铜绿假单胞菌质粒型AmpC酶DHA基因的发现

目的测定35株同时耐头孢他啶、头孢噻肟、头孢西丁、氨曲南铜绿假单胞菌质粒型AmpC酶DHA。 方法 用PCR法对铜绿假单胞菌质粒型AmpC酶DHA基因进行检测,并对阳性产物作PCR产物直接DNA测 序。结果35株铜绿假单胞菌DHA基因扩增结果2株呈阳性,其中1株测得序列为DHA-Ⅰ型。结论表明我 国同时耐头孢他啶、头孢噻肟、头孢西丁、氨曲南铜绿假单胞菌也已获得DHA基因,AmpC酶DHA基因可通过 转化、接合等方式转移给其他同种或不同种菌且易于传播,因此加强监控以防DHA基因在国内某些地区的革兰 阴性菌中流行。

多重耐药阴沟肠杆菌质粒型AmpC酶DHA-1基因的检出

目的测定56株同时耐头孢噻肟、庆大霉素和环丙沙星的阴沟肠杆菌质粒型AmpC酶基因型。方法先后用头孢西丁纸片法、三维试验、等电聚焦及酶抑制试验和微量稀释法进行表型检测。接合试验证实酶基因的转移性。多重聚合酶链反应以及基因测序等方法鉴定质粒型AmpC酶基因型。结果受试的56株细菌中有5株三维试验阳性,其中1株能转移接合,接合子多重聚合酶链反应扩增结果呈阳性,等电点为7.8,基因测序表明和DHA-1型AmpC酶一致。结论我国的多重耐药阴沟肠杆菌已获得质粒型DHA基因,DHA基因可通过转化、接合等方式转移给其他细菌且易于传播,因此应加强监控以防DHA基因在革兰阴性菌中流行。

质粒型HSV载体介导的GDNF和GFP基因在BHK细胞和骨骼肌细胞中的转移和表达

为了进一步探索治疗中枢神经损伤的新途径 ,本实验以质粒型单纯疱疹病毒 ( H SV)为载体 ,分别构建了含有胶质细胞源性神经营养因子 ( GDN F)和绿色荧光蛋白 ( GFP)基因的重组载体 H SV - GDNF和 H SV- GFP,用包装出的混合毒株分别感染体外培养的 BHK细胞及原代培养的大鼠骨骼肌细胞。 2 d后 ,对感染 HSV - G DNF组的细胞进行 G DNF免疫组织化学反应 ;感染HSV- GFP组的细胞在荧光显微镜下进行观察。结果发现 :质粒型 H SV载体可成功地将外源性 GDN F和 GFP基因导入 BH K细胞和原代培养的大鼠骨骼肌细胞。提示 :质粒型 H SV载体可以作为转基因 GDN F治疗中枢神经系统损伤的转移载体 ,为中枢神经系统损伤的治疗展示了广阔的前景。 GFP作为报告基因 ,也可因其适用广谱。

质粒型pBF_4DNA探针用于疟疾诊断的研究

质粒pBF_4DNA 用^(32)P 标记后,与现场采集的50份疟疾病人血样进行斑点杂交,9份镜检为恶性疟者杂交全为阳性,与镜检符合率为100%;41份镜检为间日疟的标本,有3份出现杂交弱阳性;10份正常人血两者检查均为阴性。DNA 探针检测恶性疟原虫的灵敏度为0.001%原虫血症。血样存放2年之久,仍可用于 DNA 杂交。

DNA疫苗的质粒型细胞因子佐剂

细胞因子是机体产生的一系列免疫效应和免疫调节蛋白。在近几年,质粒型细胞因子作为能增强DNA疫苗免疫应答的佐剂已引起了研究者广泛的关注。本文就细胞因子的生物学机制、T细胞分化和利用质粒型细胞因子佐剂优化DNA疫苗等方面的进展进行了讨论。

