激活蛋白-1诱骗寡核苷酸对豚鼠近视眼形成的影响

目的探讨球后注射脂质体包裹的激活蛋白-1诱骗寡核苷酸(activator protein-1decoy oligodeoxynucleotides,AP-1decoy ODN)对豚鼠近视眼屈光状态的影响。方法人工合成AP-1decoy ODN及错配的AP-1decoy ODN的核苷酸序列。半透明眼罩遮盖单眼诱导豚鼠近视眼的形成。遮盖眼球后注射脂质体包裹的AP-1decoy ODN或错配的AP-1de-coy ODN,检影验光测眼球屈光度,用A超(20Hz)测眼轴长度。结果豚鼠遮盖眼眼轴延长,形成近视。球后注射AP-1decoy ODN+脂质体LipofectAMNETM的遮盖眼近视程度减轻,而球后注射错配AP-1decoy ODN+脂质体LipofectAMNETM对遮盖眼的近视程度无影响。结论球后注射脂质体包裹的AP-1decoy ODN能有效抑制豚鼠近视眼的形成。

AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸对L929成纤维细胞增殖及纤维化介质表达的影响

目的探讨AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸对L929成纤维细胞增殖及纤维化介质表达的影响。方法设计并合成AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸、AP-1,Smad3阳性对照诱骗寡核苷酸及随机诱骗寡核苷酸,然后通过脂质体分别转染进入L929成纤维细胞内。分别通过ELISA法、细胞计数、ATP生物荧光法及免疫印迹法检测合成的诱骗寡核苷酸及其对L929细胞增殖及纤维化介质表达的影响。结果与随机诱骗核酸对照相比,双功能诱骗核苷酸既能明显抑制AP-1的DNA结合活性,又能抑制Smad3的DNA结合活性(P<0.01)。与随机诱骗寡核苷酸相比,AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸、AP-1,Smad3阳性对照诱骗核酸均能抑制TGF-β诱导的L929细胞的增殖并且降低其表达FN、PAI-1、c-fos、Collα2、TGF-β1、CTGF等纤维化介质,其中以AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸的作用最为显著。结论设计并合成的AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸可以有效地抑制L929成纤维细胞的增殖和纤维化介质的表达。

CREB诱骗寡核苷酸抑制吗啡依赖诱导SK-N-SH细胞神经元型一氧化氮合酶及fosB基因表达上调

目的研究转录因子CREB的结合位点cAMP反应元件(cAMPresponseelement,CRE)的诱骗寡核苷酸(CREtranscriptionfactordecoyoligodeoxynucleotide,CREdecoyODN)对吗啡依赖SKNSH细胞的神经元型一氧化氮合酶(Neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)及fosBmRNA表达上调的抑制作用。方法建立吗啡依赖SKNSH细胞模型,体外合成含CRE序列的寡核苷酸,作为CREdecoyODN,与阳离子脂类N[1(2,3dioleoyloxy)propyl]N,N,Ntrimethylammoniummethylsulfate(DOTAP)混合后导入细胞。采用放射自显影检测细胞内参入的CREdecoyODN。采用电泳迁移率改变分析(Electrophoresismobilityshiftassay,EMSA)及RTPCR技术,分别检测CREdecoyODN对吗啡依赖诱导的CREB的DNA结合活性、nNOS及fosBmRNA表达的影响。结果CREdecoyODN可在细胞内稳定存在,特异抑制吗啡依赖SKNSH细胞CREB的DNA结合活性升高、nNOS和fosBmRNA表达上调。结论CREdecoyODN通过特异抑制吗啡依赖SKNSH细胞的CREB的DNA结合活性而下调nNOS及fosBmRNA表达。

核因子-κB诱骗寡核苷酸抑制大鼠视网膜缺血再灌注损伤

目的:研究核因子-κB诱骗寡核苷酸(nuclear factor-κB decoy oligodeoxynucleotide,NF-κBdecoy ODN)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用。方法:设计、合成NF-κBdecoy ODN和错配NF-κBdecoyODN的核苷酸序列。采用升高眼内压的方法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型。缺血前10min,玻璃体内注射NF-κB decoy ODN或错配NF-κB decoy ODN。再灌注24h后,观察视网膜的组织学变化,测定视网膜的髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活力。检测缺血前10min和再灌注24h的闪光视网膜电图(flash electroretinography,F-ERG),计算其b波振幅恢复率。结果:缺血的大鼠视网膜再灌注24h后,视网膜明显充血、水肿,有许多白细胞浸润,神经节细胞和内核层细胞减少,且视网膜MPO活力增加(P<0.05)、b波振幅恢复率下降(P<0.05)。玻璃体注射NF-κB decoy ODN的大鼠,视网膜的损伤性组织学改变减轻,MPO活力降低,b波振幅恢复率增加。而玻璃体注射错配NF-κB decoy ODN则无此作用。结论:玻璃体注射NF-κB decoy ODN能有效抑制大鼠视网膜缺血再灌注损伤,保护视网膜功能。

