赖氨酰氧化酶在肺动脉高压中的相关性研究

肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)是一种严重的心血管疾病,发病机制非常复杂,其中包括血管收缩、细胞增殖、血小板聚集等多种因素。赖氨酰氧化酶蛋白家族(Lysyl Oxidase Family,LOS)是一类铜依赖的胺氧化酶,以细胞外蛋白,尤其是弹性蛋白及胶原蛋白为底物,可以催化外源性赖氨酸和内源性赖氨酸的氧化反应。近年来的研究表明,赖氨酰氧化酶在PH的发病机制中也发挥着重要的作用。本文就LOS在PH中的相关研究进行综述,指出LOS可能是PH预后不良的生物标志物。

赖氨酰氧化酶LOXL2稳定性的理论计算研究

赖氨酰氧化酶LOXL2是一种依赖于铜离子的胺氧化酶,催化胶原蛋白和弹性蛋白的赖氨酸残基侧链发生氧化脱氨,发挥着稳固细胞外基质的作用。而稳定性是蛋白质的一个重要特性,直接影响蛋白质的分子动态及其正常功能发挥,这与人类的健康和疾病密切相关。然而,关于LOXL2的稳定性目前鲜有报道,哪些位点对其稳定性有显著影响尚不清楚。本研究采用冷冻电镜和Alphafold2的数据,建立LOXL2的全长结构,通过分子动力学模拟得到其优化构象。再通过4种方法(mCSM,PremPS,DeepDDG和FoldX),计算所有位点的稳定性属性,筛选出对稳定性有显性影响的位点(定义为关键位点)。结果表明,95个关键位点对LOXL2的稳定性具有显著影响,在5个结构域上的分布数量依次为14、13、8、11和26,而结构域间的连接肽段上也有23个关键位点。在这些关键位点中,类型及数量分别为Leu(24个)、Val(20个)、Ile(12个)、Trp(11个)、Phe(11个)、Tyr(6个)、Cys(6个)、Met(4个)和Arg(1个)。其中大部分关键位点(88个)为疏水性质,这与蛋白质折叠的主要力量为疏水作用的情况是一致的,而Cys两两成对,构成二硫键,对LOXL2的结构及功能发挥重要作用。讨论中,我们将预测结果与实验值进行比较,并用自由能微扰方法,对部分关键位点进行比较,从多方面论证此项工作的可信度。此项研究,可为靶向LOXL2的疾病治疗研究,提供重要指导。

成纤维细胞中赖氨酰氧化酶调控卵巢癌紫杉醇敏感性的作用及机制探讨

目的:探讨赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)在卵巢癌中的表达模式、可能的作用机制,以及其表达与卵巢癌临床特征及治疗结局的相关性。方法:利用人类癌症基因组图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)分析LOX表达与卵巢癌临床病理特征、治疗结局及预后的相关性;利用TISCH2数据库研究LOX在卵巢癌微环境不同细胞中的表达特征;免疫组化分析LOX在卵巢癌组织中的表达情况;利用siRNA转染技术沉默LOX基因,并通过转录组测序分析LOX沉默组及对照组细胞差异表达基因;通过基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)LOX沉默组及对照组差异表达的信号通路蛋白并通过qRT-PCR验证;通过测定半数致死剂量(half-maximal inhibitory concentration,IC50)分析成纤维细胞中敲降LOX对卵巢癌紫杉醇敏感性的影响;通过Western blot及qRT-PCR分析紫杉醇作用下人纤维细胞和鼠纤维细胞中(L929)中LOX表达变化。结果:LOX高表达与卵巢癌的肿瘤存在、治疗结局差及静脉侵犯显著相关;在卵巢癌中,LOX在成纤维细胞中表达较高;沉默LOX可下调细胞黏附分子的表达;紫杉醇可诱导成纤维细胞中LOX表达上调;成纤维细胞中敲降LOX可增加共培养的成纤维细胞与肿瘤细胞对紫杉醇的敏感性。结论:LOX高表达与卵巢癌的不良预后相关,敲降LOX可提高卵巢癌对紫杉醇的化疗敏感性;其作用机制可能与改变成纤维细胞中细胞黏附分子表达相关;紫杉醇可上调成纤维细胞中LOX的表达。

