水产动物源细菌质粒介导的喹诺酮类耐药研究概况

喹诺酮类药物是一种人工合成的抗菌药物,这类抗菌药都有喹诺酮环结构,又称吡酮酸类或吡啶酮酸类。喹诺酮类药物能够穿透细胞壁进入细胞直接作用于DNA促旋酶(拓扑异构酶Ⅱ)和拓扑异构酶Ⅳ[1],通过抑制这两种酶而阻断DNA的复制,从而发挥抗菌作用[2]。由于这类药物拥有抗菌谱广、高效、用药量低、给药方便、毒副作用低和与其他抗菌药物不产生交叉耐药等优点[3],广泛应用于人医临床、畜牧水产养殖的细菌病治疗中。目前喹诺酮类药物主要用于治疗水产养殖动物常见病原如气单胞菌(Aeromonas)、弧菌(Vibrio)等引起的细菌性疾病[4]。

养殖龟鳖源气单胞菌耐药性与质粒介导喹诺酮类耐药基因分析

为了解养殖龟鳖源气单胞菌的耐药情况及质粒介导的喹诺酮类耐药（PMQR）、喹诺酮类耐药决定区（QRDR）与耐药表型之间的关系；实验采用K—B纸片法测定了1996--2013年从广东地区患病龟鳖分离的67株气单胞菌对23种常见抗菌药物的耐药性，并检测5种PMQR基因qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac（6’）-Ib—cr，同时分析PMQR基因阳性菌株染色体上gyrA、parC基因QRDR的突变情况。结果显示，67株气单胞菌对氨苄西林、头孢噻吩和磺胺复合物的耐药率分别高达100％、92．54％和83．58％，对喹诺酮类药物呈现中等耐药，耐药率介于19．40％-64．18％，而对亚胺培南、呋喃妥因、阿米卡星、头孢噻肟敏感性较高，耐药率低于10％；79．10％（53／67）的菌株对3类或以上抗菌药物具有耐药性。19．40％（13／67）的菌株携带PMQR基因，其中，8．96％（6／67）携带qnrSl基因、5．97％（4／67）携带qnrS2基因、7．46％（5／67）携带aac（6’）-Ib—CF基因[其中2株同时携带qnrS2和aac（6’）-Ib．CF基因]。13株PMQR基因阳性菌株均分别携带1—4个质粒，大小介于0．8-15kb；其中6株在gyrA基因及parC基因上均发生变异，3株仅在删rA基因上发生变异，另外4株未发现QRDR的基因突变。研究表明，广东地区龟鳖源气单胞菌对多种抗菌药物耐药并存在多重耐药现象；而且PMQR机制的存在预示着喹诺酮类耐药性很可能会在水产临床上更加快速而广泛地传播，应引起重视。

产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌的耐药性及相关耐药机制

目的了解安徽省35所医院2005年随机月份临床分离402株大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶及对常用抗菌药物的耐药情况,揭示其相关耐药机制,指导临床合理用药方法三维试验筛选产AmpC酶株;多重PCR检测产质粒介导AmpC酶菌株,对产质粒介导AmpC酶菌株用PCR方法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因、Ⅰ类整合子基因盒插入序列和主动外排系统acrAB-tolC基因结果检出产质粒介导AmpC酶菌株28株(7.0%),其中2株经测序证实为新的质粒ampC基因型(GenBank登录号分别为EF054895,EF417572)产酶菌株对12种常用抗菌药物,除亚胺培南、美罗培南全部敏感外.对其他大多数抗菌药物耐药率均高于非产酶株28株产酶菌株中有23株表现为多重耐药,20株检测出各型ESBLs基因,21株扩增出Ⅰ类整合子基因盒插入序列,20株主动外排系统acrAB-tolC基因阳性结论产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌对临床常用抗菌药物的耐药率均较高,多重耐药现象普遍,同时存在多种耐药机制,其中以产生灭活酶和Ⅰ类整合子介导的耐药机制为主对产酶株临床经验用药可选用碳青霉烯类、阿米卡星及第四代头孢菌素类抗菌药物。

肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮类抗生素耐药机制的研究

目的研究质粒介导的喹诺酮类耐药机制（PMQR）在肺炎克雷伯菌临床分离株上的分布情况，并对阳性菌株上染色体介导的喹诺酮类耐药机制进行分析。方法细菌的鉴定和药敏采用Vitek－2compact系统；采用PCR法检测质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、aac，（69－Ib－cr和qepA的分布情况。对包含PMQR的细菌，采用E．试验测定环丙沙星的MIC大小，同时扩增测序分析染色体基因gyrA、gyrB、parC、parE的突变情况。结果临床分离的67株肺炎克雷伯菌中，qnrS、qnrB、aac－（6｀）．Ib．cr、qepA的检出率分别为14．93％、2．99％、2．99％和16．42％。8株细菌同时包含qn，和卵p4基因，其中2株qnr、qepA和aac-（6｀）-Ib-cr同时阳性。PMQR阳性菌株对环丙沙星的MIC值不定（0．032～≥64μg／mL），其中8株（占61．54％）对环丙沙星高水平耐药（≥64μgg／mL）。比对结果显示，环丙沙星MIC≤0．5μg／mL的3株细菌几乎未见染色体的氨基酸序列改变；而环丙沙星MIC≥8μg／mL的菌株全部存在gyrA和parC编码氨基酸序列改变，且突变主要集中在gyrA83位、87位~[1parC80位上。所有PMQR阳性的肺炎克雷伯菌的∥膪和pa旭均未发现任何氨基酸序列突变。结论临床分离的肺炎克雷伯菌上检测到qnr、aac-（6｀）-Ib-cr、qepA的分布与共存。PMQR阳性菌株对环丙沙星的MIC值不定，但染色体机制仍是肺炎克雷伯菌对喹诺酮类抗生素耐药的主要机制，突变主要见于gyrA的83位、87位及parC的80位上。

大肠埃希菌耐药特征及质粒介导喹诺酮耐药基因分布

目的调查大肠埃希菌分离株的耐药特征及质粒介导喹诺酮耐药基因流行状况。方法纸片扩散（K-B）法进行药物敏感试验,采用双纸片法检测产超广谱β内酰胺酶（ESBL）,聚合酶链反应（PCR）检测qnr A、qnr B、qnr C、qnr D、qnr S、aac（6＇）-Ib、qep A基因,限制性酶切反应确定aac（6＇）-Ib-cr基因型。结果 179株大肠埃希菌中95株ESBL表型确证试验阳性,检出率为53.1%;产ESBL菌株未见对美罗培南耐药,对亚胺培南耐药率极低（1.1%）,对阿米卡星、哌拉西林-他唑巴坦、头孢哌酮-舒巴坦耐药率皆低于30%,对哌拉西林、头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南、甲氧苄啶-磺胺甲唑耐药率皆高于70%,对庆大霉素、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星耐药率在60%~70%;PCR扩增结果显示产ESBL菌株,具有qnr基因9株（9.5%）,其中qnr A 2株、qnr B 5株、qnr S 2株。非产ESBL菌株,具有qnr B基因3株（3.6%）;酶切反应显示产和非产ESBL菌株具有aac（6＇）-Ib-cr基因分别为21株（22.1%）和5株（6.0%）。所有菌株皆未检测到qep A基因。结论产ESBL大肠埃希菌呈现多重耐药趋势,质粒介导喹诺酮耐药基因以aac（6＇）-Ib-cr基因型为主。

