基于生物信息学探讨赖氨酸氧化酶在食管癌原发灶中的表达及对骨转移患者预后的影响

目的基于生物信息学探讨赖氨酸氧化酶(Lox)在食管癌(ESCA)原发灶及骨转移灶中的表达及临床意义。方法通过癌症基因组图谱(TCGA)及基因表达谱分析互动平台(GEPIA)数据库筛选ESCA与正常食管组织中差异表达的基因。筛选2016年1月—2020年12月河北医科大学第四医院收治的食管癌手术患者的随访信息,收集在随访过程中确诊骨转移患者的临床资料。应用蛋白免疫印迹(Western blot)验证Lox在ESCA及正常食管组织中的表达;通过免疫组化染色检测人ESCA组织、正常组织中Lox的表达;应用Kaplan-Meier曲线及Cox回归探索Lox的表达对于生存期的影响。结果对GEPIA及TCGA数据库有关ESCA数据分析发现,Lox在ESCA病灶中的表达高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);应用京都基因与基因组百科全书(KEGG)及基因富集分析(GO)发现,Lox可能参与多种信号通路的信息传导;Western blot结果显示,癌组织中Lox表达高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);对随访资料的分析发现,Lox高表达患者更倾向于发生多发骨转移;生存分析发现Lox高表达患者无骨转移生存期和总生存期短于Lox低表达的患者,差异有统计学意义(P<0.05);Cox回归发现Lox是食管癌骨转移患者预后的独立危险因素。结论Lox在ESCA中呈高表达,并与临床预后相关,其可作为ESCA诊断及治疗的有效靶点。

MRI联合血清赖氨酸氧化酶样蛋白4、信号转导和转录激活因子3检测用于原发性肝癌诊断的价值

目的:探讨磁共振成像(MRI)联合血清赖氨酸氧化酶样蛋白4(LOXL4)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)检测用于原发性肝癌诊断的价值。方法:选取肝占位性病变患者214例,比较分析原发性肝癌和肝脏良性病变患者血清LOXL4、STAT3水平差异,以及原发性肝癌不同患者间差异,同时分析MRI联合血清LOXL4、STAT3水平诊断原发性肝癌的价值。结果:确诊为原发性肝癌患者92例,肝脏良性病变122例。原发性肝癌患者血清LOXL4、STAT3明显高于肝脏良性病变患者(均P<0.05)。TNM分期Ⅲ-Ⅳ患者血清LOXL4、STAT3明显高于肝脏良性病变患者(均P<0.05)。低分化患者血清LOXL4、STAT3明显高于中高分化患者(均P<0.05)。血清LOXL4、STAT3水平诊断原发性肝癌的ROC曲线下面积分别为0.890和0.896(均P<0.05)。MRI联合血清LOXL4、STAT3水平诊断原发性肝癌的灵敏性和阴性预测值分别为95.65%和96.00%,高于MRI检查(均P<0.05)。结论:原发性肝癌患者血清LOXL4、STAT3水平升高,与TNM分期及分化程度有关;MRI联合血清LOXL4、STAT3检测诊断原发性肝癌有较好的应用价值。

尿酸上调赖氨酸氧化酶增加肾小管上皮细胞纤维连接蛋白合成

目的:通过观察尿酸对肾小管上皮细胞赖氨酸氧化酶表达的影响,探讨尿酸在肾小管损伤中的作用及其可能的机制。方法:以正常大鼠肾小管上皮细胞株NRK-52E细胞为研究对象,以不同浓度的尿酸作用于该细胞,采用免疫蛋白印迹和间接免疫荧光的方法检测赖氨酸氧化酶(LOX)的表达水平,以及细胞外基质蛋白纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的变化。观察用小干扰RNA下调LOX对尿酸诱导FN表达的影响。结果:尿酸能够显著上调NRK-52E细胞LOX前体及成熟蛋白的合成,并呈现明显的剂量依赖关系;同时,FN的表达亦显著增加。LOX siRNA能够显著抑制尿酸诱导NRK-52E细胞表达成熟LOX的作用;同时LOX siRNA能够降低高尿酸导致的FN表达的增加。结论:尿酸能够通过上调赖氨酸氧化酶增加FN的表达。

