视前区调控因子-2在中枢神经系统中的研究进展

中枢神经系统疾病严重影响人类健康和社会发展,已成为全球范围内的重大公共卫生问题。成年哺乳动物中枢神经系统再生困难,因此中枢神经系统疾病的治疗仍是重大医学难题。Rho GTP酶激活蛋白参与了细胞生长、细胞动力学、细胞膜转运和细胞凋亡的病理生理过程。视前区调控因子-2作为Rho GTP酶激活蛋白家族的重要成员,参与中枢神经系统中多种病理生理过程,包括神经元轴突的生长与导向、神经元树突的形成、神经干细胞的调控、肿瘤的转移等,在神经内分泌疾病、中枢神经损伤修复以及神经肿瘤等研究领域具有重要意义。

氯化胆碱和蔗糖切片液制作的小鼠脑片下丘脑视前区神经元电生理特性的比较

目的比较不同切片液对小鼠下丘脑视前区(mPOA)脑片神经元电生理特性的影响。方法选取6~8周龄C57雌性小鼠,异氟烷麻醉后心脏灌注(通混合气950 mL/L O_(2),50 mL/L CO_(2))4℃氯化胆碱切片液或蔗糖切片液后取脑,振动切片机制备含mPOA脑区的冠状脑片,全细胞膜片钳记录mPOA电生理特性。结果采用蔗糖切片液制作的脑片mPOA神经元的内在兴奋性要优于氯化胆碱切片液,具体表现为细胞静息膜电位更超极化,动作电位幅度、不同电流刺激平均放电幅度、放电个数均高,半宽、基强度较小。而氯化胆碱切片液制作的脑片突触活性要更好,表现为兴奋性微小突触后电流频率高于蔗糖切片液制作脑片的细胞。结论蔗糖切片液和氯化胆碱切片液在保证细胞活性的情况下,蔗糖切片液更适合记录mPOA神经元的内在兴奋性,而氯化胆碱切片液更适合突触特性的记录。

纳洛酮及电针对雌性大鼠视前区GnRH释放的影响

本文用推挽灌流技术和特异性放射免疫分析法，测定大鼠视前区灌流液中GnRH和γβ-内啡肽的含量，以观察腹腔注射纳洛酮和电针对视前区GnRH和γβ-内啡肽释放的影响，结果表明，卵巢切除组大鼠GnRH的基础含量明显高于正常组大鼠（P＜0.02），腹腔注射纳洛酮30分钟后，卵巢切除组大鼠视前区GnRH含量比注射前明显升高（P＜0．01），而γβ-内啡肽含量未见明显改变，注射纳洛酮对正常组大鼠GnRH含量无明显影响。电针对卵巢切除组和正常组大鼠视前区GnRH及γβ-内啡肽含量均无明显影响，以上结果提示正常生理情况下，雌激素的反馈抑制可能是视前区GnRH释放的主要调节机制，巢卵切除后，雌激素的反馈机制被去除，中枢内阿片肽对视前区GnRH的释放抑制转为其主要的调节机制。

大鼠下丘脑视前区神经元内雌激素受体α的表达——免疫组织化学研究

了解雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)在大鼠脑的分布及大鼠下丘脑视前区雌激素受体样阳性神经元的生后发育规律。用免疫组织化学反应方法结合图像分析仪检测雌性大鼠下丘脑视前区雌激素受体样阳性神经元的数量和灰度值。 ERα分布于 Calleja岛、梨形核、外侧隔核、基底前脑胆碱能神经元各群、终纹床核、下丘脑内侧视前区、室周核、腹内侧核、弓状核和结节乳头核、再连合和前内侧丘脑核、杏仁核复合体、梨形皮质和穹窿下器官。相比之下 ,皮质和海马内仅见几个分散的 ERα样阳性神经元。而纹状体内未见 ERα样阳性神经元。ERα免疫反应产物主要位于细胞核内 ,蓝黑色。在成年雌性大鼠下丘脑内侧视前区 (m edial preoptic area,MPA)神经元的胞浆和突起内可见较弱的 ERα免疫反应产物。在MPA内 ,生后 1天可见 ERα表达 ,随着大鼠的生后发育 ,成年时达到高峰。与成年大鼠比较 ,老年雌性大鼠雌激素受体样阳性神经元数量减少 10 .0 5 % ,P>0 .0 5 ,差异无显著性 ;平均灰度减少 41.5 7% ,P<0 .0 5 ,差异有显著性。老年雌性大鼠下丘脑 MPA内 ERα表达下调 ,可能与卵巢功能减退而导致情感。