STAT3诱骗寡核苷酸对肝癌细胞Hep G2的影响

目的观察应用诱骗寡核苷酸(decoy ODNs)靶向阻断信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of tran-scription 3,STAT3)对肝癌细胞Hep G2的影响,初步探讨其中的分子机制。方法体外合成的STAT3 decoy ODNs在脂质体的介导下转染Hep G2细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率;通过细胞生长曲线观察对细胞增殖的影响;annexin-V/PI染色检测细胞凋亡;实时定量PCR检测STAT3下游基因bcl-xL、cyclin D1和c-myc的表达。结果荧光显微镜和流式细胞仪检测表明decoy ODNs能有效转染Hep G2细胞,转染效率达90.2%;生长曲线显示decoy ODNs有效抑制Hep G2细胞增殖;decoy ODNs处理细胞48 h后,流式细胞仪annexin-V/PI染色检测到早期细胞凋亡率为(22.86±2.63)%,晚期细胞凋亡率为(23.00±2.76)%;实时定量PCR证实decoy ODNs下调bcl-xL、cyclin D1和c-myc mRNA表达。结论STAT3 decoy ODNs能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调STAT3下游bcl-xL、cyclin D1和c-myc基因的表达相关。

Egr-1诱骗寡核苷酸对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增殖及内皮功能的影响

目的探讨早期生长反应因子1(Egr-1)诱骗寡核苷酸(诱骗基因)对大鼠颈总动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖及内皮功能的影响。方法建立Wistar雄性大鼠颈总动脉球囊损伤模型。随机分4组,每组4个时相点(3,7,14,21d),每个时相点3只大鼠。取大鼠颈总动脉行病理形态学检查和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色,同时测定血清一氧化氮(NO)水平。结果对照组1(对照基因组)和对照组2(转染试剂组)分别与诱骗基因组相比,球囊损伤后7d可见内膜增生,14d、21d增生更明显(P<0.01)。正常动脉未见PCNA表达,动脉损伤后7d,新生内膜及中膜中PCNA阳性表达达高峰,14d后逐渐下降。诱骗基因治疗后,与对照组1和对照组2相比,动脉PCNA表达减少(P<0.01)。诱骗基因组NO含量较两对照组增高,第14d最明显(P<0.01)。结论Egr-1诱骗寡核苷酸可抑制大鼠颈总动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖并能升高血中NO水平。

Shionogi公司与AnGes公司联合开发NF-κB诱骗寡核苷酸类药物用于治疗皮肤病

Shionogi公司已加强其在抗过敏药物领域的研发力度，最近从AnGesMG公司获得核转录因子-κB（NF—κB）诱骗寡核苷酸（decoy oligodeoxynucleotide）类药物用于治疗特应性皮炎和其他皮肤病的全球独家开发权，这两家日本公司将合作完成此项目的开发，其中Shionogi公司负责该产品的商业化运营。