雌激素对人成纤维细胞基质金属蛋白酶-12、赖氨酸氧化酶基因表达的影响

目的:通过研究雌激素对体外培养的人皮肤成纤维细胞基质金属蛋白酶-12(MMP-12)及赖氨酸氧化酶(LOX)的mRNA转录水平的影响,探讨雌激素减缓皮肤老化的机制。方法:采用酶消化法进行体外人皮肤成纤维细胞原代培养,然后将不同浓度的雌激素(0 mol/L,1×10-5 mol/L,1×10-4 mol/L)加入体外培养的人皮肤成纤维细胞中,待药物作用后,提取总RNA,通过逆转录反应获得cDNA并进行体外扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,根据条带的平均光密度比值来判断人成纤维细胞中MMP-12及LOX mRNA的表达水平。结果:对体外培养的人成纤维细胞进行雌激素干预,经β-act i n内参校正后,RT-PCR示对照组、低剂量组、高剂量组MMP-12表达水平三组间差异无统计学意义(F=3.711,P=0.056),LOX mRNA表达水平三组间差异具有统计学意义(F=4.337,P=0.038),SNK-q检验显示,低剂量组与对照组、低剂量组与高剂量组相比,差异无统计学意义(P>0.05)、高剂量组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:雌激素可以上调LOX基因的转录水平,提示雌激素可能具有促进皮肤成纤维细胞弹力纤维的合成,逆转或缓解皮肤老化的作用。

维生素E对体外培养人成纤维细胞基质金属蛋白酶-12及赖氨酸氧化酶基因表达的影响

维生素E（VitE）是体内最重要的脂溶性抗氧化剂之一，其主要生物学功能是将脂质过氧化自由基还原成脂质过氧化物，从而阻止分子氧和自由基通过非酶反应对不饱和脂肪酸的氧化。有报道表明，部分基质金属蛋白酶（MMPs）的上调可使真皮胶原和弹性蛋白降解增加，基质金属蛋白酶-12（MMP-12）可以降解弹性蛋白,

二尖瓣病变患者血浆赖氨酸氧化酶水平与持续性心房颤动的关系

目的探讨二尖瓣病变患者赖氨酸氧化酶(lysyl oxidase,LOX)表达与持续性心房颤动(atrial fibrillation,AF)的关系。方法 2012年3月至2014年2月纳入我院拟行瓣膜置换术187例二尖瓣膜病变患者。根据是否伴有持续性AF,将研究患者分为窦性心律(sinus rhythm,SR)组和AF组。在AF组,根据患者的二尖瓣病变类型,进一步分组为二尖瓣狭窄(mitral stenosis,MS)伴AF组(MS+AF组)和二尖瓣反流(mitral regurgitation,MR)伴AF组(MR+AF组)。AF组97例,男44例、女53例,年龄(52.76±11.35)岁;SR组90例,男48例、女42例,年龄(47.95±14.22)岁。结果二尖瓣病变患者中51.87%(97/187)伴有AF,与二尖瓣反流相比,二尖瓣狭窄较多伴有持续性AF(60.31%vs.34.43%,P<0.05)。AF组血浆LOX表达水平明显高于SR组(73.78±25.42IU/L vs.51.05±18.96 IU/L,P<0.05)。在AF患者中,MS组的LOX水平高于MR组(84.21±32.15 IU/L vs.59.74±35.21IU/L,P<0.05)且易伴有血栓。多元回归分析结果显示:AF与LOX水平(r=0.124,P=0.036)及左心房直径(r=0.531,P=0.042)有关。结论二尖瓣病变患者血浆LOX水平升高与AF发生有关,二尖瓣狭窄患者尤为明显。

赖氨酸氧化酶可能在心房颤动结构重构中起核心作用

心房颤动(atrial fibrillation,AF)是临床上最常见的心律失常之一,约占心律失常患者总数的1/3。目前在发达国家AF患病率约为1.5%,60岁以后AF患病率显著增加[1]。我国进行的AF大规模流行病学调查显示AF患病率为0.77%[2]。AF是目前患者住院的主要原因之一,可引起患者心悸不适、损害心功能、增加血栓形成及血栓栓塞的危险,有较高的致残率严重影响患者的生活质量[3]。由此可见,目前AF患者数量较多且危害严重。

