西施舌(Coelomactra antiquata)群体遗传多样性与分化的研究

采用不连续垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对广西北海、福建漳港和江苏启东3个西施舌自然群体的7个等位酶12个位点进行检测分析。结果表明,西施舌群体的遗传多样性较高,平均每位点等位基因数目(A)范围为1.5833—2.0000、平均每位点有效等位基因数目(Ae)范围为1.2850—1.5373、多态位点百分数(P)为33.33%、观察杂合度(Ho)为0.2389—0.3083、期望杂合度(He)为0.1496—0.2041之间。西施舌群体间有一定的遗传分化,遗传分化系数(FST)为0.0719,福建漳港群体与广西北海群体之间的FST为0.0413,但福建漳港群体和广西北海群体与江苏启东群体之间的FST为0.0505。

漳州西施舌线粒体基因组全序列:腔蛤蜊属(Coelomactra)存在新种的证据

利用长PCR扩增漳州西施舌线粒体DNA(ZZ-mtDNA),用引物步移法测序,获得线粒体基因组DNA全序列,研究其基因组特点。结合双壳类49个物种线粒体全基因组,分析基因间核苷酸和蛋白质氨基酸序列的差异,构建系统进化树,探讨漳州西施舌系统演化地位。研究结果表明:漳州西施舌线粒体基因组DNA全长17 199bp,A+T含量为64.2%,编码36个基因,其中12个蛋白质编码基因,22个转运RNA基因(tRNAs),2个核糖体RNA基因(lrRNA和srRNA),全部基因均位于重链上,tRNASer为单拷贝,tRNAMet为双拷贝;非编码区占10.9%(1 882bp/17 199bp),其中,主非编码区为882bp,与RZ-mtDNA主非编码区差异明显,另有一个较大(400bp)的非编码区为漳州西施舌特异性非编码区;以双壳纲帘蛤目文蛤属3种贝类、贻贝目贻贝属4种贝类、珍珠贝目牡蛎科的6种贝类为参照,对编码基因的核苷酸序列和蛋白质氨基酸序列进行差异分析显示,漳州西施舌与日照西施舌达到了种间差异水平。线粒体基因组编码的基因、tRNA组成、非编码区均揭示漳州西施舌是腔蛤蜊属的一个新种。

固定化海洋微藻在西施舌(Coelomactra antiquata)人工育苗中的应用

采用海藻酸钠固定化培养6株海洋微藻,并将微藻藻珠引入西施舌幼贝育苗水体混养,通过测定水体中氨氮和亚硝酸氮质量浓度的变化,测量幼贝的生长量,研究微藻藻珠对西施舌育苗水体水质的调控作用以及对西施舌幼贝成活率与生长的影响.结果表明:西施舌幼贝混养水体中,氨氮质量浓度下降了74.7%,亚硝酸氮质量浓度下降了97.7%,与对照组相比,混养促进了幼贝的生长,提高了幼贝的成活率,生长量与对照组相比增加了84.9%.

湛江沿海西施舌性腺周年变化的组织学观察

[目的]研究湛江沿海已达性成熟年龄的西施舌性腺周年变化。[方法]通过组织学切片和显微观察,对湛江沿海达性成熟年龄的西施舌性腺进行了周年变化研究。[结果]以滤泡的发育程度、生殖细胞发育状态及其在滤泡中数量的多少为标准,对西施舌性腺的组织学观察发现,卵巢及精巢发育过程均可分为增殖期、生长期、成熟期、排放期和休止期5个时期。卵细胞的发生及其发育时期分为卵原细胞期、生长初期、生长中期、生长后期以及成熟期,精子的发生分别经历了精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和精子5个时期。根据肥满度和相对重量的周年变化规律并结合性腺组织切片观察结果,湛江地区的西施舌性腺发育为一年有2~3个排放期。该地区西施舌肥满度和相对总重最低值都出现在12月,为26.79%和25.54%;最高值出现在9月和7月,分别为46.16%和49.42%。[结论]西施舌雌雄性腺发育基本同步,雄性发育略快。

盐度对西施舌Coelomactra antiquata（Spengler）幼虫和贝苗生长发育的影响

本文运用生物统计法确定西施舌幼虫和贝苗的适宜盐度范围，结果表明。Ｄ形幼虫、壳顶幼虫和贝苗对盐度的耐受力不同。Ｄ形幼虫生长的适盐范围为１７．２７～２７．９０‰，且生长和存活的最适盐度是１７．２７～１９．９３‰；壳顶幼虫生长的适盐范围向低盐度延伸，为１３．２９～２７．９０‰，生长和存活的最适盐度为１９．９３‰。平均壳长２．９ｍｍ的贝苗存活适盐范围向高盐度延伸，为１３．２９～３５．８７‰，其中２７．９０‰是贝苗生长和存活的最适盐度。