核因子κB的反义和诱骗性寡核苷酸对大鼠球囊损伤后血管狭窄和新生内膜形成的影响

探讨核因子κBp6 5亚基的反义和诱骗性寡核苷酸单独或联合作用对大鼠颈动脉球囊损伤细胞间粘附分子、单核细胞趋化因子的作用。SD大鼠随机分为 7组 ,每组分为 6个时相点 (6h和 1、3、5、7、1 4d) ,每个时相点 3只大鼠。制作血管球囊损伤模型。相应时间点处死动物。模型组、正义组、诱骗对照组血管内膜面积、中膜面积、内膜 中膜在第 5天增加 ,1 4d达到高峰。管腔面积随时相点减小。反义组、诱骗组、反义组 +诱骗组干预后 ,血管上述病理指标明显改善 (P <0 .0 5 ) ,反义组 +诱骗组较反义组、诱骗组治疗效果更明显 (P <0 .0 5 )。内皮细胞间粘附分子、单核细胞趋化因子mRNA表达在血管损伤后 6h即可检测到 ,3、5、7d后持续表达增加 ,1 4d后表达降低。免疫组织化学检测显示 ,内皮细胞间粘附分子 1、单核细胞趋化因子 1蛋白质表达在 6个时相点均为阳性染色 ,1 4d达到高峰 ;反义组、诱骗组、反义组 +诱骗组治疗后 ,与模型组、正义组、诱骗对照组相比 ,内皮细胞间粘附分子、单核细胞趋化因子mRNA表达和蛋白合成在各时相点均降低 (P <0 .0 5 )。免疫印迹法检测核蛋白抽提物显示 ,核因子κBp6 5在血管损伤后 6h有一定蛋白表达 ,1d后蛋白表达明显增加 ,至 7d达高峰 ,1 4d后蛋白表达略降低。反义组、诱骗组。

诱骗寡核苷酸靶向阻断信号转导和转录激活因子3对卵巢上皮性癌细胞的影响

卵巢上皮性癌（卵巢癌）的病死率占妇科恶性肿瘤首位。研究表明，信号转导和转录激活因子（signal transducer and activator of transcription，STAT）3在卵巢癌中持续性激活，与卵巢癌的发生、发展、转移和侵袭相关。本研究利用体外合成的诱骗寡核苷酸（decoy ODN）转染卵巢癌细胞，竞争性抑制STAT3与相应顺式元件的结合，观察对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响．并检测STAT3下游靶基因的表达情况。

Oligofectamine介导转录因子SP1诱骗性寡核苷酸转染猪内皮细胞系条件的优化研究

目的确定SP1诱骗性寡核苷酸(Decoy Oligodeoxynucleotides,ODNs)在Oligofectamine介导下转染猪血管内皮细胞系SV-40-PED的最佳转染条件和效果。方法以SV-40-PED为转染对象,在6孔培养板中,接种SV-40-PED细胞2×105/孔,将4μlOligofectamine和不同浓度的SP1ODNs(2.5、5.0、7.5、10.0和12.5μl)分别溶于100μl无血清、无抗生素的DMEM培养基,室温放置20min后转染细胞,SP1ODNs最终浓度分别为50、100、150、200和250nmol/L、转染26h检测不同浓度转染情况,确定最佳SP1ODNs与Oligofectamine的比率、转染时间;流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度及摄取率评价转染效率;荧光显微镜观察细胞内荧光分布;测定细胞上清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量,观察细胞损伤情况。结果SV-40-PED在Oligofectamine的介导下可以摄取SP1ODNs。SP1ODNs终浓度为50、100、150nmol/L组细胞形态无明显变化,终浓度为200、250nmol/L组细胞收缩、变圆后逐渐恢复;SP1ODNs终浓度为250nmol/L时,转染26h时细胞形态也无明显变化,48、72h时有细胞漂浮现象。荧光下观察,转染成功各组荧光物质分布于细胞核内,其中SP1ODNs终浓度为200、250nmol/L组可见清晰核仁,浓度越高,荧光强度越强,细胞内荧光物质主要聚集于细胞核。SP1ODNs终浓度为250nmol/L时,转染72h组LDH浓度为137.12±3.92U/L,显著高于26h的49.61±17.13U/L和48h的120.26±8.42U/L,均有统计学意义(P<0.01);当转染时间为26h时,各浓度组上清液LDH值差异无统计学意义(P>0.05)。结论SP1ODNs终浓度为250nmol/L、转染26h时可以为SV-40-PED转染提供良好效果。

激活剂蛋白-1诱骗性寡核苷酸对大鼠颈总动脉损伤后新生内膜的影响

目的探讨激活剂蛋白1(AP1)诱骗性寡核苷酸对大鼠颈总动脉损伤后新生内膜的影响及其作用机制。方法36只Wistar大鼠随机分为3组,每组12只,均建立颈总动脉损伤模型,单纯损伤组不予任何处理;Lipofectin转染试剂组局部释放Lipofectin;治疗组局部释放AP1诱骗性寡核苷酸,3组均于于术后30min、3h、7d处死13取材,观察比较内膜增生程度,免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和c fos。结果单纯损伤组和Lipofectin转染试剂组7d时可见内膜明显增生,且有较多平滑肌细胞表达PCNA,c fos30min表达达高峰。而治疗组内膜增生程度减轻,PCNA、c fos的表达率明显下降,差异有显著意义(P<0.05或P<0.01)。结论局部转染AP1诱骗性寡核苷酸可明显抑制动脉损伤后的内膜增生,下调PCNA、c fos的表达。

