西尼罗河病毒病的研究进展

西尼罗河病毒病是由西尼罗河病毒(West Nile Virus,WNV)引起的一种人畜共患传染病,病原是一种虫媒病毒,可导致西尼罗河热和致死性的西尼罗河脑炎。自发现以来,西尼罗河病毒病曾在世界上多个国家暴发,给畜牧业和人类生命安全造成了巨大的危害。我国目前尚无该病的发生,但是防治技术储备是必要的。本文对西尼罗河病毒病的流行病学、病原学、致病机制、临床症状和病理剖检变化、诊断方法和候选疗法进行综述,为西尼罗河病毒病的防控提供资料。

宿主具有Logistic增长的西尼罗河病毒模型动力学形态分析

建立了媒介具有指数出生率以及宿主具有Logistic增长的西尼罗河病毒传染病模型,求出了模型的基本再生数,讨论了平衡点的存在性,即当基本再生数小于1时,系统有两个正平衡点或者没有正平衡点;当基本再生数大于1时,系统存在一个正平衡点或者三个正平衡点.验证了无病平衡点的稳定性.

西尼罗河病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用研究

目的:建立特异、敏感、快速检测西尼罗河病毒(WNV)的SYBR Green实时荧光定量PCR方法。方法:针对西尼罗河病毒囊膜蛋白(E)的保守序列设计引物,建立WNV的实时荧光定量检测方法,并验证该方法的特异性、敏感性以及稳定性。对保存的54例WNV感染者的血清样本进行检测,分析其检测的准确性。结果:建立的SYBR Green实时荧光定量PCR方法对WNV的检测具有高度的特异性,而对日本脑炎病毒(JEV)、圣路易斯脑炎病毒(SLEV)等均无交叉反应,检测的灵敏度可达到100pg。标准曲线具有较好的线性关系,相关系数为0.995,实时荧光定量PCR效率为100%。对54例WNV感染样本进行检测,准确率高达98.15%。结论:实时荧光定量PCR技术检测WNV具有较高的特异性、敏感性和稳定性,可作为临床诊断WNV的手段。

西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ的原核表达及间接ELISA方法的建立

目的建立西尼罗河病毒(West Nile Virus,WNV)抗体检测方法。方法人工合成了WNV NY99株E蛋白结构域Ⅲ(DⅢ)基因序列,构建了重组表达载体PET-28a-DⅢ。结果重组质粒转化BL21宿主菌后诱导表达,SDS-PAGE分析表明,表达产物相对分子量17kD,以包涵体形式存在。对表达产物作变性和复性及纯化处理,Western-blot鉴定结果表明,纯化产物可被WNV血清识别。将纯化重组蛋白包被酶标板,优化间接ELISA反应条件,抗原最佳包被浓度为3.75μg/mL、血清最佳稀释度为1∶1 600、酶标二抗最佳稀释度1∶6 000、阴阳血清临界值为0.148。特异性、敏感性及重复性试验结果表明,本方法特异性强、敏感性高、重复性良好。结论本研究为WNV感染的血清学诊断提供了技术储备。

西尼罗河病毒NS1的克隆、表达及抗原性分析

目的克隆和表达西尼罗河病毒(WNV)非结构蛋白1(NS1),并分析其与登革病毒NS1的抗原交叉反应性。方法合成WNV NS1全基因序列,将NS1全基因克隆到pGEX-5X-3原核表达载体中表达GST-NS1融合蛋白,用4型登革病毒免疫血清及登革病毒NS1单克隆抗体并应用Western Blot方法分析WNV-NS1重组蛋白的抗原性。结果重组质粒pGEX-5X-3-WNV-NS1经IPTG诱导,高效表达GST-NS1融合蛋白,经变性纯化和复性获得可溶性WNV-NS1重组蛋白,经Western Blot证实WNV-NS1重组蛋白可与各型登革病毒免疫小鼠血清及部分4型登革病毒NS1交叉单抗识别。结论成功获得可溶性WNV-NS1重组蛋白,该蛋白与登革病毒NS1具有抗原交叉反应性,其结果为建立西尼罗河病毒的血清学诊断和鉴别诊断奠定了基础。

西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体的制备以及应用分析

目的制备针对西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体,并分析其在临床检测中的应用价值。方法采用原核表达系统表达西尼罗河病毒preM/E融合蛋白,作为抗原,免疫BALB/c小鼠,按常规单克隆抗体技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,采用有限稀释法筛选能稳定分泌抗preM/EⅢ单抗的杂交瘤细胞株。接种杂交瘤细胞于小鼠腹腔,抽取腹水纯化单克隆抗体。采用间接ELISA和Western blotting对抗体特异性和效价进行分析,并对临床样本进行检测。结果获得了1株能稳定分泌preM/EⅢ蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为ME1。纯化后抗体效价为10-6,其亚类为IgG1。ME1单抗能与西尼罗病毒preM/EⅢ蛋白以及西尼罗病毒发生特异性反应,而与日本脑炎病毒(JEV)、圣路易斯脑炎病毒(SLEV)、黄热病毒(YFV)和登革热病毒(DENV)无交叉反应。临床诊断准确率为97.78%。结论 ME1单克隆抗体具有较高的特异性,临床诊断准确性较高,具有临床应用价值。

家禽感染西尼罗河病毒与岗哨鸡群监测的应用

美国一直有用活鸟来监测虫媒病毒传播的传统.在监测圣路易斯脑炎,东方马脑脊髓炎和西方马脑脊髓炎病毒时就使用了活鸟监测.活鸟监测中一般采用两种系统,一种是关在笼子里的岗哨鸡群监测系统;另一种是自由分布的野鸟监测系统.

上海地区几种动物血清中西尼罗河病毒抗体的调查

西尼罗河病毒病是一种外来的新发性的虫媒人兽共患病,近年来已经成为全球公共卫生的新威胁。为了了解上海地区西尼罗河病毒在不同动物中的存在情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对上海市马匹、鸭、动物园珍禽进行西尼罗河病毒的血清学调查。结果显示:上述3种动物均存在不同程度的西尼罗河病毒的抗体,马、珍禽、鸭中的抗体阳性率分别达到67.5%、17.9%和23.3%。本次西尼罗河病毒抗体调查的数据和分析为制定科学、合理的防控对策提供了技术依据。

在昆虫细胞中表达西尼罗河病毒prM+E蛋白

采用PCR技术扩增prM+E基因,将其插入到供体质粒pFast-Bac1中得到重组质粒Pfast-Bac1-W-PE,之后转化大肠杆菌DH10-Bac,构建包含西尼罗河病毒prM+E基因的重组杆状病毒,然后感染正常的sf9细胞,收集感染不同时间段的细胞及上层培养基。结果表明:在感染后的第1天目的基因就得到了转录,同时有少量的重组杆状病毒释放到培养基中;SDS-PAGE和Western-Blot检测结果显示,在43.0ku与66.0ku条带之间,感染细胞裂解液较正常细胞的裂解液多出一条带,该蛋白为WNV完整的E蛋白,而且这一差异蛋白能与WNV兔多抗反应。

西尼罗河病毒和西尼罗河病毒性脑炎

西尼罗河病毒(West Nile virus，WNV)于1937年最先在乌干达的西尼罗河地区发现，当时所引发的传染性疾病称为西尼罗河热(West Nile fever)，在临床表现上类似于登革热的一类疾病，在1999年以前这种虫媒病毒只在东半球发现过，主要分布在非洲和中东地区。