西施舌(Coelomactra antiquata)幼虫附着变态及胚后发育的研究

在1999-2011年间,为了充实西施舌（Coelomactra antiquate）幼虫附着变态生物学理论基础和提高育苗成苗率,采取显微连续观察和活体显微摄影方法,对西施舌的幼虫发育各阶段的形态特征、附着变态及胚后发育的全过程等进行研究。结果表明,西施舌的直线铰合幼虫出现前闭壳肌和3对面盘收缩肌。壳顶幼虫时期开始生成后闭壳肌。足呈舌状,足神经节上方有一对平衡器,面盘中央具顶鞭毛朿。后期壳顶幼虫出现足丝腺、管状内鳃丝。匍匐幼虫足呈棒状,匍匐活动频繁,足丝腺发达,内鳃丝2~3对。面盘萎缩,顶鞭毛朿脱落,开始分泌足丝附着;次生壳生成;器官移位,唇瓣、口、内鳃相连接,以鳃滤食为西施舌幼虫变态的主要生物学标志。初期稚贝唇瓣二指形,内鳃丝2~4对。初期幼贝唇瓣三角形,眼点消失,外鳃丝生成,除性腺外,内部器官发育齐全。此项研究,对于进行西施舌幼虫的诱导附着及完善其产业化育苗工艺都具有重要意义。

西施舌(Coelomactra antiguata)生殖腺发育生物学零度和有效积温的初步研究

通过室内调温饲养西施舌、观测水温及精、卵排放 ,根据K =H(T -t)有效积温公式 ,利用线性函数规律 ,探讨长乐沿海西施舌生殖腺发育生物学零度。结果表明 :西施舌性腺发育的生物学零度为 1 3℃ ,生殖腺发育有效积温为 6 6 5℃。

西施舌Coelomactra antiquata(Spengler)诱导产卵的初步研究

本文报道用物理和化学的方法,人工诱导西施舌产卵的研究结果。实验表明:氨海水浸泡西施舌Coelomactra antiquata(Spengler),对诱导排放精卵具有明显的作用。NH_4OH的有效当量浓度为1.5×10^(-3)——3×10^(-2)N,其中以7.5×10^(-3)——1.5×10^(-2)N氨海水诱导排放率最高。采用阴干加流水刺激和阴干加升降温刺激,都能促使性成熟的西施舌排放精卵。

西施舌Coelomactra antiquata(Spengler)幼虫对几种单细胞藻类摄食效果的初步试验

本文用６种单细胞藻类培育西施舌面盘幼虫生长和成苗率的影响。观察结果；体长８２μｍ的西施舌Ｄ形幼虫，２ｈ后开始摄食湛江叉鞭金藻，体长１３６μｍ的壳顶幼虫才开始摄食藻。幼虫昼夜摄食率以上午６ｈ－１２ｈ为最高，摄食小球藻，异胶藻，湛江叉鞭金藻的消化速度为８－６ｈ。

西施舌人工育苗技术工艺

西施舌是我国南方重要的经济贝类之一,由于其肉质鲜美,营养丰富,深受消费者喜爱。然而,由于过度捕捞和环境污染,西施舌的天然资源已处于枯竭状态,人工育苗补充资源势在必行。西施舌人工育苗技术涉及多个环节,其中精养和催产阶段对后续育苗成功与否至关重要。选取体型饱满的亲贝进行精养,根据水温调整投喂量,确保其获得充足营养,促进性腺发育。使用温度uge或经精检测确定受精率高的亲贝进行催产,避免受精失败造成的资源浪费。本文在总结多年来西施舌( Coelomactra antiquata )人工育苗经验的基础上,简要介绍西施舌亲由精养、催产、幼虫选优培育、幼体发育不同阶段的投饵量。日常管理、稚贝清洁培育等技术工艺及其要点。

西施舌营养成分分析与评价

对西施舌(Coelomactra antiquata)肉的水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪及部分微量元素等进行了分析,并对其营养价值进行了评价。结果表明:西施舌鲜肉含水量为82.31%,粗蛋白11.18%(占干基质量的63.19%),粗脂肪0.54%,灰分2.36%;西施舌蛋白质中含有18种编码氨基酸,其中含人体所需的全部8种必需氨基酸,必需氨基酸的质量分数为20.93%(干基),占氨基酸总量的36.28%,谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)和甘氨酸(Gly)的质量分数较高,分别占干基的7.80%、5.57%和6.70%;高度不饱和脂肪酸C20:4(EPA)和C22:6(DHA)分别占脂肪酸总数的20.41%和10.20%;对西施舌肉营养价值评价结果显示:Gly,Asp、Glu和丙氨酸(Ala)4种呈味氨基酸占水解氨基酸总量的44.77%,占游离氨基酸总量的72.94%;氨基酸评分(SAA)和化学评分(SC)结果都显示第一限制性氨基酸是色氨酸,其SAA值和SC值分别为0.73和0.43,必需氨基酸指数(IEAA)为64.91,牛磺酸含量丰富,质量比为13 830 mg/kg(干基);西施舌含有较丰富的Fe和Zn,在其干基中的质量比分别为130.0 mg/kg和52.0 mg/kg。