核因子kappaB的诱骗性寡核苷酸对肿瘤坏死因子-α诱导的细胞间粘附分子-1表达的影响

目的 探讨人脐静脉内皮细胞中 ,核因子kappaB (NF κB)的诱骗性寡核苷酸对肿瘤坏死因子(TNF) α诱导的细胞间粘附分子 (ICAM) 1表达的影响。方法 采用培养的人脐静脉内皮细胞株ECV30 4 ,脂质体介导法转染寡核苷酸 ,以流式细胞仪检测转染效率 ,电泳迁移率转换试验检测诱骗性寡核苷酸与NF κB转录因子的亲和力及特异性 ,并以RT PCR和流式细胞仪测定其对TNF α诱导的粘附分子ICAM 1表达的影响。结果 诱骗性寡核苷酸能与NF κB特异结合 ,并可显著下调TNF α诱导的人脐静脉内皮细胞ICAM 1的表达。结论NF κB的诱骗性寡核苷酸可显著下调NF κB调控的与动脉粥样硬化相关的粘附分子的表达 ,为核酸药物防治动脉粥样硬化的临床应用提供一些前期资料。

核因子-κB的反义及诱骗性寡核苷酸联合作用对内皮细胞间黏附分子-1表达的影响

目的探讨在人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)ECV304中,核因子(NF)-κB的反义及诱骗性寡核苷酸联合作用对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导的细胞间黏附分子-1(ICAM一1)表达的影响。方法采用反义和诱骗性寡核苷酸分别和联合干预ECV304,流式细胞仪检测寡核苷酸转染效率,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞仪荧光活细胞测定和免疫组织化学染色法分别从mRNA和蛋白质水平检测TNF-α诱导的ICAM-1表达。结果脂质体介导的转染法能有效地将单链、双链寡核苷酸转染至ECV304中。联合转染反义及诱骗性寡核苷酸的ECV304细胞的ICAM-1 mRNA表达较TNF-α诱导者降低42.58%(P<0.05),ICAM-1在细胞表面的表达降低85.46%(P<0.05),且下调幅度均显著大于反义寡核苷酸或诱骗性寡核苷酸的单独作用(P值均<0.01)。免疫组织化学染色也获得同样结果。结论NF-κB的反义及诱骗性寡核苷酸可显著下调NF-κB调控的与动脉粥样硬化相关的黏附分子表达,且联合作用效果强于单独作用,这可能为核苷酸干预防治动脉粥样硬化提供新的思路。

诱骗寡核苷酸下调白血病细胞中组织因子高表达的研究

目的:探索针对诱导性组织因子(TF)高表达的靶向抑制的方法,探讨针对TF启动子-247～-230区域的诱骗寡核苷酸对U937-PR9细胞中PML/RARα融合蛋白诱导的TF表达是否存在竞争性抑制作用。方法:采用诱骗寡核苷酸技术,模拟TF启动子-247～-230的序列,人工合成该片段的双链DNA,转染U937-PR9细胞,通过流式细胞术监测转染效率并确定最佳电转浓度,通过实时PCR和酶联免疫吸附试验等技术,比较转染前后加Zn2+组与不加Zn2+组的TF表达水平变化。结果:流式细胞术显示,10μmol/L电转浓度下能够实现高效转染,标记的寡核苷酸在细胞内能够稳定存在72 h。未转染对照组中,加Zn2+诱导后TF表达明显上升;转染组中,加Zn2+诱导的TF表达水平与不加Zn2+组几乎没有差异。结论:特异性诱骗寡核苷酸对TF诱导性高表达存在靶向的竞争性抑制作用,该方法为急性早幼粒细胞白血病TF高表达引发的并发症提供了靶向治疗的新思路。

