艾滋病毒重组抗原及第三代艾滋病毒抗体EIA诊断试剂盒的研制

近年来中国的艾滋病毒(HIV)感染人数以每年30%的速度增长,HIV感染者总数已超过60万人,感染者已从吸毒人员、献血员等高危人群扩展到社会各个阶层,我国已处于艾滋病泛滥前的关键时期.HIV诊断试剂盒是HIV防制工作中最重要的技术工具.用于人群筛检的HIV诊断试剂盒已历经三代,第一代试剂盒主要使用来自细胞培养的HIV病毒的裂解产物作为抗原;第二代产品使用基因工程重组抗原和/或人工合成肽作为抗原,使包被抗原中免疫优势区的比例明显增强,从而提高了试剂的灵敏度,而且标准化生产的相对更纯的抗原的使用使试剂的特异性和重复性均大为提高.前两代试剂均采用间接法原理,即先以抗原包被聚丙乙烯板,再加入待检血清,最后加入酶标记的抗人IgG抗体,因此均只能检测IgG抗体.1992年问世于美国的第三代试剂则采用双抗原夹心法,即先以抗原包被,再加入待检血清、酶标记的抗原,从而可同时检测所有类型的抗体,明显提高了试剂的灵敏度,同时由于采取了双抗原识别机制,特异性也得到了明显提高,因此在国外已取代间接法而成为主流试剂.

鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒的研制及其应用

建立了快速鉴别诊断鸡肿瘤病的PCR技术 ,研制鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒。应用该试剂盒在两年多时间里 ,对来源于广西养鸡业发达地区的 13 9个鸡群共 5 0 5只病、死鸡的 15 70份肿瘤及可疑肿瘤组织病料进行了检测 ,马立克氏病、网状内皮增生症和禽白血病的阳性率分别为 74.0 6%、11.49%和 6.73 % ,肿瘤病的混合发生率为 16.83 %。结果表明 ,应用PCR技术建立的鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒具有操作简便快捷、结果准确可靠、保存方便等特点 ,不仅适用于临床肿瘤病的鉴别诊断 。

禽流感间接ELISA诊断试剂盒的研制及应用

将成熟的禽流感间接ELISA快速诊断技术试剂盒化 ,确定其外包装、规格、盒内组成 ,对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性、可重复性、符合率、与国外同类产品比较、保存期等进行了全面、详细的研究。试剂盒由 9种成套试剂组成 ,在 - 15℃至 - 2 0℃保存 5 40天各项性能仍然很好。该试剂盒与进口禽流感间接ELISA诊断试剂盒对同样血清样品检测 ,符合率为 10 0 %。拥有该试剂盒 ,只需准备生理盐水 ,即可对大量血清样品同时进行检测 ,操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、稳定、快速 ,更适合于禽流感免疫抗体的监测及现地疫病诊断等需要。先后制备诊断试剂盒 16个批次 ,已成功应用于我国省、市兽医站、兽医研究所、农业院校、农科院、农业公司、口岸检疫部门及鸡场等各领域对禽流感的定性诊断、流行病学调查、免疫抗体监测等。

鸡传染性法氏囊病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用

采用 vero细胞增殖的 IBDV抗原建立了间接 EL ISA,用于定量检测 IBDV抗体。对该方法进行了标准化研究 ,确立了该方法的最佳工作条件。在此基础上研制了相应的诊断试剂盒 ,并对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性、可重复性、符合率、与国外同类产品的比较、保存期等进行了全面、详细的研究。结果表明 ,研制的试剂盒在 - 2 0℃保存至 6个月时各项性能都很好。该试剂盒与进口试剂盒对同样血清样品检测 ,符合率为86 .7%。间接 EL ISA试剂盒与琼扩试验的符合率为 92 .5 %。该试剂盒可对大量血清样品进行检测 ,操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、快速 ,更适合于大型鸡场 IBD免疫抗体水平的监测及现地疫病诊断等需要。

用二种ELISA法进行烟草花叶病快速诊断试剂盒的研究

以改良的间接ELISA和DotELISA为基础,研制了烟草花叶病毒(TMV)快速诊断试剂盒,其中抗体最佳工作浓度为1∶5000.通过模拟田间试验条件进行检测,并与电子显微技术相互印证,经过对云南省峨山?江川等县样品的测定,结果表明试剂盒具有敏感?特异?快捷3个特点,准确率分别为100%(间接ELISA)和98.7%(DotELISA).