宠物源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因流行性检测

【目的】对广州分离得到的宠物源(主要是宠物猫、狗)大肠杆菌进行质粒介导喹诺酮类耐药PMQR基因qnr、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因的流行性检测。【方法】采用琼脂平板稀释法对164株临床分离的宠物源大肠杆菌进行15种抗菌药物的最小抑菌浓度测定。通过PCR检测qnr、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因。建立大肠杆菌基因指纹图谱并对指纹图谱进行分析。【结果】164株宠物源大肠杆菌对12种兽医临床常用抗生素耐药率较高,且表现为多重耐药(5-14耐)。在164株宠物源大肠杆菌中检测到3个菌株同时携带qnrA、qnrB和qnrS基因,其中2株也携带aac(6′)-Ib-cr基因。阳性菌株均能扩增出指纹图谱,具有两个以上PMQR基因的菌株多分布于B型和C型。【结论】广州市宠物源大肠杆菌对临床常用抗菌药物耐药较为严重,检测结果显示喹诺酮类耐药基因在本市宠物医学临床上传播广泛,PMQR基因的产生能力与其基因型有密切的关系。

质粒介导的喹诺酮类耐药基因在鸡源大肠杆菌中的流行

为了解河南省质粒介导的喹诺酮类耐药基因(qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr)在产16S rRNA甲基化酶鸡源大肠杆菌中的流行与分布,分别设计特异性引物对2005-2008年在河南省病鸡病料中分离保存的158株16SrRNA甲基化酶阳性鸡大肠杆菌进行PCR扩增。结果显示,在158株产16S rRNA甲基化酶鸡源大肠杆菌中,qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr的检出率分别为0.6%,2.5%,13.9%,2.5%和58.2%。提示质粒介导的喹诺酮类耐药基因在河南省产16S rRNA甲基化酶鸡源大肠杆菌中普遍存在,且以qnrS和aac(6′)-Ib-cr为主。

大肠埃希菌临床分离株对喹诺酮类抗菌药的质粒介导耐药

目的了解近年来发现的质粒介导耐药机制在大肠埃希菌临床株对喹诺酮类耐药中所起的作用。方法78株环丙沙星耐药菌株分离自上海5所教学医院。以克隆斑点杂交及Southern杂交方法筛选质粒介导耐药基因qnr；以接合试验了解喹诺酮耐药的可转移性；对qnr基因进行序列分析,以引物步移法对qnr周边质粒DNA进行测序、分析。结果78株大肠埃希菌中,6株(7．7%)qnr检测阳性。在6株阳性菌中,喹诺酮耐药性均可通过质粒转移,接合子对环丙沙星的MIC较受体菌上升16～250倍。qnr基因与最早报道的序列一致,qnr位于In4族的Ⅰ类整合子上,本研究中的2个新整合子命名为In36及In37。结论与qnr相关的质粒介导喹诺酮类耐药性在大肠埃希菌临床分离株中有一定程度流行,这可能是我国细菌对喹诺酮类耐药性上升迅速的原因之一。

宠物源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrD的研究

【目的】对临床分离的宠物源大肠杆菌进行质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrD的检测,并对该基因进行序列分析和传播机制的研究。【方法】采用微量稀释法对阳性菌株进行15种抗生素的最小抑菌浓度试验;通过PCR对基因克隆,并对克隆产物和菌株阳性质粒进行转化;同时对菌株进行接合转移试验。【结果】从164株宠物源大肠杆菌中检测出1株qnrD阳性菌株(GP2009-036),GP2009-036对14种兽医临床常用抗生素耐药严重,表现为多重耐药(14耐);PCR产物经连接PMD19-T载体后可转化入DH5α感受态细胞中;接合转移试验成功地将质粒转移到大肠杆菌J53中;可从GP2009-036与其转化子中抽提出阳性质粒。【结论】该qnrD阳性菌株对临床常用抗生素耐药严重,且阳性质粒可在病原微生物间进行水平传播,其水平传播机制可能使该基因在宠物临床上进行传播。

