2型糖尿病患者胰岛细胞自身抗体、抗谷氨酸脱羧酶抗体水平与糖尿病微血管并发症的关系

目的探讨抗胰岛细胞抗体(ICA)、抗胰岛素抗体(IAA)及抗谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)与2型糖尿病(T2DM)患者发生糖尿病微血管并发症(DMAP)的关系。方法对2023年11月-2024年3月本院收治的114例T2DM患者临床资料进行回顾性分析,根据是否发生DMAP将患者分别分入单纯T2DM组(n=61)和并发症组(n=53)。检测所有患者入院时IAA、ICA及GADA水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析IAA、ICA及GADA对DMAP的评估价值,采用多因素logistic回归分析探讨DMAP的影响因素。结果并发症组患者的ICA、IAA、GADA水平均高于单纯T2DM组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ICA、IAA及GADA评估T2DM患者发生DMAP的曲线下面积(AUC)分别为0.792、0.736、0.805,联合检测的AUC为0.912。并发症组患者T2DM病程≥8年比例、有饮酒史比例均高于单纯T2DM组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。logistic回归结果显示:T2DM病程≥8年(OR=2.314,95%CI:1.136~4.714)、ICA≥4183.62 RU/mL(OR=4.221,95%CI:1.849~9.633)、IAA≥5587.37 RU/mL(OR=3.449,95%CI:1.654~7.192)、GADA≥3667.92 IU/mL(OR=5.150,95%CI:2.058~12.888)是T2DM患者发生DMAP的危险因素(P<0.05)。结论ICA、IAA及GADA与T2DM患者发生DMAP密切相关,联合检测有助于DMAP的评估。

谷氨酸脱羧酶的克隆表达与酶学性质

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)是一种非蛋白天然氨基酸,具有多种生物活性。谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase,GAD)能将L-谷氨酸或谷氨酸钠不可逆地催化为γ-氨基丁酸。为探究GAD酶学性质,从植物乳杆菌CPRGJ(Lactobacillus plantarum)中克隆表达GAD,利用镍柱亲和层析对重组GAD进行纯化并探究其酶学性质。结果表明,GAD的酶学性质为最适温度45℃、最适pH5.0、辅酶5-磷酸吡哆醛摩尔浓度250μmol/L,此时有最大酶活力;有机试剂中正丁醇对GAD有强抑制作用,通过Lineweaver Burk方程可得到GAD的米氏常数Km为19.988 mmol/L,Vmax为0.263 mmol/(L·min)。

谷氨酸脱羧酶1在精神疾病中的研究进展

谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase, GAD)是γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)的合成酶,主要在脑和胰岛中存在。GABA的异常表达与多种疾病相关,多项研究表明其合成酶GAD1可能参与精神疾病的发病过程,现就GAD1研究的新进展及其可能的致病机制进行综述。

抗谷氨酸脱羧酶65抗体相关脑炎1例

抗谷氨酸脱羧酶65抗体相关自身免疫性脑炎是由于免疫系统对中枢神经系统抗原产生抗原抗体反应而导致的疾病,常见的临床症状为局灶性发作癫痫、精神症状等为主要临床特点,其在临床工作中比较罕见,值得影像科医生的重视与学习。

自身免疫糖尿病患者谷氨酸脱羧酶抗体表位的研究

自身免疫糖尿病患者体内存在胰岛自身抗体,其中谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)被广泛应用于自身免疫糖尿病的诊断及预测。GADA表位变化与自身免疫糖尿病的发生和发展密切相关,新诊断的1型糖尿病患者血清中GADA倾向于与谷氨酸脱羧酶(GAD)65 M段和C端结合,而与N端罕见结合。GAD65-CAb阳性的成人隐匿性自身免疫糖尿病患者其胰岛功能较差,而GAD65-NAb阳性者与2型糖尿病相似。对GADA表位的研究不仅能为临床提供更多的信息,而且对于阐明自身免疫糖尿病的发病机制有重要的意义。