β-氨基丙腈通过抑制赖氨酰氧化酶减弱低氧诱导的非小细胞肺癌转移侵袭

目的探讨β-氨基丙腈(β-APN)通过抑制赖氨酰氧化酶(LOX)减弱低氧诱导的非小细胞肺癌(NSCLC)转移侵袭的作用及其机制。方法低氧状态对NSCLC细胞LOX表达及催化活性的实验:将A549、SPCA1细胞系各分为常氧组、低氧12 h组、低氧24 h组;β-APN介导LOX失活导致NSCLC细胞迁移侵袭能力及上皮—间质转化(EMT)相关分子表达变化的实验:将A549、SPCA1细胞系分常氧组、低氧组、低氧+β-APN组。运用荧光法检测2种细胞LOX活性,采用逆转录及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、LOX、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9基因表达情况,运用Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白水平。利用Transwell试验检测NSCLC细胞的转移侵袭能力。结果与常氧组比较,低氧12 h组和低氧24 h组A549及SPCA1细胞HIF-1α、LOX mRNA表达水平显著上调(P<0.01),HIF-1α、LOX蛋白水平显著上调(P<0.01),LOX酶活性显著增强(P<0.01)。与常氧组比较,低氧组A549及SPCA1细胞系的迁移能力和侵袭能力增强;与低氧组比较,低氧+β-APN组均显著减弱(P<0.01)。与常氧组比较,低氧组中E-cadherin mRNA的表达水平下降,N-cadherin、MMP-2及MMP-9 mRNA的表达水平上升;与低氧组比较,低氧+β-APN组E-cadherin mRNA的表达水平上升,N-cadherin、MMP-2及MMP-9 mRNA的表达水平下降(P<0.01)。与常氧组比较,低氧组E-cadherin蛋白水平下降及N-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白水平上升;与低氧组比较,低氧+β-APN组E-cadherin的蛋白水平上升,N-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白水平下降(P<0.01)。结论β-APN可通过抑制LOX酶减弱低氧诱导的NSCLC转移侵袭。

赖氨酰氧化酶家族在大鼠急性高眼压视网膜中的表达

目的观察赖氨酰氧化酶家族(LOXs)在急性高眼压(AOH)大鼠视网膜中的表达变化。方法取SD成年雄性大鼠随机分为对照组(CON组)和AOH组。CON组大鼠正常饲养不做任何处理;AOH组大鼠采用前房灌注法建立AOH模型。2周后处死大鼠,收集视网膜组织。qRT-PCR检测视网膜组织中LOXs[包括赖氨酰氧化酶(LOX)和赖氨酰氧化酶样蛋白LOXL1、LOXL2、LOXL3、LOXL4]表达及细胞外基质(ECM)相关蛋白Collagen 1/3/4 a1(Col1/3/4 a1)、Elastin(Eln)、Fibulin1/4(Fbn 1/4)表达。免疫组化染色检测LOXs在大鼠视网膜中的定位表达情况。Western blot检测大鼠视网膜中LOX表达变化。结果LOXs在大鼠视网膜各层均有不同程度的表达,LOX主要表达于视网膜神经节细胞层、神经纤维层、内丛状层和外丛状层;LOXL1主要表达于内丛状层、外丛状层和血管壁;LOXL2主要在神经节细胞层、内丛状层和内核层中表达;LOXL4在内丛状层和内核层中表达;然而LOXL3仅在视网膜血管壁中表达。与CON组比较,AOH组大鼠视网膜组织中LOX、Col1a1、Eln表达增加(P<0.05);2组大鼠视网膜中LOXL1、LOXL2、LOXL3、LOXL4、Col3a1、Col4a1、Fbn1、Fbn4 mRNAs表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论AOH大鼠视网膜中LOX高表达,其可能通过ECM重塑参与高眼压导致的视网膜损伤病理过程。