赖氨酸氧化酶与肾间质纤维化的关系研究进展

肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病发展为终末期肾病的共同病理特征,表现为细胞外基质(extracellular matrix,ECM)增多且发生过度交联。赖氨酸氧化酶是促进ECM交联的关键酶,在肾间质纤维化过程中发挥重要作用。本文就赖氨酸氧化酶与肾间质纤维化关系的研究进展作一综述。

赖氨酸氧化酶下调对乏氧肺癌细胞侵袭迁移和E-钙黏素蛋白表达的影响

目的观察赖氨酸氧化酶（LOX）下调对乏氧人肺癌细胞NCI-H460侵袭迁移和上皮一间质转化表型分子E．钙黏素蛋白表达的影响。方法应用针对人LOX基因的小干扰RNA（siRNA）转染常氧（19％0：）肺癌细胞，24h后将细胞置乏氧（0．5％O2）培养箱培养，乏氧24h后采用实时定量PCR检测细胞LOXmRNA表达，Western印迹法评价LOX和E一钙黏素蛋白表达，Transwell小室评价细胞侵袭迁移能力。结果与常氧细胞（设定为1）相比，乏氧诱导肺癌NCI-H460细胞LOXmRNA（26．04±1．78）和蛋白（5．574-1．27）表达均显著增加（均P〈0．05）。与乏氧对照siRNA组（设定为1）比较，LOXsiRNA转染后乏氧NCI-H460细胞LOXmRNA和蛋白表达分别为0．24±0．03和0．29±0．03，细胞侵袭力和迁移力分别为0．57±0．03和0．49±0．02，E-钙黏素蛋白表达为2．17±O．21（均P〈0．05）。结论LOX下调可降低乏氧肺癌细胞侵袭迁移，增加E-钙黏素蛋白表达。

类赖氨酰氧化酶1在翼状胬肉中的表达

目的通过检测正常结膜组织和翼状胬肉中类赖氨酸氧化酶1(LOXL-1)的表达,探讨LOXL-1在翼状胬肉发展过程中的影响及意义。方法采用免疫组织化学检查正常结膜组织(19例)和翼状胬肉组织(25例)中LOXL-1的表达情况,测定两组免疫组织化学结果的光密度值。结果正常结膜组织与翼状胬肉中LO XL-1的光密度值比较,差异有统计学意义(P<0.05),正常结膜组织偏低。结论翼状胬肉组织中LO XL-1的表达较正常结膜组织高,LOXL-1在翼状胬肉发展中起到了促进的作用。

结直肠癌组织中锌指E盒同源结合蛋白-1、赖氨酸酰氧化酶-2的表达变化及意义

目的探讨结直肠癌组织中锌指E盒同源结合蛋白-1(ZEB1)与赖氨酸酰氧化酶-2(LOXL2)的表达变化及其意义。方法利用免疫组织化学法检测83例结直肠癌患者手术切取的癌组织与癌旁组织中ZEB1与LOXL2的表达水平,并进行比较。分析癌组织ZEB1与LOXL2的表达与患者临床病理参数的关系。采用Kaplan-Meier生存曲线评估预后。结果 ZEB1、LOXL2在结直肠癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织(P均<0.05)。结直肠癌组织中,ZEB1及LOXL2的阳性表达率与TNM分期、浸润程度、淋巴结转移相关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤组织分化程度无关(P均>0.05),且ZEB1与LOXL2的表达呈正相关(r=0.348,P=0.001)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果表明,ZEB1及LOXL2表达阴性的患者术后生存率和平均生存时间均高于ZEB1及LOXL2表达阳性的患者(P均<0.05)。结论 ZEB1与LOXL2在结直肠癌组织中异常高表达,且参与病情进展及促进不良预后。