转录因子SP1诱骗性寡核苷酸对猪血管内皮细胞α半乳糖苷链表达的影响

目的:探讨转录因子SP1诱骗性寡核苷酸(decoy ODN)对猪血管内皮细胞系(SV-40-PED)膜蛋白α半乳糖苷链(αGal)表达的影响。方法:SP1诱骗性寡核苷酸转染猪血管内皮细胞系,细胞爬片后荧光显微镜下观察αGal抗原表位的表达;蛋白印迹法(Western blot)检测蛋白表达情况;RT-PCR法检测SV-40-PED转染前后α1,3半乳糖转移酶(α1,3GT)mRNA。结果:荧光显微镜下细胞爬片可见转染组(decoy ODN组)细胞膜荧光表达明显减弱,部分部位可见点状荧光缺损。Western blot显示decoy ODN/PED的αGal相对吸光度值为48.2±0.9,仅为空转染组(只含有转染试剂oligofectamine)91.6±1.7的52.6%(P<0.05)。转染组α1,3GT基因异构体的mRNA表达量(异构体1为0.42±0.20;异构体2为0.27±0.12)显著低于空转染组(异构体1为0.72±0.17;异构体2为0.50±0.19;P<0.05),但错配组(错义decoy ODN组)及空转染组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:SP1 decoy ODN可以靶向性抑制猪血管内皮细胞系αGal基因的表达。

NF-κB寡核苷酸诱骗策略构建胶原诱导性关节炎大鼠耐受性DC

目的:探讨NF-κB寡核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN Decoy)策略构建胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠脾脏来源的稳定的耐受性树突状细胞(DC),并对其成熟状态进行评估。方法:取CIA大鼠脾脏细胞,运用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4两种细胞因子诱导培养DC,并分为4组:单纯DC组、Decoy-DC组、LPS刺激DC组、LPS刺激Decoy-DC组。对4组细胞进行形态学观察、活力评价、表型鉴定及耐受性评估。结果:各组DC活力均>90%。OX-62表达率>55%。Decoy-DC组表面共刺激分子CD80和CD86阳性率和平均荧光强度、刺激淋巴细胞增殖能力及IFN-γ分泌能力均显著低于Control-DC组(P<0. 05),而IL-10分泌能力显著高于Control-DC组(P<0. 05)。LPS刺激Decoy-DC组CD80和CD86阳性率和平均荧光强度、刺激淋巴细胞增殖能力及IFN-γ分泌能力均显著低于LPS-DC组(P<0. 05),而IL-10分泌能力显著高于LPS-DC组(P<0. 05)。LPS-Decoy-DC组CD80和CD86阳性率和平均荧光强度、刺激淋巴细胞增殖能力与Decoy-DC组比,无显著性差异(P>0. 05)。结论:CIA大鼠脾脏细胞经NF-κB ODN Decoy策略成功构建出形态、表型及功能稳定的耐受性DC。

cDNA芯片检测STAT5诱骗核苷酸对K562细胞凋亡相关基因的影响

目的：转录因子STAT5在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)中组成性激活,并与CML细胞恶性表型密切相关,本研究用cDNA芯片检测方法探讨诱骗核苷酸(decoy ODNs)抑制STAT5对白血病K562细胞株凋亡相关基因的影响。方法：分别提取decoy ODNs处理前后的K562细胞总RNA,逆转录合成Cy3、Cy5标记的cDNA探针,与人14K基因表达谱cDNA芯片(V2.0)杂交,扫描获得数据后,用Genespring软件分析对照组和实验组的差异表达基因,半定量RT- PCR验证cDNA芯片结果。结果：2张cDNA芯片检测重复性良好(R=0.9799)。在13824个标记的基因中,检出413个上调基因,其中包括：TIAF1、GAB1、GYPA、DAPK3、TNFRSF1B、IRF1和PML等在内的18个凋亡相关基因；在检出的332个下调基因中,发现PIM1、CCND2、CCND1、MYC和BCL2L1等在内的11个凋亡相关基因；部分基因经半定量RT-PCR证实与cDNA芯片结果一致。结论：Decoy ODNs抑制STAT5信号通路后可引起K562细胞多种凋亡相关基因的变化,本实验为进一步研究STAT5信号通路所调控的凋亡相关基因提供了依据。