赖氨酰氧化酶样蛋白4在肝细胞癌中的表达及其预后相关性分析

利用生物信息学分析人赖氨酰氧化酶样蛋白4(1ysyl-oxidase like 4,LOXL4)基因在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及临床意义,为HCC的诊治提供新的思路。基于癌症基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库和人类蛋白表达图谱(thehumanproteinatlas,HPA)数据库分析LOXL4在HCC组织和正常肝组织中的表达差异,分析LOXL4与HCC患者临床病理特征的相关性并进行可视化分析;通过GEPIA数据库及构建Cox回归模型分析LOXL4表达与患者预后关系;分析LOXL4与HCC肿瘤标志物基因的相关性;STRING在线数据库构建LOXL4蛋白质相互作用网络;TIMER数据库分析LOXL4基因与肿瘤免疫浸润的关系。数据库分析结果表明LOXL4在HCC中表达水平显著升高,且LOXL4表达与HCC患者的病理分级呈正相关。生存分析和Cox回归分析显示LOXL4高表达提示HCC患者预后较差。HCC中TRPV4、INHBE、ITGB5和BCL7A与LOXL4的表达呈正相关,SOD1、ADI1、HINT2和HAGH与LOXL4的表达呈负相关。LOXL4与HCC肿瘤标志物GPC3和CK19的表达呈正相关,与ARG1和CD10的表达呈负相关。LOXL4与LOX、BMP1、TLL1等10种蛋白质存在相互作用。LOXL4表达与肿瘤细胞纯度及多种免疫细胞浸润具有显著相关性。本研究揭示了LOXL4在HCC中表达上调且与HCC患者预后不良、免疫浸润及多种HCC诊断标志物密切相关,其有望成为HCC的早期筛查、诊断及预后评估的重要生物靶标。

赖氨酰氧化酶与人类疾病

赖氨酰氧化酶(lysyl oxidases,LOXs)是一种能够催化细胞外基质蛋白(如胶原和弹性蛋白)交叉连接的酶类,这一功能使其在组织的稳定、重塑和伤口愈合中发挥重要作用.随着研究的不断深入,LOXs在细胞增殖、细胞趋化以及肿瘤发生等过程中也彰显出十分关键的作用.研究发现,一些诸如结缔组织病、剥脱综合症、铜代谢障碍性疾病及盆腔器官脱垂和骨疾等疾病的发生与LOXs有很大关系.综述了LOXs的生物合成、结构特点、多功能性以及与人类疾病的关系.

赖氨酰氧化酶对胃癌细胞迁徙能力的影响

目的研究赖氨酰氧化酶(LOX)对胃癌细胞迁徙能力的影响。方法培养两株胃癌细胞,用Real-Time PCR法检测其LOX的表达量;通过体外Transwell小室迁徙实验比较两株胃癌细胞在不同浓度β-氨基丙腈(BAPN)作用下迁徙能力的变化。结果两株胃癌细胞中均有LOX的表达,当BAPN浓度是0.2和0.3 mmol/L时,胃癌细胞的体外迁徙能力受到抑制。结论LOX可能通过增强肿瘤细胞的迁徙能力而促进肿瘤的转移。

赖氨酰氧化酶与乳腺癌侵袭转移相关因子的研究

目的探讨赖氨酰氧化酶(LOX)与乳腺癌侵袭转移相关因子基质金属蛋白酶(MMPs)及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的相关性以及LOX在乳腺癌侵袭转移中的可能机制。方法构建LOX基因的特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV),稳定转染至乳腺癌细胞MDA-MB-231,实验设空白组、干扰组和阴性对照组,实时定量荧光PCR检测3组细胞中LOX、MMP-2、MMP-9和HIF-1α的表达,Western blot检测各组LOX蛋白的表达;构建乳腺癌细胞MDA-MB-231,MCF-7和LOX基因干扰的MDA-MB-231裸鼠移植瘤模型,6周后测定移植肿瘤的生长及转移情况,SP免疫组织化学技术检测移植瘤中LOX、MMP-2、MMP-9及HIF-1α蛋白的表达情况。结果转染LOX-RNAi-LV后乳腺癌细胞MDA-MB-231中的LOX mRNA和蛋白被明显抑制,抑制率为89.20%和82.97%,差异有统计学意义(P<0.05);干扰组的MMP-2、MMP-9及HIF-1α表达与阴性对照组及空白组比较差异有统计学意义(P<0.05);6周后裸鼠的MDA-MB-231组LOX、MMP-2、MMP-9及HIF-1α蛋白表达水平明显高于LOX基因干扰组及MCF-7组,相关分析显示,LOX蛋白与MMP-2(r=0.696,P=0.000)、MMP-9(r=0.735,P=0.000)、HIF-1α(r=0.737,P=0.000)蛋白呈显著正相关。结论 LOX-RNAi-LV可有效下调乳腺癌细胞MDA-MB-231中LOX mRNA和蛋白表达水平;LOX促进乳腺癌侵袭转移的机制可能与MMP-2、MMP-9及HIF-1α的异常表达相关。