腹外侧视前区5-羟色胺对大鼠睡眠-觉醒周期的作用

目的 通过腹外侧视前区 (VLPO)微量注射 5 羟色胺酸 (5 HTP)、非特异性 5 HT受体阻断剂麦角新碱 (MS)和5 HT再摄取抑制剂氟西汀观察 5 HT在VLPO对大鼠睡眠-觉醒周期的影响。方法 采用脑立体定位、核团微量注射和多导睡眠描记技术。结果 VLPO双侧分别微量注射小剂量 5 HTP(0 5μg ,0 1 μl)对大鼠睡眠 -觉醒周期无明显影响 ;而双侧注射大剂量 5 HTP(1 0 μg ,0 1 μl)使大鼠睡眠减少 ,觉醒增加 ;VLPO双侧注射 5 HT再摄取抑制剂氟西汀(6 0 μg ,0 1 μl)可产生与大剂量 5 HTP类似的作用 ;而VLPO双侧微量注射非特异性 5 HT受体阻断剂麦角新碱(MS ,1 0 μg ,0 1 μl)使大鼠睡眠增加 ,觉醒减少。大剂量 5 HTP和MS对觉醒 ,睡眠成分改变具有明显的时间相关性。结论 5 HT在VLPO参与睡眠 -觉醒周期调节且有促觉醒作用 。

兔蓝斑下核内注入6-羟基多巴胺后视前区阿片受体的变化

本文在家兔双侧蓝斑下核内注入6-羟基多巴胺(6-OHDA)20~d后,用甲醛诱发荧光组织化学法显示视前区儿茶酚胺(CA)神经末梢明显减少,其中以内侧区较明显;与此同时,受体放射自显影结果表明,视前区与~3H-埃托啡特异结合的阿片受体密度也明显减少,亦以视前内侧区较显著。上述结果提示,视前区(尤其内侧区)CA 神经末梢上分布有阿片受体。

补中益气汤对脾虚发热家兔体温、脑脊液PGE_2和丘脑下部-视前区组织cAMP含量的影响

Objective:to research the antipyretic mechanisms of Buzhongyiqitang in reserpine induced splenasthenic rabbit.Method:The model of splenasthenic syndrome in rabbit was made by i.m.reserpine.Then,Buzhongyiqitang groups were given Buzhongyiqitang 5g/kg,10g/kg to stomach.On the 4 th day,observing the changes of temperature、PGE 2 in cerebrospinal fluid and cAMP in hypothalamus preoptic tissue between model group,control group and Buzhongyiqitang groups after i.v.TAB triple vaccine.Results:Buzhongyiqitang can remarkably reduce elevated temperature( P <0 01、 P <0 01),PGE 2 and cAMP.Conclusion:Buzhongyiqitang had antipyretic effect for reserpine induced splenasthenic syndrome with elevated temperature in rabbit.The mechanism is probably related to reducing PGE 2 and cAMP in concerned central nervous.

