核酸疫苗大规模质粒纯化研究进展

DNA疫苗又称基因疫苗,是指将编码某种蛋白质抗原的重组真核表达载体直接注射到动物体内,使外源基因在活体内表达,产生抗原激活机体的免疫反应,从而诱导产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答,具有预防和治疗疾病的作用。核酸疫苗具有减毒疫苗的优点,同时基本不存在逆转的危险,因此被认为是继传统疫苗、基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗。

质粒纯化及动物骨骼肌电穿孔转基因的研究

建立了有效的质粒纯化工艺。用自制的活体基因电转仪,以兔子为动物模型,进行骨骼肌电穿孔转绿色荧光蛋白表达质粒,初步确定电穿孔提高了质粒在肌肉组织中的转染效率。在此基础上,对羔羊和仔猪实施骨骼肌电穿孔转pM-GHRH生长激素释放激素表达质粒,结果表明,pM-GHRH质粒对羔羊和仔猪的生长没有显著影响。

质粒DNA提取与酶切方法的比较研究

比较了质粒DNA小量和大量制备方法,分析了质粒纯度、酶的种类、单酶切和双酶切方法对酶切效果的影响。结果显示,质粒DNA小量制备法效果好,提取的质粒量大,质量高;GalUR/TEM-T质粒双酶切时需先经过纯化才能酶切完全;BamHI单酶切FRO2/PCB302质粒效果比较好,而XbaI单酶切FRO2/PCB302质粒效率比较低,需要纯化和降低酶切反应中质粒的浓度。

BAC文库构建中的几个技术问题探讨

构建BAC文库有两个关键环节 :一是载体的克隆 ;二是HMW(highmolecularweight)DNA的制备。针对这两个问题 。

一种新型疟疾核酸疫苗生产工艺的初步研究

疟疾是危害人类健康和生命的主要寄生虫病之一,寻找合适的疫苗一直是该病控制的重要方向。在疟疾核酸疫苗方面作了系列尝试,取得较好研究结果,并最终构建了以胸腺嘧啶合成酶基因为筛选标记的、具有大肠杆菌平衡致死特征的新一代疟疾核酸疫苗pThyAAWTE。对影响工程菌高密度发酵的几个因素进行了分析,所优化程序可使工程菌发酵密度达OD60 0 60以上;此外,还对质粒初步纯化过程中的几个重要参数进行了分析,初步结果表明,悬浮液体积(ml) :菌体湿重(g)在2 :1以上,对质粒的得率没有明显影响;碱裂解时间在一定范围内不影响质粒的质量;合适的悬浮液体积/裂解液/中和液比能明显提高质粒产量;用优化程序所提取的质粒其产量与试剂盒提取的量相当。为pThyAAWTE的大规模纯化打下了基础。

细菌人工染色体基因组文库构建关键技术研究

基因组文库是进行分子克隆和基因结构与功能研究的基础,完整覆盖的基因组文库的构建,使基因组任何DNA片段的筛选和获得成为可能。细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)与其它载体系统相比具有转化效率高、嵌合体少、插入片段易回收,高覆盖率、稳定性强,并且具有易分离和操作等特性等优点而被广泛应用。作为物种保护策略的重要部分,构建我国濒危动植物品种基因组BAC文库,对于其遗传资源的保护和研究具有非常重要的作用。在查阅大量国内外相关资料的基础上,就BAC基因组文库构建过程中载体的制备、高分子量DNA的制备、大片段DNA的回收、连接与电击转化、基因组BAC文库质量鉴定等几个重点、难点问题进行了详细的论述和分析,对于构建高分子量插入片段、高覆盖率和稳定性的基因组文库提供理论基础与技术支撑。

胡晗华、饶志明等获本刊优秀论文奖

根据我部决定(见本刊1999年第2期第159页)和有关专家推选评定，胡晗华、石岩峻、丛威、蔡昭铃的论文《不同氮磷水平下中肋骨条藻对营养盐的吸收及光合特性》[2004，10(6)：735～739]和饯志明、赵有玺、李辉、王正祥、沈微、方惠英、诸葛健的论文《太湖流域土壤微生物基因组总DNA分离纯化及其质粒文库的初步构建》[2004，10(6)：774～777]获本刊2004年第5期优秀论文奖。