沙门氏菌耐药与毒力杂合质粒的分子特征与转移风险研究进展

沙门氏菌是引发食物中毒的首要致病细菌,其高毒耐药流行株在食品安全研究领域受到广泛关注。这些高毒耐药株中常携带耐药与毒力基因杂合质粒及大量可移动元件,它们可通过整个食品产业链进行水平转移,给民众的餐桌安全和身体健康带来巨大危害。深入解析这些质粒中耐药与毒力基因杂合转移的分子特征及其转移风险,是研究食源性致病菌危害因子传播规律领域的一个重要问题。伴随着测序技术的进步,耐药与毒力基因在质粒中的聚集与重组等演化过程逐渐被揭示,可移动元件在质粒的稳定和转移过程中的作用也得到初步验证。基于此,本文从杂合方式与转移风险、重要可移动元件的功能以及杂合质粒中耐药与毒力基因的演化特征等角度,简述沙门氏菌耐药与毒力杂合质粒的研究进展,以期为揭示高毒耐药株的传播特征和风险评估提供数据支持。

陕西省致仔猪腹泻大肠埃希菌的耐药性及其质粒谱型研究

【目的】研究陕西省致仔猪腹泻大肠埃希菌的耐药性及其与质粒谱型之间的关系。【方法】对分离自陕北、关中、陕南等地7个猪场腹泻仔猪粪便的104株致病性大肠埃希菌,采用K-B法测定其对11类26种抗生素的耐药性。对11株大肠埃希菌耐药菌株进行质粒分子分型及同源性聚类分析。【结果】陕西省致仔猪腹泻大肠埃希菌对哌拉西林、头孢他啶、多粘霉素B和痢特灵的耐药率为0;对先锋Ⅴ、先锋Ⅵ、先锋必素、头孢呋辛的耐药率分别为15%,12%,12%和8%;对丁胺卡那霉素、新霉素、氧氟沙星的耐药率分别为23%,27%和27%;对青霉素、强力霉素、四环素、羧苄西林、复方新诺明、氯霉素、氨苄西林的耐药率均在85%以上;而对苯唑西林、氯洁霉素的耐药率均为100%。多重耐药性检测结果表明,分离菌株的耐药性以8～13耐居多,占71%,1～7耐的菌株占17%,13耐以上占12%。质粒检测结果表明,相同地区、相同时间分离的菌株,其耐药谱相似,质粒谱型相同或相似;不同来源的菌株,耐药谱可相似也可不同,而质粒谱一般不同。同源性聚类分析表明,陕西省各地区耐药菌株质粒的流行存在地区差异,其差异性保持在35%以内。【结论】陕西省致仔猪腹泻大肠埃希菌耐药性较严重,且呈自南向北递增的趋势,不同地区大肠埃希菌分离株的耐药性差异与其携带的质粒有关。

大肠杆菌-分枝杆菌分泌型穿梭表达质粒pBCG-SP-HSP65的构建及人结核杆菌HSP65的表达

用PCR技术从BacillusCalmette gu啨ｒｉｎ(BCG)基因组中扩增出抗原 85B(Ag85B)的信号肽 (SP)DNA序列 ,从pCMVMTHSP65质粒中扩增出人结核杆菌HSP65全长基因。利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒pBCG 2 10 0的人结核杆菌HSP70启动子下游 ,构建成分泌型原核穿梭表达质粒 (pBCG SP HSP65)。酶切鉴定、PCR和测序分析结果均表明分泌型原核穿梭表达质粒pBCG SP HSP65构建成功。利用电穿孔将该质粒转入耻垢分枝杆菌(Mycobacterialsmegmatis,MS)中 ,用卡那霉素筛选出阳性重组子。经热诱导后用SDS PAGE观察到在耻垢分枝杆菌中 65kD蛋白占总蛋白的 2 0 % ,而在重组耻垢分枝杆菌表达的 65kD蛋白占菌体总蛋白的 3 4 46% ,占裂解物上清总蛋白的 68 56% ,表明重组的HSP65基因能在耻垢分枝杆菌中高效表达 ,表达的蛋白大部分以可溶状态存在。通过Western blot证实分泌的该蛋白能与结核杆菌HSP65的抗体特异性结合 ,说明该重组蛋白具有HSP65的生物学活性。

