调补心肾方通过活化PI3K/Akt/mTOR通路促进阿尔茨海默病5xFAD转基因小鼠突触可塑性相关蛋白的合成

目的探讨调补心肾方(党参、制首乌、枸杞子、黄芪等)对阿尔茨海默病5xFAD转基因小鼠突触可塑性的影响及机制。方法取5月龄雄性野生型(WT)小鼠和5xFAD转基因小鼠各18只,分别随机分为对照组(0.9%NaCl)、调补心肾方组(颗粒剂,4.18 g·kg^(-1))、安理申组(盐酸多奈哌齐,0.625 mg·kg^(-1)),每组6只。按照上述分组灌胃给药,每日1次,共60 d。采用透射电镜观察小鼠海马组织超微结构;Western Blot法检测小鼠皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1、NMDAR1、p-CaMKⅡa、CaMKⅡa、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达水平。结果与WT对照组比较,5xFAD对照组小鼠海马CA1区突触的超微结构不规则,线粒体萎缩、减少,线粒体嵴断裂、消失,突触膜弯曲不规则,突触囊泡减少,突触后致密物(PDS)变薄甚至断裂;皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1/NMDAR1、p-CaMKⅡa/CaMKⅡa、PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均明显下调(P<0.05)。与5xFAD对照组相比较,5xFAD调补心肾方组小鼠海马CA1区突触的超微结构有明显变化,线粒体数量增加,突触囊泡增多,突触膜完整,突触后致密物有增厚现象;皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1/NMDAR1、p-CaMKⅡa/CaMKⅡa、PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论调补心肾方可能通过活化PI3K/Akt/mTOR通路,促进突触可塑性相关蛋白合成,进而改善AD的认知功能障碍。

调心补肾方治疗非痴呆型血管性认知功能障碍临床研究

目的:观察调心补肾方治疗非痴呆型血管性认知功能障碍的临床疗效。方法:将60例非痴呆型血管性认知功能障碍确诊患者随机分为中药治疗组和西药对照组,各30例,中药组给予调心补肾方中药,100mL,2次/d,对照组给予尼莫地平治疗,30mg,3次/d,治疗3个月,治疗前后分别检测患者的MMSE、韦氏记忆MQ值和血同型半胱氨酸。结果:经治疗后两组MMSE、韦氏记忆MQ值均有明显提高,统计学检验有显著性差异(P<0.01),治疗组比对照组MMSE、韦氏记忆MQ值的增值均有增加,有统计学差异;治疗组血同型半胱氨酸水平下降明显,统计学检验有差异(P<0.05),对照组治疗前后无统计学差异(P>0.05),治疗组比对照组血同型半胱氨酸水平降值较大,有统计学差异。结论:调心补肾方能有效改善非痴呆型血管性认知功能障碍患者的认知功能,优于钙离子拮抗剂尼莫地平,且无任何不良反应发生。

调心补肾方对阿尔茨海默病小鼠前额皮质中小胶质细胞激活和神经炎症反应的影响

目的探讨调心补肾方(TXBSF)对早老素1/2条件性双基因敲除(PS cDKO)的阿尔茨海默病(AD)小鼠前额皮质中小胶质细胞激活和神经炎症反应的影响。方法选取60只3~3.5月龄的PS cDKO小鼠及其同窝野生型对照小鼠,分为野生型(WT)组、模型(PS cDKO)组和模型+TXBSF(PS cDKO+TXBSF)组,每组20只。野生型组和模型组小鼠均食用普通饲料,模型+TXBSF组小鼠给予含有TXBSF(17.918 g/kg)饲料喂养90 d,药物治疗结束后取材进行分子生物学检测。采用免疫组化染色法观察TXBSF对各组小鼠前额皮质中小胶质细胞的激活情况;qRT-PCR法检测TXBSF对各组小鼠前额皮质中促炎症因子环氧化酶-2(COX-2)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)mRNA水平的影响;Western blot法检测TXBSF对各组小鼠前额皮质中COX-2和iNOS蛋白表达的影响;ELISA法检测TXBSF对各组小鼠前额皮质中TNF-α、IL-6和IL-1β含量的影响。结果免疫组化染色结果显示,与模型小鼠相比,模型+TXBSF组小鼠表现出下降的阿米巴样小胶质细胞比例(P<0.05)、较多的分支数(P<0.05)、较长的平均长度(P<0.05)以及较长的最长分支长度(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与模型组小鼠相比,模型+TXBSF组小鼠COX-2、iNOS、TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达下降(P<0.05)。Western blot结果显示,与模型组小鼠相比,模型+TXBSF组小鼠前额皮质中COX-2和iNOS的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。ELISA结果显示,与模型组小鼠相比,模型+TXBSF组小鼠前额皮质中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显著下降(P<0.05)。结论TXBSF可能通过抑制前额皮质中小胶质细胞的激活和神经炎症反应来改善AD小鼠的记忆障碍。