西施舌外套膜蛋白质组双向电泳体系的构建

建立了西施舌(Coelomactra antiquata)外套膜蛋白质组的双向凝胶电泳体系,比较分析了不同pH梯度胶条、水化条件的优化及不同染色方法对双向电泳结果的影响。结果表明:用pH 4～7的非线性胶条,水化时加上除盐步骤,采用硝酸银染色,即可获得高分辨率、高重现性的双向电泳图谱,为进一步研究西施舌外套膜蛋白质的组成奠定了基础。

西施舌群体遗传结构及分化的RAPD分析

采用55个随机引物对西施舌(Coelomactra antiquata)5个群体,即长乐(CL)、启东(QD)、连云港(LYG)、胶南(JN)和北海(BH)群体进行RAPD扩增。用PopGen(Version1.32)软件进行遗传多样性分析。结果共筛选出12个重复性好的引物,得到88条清晰稳定的条带,扩增片段在100 bp～3 000 bp之间,其中引物S299扩增的600 bp片段为长乐群体特有。多态位点比例为62.07%～78.26%(JN、LYG、BH、QD、CL群体分别为78.26%、77.05%、72.58%、70.05%、62.07%),Shannon指数为0.210 5～0.312 3。群体间遗传距离为0.068 3～0.223 9,其中长乐群体与其余4个群体间的遗传距离为0.182 7～0.223 9,4个非长乐群体的遗传距离为0.068 3～0.136 7。群体间遗传分化系数(Fst)为0.313 01(P<0.05),表明在整个遗传变异中群体间占31.30%。CL群体与QD,BH,JN,LYG群体间的遗传分化系数(Gst)分别为0.364 9,0.344 8,0.325 0,0.309 0;而非长乐群体之间的遗传分化系数为0.148 2～0.240 3;以上数据显示长乐群体遗传分化最大。聚类结果显示,启东和胶南群体首先聚为一支,然后与北海群体聚在一起,再和连云港群体相聚;而长乐群体则单独形成一支。

硫化物和氨对西施舌幼贝的毒性影响研究

硫化物和氨对西施舌Coelomactra antiquata幼贝的急性毒性试验表明,硫化物的96h半致死浓度(LC50)值为4.131mg·L-1,安全浓度(SC)值为0.413mg·L-1;总氨氮的96hLC50值为14.220mg·L-1,SC值为1.422mg·L-1,其中NH3N的96hLC50值为0.903mg·L-1,SC值为0.090mg·L-1。硫化物和氨同时存在时表现为相加作用,在等毒条件下其96hLC50值分别为2.001和10.048mg·L-1(NH3N0.870mg·L-1),SC值分别为0.200和1.005mg·L-1(NH3N0.087mg·L-1)。30d的生长试验表明,在硫化物和氨同时存在、硫化物和总氨氮的浓度分别为0.10—0.20和0.50—1.00mg·L-1时,对西施舌幼贝壳长生长和成活率影响不显著,但硫化物和总氨氮浓度达0.25和1.25mg·L-1时则影响显著。

西施舌3个自然群体杂合性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对广西北海、福建漳港和江苏启东3个西施舌（Coelomactra antiquata（Spengler））自然群体杂合性进行了研究。共检测分析了7个酶，获得12个位点、25个等位基因。其中4个位点是多态的，分别是Sod-1、Mdh-1、Est-1、Est-3，这些位点分别有1～7个等位基因。结果表明，福建漳港群体的Sod-1和Est-1位点、广西北海群体的Sod-1位点符合Hardy-Weinberg平衡（P〉0．05）；江苏启东群体的多态位点中所有位点、福建漳港群体的Mdh-1、Est-3位点、广西北海群体的Mdh-1、Est-1、Est-3位点均非常显著偏离Hardy-Weinberg平衡（P〈0．01）。另外，除了江苏启东和福建漳港群体的Est-1位点表现出杂合子缺失（F〉0）外，各群体中每个位点均表现出杂合子过量（F〈0）。结合各群体中每个多态位点的观察杂合度和期望杂合度，认为中国东南沿海西施舌的种质资源状况良好。