溶菌酶对体外培养的人成纤维细胞基质金属蛋白酶-1和12及赖氨酸氧化酶基因表达的影响

目的探讨溶菌酶对体外培养的人成纤维细胞基质金属蛋白酶-1和12及赖氨酸氧化酶基因表达的影响。方法采用酶消化法进行体外人皮肤成纤维细胞原代培养，然后将不同浓度的溶菌酶（0，1×10^-8，1×10^-7mol／L）]加入体外培养的人皮肤成纤维细胞中，待药物作用后，提取总RNA，通过逆转录反应获得cDNA并进行体外扩增，对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据条带的平均光密度A值的比值来判断人成纤维细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-1、MMP-12及赖氨酸氧化酶（LOX）mRNA的表达水平。结果对体外培养的人成纤维细胞进行溶菌酶干预，经B肌动蛋白内参校正后，RT-PCR示对照组、低剂量组、高剂量组MMP-1、MMP-12 mRNA表达水平三组间差异具有统计学意义（F值分别为6．98和4．44，P值均〈0．05）。SNK—q检验显示，低剂量组与对照组、高剂量组比较，差异均无统计学意义（P〉0．05），高剂量组与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。LOX mRNA表达水平三组间差异具有统计学意义（F=5．24，P〈0．05），SNK—q检验显示，低剂量组、高剂量组与对照组相比，差异具有统计学意义（P〈0．05），低剂量组与高剂量组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论溶菌酶可以下调MMP-1和MMP-12及上调LOX基因的转录水平。

阿托伐他汀对慢性心力衰竭小鼠心肌组织赖氨酰氧化酶表达的影响

目的研究阿托伐他汀对慢性心力衰竭(CHF)小鼠心肌组织赖氨酰氧化酶(LOX)表达的影响及机制。方法选取C57BL/6小鼠复制CHF小鼠模型,再随机分为CHF组10只、阿托伐他汀组11只[阿托伐他汀3 mg/(kg.d)灌胃]和β氨基丙组10只[β氨基丙100mg/(kg.d)灌胃]。另设对照组9只。在4周末将小鼠处死,提取心肌组织RNA及蛋白质,RT-PCR法测定心肌组织LOX、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及NF-κB的mRNA表达水平,Western blot测定心肌组织LOX、磷酸化p38及p38蛋白表达水平。结果 CHF组小鼠心肌组织LOX、MMP-9、NF-κB mRNA表达明显高于对照组(P<0.01);阿托伐他汀组心肌组织LOX、MMP-9、NF-κB mRNA表达较CHF组明显下调(P<0.01)。CHF组心肌组织LOX及磷酸化p38蛋白表达明显高于对照组(P<0.01);与CHF组比较,阿托伐他汀组及β氨基丙组心肌组织LOX及磷酸化p38蛋白表达明显下降(P<0.01)。结论阿托伐他汀可逆转CHF小鼠心肌组织LOX的表达,LOX可通过调节CHF小鼠心肌组织MMP-9表达,从而抑制心脏重构,这可能是延缓CHF进展的重要机制。

赖氨酰氧化酶在肝细胞癌中的表达及其与血管内皮生长因子的关系

目的探讨赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)在肝细胞癌(HCC)的表达及其与侵袭转移的关系。方法采用免疫组织化学法检测LOX在HCC组织、癌旁肝组织和正常肝组织中的表达,分析其与HCC临床病理特征和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白之间的关系。结果 LOX在HCC、癌旁组织和正常肝组织中的阳性表达率分别为59.0%、88.9%和94.7%,LOX在HCC中的表达显著低于癌旁和正常肝组织(P<0.01);LOX蛋白阳性表达率随肿瘤分化程度的降低、数目增多、周围组织器官受侵、远处器官转移而显著降低(P<0.05);在HCC中,LOX的表达与VEGF表达呈显著负相关(rs=-0.313,P<0.05)。结论 LOX蛋白表达下调或缺失与HCC发生、发展密切相关,LOX蛋白表达下调或缺失伴随VEGF表达升高可以联合促进HCC的生长、转移。

赖氨酰氧化酶与心血管疾病的关系

赖氨酰氧化酶（lysyl oxidase,LOX）是一种铜依赖性氨基氧化酶,相对分子质量为32 000,能参与催化细胞外基质中胶原和弹性纤维的赖氨酸残基交联,以维持细胞外基质的结构和正常功能.近年发现,LOX参与冠心病等心血管疾病的发生和发展,现就其与心血管疾病关系的研究进展做一综述.