海南省奶源和养殖环境主要肠杆菌科细菌的分布及基因分型

本研究从2021年海南省两个奶牛场采集的52份样本中分离肠杆菌科细菌,并对分离菌株进行了毒力基因、质粒型和生物被膜形成能力检测及肠杆菌科细菌基因间重复序列分子分型(ERIC-PCR)研究,以期明确牛奶及奶牛场环境中肠杆菌科细菌分布流行状况及其生物学特性。首先,采用16S rDNA PCR和ERIC-PCR对分离的肠杆菌科细菌进行鉴定和去重,结果显示52份样本中分离到肠杆菌科细菌49株,其中大肠埃希菌(Escherichia coli)32株,肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)13株,阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)3株,产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)1株;其次,采用PCR方法进行了分离菌株的毒力基因检测,结果显示,ompA的检出率最高;之后,采用CARATTOLI创建的基于PCR的质粒复制子分型,结果显示K质粒的检出率最高;采用刚果红琼脂法对分离菌株进行了生物被膜形成能力定性检测,发现49株肠杆菌科细菌中有37株指示有生物被膜形成能力;最后,通过ERIC-PCR分型进行了肠杆菌科细菌的亲缘关系和遗传多样性分析,发现49株肠杆菌科菌株可划分为17型(Ⅰ~ⅩⅦ),Ⅵ型为优势型(均为Escherichia coli),共20株。整体研究表明肠杆菌科细菌在奶源环境中广泛存在、生物特性多样,推测具有一定的致病力和耐药性,引起人类和动物疾病风险较高,提示养殖、运输中的卫生和规范操作至关重要。

抗凋亡基因bcl-2 cDNA表达型质粒的构建及序列分析

目的 :克隆抗凋亡基因bcl-2,并构建其表达型质粒 ;进行序列分析 ,为基因转染作准备。方法 :应用PCR定向克隆技术 ,克隆SD大鼠鼠脑bcl-2全编码cDNA序列 ;应用双脱氧末端终止法进行重组质粒中bcl-2的cDNA序列分析 ;利用基因重组技术 ,将bcl-2全编码cDNA序列 ,导入pCMV -Tag -1表达型质粒。结果 :成功地克隆SD大鼠bcl-2全编码cDNA序列 ,并将其成功地导入pCMV -Tag -1表达型质粒 ;经序列分析 ,发现bcl-2全编码序列与GeneBank中的相应序列相比 ,有3个碱基出现差别 ,分别为171位a→g,233位a→c ,530位 g→a,均为同义突变。结论

内皮抑素基因的获取及其分泌型质粒构建的研究

目的 :通过分离、克隆、重组出内皮抑素基因并测定其基因序列 ,探讨单独或联合其它血管抑制因子基因及其表达产物经纯化作为生物制品可用于肿瘤治疗的研究。方法 :采用RT_PCR技术自肝癌组织中扩增出内皮抑素目的基因片段 ,采用pEZZ18为分泌型质粒载体构建含内皮抑素基因的重组质粒并在大肠杆菌DH5α内进行表达。结果 :成功获得内皮抑素基因并经序列测定证实。序列分析显示与已发表的内皮抑素基因无明显差异。克隆至 pEZZ18载体构建成功含内皮抑素基因的分泌型重组质粒。结论 :构建的重组质粒具有外分泌特性 ,为成功分泌表达内皮抑素、快速纯化及临床应用打下良好基础。

我国D2-43病毒株PrM-E基因的复制型载体质粒DNA的免疫原性(英文)

观察含我国登革 2型病毒株 (D2 4 3)的PrM E基因的复制型SFV(semlikiforestvirus)重组质粒DNA的免疫原性 ,为登革新型疫苗的研制提供依据 .将PrM E基因自T载体上切下 ,插入复制型SFV病毒载体质粒DNA中 .将此重组质粒DNA以电穿孔法导入BHK2 1细胞 ,用间接免疫荧光法在感染细胞内可检测到登革 2型病毒特异蛋白的表达 .采用去除内毒素的质粒提取试剂盒制备重组质粒DNA ,然后以不同剂量通过肌肉多点注射途径免疫Balb c鼠 ,获得的鼠血清可与登革D2 4 3感染的C6 36抗原片起特异的抗原抗体反应 .结果表明 ,含登革 2型病毒PrM E基因的复制型SFV病毒载体质粒DNA在Balb c鼠中可诱导登革 2型病毒特异抗体的产生 ,但抗体水平较低 .