子宫主韧带中弹性蛋白、赖氨酰氧化酶表达与盆底器官膨出的关系

目的:检测女性盆底器官膨出(POP)患者子宫主韧带中弹性蛋白(elastin)和赖氨酰氧化酶(LOX)表达,探讨两种基因与POP发生发展的关系。方法:选择因子宫脱垂而行全子宫切除术的患者60例,同期选择因妇科良性疾病、无压力性尿失禁(SUI)或POP行全子宫切除术患者60例作为对照。于手术中取子宫主韧带,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定elastin、LOX mRNA的表达,免疫蛋白印迹法(Western blotting)检测两种蛋白表达。结果:无论绝经与否,POP组子宫主韧带中elastin、LOX mRNA及其蛋白表达明显低于对照组,POP组中绝经后患者elastin、LOX mRNA及其蛋白表达明显低于绝经前患者,差异显著(P<0.05);子宫主韧带elastinmRNA及蛋白表达变化与LOX相应水平呈明显的直线正相关(r=0.9959,r=0.9708,P<0.05)。结论:POP患者子宫主韧带elastin表达减弱影响弹性纤维形成,LOX表达减弱可能通过影响胶原与弹性纤维的交联亦使盆腔支持结构稳定性降低,从而导致POP的发生;绝经后女性体内雌激素水平的降低可能通过影响LOX的表达,进而参与POP的发生。

赖氨酰氧化酶基因在上消化道癌组织内的表达及临床意义

背景与目的:赖氨酰氧化酶(lysyloxidase,LO)是近来发现的肿瘤候选抑癌基因,国外研究发现其表达与乳腺及前列腺癌的复发转移有关,但有关该基因与上消化道癌复发、转移之间关系的研究至今未见报道。本研究的目的在于探讨LO基因在食管、贲门及胃三种上消化道恶性肿瘤转移中的作用。方法:应用RT-PCR的方法检测食管癌,贲门癌,胃癌组织及其相应癌旁正常组织内LO基因的表达情况。结果:研究表明LO基因在以上三种癌组织表达率分别为42.1%(16/38)、42.9%(9/21)及28.0%(7/25);伴有淋巴结转移的癌组织LO表达率均低于不伴淋巴结转移的组织(P<0.05);肿瘤浸润至深肌层以下者LO表达率降低(P>0.05)。该基因的表达与肿瘤组织学分型、浸润方式、肿瘤大小及淋巴结转移个数等无关(P>0.05)。结论:本研究实验表明LO基因表达率降低与上消化道肿瘤转移存在相关性,提示该基因可能在抑制肿瘤转移中起重要作用。

赖氨酰氧化酶样蛋白2在头颈部鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨赖氨酰氧化酶样蛋白2(lysyl oxidase-like 2,LOXL2)在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)中的表达及与肿瘤转移、预后间的关系。方法:免疫组化检测LOXL2在157例HNSCC患者中的蛋白表达情况,并分析其表达与临床病理特征、转移时间(time to metastasis,TTM)及总生存时间(overall survival,OS)的关系。结果:LOXL2阳性表达患者中位TTM为27.3个月,5年OS为26.1%;而LOXL2阴性表达患者中位TTM为38.6个月,5年OS为47.8%。LOXL2的表达增加与HNSCC中淋巴转移呈正相关(P<0.05)。结论:HNSCC组织中LOXL2高表达患者更容易发生早期转移,预后更差。LOXL2可能成为一种新的判断头颈部鳞状细胞癌恶性程度和预后的分子标志。