大鼠腹外侧视前区P物质对睡眠的影响及其作用机制的研究

目的探讨大鼠下丘脑腹外侧视前区(vLPO)中P物质(SP)对睡眠的影响及其作用机制。方法SD大鼠120只,分实验组(64只)和对照组(16只),40只不符合要求剔除。采用脑立体定位、核团插管、微量注射、多导睡眠描记和免疫组织化学染色等方法观察vLPO中SP对睡眠的影响及其机制。结果大鼠下丘脑vLPO内微量注射SP后与对照组比较睡眠时间增加13.1%,特别是深慢波睡眠,觉醒时间减少22.0%;而在vLPO内微量注射SP受体阻断剂后睡眠时间减少19.6%,觉醒时间增加31.9%。vLPO内微量注射磷脂酶C抑制剂U73122或γ-氨基丁酸(GABA)合成关键酶(谷氨酸脱羧酶)抑制剂3-巯基丙酸均可阻断SP的促眠作用。结论SP在大鼠vLPO中具有促进睡眠,特别是提高深慢波睡眠的作用,该效应可能是通过vLPO中GABA能神经元介导的。

大鼠下丘脑腹外侧视前区和结节乳头体核的直接神经纤维投射研究

目的探讨促睡眠调节中枢下丘脑腹外侧视前区(VLPO)与促觉醒调节中枢结节乳头体核(TMN)之间是否具有双向调节的直接通路。方法将SD大鼠随机分为对照组(ACSF组)与实验组(TMN+ACSF&VLPO+DiO组,TMN+DiO&VLPO+ACSF组),采用脑立体定位技术,核团内微量注射、冰冻切片等方法观察和记录大鼠VLPO和TMN分别注射细胞膜荧光探针Fast DiO后的TMN和VLPO的荧光信号。结果 TMN+ACSF&VLPO+DiO组大鼠注射Fast DiO术后72 h,TMN脑区神经细胞可见明显的绿色荧光;TMN+DiO&VLPO+ACSF组大鼠注射Fast DiO术后72 h,VLPO脑区神经细胞也可见明显的绿色荧光。结论 VLPO与TMN间有双向直接神经纤维投射。

强、弱电针对兔视前区-下丘脑前部热敏神经元电活动影响的对比观察

目的:阐明前期工作中所见针刺退热、散热效应的中枢机制及其与穴位感受系统的关系。方法:选用新西兰兔18只,随机分为内毒素、内毒素加弱电针和内毒素加强电针3个组,每组6只,实验在动物肌肉松弛、清醒、行人工呼吸和内毒素化条件下进行。穴位取双侧"涌泉"穴,刺激取连续方波脉冲,波宽0.1 ms,频率8 Hz,强电针25 V,弱电针4.5 V。以视前区-下丘脑前部热敏神经元放电为指标,观察3组处理因素对热敏神经元放电的影响。结果:强电针组热敏神经元放电频率与内毒素组相比,从40-45 min时段起差异具有显著性意义(P<0.01);弱电针组热敏神经元放电频率与内毒素组相比,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:针刺对热原抑制热敏神经元活动可以产生显著的拮抗作用,因而具有促进散热和退热的功效;针刺的这种作用是通过穴位高阈的细纤维性感受系统产生的。

长时程冷暴露后大鼠下丘脑脑片视前区温敏神经元的适应性变化

本文比较了生活在冷室（５±１℃，２０只）和暖室（２０±３℃，３５只）达三周的雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠下丘脑脑片视前区神经元电活动和温度敏感性，共记录到１２７个来自暖室组及８６个来自冷室组自发放电神经元。结果表明：（１）冷适应后冷敏神经元的比例明显提高，温度敏感性不变而放电活动的临界温度和下限温度明显下移；（２）热敏神经元的温度敏感性和临界温度降低，但在３７℃时的自发放电活动频率显著增加；（３）非温敏神经元的电活动也增加，其下限温度下移极显著，显示了大鼠视前区神经元在冷适应中的可塑性及其与冷适应中体温调节的机制相关。

电刺激腹中隔区对兔视前区前下丘脑温敏神经元放电的影响

目的和方法 :采用玻璃微电极细胞外引导单位神经元放电的方法 ,观察电刺激兔腹中隔区 (VSA)时 ,视前区 -下丘脑前部 (POAH)温度敏感神经元放电频率的变化。结果 :电刺激腹中隔区可使视前区 -下丘脑前部热敏神经元放电频率增加 ,冷敏神经元放电频率减少。结论 :腹中隔区可能通过影响视前区