十株不同鼠疫菌苗株的质粒图型和重要抗原特性的比较研究

研究十株不同鼠疫菌苗株(包括变异株)的质粒图型和它们与重要抗原特性的关系的结果表明:除了45Mdal 质粒和6Mdal 质粒分别与菌株的Ca^(++)依赖特性和鼠疫菌素1产生有关之外,鼠疫菌的大质粒(52-91Mdal)可能在 F_1抗原的合成中起调控作用。根据我国各鼠疫疫源地的菌株类型的不同,在用菌苗预防不同地区的鼠疫时,考虑菌苗株的类型可能是有益的。

全国10所教学医院产ESBLs和质粒AmpC酶大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的研究

目的研究全国10所教学医院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中同时产ESBLs及质粒型AmpC酶菌株的比率及其基因型特点,比较不同地区间的差别。方法收集来自中国不同地区的10所教学医院2003年度产ESBLs的大肠埃希菌90株和肺炎克雷伯菌61株,用等电聚焦电泳测定β内酰胺酶的等电点;接合试验证实酶基因有无可转移性;采用多重聚合酶链反应(MPCR)及序列分析确定质粒AmpC酶的基因型。结果武汉、南京、济南等地产ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌所占比率相近,均在50%左右;北京产ESBLs大肠埃希菌所占比率低于肺炎克雷伯菌;其他各城市产ESBLs大肠埃希菌所占比率均略高于肺炎克雷伯菌。在产ESBLs菌株中24.4%大肠埃希菌和19.4%肺炎克雷伯菌对头孢西丁耐药。除沈阳无对头孢西丁耐药菌株外,其他医院均存在对头孢西丁耐药株。产ESBLs菌株基因型主要为CTX—M型,其中以CTX-M-9组最为常见,其次为CTX-M-1组。在同时产ESBLs和AmpC的菌株中,肺炎克雷伯菌多于大肠埃希菌,且均为CTX-M/ DHA-1型(多为CTX-M-9/DHA-1型)。3株同时产ESBLs和AmpC肺炎克雷伯菌的接合子PCR结果与其供体菌完全相同。结论参与本研究的各所教学医院产ESBLs菌株基因型主要为CTX-M-9组,在同时产ESBLs和AmpC酶的菌株中,肺炎克雷伯菌多于大肠埃希菌,多为CTX-M-9/DHA-1型,该酶可通过质粒传播。

紫云英根瘤分离菌株质粒多样性的研究

从广东、广西、湖南、湖北、江西、浙江、江苏７省紫云英（ＡｓｔｒａｇａｌｕｓｓｉｎｉｃｕｓＬ．）主要分布区４６个采集点的紫云英根瘤中分离到１０１个菌株．检测发现有１６种不同质粒类型，所含质粒１～４个不等，含两个质粒的菌株占绝大部分，质粒Ｍｒ为３６×１０６～３６４×１０６．用克隆Ｍ．ｈｕａｋｕｉ７６５３Ｒ的ｎｏｄＤＢＣ４．２ｋｂ片段为探针（α３２ｐｄＣＴＰ）进行的分子杂交结果表明，所有这些菌株均含有共生质粒，通常为第一大质粒，但Ｃ、Ｌ、Ｍ、Ｎ和Ｏ型为第二大质粒，共生质粒Ｍｒ在１３１×１０６～３６４×１０６之间．比较质粒类型与１６Ｓ２３ＳｒＤＮＡＩＧＳ（ｐＨｒ，ｐ２３ＳＲ０１）ＰＣＲＲＦＬＰ分析结果表明，ＩＧＳ类型不同，即使在同一植株分离所得的根瘤其质粒类型常不同，但在同一植株上分离菌株的质粒类型相同，则其ＩＧＳ常表现相同．