质粒介导的DHA型AmpC酶在肺炎克雷伯菌中的表达及对耐药性的影响

目的研究质粒介导的DHA型AmpC酶在肺炎克雷伯菌中的基因表型及耐药性。方法根据美国临床实验室标准协会(CLSI)的标准,用琼脂稀释法检测MIC值和K-B法确证ESBLs,利用3-氨基苯酚硼酸对AmpCβ-内酰胺酶(AmpC酶)的抑制作用检测肺炎克雷伯菌的AmpC酶表型;用基因芯片技术及聚合酶链反应(PCR)检测ESBLs与AmpC酶的基因型。结果DHA型AmpC酶肺炎克雷伯菌同时具有产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)为94.2%,以DHA+TEM+SHV的基因表型最多38.3%;AmpC酶肺炎克雷伯菌的MIC50均<0.25μg/ml、MIC90均<0.5μg/ml,该类菌对头孢他啶的耐药率(85.7%)高于对头孢噻肟的耐药率(60.0%),但MIC50和MIC90基本相同;34株产酶菌的耐药基因经质粒接合试验,分别有14株接合成功,5株在头孢噻肟和头孢西丁两种选择性平皿培养基中同时接合成功,2株在和头孢西丁平皿培养基中接合成功,7株在头孢噻肟平皿培养基中接合成功。结论解放军总医院质粒介导的DHA型AmpC酶,在肺炎克雷伯菌中以DHA+TEM+SHV的基因表型为主,同时具有ESBLs占94.1%;41.2%的可以将耐药质粒结合给大肠埃希菌。

鲍曼不动杆菌质粒介导喹诺酮耐药机制研究

目的调查临床分离的鲍曼不动杆菌中质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因的分布情况,并对PMQR阳性菌株中染色体介导的喹诺酮耐药机制进行分析。方法采用琼脂二倍稀释法测定菌株对环丙沙星和左氧氟沙星的药物敏感性;PCR检测qnr A、qnr B、qnr C、qnr D、qnr S、aac(6’)-Ib-cr和qep A,对PMQR阳性菌株扩增blaTEM、blaSHV、blaCTX-M和blaPER,同时扩增测序分析染色体基因gyr A、gyr B、par C和par E的突变情况;接合转移试验验证PMQR与bla基因的转移性。结果 91株鲍曼不动杆菌中有2株携带qnr B4基因。2株PMQR阳性菌株均接合转移成功,qnr B4和blaCTX-M-14、blaSHV-12基因可以通过质粒共同转移。PMQR阳性菌株均在Gyr A亚基和Par C亚基存在氨基酸突变,其相应的接合子以及受体菌均未发现突变。结论临床分离的鲍曼不动杆菌中存在qnr B基因,qnr与bla基因能共同转移,造成多重耐药的传播。

产质粒介导AmpC酶的肺炎克雷伯菌耐药性和基因型研究

目的了解耐头孢西丁的产质粒介导AmpC酶的肺炎克雷伯菌的耐药性及其AmpC酶基因型别。方法对49株耐头孢西丁肺炎克雷伯菌用头孢西丁三维试验检测AmpC酶,用平皿琼脂倍比稀释法检测产酶株的药物敏感性,提取质粒用多重PCR技术检测质粒介导的AmpC基因型,设计引物进行结构基因的全长扩增和测序。结果29株肺炎克雷伯菌(发生率59.2%)产质粒介导AmpC酶;其中检出DHA型16株,CIT型6株,EBC型7株,发现新的基因型2种,自命名为ACT-3和MIR-4,GenBank登录号分别为EF125013和EF587233。产质粒介导AmpC酶的菌株耐药性严重,且呈多重耐药,但对亚胺培南和美罗培南全部敏感。结论肺炎克雷伯菌中质粒介导AmpC酶发生率高,以DHA-1型为主,并在国际上首次报道2株新基因。治疗相关感染以碳青酶烯类抗生素为首选药物。

