-EMAPⅡ,并纯化获得目的蛋白;利用基因芯片技术研究重组人pro-EMAPⅡ对Saos-2细胞基因的表达调控。结果:获得重组人pro-EMAPⅡ;基因表达芯片分析表明,重组人pro-EMAPⅡ作用于Saos-2细胞后,后者有39个基因表达上调,29个基因表达下调,在这68个基因中有12个差异基因参与多个信号通路。结论:重组人pro-EMAPⅡ作用于Saos-2细胞,使其多个基因表达水平发生改变,有助于揭示pro-EMAPⅡ的调控机制及信号通路。

人白细胞介素-29cDNA克隆及其在大肠杆菌系统的表达

目的:克隆人细胞因子IL-29全长cDNA及其在大肠杆菌中表达,制备抗IL-29多克隆抗体。方法:分离外周血单核细胞;vsv感染后,提取总RNA,通过一步RT-PCR获得IL-29全长cDNA。DNA测序正确后,将IL-29cDNA的编码框序列构建到原核表达载体pET28a(+)中。卡那霉素平板筛选及PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增、转化大肠杆菌进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE、Westernblotting鉴定,亲和层析分离纯化得到Mr为23000组氨酸标签重组人IL-29融合蛋白。纯化的IL-29免疫家兔制备抗IL-29多克隆抗体。结果:成功获得人IL-29全长cDNA,并以包涵体形式表达于大肠杆菌中。免疫家兔后获得特异抗IL-29的多克隆抗体。结论:获得rhIL-29细胞因子及其多克隆抗体,为其进一步研究及应用奠定基础。

循环可溶性生长刺激表达基因2蛋白水平与白细胞介素1受体样分子1基因多态性的相关性分析

目的探讨循环可溶性生长刺激表达基因2蛋白(s ST2)与白细胞介素1受体样分子1(IL1RL1)基因多态性的关系。方法利用国际千人基因组项目筛选出完整的IL1RL1基因和标签单核苷酸多态性(SNP),然后提取2016年10月至2017年4月于首都医科大学附属北京安贞医院进行体检的350例受试者的全基因组DNA,聚合酶链反应扩增后,采用MALDI-TOF质谱仪分析,检测结果使用TYPER 4.0软件获取原始数据及基因分型图。分析s ST2水平与IL1RL1基因标签SNP的相关性。结果所有受试者s ST2水平为6.45(4.58,9.38)μg/L。IL1RL1基因共筛选出5个标签SNP,分别为rs12712135、rs1921622、rs11123923、rs3821204、rs4988958,均与s ST2水平相关(均P<0.05),其中rs12712135位点与s ST2水平相关性最显著。调整年龄、性别、体重指数、吸烟、基础疾病后,5个SNP仍与高s ST2水平(≥6.45μg/L)风险独立相关(均P<0.05)。结论循环s ST2水平受IL1RL1基因遗传变异的影响。

重型肝炎患者fgl2凝血酶原酶基因的表达

目的 探讨重型肝炎患者外周血单个核细胞 (PBMNC)中fgl2凝血酶原酶mRNA的变化及其意义。方法 选择重型肝炎患者 18例 ,非重型急性肝炎 15例、非重型慢性肝炎 14例 ,应用RT PCR方法对其外周血fgl2凝血酶原酶mRNA进行半定量检测。结果 重型肝炎组外周血fgl2凝血酶原酶mRNA与 β actinmRNA表达灰度值比值为 1 55±0 2 3 ,明显高于非重型急性肝炎组 (1 3 4± 0 18)、非重型慢性肝炎组 (1 2 9± 0 16)及正常对照组 (1 3 1± 0 12 ) ,均为P <0 0 1。结论 重型肝炎患者的肝坏死可能与fgl2凝血酶原酶的高表达有关 。

血管内皮细胞特异表达Cre重组酶转基因小鼠的建立(英文)

血管内皮细胞参与血管形成、血管稳态维持、血栓形成、炎症和血管重建等生理和病理过程。为了便于通过Cre-LoxP系统研究相关基因在血管内皮细胞中的功能,创建了Tie2-Cre转基因小鼠,利用Tie2基因的启动子驱动Cre重组酶基因在血管内皮细胞中表达。经基因组PCR和SouthernBlot鉴定有6只小鼠在基因组上整合有Cre基因,整合率为11%。为了验证Cre重组酶的剪切活性和表达组织分布,我们将Tie2-Cre转基因小鼠分别与Smad4条件基因打靶小鼠和报告小鼠ROSA26交配。Tie2-Cre;Smad4Co/+小鼠的多个组织的基因组DNA的PCR结果显示,Cre重组酶在所有包含血管内皮细胞的组织中表达并能介导LoxP间的重组。Tie2-Cre;ROSA26双转基因胚胎LacZ染色结果显示,Cre重组酶在所有被检测组织的血管内皮细胞中特异性表达。因此,Tie2-Cre转基因小鼠可作血管内皮细胞谱系分析和在血管内皮细胞进行条件基因打靶的理想工具小鼠。

核仁素在不同细胞膜表面的表达

目的探讨核仁素(又称C23)蛋白在不同细胞膜表面的表达。方法采用活细胞间接免疫荧光、活细胞流式细胞术以及细胞膜蛋白分离结合免疫印迹等方法检测核仁素蛋白在大鼠H9C2胚胎心肌细胞、小鼠C2C12肌原细胞、小鼠RAW264.7巨噬细胞、人HeLa宫颈癌细胞及人THP-1单核细胞等细胞膜表面的表达。结果间接免疫荧光检测发现核仁素在上述细胞膜上呈散点状分布,与已知的细胞膜蛋白Fas的分布一致;流式细胞术表明核仁素抗体检测使各种细胞发出的荧光量明显高于正常IgG检测时所发出的荧光量,其中THP1细胞中各种荧光量均值分别为:核仁素抗体16.74,Fas抗体11.14,IgG为8.58;HeLa细胞中荧光量均值为:核仁素抗体16.84,Fas抗体10.39,IgG为9.01;通过提取上述五种细胞的膜蛋白,采用免疫印迹检测发现核仁素和Fas均出现在细胞膜蛋白组分中。结论核仁素可在多种细胞膜表面表达,提示这种膜定位核仁素可能作为某些配体的受体介导信号转导,参与细胞功能的调节,为进一步深入研究核仁素的功能提供了新的思路。