国人胰岛细胞自身抗原ICA69原核表达型质粒的构建

目的：应用基因工程技术生产适用于I型糖尿病早期诊断的试剂盒打下基础。方法：从中国人胰岛细胞瘤组织总RNA中，经逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）克隆了胰岛细胞自身抗原69KD蛋白（ICA69）基因的cDNA，双脱氧末端终止法对其全部核苷酸序列予以确定后，将此编码483个氨基酸、全长1449bp的cDNA重组入表达型质粒中。结果：核苷酸序列分析证实重组质粒接口处读码框架正确。结论：为ICA69重组基因的表达及表达产物在临床诊断中的应用奠定了基础。

不同饲养模式下宁蒗高原鸡源大肠杆菌耐药元件的分布特征

为了分析不同饲养模式下宁蒗高原鸡源大肠杆菌分离株中耐药基因、整合子和质粒型的分布特征,以便更好地保护和开发利用宁蒗高原鸡,试验采用PCR方法,在分离株系统分群的基础上,对耐药基因bla_(SHV)、bla_(TEM)、bla_(CTX-M-1)、bla_(CTX-M-2)、bla_(CTX-M-8/-25)、bla_(OXA-48)、tetA和tetB,整合子1和整合子2,10种质粒型进行了检测,并分析了不同质粒型间的关联性及系统分群、整合子、耐药基因、质粒型间的关联性。结果表明:B_(1)亚群的总检出率最高(68.21%),其次为B_(23)亚群(26.67%),不同饲养模式下不同亚群间的检出率存在差异;耐药基因bla_(TEM)的总检出率最高(81.54%),之后依次为bla_(OXA-48)(47.18%)、tetB(43.59%)和bla_(SHV)(42.05%),不同饲养模式下有些耐药基因的检出率存在差异;整合子1的总检出率(66.15%)高于整合子2(24.10%),笼养和混养模式下整合子1的检出率显著高于林下放养模式(P<0.05);质粒型IncI1的总检出率最高(97.44%),之后依次为IncP(82.05%)、IncN(63.59%)和IncFrep(56.41%)等,不同饲养模式下大部分质粒型的检出率存在差异;质粒型IncP、IncI1和IncN间,或这些质粒型与其他质粒型间具有高的关联性;整合子1与tetB、IncP和IncI1间有强关联性;IncP、IncFIB、IncI1、IncFrep、IncN与bla_(TEM)、tetB有关联性。说明不同饲养模式下,宁蒗高原鸡源大肠杆菌分离株中含有致病性分离株,且这些分离株携带不同的耐药基因、整合子和质粒型,在生产实践中需引起重视。

多黏菌素B和米诺环素对鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性检验研究

目的 探究多黏菌素B和米诺环素对鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性。方法 择取2021年1月至2023年1月本院80例鲍曼不动杆菌感染患者深入分析,均采用多黏菌素B、米诺环素检验鲍曼不动杆菌,分析体外抗菌活性。结果 鲍曼不动杆菌产酶类型有产金属β内酰胺酶(MBLs)、质粒型AmpC酶、诱导型AmpC酶。鲍曼不动杆菌产MBLs阳性例数为75例,阳性率为93.75%;产质粒型AmpC酶阳性例数为35例,阳性率为43.75%;产诱导型AmpC酶阳性例数为30例,阳性率为37.50%。多黏菌素B产MBLs型、产质粒型AmpC型、产诱导型AmpC酶鲍曼不动杆菌最低抑菌浓度(MIC)范围、MIC50、MIC90低于米诺环素,抑菌率较米诺环素高(P<0.05)。结论 在对鲍曼不动杆菌检测时,多黏菌素B与米诺环素相比,米诺环素活性更强。