转化生长因子β2对人眼Tenon囊成纤维细胞中赖氨酰氧化酶家族表达的诱导作用

背景研究表明，转化生长因子β2（TGF-β2）促进Tenon囊成纤维细胞（TFs）的活化，在青光眼滤过术后结膜下纤维化过程中发挥作用，但其作用机制尚未完全明了。赖氨酰氧化酶家族（LOXs）与细胞外基质重塑有关，了解青光眼术后滤过泡的纤维化过程中TGF-β2与LOXs活化的关系对青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化的防治具有重要意义。目的观察TGF-β2对体外培养的人眼TFs中LOXs蛋白表达变化的影响。方法将培养的第4～8代人TFs分为正常对照组和不同质量浓度TGF-β2培养组，分别在细胞培养液中添加终质量浓度为2、4、8和16ng／ml TGF-β2继续培养24h，采用Western blot法测定不同质量浓度TGF-β2培养组细胞中LOXs蛋白表达的变化，确定最适TGF-β2刺激质量浓度。用4ng／ml TGF-β2分别处理培养的TFs6、12、24和48h，采用Western blot法测定各时间点细胞中LOXs蛋白表达的变化。采用细胞免疫荧光法分别检测正常对照组和4ng／ml TGF-β2培养组TFs中LOX蛋白的表达及其在细胞中的分布。结果Western blot法检测显示，正常对照组及2、4、8和16ng／ml TGF-β2培养组人TFs中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3及LOXL4蛋白的表达强度均随TGF-β2质量浓度的升高而增加，各组间细胞中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3和LOXL4蛋白相对表达量的总体比较，差异均有统计学意义（F=37．338、13．438、31．067、11．767、15．167，均P〈0．01）。细胞中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3及LOXL4蛋白相对表达量的升高呈TGF-β2剂量依赖性。正常对照组及4ng／ml TGF-β2刺激人TFs后6、12、24和48h组，细胞中LOXL2蛋白的相对表达量分别为0．68±0．07、1．09±0．10、1．32±0．07、1．50±0．06和1．89±0．12，其表达强度呈时间依赖性，总体比较差异有统计学意义（F=82．832，P=0．000）。正常对照组人TFs中LOX蛋白表达强度较弱，主要位于细胞质中，TGF-β2培养组细胞中LOX蛋白的表达强度明显强于正常对照组，且表达LOX蛋白的细胞增多。结论正常人TFs中可见LOXs呈低表达，TGF-β2以剂量和时间依赖的方式上调人TFs中LOXs蛋白的表达。这个结果为青光眼术后滤过泡纤维化的相关防治研究提供了实验依据。

共培养下后交叉韧带成纤维细胞中赖氨酰氧化酶的基因表达

背景:后交叉韧带对人膝关节结构的稳定以及功能的发挥起着重要作用。与内侧副韧带相比,损伤后的后交叉韧带难以很好的自我愈合,甚至会导致半月板撕裂和软骨损伤。为了提高后交叉韧带的愈合能力,这就需要寻找新的途径来再生和修复损伤的后交叉韧带。近年来的研究表明,赖氨酰氧化酶在组织损伤修复过程中起到非常重要的作用,但其在后交叉韧带修复过程中的分子机制研究尚未涉猎。目的:观察与滑膜细胞共培养后交叉韧带成纤维细胞中赖氨酰氧化酶基因的表达。方法:将第4代的后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞分别种植于6孔板和Tanswell中。实验分为2组,即后交叉韧带成纤维细胞与滑膜细胞共培养组和后交叉韧带成纤维细胞单层培养组。培养6h后,提取总RNA,通过半定量PCR和实时定量PCR检测单层培养组和共培养组中后交叉韧带成纤维细胞中赖氨酰氧化酶基因表达。结果与结论:与单层培养组相比,赖氨酰氧化酶、赖氨酰氧化酶样蛋白1、赖氨酰氧化酶样蛋白2、赖氨酰氧化酶样蛋白3和赖氨酰氧化酶样蛋白4的基因表达在共培养的后交叉韧带细胞中都明显升高,分别增加了1.1,1.4,1.1,1.3,1.1倍(P<0.05)。单层培养组家族成员在单层培养和共培养中表达情况的差异性,说明细胞之间的相互作用会影响后交叉韧带组织的损伤修复,对后交叉韧带损伤修复的机制研究有极其重要的参考价值。