禽流感病毒夹心ELISA诊断试剂盒的研制及应用

将成熟的禽流感病毒(AIV)夹心ELISA快速检测方法组装成诊断试剂盒.试剂盒由1～11号试剂、一块酶标板和一份说明书组成.对试剂盒内各组份进行了特异性、敏感性、重复性及保存期的测定.结果表明,在-10℃下能保存6个月,而且特异性强、敏感性高、重复性好,操作简单、方便,能快速、准确地检测出样品中是否带有AIV抗原.先后制备了8个批次的诊断试剂盒,于湖北、安徽及河南等地的养禽场、兽医站、农科院、农业院校等化验室应用,取得了良好的效果.

犬细小病毒的PCR诊断试剂盒的研制

目的 建立检测犬细小病毒的PCR诊断试剂盒。方法 通过在犬细小病毒 (CPV)的基因组中设计的特异性寡核苷酸引物 ,利用PCR技术研制犬细小病毒的PCR诊断试剂盒。结果 在特定的反应条件下 ,使用该试剂盒能特异地扩增含有犬细小病毒的样品 ,且能检出痕量 (10ng)的犬细小病毒DNA ,被测粪样只需进行简单煮沸就能进行PCR反应 ,该试剂盒能在常温下保存 1周以上、4℃保存 1年以上。同血凝试验 (HA〕及单克隆抗体ELISA方法比较 ,对 6 6份样品进行检测 ,显示该PCR试剂盒具有特异、灵敏等优点。结论 成功研制了犬细小病毒的PCR诊断试剂盒 。

猪戊型肝炎ELISA诊断试剂盒的研制及应用

本试验旨在建立有效的针对猪戊型肝炎病毒(HEV)的诊断技术及试剂盒。作者建立了应用猪HEVORF3筛选出来的一段序列合成肽swHEV11检测HEV血清抗体的间接ELISA诊断方法,确定的抗原最适包被浓度为3μg·mL-1;血清最适稀释度为1∶10,作用时间为30min;酶标抗体最适稀释度为1∶12000,作用时间为60min。用HEV ORF3合成肽swHEV11研制的猪HEV ELISA诊断试剂盒,与北京万泰试剂盒检测比较,符合率为73.4%(205/279),灵敏度和特异性分别为73.3%(200/273)和83.3%(5/6)。该试剂盒批内重复的变异系数<10%,批间变异系数<20%。结果表明,该方法的建立和所研制的猪戊型肝炎诊断试剂盒灵敏度高,特异性强,稳定性合格,为猪戊型肝炎病毒抗体的检测和流行病学的调查提供了一种简便快速的血清学诊断方法。

猪伪狂犬病毒野毒株SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR诊断试剂盒的研制

根据GenBank中猪伪狂犬病毒(PRV)gE基因序列设计特异性的引物,PCR扩增获得PRV gE基因片段,构建重组质粒pMD18-T-gE,作为阳性标准品。对SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应条件进行优化,建立猪PRV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR诊断方法,研制诊断试剂盒。扩增产物的熔解曲线分析结果显示只出现单特异峰,无引物二聚体,对猪圆环病毒(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)、PRV(gE基因缺失株)、猪源E.coli、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)均无阳性信号扩增,且重复性好,灵敏度可达2.3×101拷贝/μL。结果表明,研制的PRV野毒株SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR试剂盒特异、灵敏、快速、重复性好,适于伪狂犬病毒临床样品的检测。

新型HCVEIA诊断试剂盒的研制

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组结构区核壳蛋白（Ｃ）区抗原、膜蛋白Ｅ１和Ｅ２区抗原，以及非结构区ＮＳ３－ＮＳ５区抗原的区段，已经在原核细胞中获得有效的表达。同时，相应区段中的优势抗原表位肽也经化学合成法大规模地制备。ＨＣＶ基因组上各区段抗原性的分析发现，由Ｃ区和ＮＳ３区分别编码的Ｃ抗原和Ｃ３３ｃ抗原是ＨＣＶ基因组上两个优势抗原区段。其相应的抗体出现早（感染后６周可检出抗Ｃ３３ｃ抗体），阳转率高（约９９％阳性检出率），特异性和重复性均优于其它区段抗原。以中国人ＨＣＶ的Ｃ３３ｃ重组蛋白和分支状合成肽ＭＡＰ－Ｃ－１９为复合抗原，研制了适合我国抗ＨＣＶ抗体检测的新型丙型肝炎病毒酶免疫测定（ＨＣＶＥＬＡ）诊断试剂盒。它同当代美国Ａｂｂｏｔｔ／ＵＢＩＨＣＶＥＬＡ诊断试剂的符合率约９８％，同加拿大ＹＥＳ公司ＨＣＶＥＩＡ诊断试剂的符合率约９７．８％，阳性检出率提高了约２％，３次重复性达１００％，表明其特异性、敏感性和重复性均达到了当代第二代ＪＣＶＥＬＡ诊断试剂的水平。我国人群中抗ＨＣＶ抗体的分布情况为：正常人群的检出率１％－２％；外科类住院病人检出率约２８．８％；肝炎患者抗ＨＣＶ阳性率为３４．４％，慢活肝、肝硬化和重症肝炎患者?

烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)诊断试剂盒的制备及应用

本研究通过筛选致病力强的烟草野火病菌株作为抗原 ,制备了烟草野火病菌特异性的抗血清 ,研制出SPA ELISA、间接 ELISA 2种诊断试剂盒 ,使检测真正作到了简便、快速、灵敏、准确。同时 ,应用这 2种诊断试剂盒对从田间及温室中采集的土壤、烟株根围、田间杂草、种子进行检测 ,明确了云南烟草野火病的初侵染源主要为种子和根围。

鸡传染性法氏囊病单抗快速诊断试剂盒的研制及初步应用

以感染传染性法氏囊病病毒 ( IBDV)的鸡法氏囊组织制备免疫抗原 ,免疫 BALB/c系小鼠 ,取其脾细胞与 NS0浆细胞进行细胞融合 ;以 AC-ELISA筛选阳性细胞克隆 ,经 3次有限稀释克隆化及鉴定 ,获得 2株识别 IBDV不同抗原决定簇的高亲和力单克隆抗体株。以该 2株单克隆抗体制备快速诊断试剂 ,组装了鸡传染性法氏囊病快速诊断试剂盒。该试剂盒由若干 4 0孔酶标板 ,1号酶标液 ( HRP标记 IBDV单抗 )、2号洗涤液、3号显色液 ( TMD显色底物 )、4号显色液 (供氢体 )等反应液 ,0 .0 1 mol/L PBS( p H7.2 )阴性对照、IBDV阳性对照 (提取的 IBDV蛋白 )组成 ,并对试剂盒特异性、敏感性、重复性及稳定性等进行了鉴定。应用该快速诊断试剂盒对来源于不同地区的临床诊断疑似 IBD的法氏囊病料各 2 0份进行了检测 ,并与琼扩试验、常规ELISA检测结果作了比较 ,结果表明 ,该快速诊断试剂盒的检测结果与常规 ELISA的检测结果相似 ,操作程序简便 ,可在 1 0～ 1 5min内完成 。

甲肝IgM抗体诊断试剂盒在甲肝病毒抗原检测中的应用

将HAVIgM -Ab诊断试剂盒用HAV -Ag标准品调控灵敏度后 ,用于检测HAV -Ag ,并比较快速检测法和常规过夜法两种检测方法的测定效果 ,以选择在甲肝疫苗生产中 ,抗原检测的合适方法。经过调控灵敏度后 ,抗HAVIgM诊断试剂盒完全可以用来检测HAV -Ag。并可以正确评价HAV -Ag滴度 ,HAV感染性滴度。适用于甲肝疫苗的检定工作。

旋毛虫基因重组抗原快速ELISA诊断试剂盒的研究

用旋毛虫基因重组抗原 (TSRA)建立了诊断猪旋毛虫病的快速ELISA诊断试剂盒。用TSRA和旋毛虫肌幼虫排泄 -分泌抗原 (ES)分别对 12份人工感染旋毛虫病猪血清进行快速ELISA检测 ,阳性率为 10 0 %。在猪旋毛虫病发病区随机采集 10 3份血清和肉样 ,分别用TSRA和ES作抗原对血清进行快速ELISA检测 ,结果显示 ,它们与肌肉消化法的诊断符合率分别为95 12 %和 96 3%。研究证明 ,用TSRA组装的诊断试剂盒具有良好的灵敏性、特异性和重复性。