靶向转录因子STAT3的Decoy核苷酸对膀胱癌细胞体外增殖的抑制作用

目的：研究核转录因子STAT3的诱骗寡核苷酸(decoy ODNs)对人膀胱癌细胞系增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。方法：采用阳离子聚合物Sofast为转染试剂将STAT3 decoy ODNs转染入膀胱癌T24及5637细胞；用MTT法检测细胞增殖情况；流式细胞术检测ODNs的转染效率；荧光显微镜检测ODNs入核情况；RT-PCR及Western blot检测转染ODNs前后bcl-xl、cyclinD1和c-myc表达水平的变化。结果：ODNs可有效地转染至细胞内,部分可进入核内,转染效率呈剂量依赖关系；STAT3 decoy ODNs可抑制膀胱癌细胞的增殖,100 nmol/L组抑制率最明显,达40%～48%；100 nmol/L decoy ODNs明显抑制bcl-xl、cyclinD1和c-myc mRNA及蛋白的表达水平。结论：STAT3 decoy ODNs可显著抑制膀胱癌细胞的增殖。其作用机制可能是通过下调癌基因c-myc、细胞周期基因cyclinD1及凋亡相关基因bcl-xl的基因转录及蛋白表达而实现的。

转录因子NF-κB对血管成形术后血管狭窄和新生内膜形成的影响

目的探讨核转录因子NF-κB的反义和诱骗性寡核苷酸对大鼠颈动脉球囊损伤后血管增殖反应及相应细胞因子、细胞外信号调节激酶的影响。方法SD大鼠随机分为7组,每组分为6个时相点(6 h,1,3,5,7,14 d),每个时相点3只大鼠。制作血管球囊损伤模型。相应时间点处死动物,使用病理形态学、逆转录聚合酶链反应、免疫组化、W esternb lot等方法测定血管病理形态改变、单核细胞趋化因子(Monocytes chemotactic prote in-1,MCP-1)的mRNA和蛋白质表达、NF-κB p65和细胞外信号调节激酶(Extra-cellu lar sig-nal regu lated k inase,ERK2)的蛋白质含量。结果模型组、正义组、Scramb le组血管内膜/中膜在d 5增加,14 d达到高峰。反义组、诱骗组、反义组+诱骗组干预后,血管内膜/中膜明显减小(P<0.05),反义组+诱骗组较反义组、诱骗组治疗效果不明显。MCP-1 mRNA表达在血管损伤后6 h即可检测到,3、5、7 d后持续表达增加,14 d后表达降低,免疫组化显示MCP-1蛋白质表达在6个时相点均为阳性染色,14 d达到高峰;反义组、诱骗组、反义组+诱骗组治疗后,与模型组、正义组、Scramb le组相比,MCP-1 mRNA表达和蛋白合成在各时相点均降低(P<0.05)。W estern b lot检测核蛋白抽提物显示核因子NF-κB p65在血管损伤后6 h有一定蛋白表达,1 d后蛋白表达明显增加,至7 d达高峰,14 d后蛋白表达略降低。ERK2在血管损伤后1 d蛋白表达开始增加,d 7达到峰值,14 d后与d 7相比无明显差异。反义组、诱骗组、反义组+诱骗组干预后,各时相点蛋白质表达均较模型组、正义组、Scramb le组减弱(P<0.05)。结论转录因子NF-κB调控MCP-1、ERK2基因表达和蛋白质合成;球囊损伤后血管壁细胞增殖在不同时相点有动态变化;脂质体介导局部转染反义、诱骗性寡核苷酸可抑制NF-κB激活对下游基因的调控,两者联合作用效果较单独应用未表现出更明显的作用。

肿瘤相关巨噬细胞STAT3信号途径在抗乳腺癌免疫应答中的作用

目的探讨肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associatedmacrophages,TAMs)信号转录和激活因子3(signaltransducerandactivatorsoftranscription3,STAT3)信号途径在抗乳腺癌免疫应答中的作用。方法凝胶电泳迁移实验(electrophoreticmobilityshiftassay,EMSA)检测STAT3诱骗寡核苷酸(decoyoligonucleotides,decoyODNs)抑制STAT3活性的特异性及乳腺癌细胞的培养上清液诱导培养的大鼠腹腔的巨噬细胞的STAT3活性;用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活经培养诱导并用STAT3decoyODNs转染的巨噬细胞、将其注射于SD大鼠的移植乳腺癌局部,检测肿瘤的生长和大鼠脾细胞的免疫功能。结果STAT3decoyODNs能特异性地抑制STAT3的活性;经乳腺癌细胞的培养上清液液诱导后,巨噬细胞的STAT3过度激活;STAT3decoyODNs转染的诱导培养的巨噬细胞经LPS激活后能增强鼠脾细胞对乳腺癌的免疫反应和抑制肿瘤的生长。结论TAMs的免疫抑制作用可能与其STAT3信号过度激活有关,抑制TAMs的STAT3信号能增强机体对乳腺癌的免疫应答反应。