谷氨酸脱羧酶抗体检测的生物素．链霉亲合素放大ELISA系统构建及其临床应用

目的建立检测谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)的新方法,即生物素-链霉亲合素放大ELISA系统(ELISA,BAS ELISA),并进行验证及初步临床应用。方法人脑组织经过破碎、抽提、二次凝胶过滤层析与阴、阳离子交换层析分离蛋白,收集纯化的谷氨酸脱羧酶(GAD);以链霉亲和素(SA)预包被,使GAD生物素化(bio-GAD),探讨检测GADA的最优实验条件,并对BAS ELISA的灵敏度、特异性、准确性及精密性进行验证。然后选择新诊断的成年1型糖尿病患者106例(T1DM组),以健康体检者98例为对照组,抽取空腹外周静脉血3 ml,分离血清冷冻标本,用构建的BASELISA和德国宝灵曼公司Anti-GAD65 ELISA检测血清中的GADA,对比研究并进行统计学分析。结果成功构建了检测GADA的BAS ELISA新方法;在T1DM组中,BAS ELISA方法测得T1DM的GADA阳性率显著高于anti-GAD65 ELISA方法(82.08%vs 52.83%,P<0.01);在对照组中BASELISA方法测得T1DM的GADA阳性率也明显高于anti-GAD65 ELISA方法(10.20%vs 6.12%,P<0.05)。结论利用生物素-链霉亲合素放大系统可以构建检测GADA的ELISA新方法;生物素-链霉亲合素放大ELISA系统在检测GADA方面具有较高的特异性、灵敏度、准确性和精密性,提高了GADA检测的阳性率,降低T1DM的漏检率,为早期检测T1DM提供新方法。

谷氨酸脱羧酶活力测定中GABA比色定量方法研究

建立了谷氨酸脱羧酶活力测定中γ-氨基丁酸比色测定方法,该方法灵敏度高、精确性和重现性好。测定程序为:取酶反应液0.4ml,加入Na2CO3(1mol/L)0.1ml、pH10.0硼酸盐缓冲液(0.2mol/L)0.5ml、6%苯酚1ml,混匀,于室温下(20℃)在5min内加入5.2%NaClO溶液1ml,混匀后放置4～8min,然后沸水浴l0min,立即冰浴20min,待溶液出现蓝绿色后,加入2.0ml60%乙醇溶液,混匀后于20℃水浴中放置20～40min,测定640nm处的吸收值。经采用比色法和高效液相色谱法对谷氨酸脱羧酶酶反应液进行测定,两种方法的测定结果相对误差为4.91%。

香蕉谷氨酸脱羧酶基因克隆与表达

根据抑制缩减杂交文库获得的香蕉谷氨酸脱羧酶基因片段,利用RACE技术,首次从香蕉果实中克隆了谷氨酸脱羧酶基因的cDNA全长.结果表明,该cDNA的ORF全长1 500 bp,编码499个氨基酸.Blast分析表明,该基因所推导的氨基酸序列与水稻、柑橘、白杨、番茄等具有较高的一致性,分别为82%、81%、79%、78%,推测其编码的蛋白质分子量为56.25 kD,等电点5.21,具有与钙调蛋白结合的C端延伸区域和磷酸吡哆醛结合位点.组织特异性和果实采后正常成熟不同阶段表达结果显示,该基因在香蕉根、茎、叶、花、果实中均有表达,果实中的表达量较高,正常成熟表达量的增加可能受内源乙烯诱导并促进乙烯生物合成,推测其可能在不同的生理过程中起作用,并且与果实成熟及乙烯生物合成密切相关.

谷氨酸脱羧酶抗体诊断成人隐匿性自身免疫性糖尿病探讨

采用放射配体法检测谷氨酸脱羧酶（GAD65）抗体，对195例≥35岁非酮症Ⅱ型糖尿病起病半年以上者和45例正常对照者的观察表明：本组Ⅱ型糖尿病者GAD65抗体阳性率为14．8％，高于正常对照者的2.2％；发病年龄＜40岁、有酮症史、体重指数（BMI）＜21kg／m2、空腹血清C肽＜0．3nmol／L和（或）胰升糖素刺激后6分钟血清C肽＜0．6nmol／L者，GAD65抗体阳性率均高于相应对照组（前者分别为后者的25、4.1、3.2和5.8倍）；而患者性别、病程和发病时多饮、多尿、多食及消瘦症状的多寡与GAD65抗体无显著性关联。结果提示：①我国成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA）占Ⅱ型糖尿病的比例较高；②Ⅱ型糖尿病起病患者发病年龄轻、有酮症史、低体重和胰岛素缺乏为LADA诊断的重要线索；③GAD抗体检测对早期诊断LADA有实用价值。