Amplex Red荧光法检测组织工程瓣膜赖氨酰氧化酶活性

目的采用Amplex red荧光法检测组织工程心脏瓣膜(tissue engineered heart valve,TEHV)中赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)的活性。方法经胰蛋白酶+乙二胺四乙酸、聚乙二醇辛基苯基醚和核酸酶处理,去除猪主动脉瓣叶的细胞成分,然后在其表面种植大鼠肌成纤维细胞,构建TEHV。用高糖培养基在体外培养瓣膜27 d,再用不含酚酞和血清的培养基培养24h,收集此时的培养基作为样本,用Amplex red荧光法检测样本中LOX的浓度,同时应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TEHV中LOXmRNA的表达。结果样本中LOX的荧光值为45.60±1.66,根据标准曲线获得相应的LOX浓度为0.123±0.003μg/ml,同时各个TEHV均有LOXmRNA的表达,与Amplex red荧光法检测的结果相一致。结论应用Amplex red荧光法检测TEHV中LOX的活性具有可行性,并为反映LOX对TEHV细胞外基质中胶原交联的重要作用提供了方法依据。

腹股沟直疝及斜疝患者腹横筋膜原纤维蛋白-1、转化生长因子β1、类赖氨酰氧化酶1的表达研究

目的比较原纤维蛋白-1(Fibrillin-1)、转化生长因子β1(TGFβ1)及类赖氨酰氧化酶1(LOXL1)在腹股沟直疝及斜疝患者腹横筋膜组织的表达,探讨腹股沟直疝的发病机制。方法用免疫组化和Western blot方法检测在我院行疝修补术患者(直疝19例,斜疝23例)腹横筋膜组织中Fibrillin-1、TGFβ1及LOXL1的表达情况。并对两者相关性进行分析。结果腹股沟直疝患者腹横筋膜组织Fibrillin-1、TGFβ1及LOXL1的含量显著低于斜疝患者(P<0.05);直疝腹横筋膜Fibrillin-1与TGFβ1(P<0.05),LOXL1与TGFβ1的表达呈正相关(P<0.05)。结论腹股沟直疝患者腹横筋膜组织Fibrillin-1、TGFβ1及LOXL1存在异常表达,并且相互作用共同参与了腹股沟直疝的发生。

结直肠癌患者外周血赖氨酰氧化酶基因多态性及其临床意义

目的探讨外周血赖氨酰氧化酶（LOX）基因rs2278226位点多态性与结直肠癌患者肿瘤转移的关系。方法选取2012年1月-2015年6月间在河北省人民医院住院治疗的164例转移结直肠癌患者（转移组）、218例无转移结直肠癌患者（无转移组），并选择同期进行体格检查的健康者340名（对照组），检测其血清肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）、CA199、CA50和外周血L0x的水平。采用离心柱法提取各样本基因组DNA，PCR技术扩增目的基因后应用DNA直接测序技术检测3组患者外周血LOX基因rs2278226位点的多态性。采用Logistic回归分析LOX基因rs2278226多态位点与结直肠癌转移间的关系。结果转移组和无转移组的血清CEA、CA199、CA50和LOX水平均显著高于对照组（P值均〈0．05）。转移组的血清CEA、CA199、CA50和LOX水平均显著高于无转移组（P值均〈0．05）。PCR产物纯化后双向测序结果显示，LOX基因rs2278226位点存在两种单核苷酸多态性C和G，共有3种基因型：CC（突变纯合子）、CG（突变杂合子）、GG（非突变基因型）。转移组和无转移组的CG、CC基因型频率均显著高于对照组（P值均〈0．05），转移组的CC基因型频率显著高于无转移组（P〈0．05）。转移组和无转移组的C等位基因频率均显著高于对照组（P值均〈0．05），转移组的C等位基因频率显著高于无转移组（P〈0．05）。Logistic回归分析显示，CC基因型是结直肠癌转移的独立危险因素（OR=2．951，95％CI为1．198～4．687，P〈0．05）。结论结直肠癌患者LOX基因rs2278226位点多态性与肿瘤转移有关。