西施舌的耗氧率与排氨率研究

采用室内实验生态学方法研究了不同栖息水温和不同溶解氧水平下处于标准代谢状态的西施舌耗氧率与排氨率,并测定了窒息点.结果表明,在25℃时,水中DO≥3.11±0.15mg.L-1时,西施舌的耗氧率和排氨率分别为0.74±0.05mg.g-1.h-1和2.56±0.05μmol.g-1.h-1,处于相对稳定状态;当DO低于此值则代谢出现异常,耗氧率随DO下降而下降,直到窒息为止,其窒息点为1.22±0.06mg.L-1,而排氨率也呈直线下降,但排氨停止滞后于耗氧停止.耗氧率与栖息水温呈二次线型关系OCR=-0.0027T2+0.1367T-0.9557,R2=0.9724;水温为25.3℃时,西施舌的耗氧率达到最大,为0.77mg.g-1.h-1.处于适温状态(15℃和20℃)的O/N值要高于低温(10℃)和高温(25℃和30℃)时的O/N值,西施舌在适宜条件下更多地依赖于脂肪供能维持标准代谢,而在环境不适时则更多地调用机体的蛋白质来维持生理代谢需要.

西施舌5个地理群体ITS1序列变异及系统发生分析

利用核糖体rRNA基因第一内转录间隔区(ITS1)序列,对我国山东日照(RZ)、江苏连云港(LYG)和启东(QD)、福建长乐(CL)、广西北海(BH)沿海西施舌5个野生群体的遗传结构进行了分析。经PCR扩增、克隆、非克隆测序,获得长度为816—843bp的ITS1核苷酸序列,其平均G+C含量(60.8%)显著高于A+T含量。在西施舌5个群体93个个体118个序列中共检测到153个变异位点,多态位点比例为18.3%,其中,简约信息位点为63个,共有63种基因型。群体间遗传距离在0.74%—3.38%之间,群体内遗传距离为0.72%—1.06%之间。CL群体与其他4个群体间的遗传距离明显高(3.17%—3.38%)。AMOVA分析结果显示长乐群体有明显的遗传分化(FST=0.670—0.702,P(0.001)。以中国蛤蜊为外群构建的NJ树和ML树显示CL群体聚为一支,非长乐群体互相重叠聚为另一支,研究结果显示,长乐群体已经形成了具有明显遗传结构的地理种群。

中国沿海西施舌5个自然群体形态差异和RAPD分析

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对5个西施舌自然群体的遗传多样性进行了研究.在选择的20个随机引物中共检测到168条标记条带.每个引物扩增谱带数在3～15之间.片段长度250～3 000 bp不等.利用Popgen1.32和PHILIP统计软件对实验数据进行处理,确立了5个群体间的亲缘关系,并对3个形态参数进行了方差分析,探讨了与RAPD结果的关联.结果表明:5个群体内和群体间遗传距离都较大,广西北海群体由于地理环境等因素的影响,无论是外部形态和遗传距离与其他4群体有较大差异,可能已经形成了地理种群.5个群体多态位点比例和平均遗传杂合度都较高,平均值为78.97%和0.308 7,香农多样值在0.301 8～0.367 3之间,聚类分析显示,山东群体与江苏群体亲缘关系最近,然后依次是浙江群体和福建群体.我国西施舌遗传多样性处于较高的水平,种质资源良好,西施舌养殖有很好的发展前景.

温度、pH和摄食作用对西施舌胃蛋白酶活力的影响

研究了不同温度、不同pH值和摄食后不同时间条件下西施舌胃蛋白酶的活性变化。结果表明:在pH为3.0时,西施舌胃蛋白酶最适温度为50℃,明显高于生理温度,酶活力达到最大(290.18±20.11)U;在温度为50℃下,最适pH值为2.6,酶活力达到最高,为(426.59±30.80)U,远低于生理pH;西施舌在摄食后,胃蛋白酶的活力有明显的提高,摄食后0.5 h西施舌胃蛋白酶的活力达到最大值(96.04±30.02)U,其后活力降低,但在摄食后4 h时,活力又有回升,之后又趋于最低值(43.06±6.69)U。

西施舌精子发生过程的超微结构观察

利用透射电镜研究西施舌精子的发生和结构 ,揭示了从精原细胞逐渐发育为精子过程中细胞形态结构的变化和细胞器的演变规律。精细胞的分化分为 6期 ,主要包括 :核形态由扁圆到圆再到椭圆形 ;核染色质以颗粒状形式凝集 ;高尔基体分泌的前顶体颗粒聚合发育为前顶体囊 ,参与顶体的形成 ;线粒体逐渐融合与发达 ;中心体的移动及鞭毛的形成 ;胞质的逐步减少。成熟精子为原生型 ,由头部、中段和尾部组成。顶体圆锥状 ,高密度的顶体物质集中分布于基部四周 ,呈灯罩状 ;亚顶体腔呈尖锥状 ,内含密度较低的均匀物。细胞核近椭圆形。中段由 4个椭圆形的线粒体和 2个相互垂直的中心粒组成。尾部鞭毛为典型的“9+2”型结构。