2,4-二硝基氟苯柱前衍生法测定植物中谷氨酸脱羧酶的活力

建立了2,4-二硝基氟苯(FDNB)柱前衍生反相高效液相色谱紫外检测法测定植物中谷氨酸脱羧酶(GAD)活力的方法。利用GAD催化L-谷氨酸脱羧转变成γ-氨基丁酸(CABA)的性质,用FDNB柱前衍生GABA,HPLC Lichrospher C18色谱柱分离,在360nm下检测衍生物,从而得到生成GABA的含量,及不同植物组织中的GAD活力。本方法的线性范围0.2～5g/LGABA(r=0.9954),精密度RSD为0.21%、回收率高,且衍生化产物在一个月内都能保持稳定。用本方法测定得出稻米和茶叶中均有一定的GAD活力。在稻米组织中,GAD主要分布在米胚芽中,米糠也具有相对较高的GAD活性,为开发富含GABA的糙米食品提供了依据。

发芽糙米与稻谷的谷氨酸脱羧酶活力及γ-氨基丁酸含量比较

比较了糙米与稻谷发芽期间及培养结束后的静置过程中谷氨酸脱羧酶(GAD)活力、γ-氨基丁酸(GABA)及谷氨酸(Glu)含量变化情况。结果表明,糙米和稻谷在(32±1)℃条件下,以1.2 L/min的通气量,用含有0.1%L-谷氨酸、0.1%抗坏血酸的培养液浸渍发芽,生长速率和呼吸速率均以糙米为快。培养结束时,发芽糙米中GABA含量和Glu含量分别比发芽稻谷增加64.05%和14.68%,空气中放置8 h后发芽糙米中GABA含量比发芽结束时增加了24.32%,整个发芽和静置期间发芽糙米中GAD活力始终高于发芽稻谷。

产谷氨酸脱羧酶金银花内生菌的鉴定及其转化特性研究

从金银花植株茎中分离到了1株具有谷氨酸脱羧酶活性的内生细菌,1g菌体(DW)24h可将241.224μmolL-Glu转化生成GABA。通过引物设计,利用PCR扩增出该菌株的16SrDNA序列,大小为1459bp。通过形态特征、生理生化特征和16SrDNA序列分析鉴定EJH-7为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。同时基于16SrDNA构建了系统进化树,并对EJH-7进行了系统发育分析。Bacillus megateriumEJH-7细胞转化谷氨酸生成GABA的最适反应温度和pH分别为30℃和5.5;表面活性剂Tween20和Tween80对转化反应活性有抑制作用,而Triton100影响不显著;Ca2+、Cu2+和Co2+对转化反应活性有促进作用,分别提高了20.36%、46.61%和6.77%,而K+、Fe2+、Zn2+、Mg2+和Mn2+有不同程度的抑制作用。

比色法快速测定乳酸菌谷氨酸脱羧酶活力及其应用

基于Berthelot显色测定ω 氨基酸的反应 ,探讨了比色法快速测定谷氨酸脱羧酶活力的测定条件。结果表明 ,该方法灵敏度较高 ,重现性好 ,成本低 ,快捷 ,可替代氨基酸分析仪分析法。对乳酸菌谷氨酸脱羧酶提取液的适宜反应底物体系为 0 2mol LMacIlvaine ,pH4 7,内含 0 1mmol LPLP (5 磷酸吡哆醛 ) ,1 0mmol L底物L MSG (L 谷氨酸钠 )。 2 0 0 μL底物溶液和 1～ 1 0 0 μL酶液在 3 0℃反应 ,然后冰浴中加入 2 0 0 μL 0 2mol L硼酸缓冲液 (pH9 0 )终止反应 ,再加入 1mL 6%苯酚和 40 0 μL次氯酸钠 ,沸水浴加热 1 0min后 ,迅速冷却 2 0min ,在 63 0nm测定吸光值 ,酶反应产物γ 氨基丁酸的定量以标准曲线确定 。

米糠谷氨酸脱羧酶的酶学性质研究

研究了米糠谷氨酸脱羧酶(GAD)的酶学性质。结果表明:米糠GAD的最适温度为40℃,最适pH5.6,米糠GAD耐热性较差,60℃下保温0.5 h后,酶活下降至65%,保温1 h,酶活下降至48%,而70℃时酶就完全失活,而此酶在pH5.5～9都可以保持84%以上的酶活力。米糠GAD对底物和辅酶PLP的Km分别为0.028 45 mol/L和1.13μmol/L。KI、Ag^(2+)、SDS、乙酸对米糠GAD的活力有较大的抑制作用,而Ca^(2+)对米糠GAD的活性有较强的激活作用,提高了底物与米糠GAD的亲和力。