干扰赖氨酰氧化酶基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、增殖的影响

目的探讨抑制赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)基因表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、增殖的影响及其机制。方法将乳腺癌MDA-MB-231细胞分为实验组(RNAi组)、阴性对照组(Mock组)和空白对照组(Con组);设计合成特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)转染MDA-MB-231细胞。以荧光定量PCR检测LOX mRNA及增殖因子Ki-67、cyclinD1的表达;Western blot法检测LOX基因蛋白的表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、细胞集落形成实验观察各组细胞生长及增殖情况。结果转染LOX-RNAi-LV后,MDA-MB-231细胞中LOXmRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞生长、增殖能力明显减弱,细胞集落形成率明显降低,相关增殖因子Ki-67和cyclin D1 mRNA的表达均明显下降(P<0.05)。结论转染LOX-RNAi-LV可有效干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞中LOX mRNA和蛋白的表达,抑制肿瘤细胞的生长、增殖,其作用机制可能与下调Ki-67、cyclinD1的表达有关。

抑制赖氨酰氧化酶可抑制胃癌细胞体外迁移和异质黏附

目的用不同浓度的β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,BAPN)抑制赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)后,观察两株胃癌细胞MGC-803和BGC-823的迁移、黏附能力变化,以探讨LOX对胃癌发生发展的影响。方法分别培养两株胃癌细胞MGC-803和BGC-823,用Real-Time PCR法检测两株胃癌细胞中LOX的m RNA;在用BAPN抑制LOX后,通过体外划痕实验和Transwell小室迁徙实验比较两株胃癌细胞的迁徙能力的变化,以同质黏附实验和异质黏附实验比较其黏附能力的变化。结果两株胃癌细胞中均有LOX的表达;加入0.2和0.3m M BAPN均可抑制胃癌细胞MGC-803和BGC-823的体外迁移能力,增强其同质黏附能力,减弱其异质黏附能力。结论 LOX可能通过增强胃癌细胞的迁移能力,减弱同质黏附、增强异质黏附能力来促进胃癌的转移。

赖氨酰氧化酶体内外对乳腺癌增殖和侵袭作用的研究

目的探讨赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)对人乳腺癌细胞的生长增殖、侵袭及转移能力的影响及可能作用的机制。方法构建LOX基因的特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV),稳定转染至乳腺癌细胞MDA-MB-231,实验设3个组,即空白组(Con)、干扰组(RNAi)、阴性对照组(Mock),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、细胞集落形成实验及流式细胞仪观察细胞生长及增殖情况,细胞侵袭迁移实验(Transwell)检测细胞侵袭及迁徙能力改变;免疫组织化学法检测111例人乳腺癌组织、癌旁乳腺组织及20例乳腺良性病变组织中LOX、基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)的表达,并对LOX与临床病理资料及MMP-2、MMP-9的相关性进行分析。结果转染72h后,MTT法显示干扰组细胞生长明显受抑制;细胞集落形成实验显示干扰组的细胞集落形成率明显低于空白组和对照组;Transwell侵袭和迁移实验结果显示RNAi组穿过Transwell小室滤过膜细胞数分别为47±2和63±2,差异有统计学意义(P=0.000);流式细胞仪测定细胞周期,3组之间差异无统计学意义。LOX蛋白在人乳腺癌、癌旁乳腺组织及乳腺良性肿瘤组织中的表达率分别为48.64%(54/111)、26.13%(29/111)、20.00%(4/20),乳腺癌组织中LOX蛋白的表达率明显高于癌旁乳腺组织及乳腺良性肿瘤组织(P=0.019)。LOX蛋白在不同肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移的表达率存在显著差异。相关分析显示,LOX蛋白表达与MMP-2(r=0.262,P=0.005)、MMP-9(r=0.424,P=0.000)蛋白之间呈显著正相关。结论 LOX可以促进乳腺癌的侵袭转移;LOX和MMP-2、MMP-9转移因子可能具有协同促进作用,促进了乳腺癌的侵袭转移。