视前区儿茶酚胺神经末梢损毁对针刺镇痛的影响

本实验在家兔双侧视前区内注入6-羟基多巴胺(6-OH-DA,4μg/每侧),选择性损毁该区儿茶酚胺(CA)神经末梢后,观察对针刺镇痛的影响。实验结果表明,注药后第二、四天,针刺镇痛效应较针前或对照组均有明显提高。注药后第十天,针刺镇痛效应基本恢复到对照组水平。用甲醛诱发荧光组织化学法显示视前区 CA 末梢,可见6-羟基多巴胺组的 CA 末梢明显减少。结果提示,视前区 CA 含量减少有利于针刺镇痛作用。

下丘脑内侧视前区在电针影响蓝斑核神经元放电中的作用

本实验以蓝斑(LC)神经元放电为指标，观察刺激内侧视前区(MPO)对LC神经元放电的影响，及与电针的关系。结果如下；

大鼠内侧杏仁核的性双形性和向内侧视前区直接投射的研究

本文将内侧杏仁核分为5个亚区：即前背亚区、前腹亚区、中背亚区、后背亚区和后腹亚区。细胞构筑定量分析结果表明;雄性大鼠内侧杏仁核的吻尾长度（1.440mm）、体积（0.6485mm3）、细胞总数（50421个）均显著大于雌性（吻尾长度为1.320mm，体积为0.5326mm3，细胞总数为43922个）。并且证明内侧杏仁核的5个亚区中.雄性大鼠后背亚区的吻尾长度（0.510mm）、体积（0.1519mm3）、细胞总数（13331个）都显著地大于雌性（吻尾长度为0.375mm、体积为0.0774mm3、细胞总数为8655个），而其它亚区无上述性别差异。另外，雄性大鼠内侧杏仁核及其后背亚区和后腹亚区的细胞密度小于雌性。上述性别差异均具有统计学意义。这些结果表明内侧杏仁核具有性双形性，且此性双形性主要表现在后背亚区。将HRP注入一侧内侧视前区，在同侧内侧杏仁核各亚区内标记细胞的平均数及其占内侧杏仁核内标记细胞总平均数的百分比为：后背亚区为107.4个，占58％;后瓜亚区为42.1个，占21.2％;前背亚区为16.毛个，占8.8％;前腹亚区为13.6个，占6.7％;中背亚区为9.6个，占5.3％。进一步提示后背亚区可能是内侧杏仁核与性功能有关的主要功能部位。

猫下丘脑前部-视前区温度敏感神经元对电刺激中缝背核的反应

用玻璃微电极细胞外引导单位神经元放电的方法,观察电刺激猫中缝背核时,下丘脑前部-视前区神经元的放电频率及温度敏感系数的变化。结果提示,中缝背核可能参与体温调节的中枢调控过程。

精氨酸加压素对大鼠视前区GABA_A受体亚单位磷酸化的影响

目的:研究精氨酸加压素(AVP)对大鼠视前区γ-氨基丁酸(GABA)A型受体(GABA_A受体)亚单位(α、β和γ2)表达和磷酸化的影响。方法:实验分为对照组、AVP组、V1a受体抑制剂+AVP组和V1a受体抑制剂组(均n=10);腹腔注射AVP或V1a受体抑制剂0.5 h后,采用RT-qPCR和Western blot法检测视前区GABA_A受体亚单位(α、β和γ2)表达及磷酸化的变化。结果:与对照组相比,AVP或V1a受体抑制剂组大鼠视前区GABA_A受体亚单位表达均无显著变化;AVP能显著上调视前区GABA_A受体γ2亚单位的磷酸化水平(P<0.05);AVP显著增加蛋白激酶C(PKC)和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达和磷酸化(P<0.01)。结论:外源性AVP不影响GABA_A受体亚单位(α、β和γ2)表达,但主要通过V1a受体激活PKC和CaMKⅡ,影响γ2亚单位磷酸化水平,从而调制视前区GABA_A受体介导的抑制性突触传递。