安氏隐孢子虫PCR诊断试剂盒的初步应用

运用首次研制的安氏隐孢子虫PCR诊断试剂盒对广东省4个奶牛场和河南省1个奶牛场共234份样品,进行了安氏隐孢子虫感染的实际检测,并与常规检测方法饱和蔗糖漂浮法、改良抗酸染色法进行了比较。本试剂盒的检出率比常规检测方法提高了2%～13%,显示该试剂盒具有特异、敏感等优点,对开展隐孢子虫病的鉴别诊断和分子流行病学调查具有重要的应用价值。

三种结核抗体快速诊断试剂盒对三种常见结核病的诊断价值

目的 探讨三种结核抗体诊断试剂盒对肺结核、结核性脑膜炎 (结脑 )、结核性胸膜炎 (胸膜炎 )诊断价值。方法 采用澳大利亚产ICT -TB卡、TB -DOT和国产快速ELISA试剂盒检测 2 2 0例肺结核病人血清、56例结脑病人脑液、36例胸膜炎病人胸液与 4 8例非结核肺疾病血清、17例非结脑脑病脑液、18例非结核性胸膜炎胸液、30例健康人血清的结核抗体对比观察。结果 三种体液结核抗体总敏感性ICT -TB卡为 50 .7%、TB -DOT 52 .7%、ELSIA 58.7% ,三者间无显著性差异 (P >0 .0 5) ,其特异性分别为 97.3%、93.2 %、79.7% ,无显著性差异 (P >0 .0 5) ,ICT -TB卡对肺结核、结脑、胸膜炎血清结核抗体敏感性依次为 57.2 %、4 6 .4 %、30 .6 % ,TB -DOT 6 0 .0 %、4 4 .6 %、33.3% ,ELSIA6 8.2 %、4 2 .9%、38.9% ,有显著性差异 (P <0 .0 0 5,P <0 .0 5)。三种试剂盒检测三种体液结核抗体比较 ,血清敏感性最高 (57.2 %～ 6 8.2 % )、脑液次之 (51.8%～ 55.4 % ) ,胸液最低 (31.6 %～ 50 .0 % )。结论 抗原纯度较高的TB -DOT和ICT -TB卡特异性较强 ,但敏感性较低 ,复合抗原ELISA敏感性稍高 ,特异性偏低 ,但三者的临床价值基本相同。检测结核抗体对肺结核诊断价值优于结脑和胸膜炎。

几家HCV抗体诊断试剂盒检测系列血清的比较

应用Abbott、UBI及国内几家的HCV第二代抗体诊断试剂盒A、B、c及D检测25名HCV感染者的210份感染后不同时期的系列血清,首次采用ELISA及RIBA分片段检测抗体,并与敏感的PCR法检测血清中HCV RNA结果相比较。虽然各试剂盒的总体检测符合率无显著性差异,但个别国产试剂盒的早期检测能力尚有待提高。用任何一家抗体检测试剂盒均会漏检小部分标本,抗体检测阴性的血清在100000倍稀释后仍可检出HCV RNA,因此,有必要发展包括更多片段包被的第三代HCV抗体诊断试剂盒。

鼠疫菌F1抗体/抗原酶联免疫诊断试剂盒的应用评价

目的对兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒进行临床应用评价。方法采用双抗原/抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接血球凝集试验(IHA)、胶体金免疫层析试验(GICA)3种方法的诊断试剂对比检测云南省地方病防治所中心实验室保藏的和现场采集的血清样品和脏器样品,对血清样品做鼠疫菌F1抗体检测,对脏器样品做鼠疫菌F1抗原检测。结果在358份血清样品中,ELISA试剂检出F1抗体阳性52份(14.52%),IHA试剂检出阳性37份(10.34%),GICA试剂检出阳性45份(12.57%)。ELISA与IHA试剂的符合率为95.23%,与GICA试剂的符合率为96.92%。经统计学χ2检验,ELISA试剂检出F1抗体阳性率高于IHA试剂(χ2=11.53,P=0.000 7),与GICA试剂检出的差异无统计学意义(χ2=3.27,P=0.070 4)。进一步分析滴度差值频数,ELISA试剂检测人血清的敏感性高于IHA试剂的样品占87.5%。在117份脏器样品中,3种试剂均检出F1抗原阳性15份(12.82%),符合率100%。滴度差值频数比较,ELISA试剂检测敏感性高于反向间接血球凝集试验(RIHA)试剂的样品为78.57%。结论兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒性质特异,其敏感性优于IHA试剂盒和GICA试剂条,值得在鼠疫的监测和快速诊断中推广应用。