质粒介导的超广谱β－内酰胺酶的研究进展

随着三代广谱头孢菌素的应用，出现了新的β－内酰胺酶。质粒介导的超广谱β－内酰胺酶（Ｅｘｔｅｎｄｅｄ－ｓｐｅｃｔｒｕｍβ－ｌａｃｔａｍａｓｅｓＥＳＢＬｓ）主要由肠杆菌科细菌产生，能水解青霉素类。头孢菌素类及单环类抗生素，ＥＳＢＬｓ主要来源于ＴＥＭ及ＳＨＶ系列，但近年来也出现了一些不是来源于ＴＥＭ和ＳＨＶ系列的酶，另外还报道了一些与头孢菌素酶相关的对所有头孢素包括头霉素类耐药的新酶。本文对ＥＳＢＬｓ的来源、分类以及分子特性等几方面进行了综述。

喹诺酮类耐药福氏志贺菌的质粒介导耐药机制研究

目的研究萘啶酸耐药的福氏志贺菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac(6')-Ib-cr的流行状况。方法收集我院2002-2011年腹泻患者大便标本分离出的福氏志贺菌,用纸片扩散法测定13种抗菌药物的敏感性,筛选出存活的82株萘啶酸耐药的野生株。采用PCR方法检测菌株的qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac(6')-Ib-cr耐药基因,对PCR阳性产物进行测序确定基因型别。结果 82株萘啶酸耐药的福氏志贺株以F2a最为常见,占47.56%,对其他多种抗生素存在耐药,耐药率分别为氨苄西林95.12%、哌拉西林18.29%、头孢噻肟12.20%、头孢曲松12.20%、头孢吡肟7.50%、环丙沙星53.66%、氧氟沙星37.80%、诺氟沙星36.59%、左氧氟沙星26.83%、头孢美唑4.00%、氯霉素40.24%、复方磺胺甲恶唑77.50%和磷霉素6.10%。共检测到质粒介导耐药基因的细菌13株(15.85%),3株携带qnrB基因均为qnrB6型;8株携带qnrS基因均为qnrS1型;7株携带aac(6')-Ib-cr基因,其中有5株同时携带qnrB和aac(6')-Ib-cr。结论本地区福氏志贺菌临床分离株对喹诺酮类抗菌药物耐药较严重,存在质粒介导的耐药机制,应加强监测。

质粒介导aac(6')-Ib基因检测与喹诺酮类耐药

目的了解大肠埃希菌临床株对喹诺酮类抗菌药物耐药情况并分析质粒介导aac(6')-Ib基因存在与喹诺酮类药物耐药性的关系。方法采用纸片扩散法(K-B)对临床中段尿分离所得121株大肠埃希菌进行耐药性检测,聚合酶链反应(PCR)法检测大肠埃希菌aac(6')-Ib基因,对aac(6')-Ib基因阳性菌株扩增片段进行DNA测序并确定基因型。结果大肠埃希菌临床株对萘啶酸、环丙沙星、诺氟沙星、左氧氟沙星4种喹诺酮类抗菌药物耐药率均高于75%。aac(6')-Ib基因检出率为14.0%(17/121),经DNA测序确定aac(6')-Ib基因变异体(cr)有14株,突变率为82.4%(14/17);aac(6')-Ib基因阳性株对氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦、头孢唑啉、头孢克洛、头孢呋辛、阿米卡星、环丙沙星、诺氟沙星、左氧氟沙星耐药率高于阴性株且差异有统计学意义(P<0.05)。结论仁济医院临床分离大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物耐药情况严重;质粒介导aac(6')-Ib基因的存在可使大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物耐药性提高;质粒介导aac(6')-Ib基因还可能引起细菌对β-内酰胺酶抑制剂药物和头孢菌素类药物敏感性下降。