调心补肾方改善Presenilin1/2条件性双基因敲除小鼠记忆障碍的机制研究

目的研究调心补肾方(Tiao Xin Bu Shen Fang,TXBSF)对Presenilin1/2条件性双基因敲除(presenilin1/2 conditional double knockout mice,PS cDKO)的阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)模式小鼠记忆障碍的影响。方法实验动物采用3-3.5月龄小鼠,雌雄各半,随机双盲分组法分3组:同窝野生型组(Wildtype,WT)、PS cDKO组(cDKO)、调心补肾方组(cDKO+TXBSF),每组20只。利用PS cDKO小鼠作为AD模式小鼠,cDKO+TXBSF组为PS cDKO小鼠给予含有TXBSF(17913 ppm)饲料治疗60 d,其余2组食用普通饲料,治疗结束后进行行为学检测。分别采用旷场实验、高架十字迷宫实验、Y迷宫实验和条件性恐惧实验观察TXBSF对PS cDKO小鼠学习记忆的影响;并采用Western blot方法检测TXBSF对PS cDKO小鼠海马突触相关蛋白和促炎症因子表达的影响;采用免疫组化观察TXBSF对PS cDKO小鼠海马CA3区小胶质细胞激活的影响。结果旷场实验结果显示,TXBSF没有改变PS cDKO小鼠的活动时间及活动距离(P>0.05),说明TXBSF并不会影响PS cDKO小鼠的自发运动能力。高架十字迷宫实验结果显示,PS cDKO小鼠较WT小鼠在开放臂逗留的频率降低(P<0.01),时间相比则增高(P<0.001);而TXBSF治疗后增加PS cDKO小鼠在开放臂逗留的频率(P<0.01),但减少逗留的时间(P<0.05),说明TXBSF能改善PS cDKO小鼠的焦虑样行为。Y迷宫结果显示,PS cDKO小鼠较WT小鼠在闭合臂逗留的频率和时间均降低(P<0.01),而cDKO+TXBSF小鼠在闭合臂逗留的频率和时间较PS cDKO小鼠均增加(P<0.01),说明TXBSF能改善PS cDKO转基因小鼠空间学习记忆能力。条件性恐惧实验结果显示,在Contextual阶段与Cued阶段,PS cDKO小鼠的僵直时间百分明显低于WT小鼠(P<0.001),而cDKO+TXBSF小鼠的僵直时间百分比较PS cDKO小鼠显著增高(P<0.05),说明TXBSF可以改善PS cDKO小鼠的联合记忆障碍。Western blot检测结果发现,TXBSF治疗可降低PS cDKO小鼠海马组织中促炎症因子iNOS和COX-2表达的增加,表明TXBSF可以抑制PS cDKO小鼠的神经炎症反应;并且TXBSF治疗提高PS cDKO小鼠海马组织中MAP2和PSD95蛋白表达的下降,改善神经元和突触损伤。另外,免疫组化结果表明TXBSF对PS cDKO小鼠海马CA3区的小胶质细胞激活有抑制作用。结论TXBSF对PS cDKO小鼠学习记忆障碍具有一定程度的改善作用。TXBSF对PS cDKO小鼠具有神经保护作用可能是通过抑制神经炎症反应实现的。

调心补肾方改善阿尔茨海默病小鼠前额皮质突触缺失和tau蛋白过度磷酸化的作用研究

目的研究调心补肾方(TXBSF)对早老素1/2条件性双基因敲除(PS cDKO)的阿尔茨海默病(AD)小鼠模型前额皮质(PFC)突触缺失和tau蛋白过度磷酸化的影响。方法采用3~3.5月龄小鼠,雌雄各半,随机分为野生型组(WT)、PS cDKO模型组(cDKO)、PS cDKO+TXBSF组(cDKO+TXBSF),每组6只。WT和cDKO两组小鼠给予普通饲料,cDKO+TXBSF小鼠给予含TXBSF(给药剂量为2.55 g/kg)的饲料喂养,共治疗90 d。采用Western blot法检测小鼠PFC中N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)亚基(NR1、NR2A、NR2B)、微管相关蛋白2(MAP2)和tau蛋白表达;qRT-PCR法检测小鼠PFC中NR1、NR2A、NR2B和MAP2 mRNA表达。结果Western blot检测结果显示,与cDKO小鼠相比,cDKO+TXBSF小鼠PFC中NR1、NR2A、NR2B和MAP2蛋白表达增加(P<0.05);磷酸化tau(ser 396/404)蛋白表达减少(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与cDKO小鼠相比,cDKO+TXBSF小鼠PFC中NR1、NR2A、NR2B和MAP2 mRNA表达增加(P<0.05)。结论TXBSF对PS cDKO小鼠记忆缺陷的改善作用可能通过逆转PFC的tau蛋白过度磷酸化和下调突触相关蛋白的表达来实现。