睡眠剥夺大鼠腹外侧视前区腺苷水平的变化

目的研究睡眠剥夺大鼠促睡眠中枢腹外侧视前区(VLPO)内腺苷变化规律。方法将SD大鼠随机分为对照组和睡眠剥夺组。采用脑立体定位、微透析、多导睡眠描计技术和高效液相色谱法观察两组大鼠的睡眠剥夺前、睡眠剥夺期以及睡眠剥夺后恢复期VLPO内腺苷含量变化。结果与对照组比较,睡眠剥夺组睡眠剥夺前觉醒(W)、非快速眼动(NREM)睡眠和快速眼动(REM)睡眠无明显变化;而在睡眠剥夺期W时间增加58.5%(P<0.01),NREM时间减少55.7%(P<0.01),REM时间差异无统计学意义;在睡眠剥夺后恢复期W时间减少18.4%(P<0.05),NREM时间增加17.4%(P<0.05),REM时间差异无统计学意义。与对照组比较,睡眠剥夺开始的2 h内睡眠剥夺组的VLPO内腺苷相对含量无显著变化。而随后的4 h VLPO内腺苷相对含量明显升高(P<0.05)。睡眠剥夺后恢复期的3 h内睡眠剥夺组的VLPO内腺苷相对含量显著减少(P<0.05)。结论腺苷在VLPO内参与睡眠-觉醒周期的调节。

实验性脑缺血后隔-视前区内神经元的病理组织学和超微结构变化

目的:为探讨急性脑缺血后出现性功能障碍的机理.方法:应用蒙古沙土鼠脑缺血再灌注模型,对脑隔-视前区内性功能调节相关神经元光镜和电镜下的病理组织学和超微结构改变进行了观察.结果:短时急性脑缺血再灌注造成的神经元密度和亚细胞水平的结构变化是暂时的,可在2周内恢复.当脑缺血达10分钟再灌注后神经元损害加重,且在2周后尚未恢复,损害主要为膜结构如线粒体、内质网等破坏.结论:神经元损伤程度与缺血时间及再灌注时间长短密切相关,脑隔-视前区内神经元的病理损害是引起性功能障碍的重要形态学依据.

精氨酸加压素反转前列腺素E_2引起的大鼠视前区冷敏神经元活性增强

目的研究精氨酸加压素(AVP)对前列腺素E2(PGE2)引起大鼠视前区冷敏神经元活性变化的影响。方法在制作了大鼠视前区脑片以后,应用全细胞膜片钳技术记录视前区神经元的放电频率,鉴别它们的温度敏感性,然后分别记录PGE2(1μmol)、AVP(1μmol)+PGE2(1μmol)或AVP(1μmol)+PGE2(1μmol)+AVP V1a受体阻断剂(1μmol)对冷敏神经元放电频率的影响。结果 1)加入PGE2后,有61.5%(8/13)的大鼠视前区冷敏神经元的放电频率明显上升,其平均增幅为(69.6±39.7)%。2)洗脱PGE2的作用后,往PGE2激活的冷敏神经元浴液中加入了PGE2和AVP混合液后,这些神经元的平均放电变化却转为下降(P<0.05),说明AVP反转了PGE2引起的冷敏神经元放电活性增强。3)洗脱PGE2和AVP混合液的作用后,继续加入了PGE2、AVP和AVP V1a受体拮抗剂,神经元的平均放电变化与PGE2和AVP混合液引起的放电变化差异有统计学意义(P<0.05),而且与PGE2引起的放电变化相似(P>0.05),表明AVP V1a受体拮抗剂阻断了AVP对PGE2引起冷敏神经元放电频率变化的影响。结论 PGE2可引起大鼠视前区冷敏神经元活性增强,AVP通过激活V1a受体反转了PGE2引起的冷敏神经元活性增强。