普伐他汀抑制重组人CD40配体诱导的U937诱导型细胞环氧合酶的表达

目的 探讨重组人CD40 配体(rhCD40L)对培养的人单核细胞(U937)表达诱导型环氧合酶(COX 2)的作用和普伐他汀对其的影响。方法 体外培养U937 细胞,分别以浓度为0. 05、0. 10、0. 20、0.40μg/ml的rhCD40L刺激24 h;以0. 40μg/ml的rhCD40L 分别刺激3、6、12、24 h。再将0. 40μg/ml 的rhCD40L与终浓度分别为1×10-2、1×10-3、1×10-4 mmol/L的普伐他汀共同刺激24 h。采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测COX 2 mRNA的表达。结果 0.4μg/ml的rhCD40L刺激后3 h,可诱导COX 2 mRNA表达,随着rhCD40L浓度和作用时间增加,COX 2 mRNA表达明显增加(P<0.01),呈时效和量效的关系。0.4μg/ml的rhCD40L与普伐他汀共同刺激24 h后,COX 2 的表达明显被抑制。结论 rhCD40L可以时间和浓度依赖的方式诱导COX 2的表达,普伐他汀可抑制此作用。

COX-2在系统性红斑狼疮病人PBMC中的表达及意义

目的 检测环氧全酶 -2 (Cyclooxygenase -2 ,COX -2 )蛋白在系统性红斑狼疮 (Systemiclupuserythematosus ,SLE)患者外周血单核细胞 (Peripheralbloodmonocytes ,PBMC)中的表达情况。探讨COX -2蛋白表达水平与SLE病情活动程度之间的关系。 方法 从外周血中分离PBMC后涂片 ,用免疫组化染色的方法测定COX -2蛋白的表达情况。 结果 COX -2蛋白在SLE实验组呈高表达状态 ,与SLE疾病的活动性之间呈正相关。 结论 COX -2的表达与SLE的发病有关 。

Effects of selenium on peripheral blood mononuclear cell membrane fluidity,interleukin-2 production and interleukin-2 receptor expression in patients with chronic hepatitis

AIM To study the effect of selenium on peripheral blood mononuclear cell (PBMC) membrane fluidity and immune function in patients with chronic hepatitis.METHODS: PBMCs were pretreated with selenium (1.156x 10.7 mol/L) for 6 h in vitro or extracted directly from patients after administration of selenium-yeast continuously for 8-12 wk (200 pg/d), and then exposed to Con-A for 48 h. The membrane fluidity, interleukin-2 (IL-2) production and interleukin-2 receptor (IL-2R) expression in PBMCs and malondialdehyde (MDA) concentration in medium and lipid peroxide (LPO) in plasma were determined.RESULTS: The PBMC membrane fluidity, IL-2 production and IL-2R expression in patients with chronic hepatitis were significantly lower than those in healthy blood donators (particle adhesive degree R, 0.17±0.01 vs 0.14±0.01,P<0.01; IL-2, 40.26±9.55 vs72.96±11.36, P<0.01, IL-2R,31.05±5.09 vs 60.58±10.56, P<0.01), and the MDA concentration in medium in patients with chronic hepatitis was significantly higher than that in healthy blood donators (1.44±0.08 vs0.93±0.08, P<0.01). Both in vitro and in vivo administration of selenium could reverse the above parameters.CONCLUSION: Supplement of selenium can suppress lipid peroxidation, and improve PBMC membrane fluidity and immune function in patients with chronic hepatitis.

卵巢上皮性癌中表达Tie2单核巨噬细胞的研究

目的 探讨卵巢上皮性癌(EOC,epithelial ovarian cancer)患者外周血和癌旁腹膜中表达Tie2单核巨噬细胞(Tie2-expressing moncytes/macrophages,TEMs)的分布情况。方法 2011年7月至2012年12月于同济大学附属第一妇婴保健院,分离正常成年女性、卵巢良性肿瘤及EOC患者外周血单核细胞;RT-PCR检测Tie2 mRNA的表达情况,流式细胞术检测Tie2^+细胞占CD14^+外周血单个核细胞的比例;免疫荧光技术分析TEMs在良性卵巢肿瘤、EOC原位灶及癌旁腹膜中的浸润情况。结果 正常成年女性、良性卵巢肿瘤及EOC患者外周血单核细胞在mRNA和蛋白水平均表达Tie2;良性卵巢肿瘤及EOC患者外周血TEMs的比例分别为(9.41±5.93)%、(1.82%~23.45%)和(7.99±3.90)%(1.71%~15.03%),较正常对照组(4.13±2.86)%(1.18%~9.56%)比例增加,差异有统计学意义(P<0.05);形态学研究证实EOC患者癌旁腹膜中浸润着数量丰富的TEMs(15.17±8.84)%(2.27%~25.81%),而良性卵巢肿瘤患者腹膜中几乎没有TEMs的浸润。结论 EOC患者外周血、原位灶及癌旁腹膜组织中存在表达Tie2的单核巨噬细胞;TEMs比例在EOC患者外周血、腹膜局部显著上升,有利于肿瘤微环境中血管的生成,从而参与调控卵巢癌的进展。