氟喹诺酮耐药志贺菌中质粒介导qnr基因的检测

目的检测志贺菌对氟喹诺酮抗菌药物的耐药情况,探讨氟喹诺酮耐药与志贺菌携带质粒介导qnr基因的关系。方法用纸片扩散法对100株志贺菌(福氏志贺菌50株,宋内志贺菌50株)进行耐药性检测,聚合酶链反应(PCR)检测志贺菌质粒介导qnr基因并进行DNA测序,分析qnr基因的存在与药敏结果的关系。结果 100株志贺菌中有9株检出qnr基因,检出率为9%(9/100),福氏志贺菌为4%(2/50),宋内志贺菌为14%(7/50);qnr基因阳性菌株对氧氟沙星的耐药率(11.1%)高于阴性菌株(5.5%),但差异无统计学意义。qnr基因阳性菌株对5种氟喹诺酮药物的抑菌圈中位数比较均缩小。结论宋内志贺菌质粒介导氟喹诺酮耐药qnr基因的携带率明显高于福氏志贺菌;志贺菌若携带质粒介导qnr基因则会导致对氟喹诺酮药物的敏感性下降。

海南地区产质粒介导AmpC酶和ESBLs大肠埃希菌的耐药性分析

目的分析海南地区产质粒介导AmpC酶和ESBLs大肠埃希菌的耐药性,指导临床合理使用抗生素。方法收集海南地区2009年8所医院临床分离不重复大肠埃希菌540株,通过表型筛选试验、三维试验和PCR扩增试验检测质粒AmpC酶基因型;用确证试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs);用K-B法进行药物敏感试验。结果 540株大肠埃希菌中,检测出6株(1.1%)产CMY-2型质粒AmpC酶,258株(47.8%)单产ESBLs,4株(0.7%)同产质粒AmpC酶及ESBLs。非产酶株与产酶株(单产质粒AmpC酶、单产ESBLs或同产质粒AmpC酶及ESBLs)对13种抗菌药物耐药率差异具有统计学意义(P<0.05)。结论产ESBLs和AmpC酶是大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因,建议对产酶菌株临床经验用药可选用碳青霉烯类抗生素。

安徽省产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌的耐药性及基因型分析

目的了解2007年安徽地区产质粒介导AmpC酶的大肠埃希菌检出率及产酶株基因型。方法三维实验进行AmpC酶筛选;并行转移接合实验,PCR检测AmpC酶基因,琼脂稀释法进行药物敏感试验。结果21株大肠埃希菌三维实验阳性,占所有临床分离菌株的5.9%(21/355),19株经PCR检测携带ampC基因,16株转移接合成功,经序列分析表明,9株CIT阳性结果,6株DHA阳性结果,3株EBC阳性结果;1株同时携带EBC及DHA基因。其中有1株EBC型新基因被检出(序列号为FJ237369);药敏结果显示临床分离菌株及接合子对多种抗菌药物耐药,对头孢吡肟,亚胺培南,美罗培南相对较敏感。结论安徽地区大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶以CIT型和DHA型为主,同时存在变异型,临床可选用第四代头孢菌素类抗菌药物,碳青霉烯类抗菌药物抗感染治疗。

临床分离鲍曼不动杆菌耐药表型和质粒介导喹诺酮类耐药基因研究

目的:对医院分离出的鲍曼不动杆菌耐药谱进行调查,探求鲍曼不动杆菌中质粒介导对喹诺酮类药物耐药基因(PMQR)携带情况,给临床感染性疾病治疗提供参考。方法:采用VITEKT-2 compact全自动细菌鉴定及药敏系统对菌株进行鉴定和药敏检测,采用PCR法检测细菌是否携带PMQR基因(qnrA、B、C、D、S、aac(6')-Ib和qepA),随机选取每种耐药基因的PCR产物进行测序分析。病原菌的药敏结果采用WHONET 5.6软件分析。结果:近两年来从临床标本中一共检出152株鲍曼不动杆菌,药敏结果显示鲍曼不动杆菌对喹诺酮类和其他抗菌药物的耐药性有逐年递增之势。PCR检测结果显示29.6%(45/152)菌株携带aac(6')-Ib,1.3%(2/152)菌株携带qnrB,质粒上的qnrA、C、D、S和外排泵qepA基因产物并未检测出。结论:本地区鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物的耐药性强,PMQR携带率较低。