爬山虎内生菌的鉴定及其谷氨酸脱羧酶酶学特性

从爬山虎茎中分离到5株内生菌,其中菌株EJC-1具有谷氨酸脱羧酶(GAD)活性。当湿菌体与10 g.L-1谷氨酸钠溶液比例为1∶10(W∶V)时,在30℃和120 r.min-1下振荡反应24 h,细胞转化液中γ-氨基丁酸浓度为(3.07±0.23)mmol.L-1。通过形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定EJC-1为巨大芽孢杆菌(Bacillus megateri-um)。同时基于16S rDNA构建了系统进化树,并对EJC-1进行了系统发育分析。B.megateriumEJC-1 GAD的最适反应温度和pH分别为50℃和5.6。低于40℃,GAD在pH5-6范围内较稳定。2.5 mmol.L-1Mg2+对GAD活力具有显著的促进作用,活力提高了13.85%。

谷氨酸脱羧酶(GAD_(65))自身抗体的放射配体检测法

为建立一种诊断和预测胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）的免疫学定量检测指标，改良了Ｐｅ－ｔｅｒｓｅｎ的谷氨酸脱羧酶自身抗体（ＧＡＤ－Ａｂ）放射配体分析法，以试管内转录和翻译的标记６５ｋＤ谷氨酸脱羧酶作抗原，以蛋白Ａ凝胶作为抗体沉淀剂，用液闪仪测ｃｐｍ值。对１５例初发ＩＤＤＭ和４０例对照的测定结果显示：ＩＤＤＭ组ｃｐｍ值显著高于对照组（Ｐ＜０．００１）；以对照组ｘ±２ｓ作为阳性标准，则ＩＤＤＭ组阳性率为６７％（１０／１５），对照组为２．５％（１／４０）。故改良的ＧＡＤ－Ａｂ放射配体分析法对初发ＩＤＤＭ诊断的特异性为９７．５％，敏感性为６７％。且操作简便，易于推广。

精神分裂症患者血清谷氨酸脱羧酶抗体的测定及其临床意义

目的 探讨精神分裂症患者血清谷氨酸脱羧酶抗体 (GAD Ab)的含量、阳性率及其临床意义。方法 采用ELISA法对 89例精神分裂症患者及 30名正常健康者血清GAD Ab含量进行测定 ,比较两者的GAD Ab值及阳性率 ,并将GAD Ab值与精神分裂症BPRS各因子分分别进行直线相关分析。结果 精神分裂症患者血清GAD Ab值及其阳性率显著高于正常健康者 ,病程 <5年的精神分裂症患者血清GAD Ab值高于病程≥ 5年的患者 ;GAD Ab值与思维障碍因子呈正相关 ,与迟滞因子呈负相关。结论 精神分裂症患者血清GAD Ab存在异常 ,可能具有病因学意义。

微生物谷氨酸脱羧酶研究进展

文章综述了谷氨酸脱羧酶的研究概况,包括微生物来源及分布、在微生物中的作用、酶学特性、酶的结构及基因工程,并对其研究前景进行了展望。

乳酸菌谷氨酸脱羧酶的酶学性质研究

本文对一株乳酸菌所产谷氨酸脱羧酶的酶学性质进行了较系统的研究,其中包括酶的热稳定性、pH稳定性及温度、pH和一些化学物质对酶活的影响。结果表明:此酶的最适温度为52℃,最适pH为4.5,米氏常数Km=24mmol。PLP、VB6及Ca2+在一定程度上都能促进酶活,且在含量小于100μmol时,作用程度为PLP>VB6>Ca2+。乙酸浓度小于0.05mol/L也能提高酶活力。

发芽糙米γ-氨基丁酸形成的谷氨酸脱羧酶活性与底物变化的相关性分析

以糙米为原料,采用浸泡发芽结合超声波逆境处理方式增加糙米中γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)含量。对发芽过程中谷氨酸(glutamic acid,GA)含量、谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)活性及GABA含量进行分析,研究GA含量、GAD活性与GABA含量之间的关系。结果表明:随着发芽时间延长,GABA及GA含量持续明显增加,且GABA与GA含量有显著相关性(P<0.05)。随着发芽时间延长,GAD活性呈先增后降再增的趋势;在发芽0~48 h之间,对照组GAD活性(以GABA量计)均值为9.25 nmol/g,GABA含量增加到6倍以上;在48~60 h之间,GABA增量不明显。与对照相比,超声波处理促进GA含量增加2倍以上,并且快速提高GAD活性,在36 h时发芽糙米中GABA含量最高达41.85 mg/100 g。