沉默赖氨酰氧化酶基因对喉癌Hep-2细胞凋亡及化疗敏感性的影响

目的探讨沉默赖氨酰氧化酶(LOX)基因表达对喉鳞癌Hep-2细胞凋亡及化疗敏感性的影响。方法将LOX siRNA转染至Hep-2细胞,免疫细胞化学及免疫印迹(Western blot)检测喉鳞癌Hep-2细胞中LOX蛋白表达情况,实时聚合酶反应(RT-PCR)检测LOX mRNA;MTT法检测不同浓度顺铂对Hep-2细胞生长抑制率的影响;流式细胞术(FCM)检测Hep-2细胞凋亡。结果转染LOX siRNA后Hep-2细胞中LOX蛋白和mRNA表达水平下调(P<0.05);用浓度为2、3、4 mg/L顺铂作用Hep-2细胞后,可明显抑制细胞生长(P<0.05)。转染组细胞联合顺铂作用后细胞凋亡指数及生长抑制率显著高于阴性对照组、空白对照组、顺铂组及转染组(均P<0.05)。结论特异性抑制LOX表达可诱导Hep-2细胞凋亡,并增强喉鳞癌Hep-2细胞对顺铂的敏感性。

生物传感器法测定玉米中赖氨酸的研究

应用生物传感器技术,建立了玉米中赖氨酸测定的方法。赖氨酸生物传感分析仪只对赖氨酸有响应。文中测定系统选用pH7.0的缓冲液,回收率在99.2%～100.8%。应用赖氨酸生物传感分析仪测定了4批玉米样品的赖氨酸含量,结果为0.326～0.349g/100 g。分别用赖氨酸生物传感分析仪与传统的全自动生化分析(?)对比检测,对2组数据进行了回归分析,回归方程为:y=0.798+0.948x,R=0.991。

赖氨酰氧化酶家族在肝细胞癌发生发展中的作用

赖氨酰氧化酶(LOX)家族是由LOX和LOX样蛋白(LOXL1~4)组成的铜胺氧化酶,在肿瘤组织中过表达,通过细胞外基质的共价交联促进肿瘤转移,具有细胞生长控制、肿瘤抑制、衰老和趋化作用。近年来,越来越多的证据表明LOX家族成员在肝细胞癌(HCC)的发病机理中发挥着关键作用,提示它们作为治疗靶点的巨大潜力。本文就LOX家族成员在HCC发生发展中的作用及中药提取物通过调节LOX家族对HCC的干预作用进行综述,以期为防治HCC的深入研究提供参考。

大肠杆菌合成生物基塑料单体5-氨基戊酸的代谢工程

5-氨基戊酸可作为新型塑料尼龙5和尼龙5,6的前体。尼龙5和尼龙5,6是重要的工程塑料,应用于机械、化工、仪表、汽车等工业。目前几种5-氨基戊酸的生物合成法普遍产率较低且合成过程复杂,成本高,无法实现大规模工业生产。本研究中,笔者构建了一种基于单酶L-赖氨酸α-氧化酶RaiP表达的工程菌株,采用发酵和全细胞催化两种方式,实现了5-氨基戊酸的高效生产。在添加体积分数4%乙醇的条件下,工程菌株CJ02可生产5-氨基戊酸1.26 g/L。在加入体积分数4%的乙醇和10 mmol/L H2O2的反应器中,5-氨基戊酸的质量浓度可达到29.12 g/L。本研究对5氨基戊酸的生物合成工艺开发具有指导作用,有利于实现生物基塑料生产的工业化。

生物基高分子材料尼龙5单体5-氨基戊酸生物合成研究进展

5-氨基戊酸(5AVA)是生物基聚酰胺材料尼龙5和尼龙6,5的单体。尼龙5和尼龙6,5是重要的工程塑料,广泛应用于机械、化工、仪表、汽车等工业。目前工业上合成5AVA主要使用化学合成,但是化学合成法无法满足市场对生物基聚氨酯材料日益增长的需求,且化学合成法污染大,对环境不友好。因此,生物法合成5AVA引起了广泛关注。本文综述了生物法合成5AVA的研究现状和发展前景。生物合成法包括发酵法、全细胞催化法、生物酶法等。总结了目前生物合成5AVA 4种生物合成途径,对这4种生物合成途径的宿主、合成策略、产物浓度、得率等进行了总结和比较。