免疫亲和层析技术协同酶联免疫吸附法检测赭曲霉毒素A

利用免疫亲和层析技术(immunoaffinity chromatography,IAC)对样品中赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)进行捕获与浓缩,利用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法对IAC捕获的目标物OTA进行测定。IAC与ELISA中的抗OTA单克隆抗体来自不同的克隆株,分属不同独特型,与OTA结合靶点的选择性存在差异,IAC与ELISA协同检测,可以有效过滤OTA结构类似物造成的干扰,提高免疫分析的特异性与灵敏度。该方法用于加标样品测定时,OTA的检出限为0.2 ng/g,定量限为0.4 ng/g,OTA的平均回收率为75.9%,与单一的ELISA法相比,该方法虽然回收率略低,但灵敏度可以显著提高,达到ELISA法的60倍。通过对49份样品的实际检测,该方法检出阳性样品与国标法的符合率达到100%,漏检率为0%,由此可见,该方法在准确性上表现出明显的优势。作为一种综合免疫分析技术,该方法不需要大型仪器设备,对操作环境没有严格要求,便于基层实验室对样品中OTA的分析。

基于磁性纳米粒子的比色适配体传感器检测赭曲霉毒素A

基于磁性纳米粒子(Fe_(3)O_(4)@Au)和纳米银(Ag NPs),通过DNA碱基互补配对,构建了一种新颖的比率比色传感器用于赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的检测。OTA适配体(aptamer)偶联的Fe_(3)O_(4)@Au作为参比信号,互补DNA(cDNA)偶联的Ag NPs作为响应信号,通过调控两者的比例以及DNA碱基互补,制备了具有两个紫外吸收峰的比率纳米探针(Fe_(3)O_(4)@Au-Ag)。没有OTA存在时,比率比色传感器的吸光度比值(A400/A580)保持恒定。对检测条件(时间、pH和温度)进行了优化,在优化条件下,该传感器对OTA检测呈现良好的线性关系,线性范围为0.01~1000 ng·mL^(-1),检出限为0.033 ng·mL^(-1)。该传感器具有良好的选择性、重现性和高灵敏度,并被成功应用于豌豆粉中OTA的检测,回收率为93.9%~96.0%。

基于链置换扩增的电化学适配体生物传感器检测食品中的赭曲霉毒素A

为构建一种基于链置换扩增技术(SDA)和电化学适配体传感器技术检测食品中赭曲霉毒素A(OTA)的方法,根据OTA特异性适配体设计发卡结构,并在发卡结构的茎部设置SDA反应识别位点,进行SDA扩增。将扩增产物与修饰二茂铁(Fc)的电化学探针进行杂交,使电信号发生变化,从而建立电化学适配体传感器检测OTA的方法。通过对7组不同毒素的测定评价该方法的特异性,测定其灵敏度和检出限,并与赭曲霉毒素A酶联免疫分析方法(ELISA)国家标准(GB 5009.96-2016)进行对比试验。结果表明:最优条件下,电化学适配体传感器灵敏度线性范围为0.1 pg/mL~10 ng/mL,检出限(LOD)为0.05 pg/mL。当OTA存在时,检测结果为阳性,当OTA不存在时,检测为阴性,说明该方法特异性良好。在人工加标试验中,该电化学适配体传感器的加标回收率为96.60%~99.04%,ELISA(国家标准)的加标回收率为94.00%~98.50%,该方法的加标回收率优于国家标准。结论:该方法能够快速检测食品中的OTA,具有实用应用价值。

高效液相荧光色谱法同时测定六神曲中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A

目的建立一种用免疫亲和柱净化-柱后光化学衍生-高效液相色谱同时检测六神曲中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的方法。方法样品采用60%乙腈超声提取,免疫亲和柱净化,采用XBridge^(®)Phenyl苯基色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈和0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,光化学衍生仪衍生,通过切换荧光波长检测。结果黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A标准曲线的线性范围分别为0.006~0.108、0.500~2.500和0.202~1.009 ng,6种毒素的线性关系在0.9994以上,检出限分别为1.2、100.0和40.3 ng/ml,平均加标回收率为73.2%~92.3%,相对偏差为2.1%~5.4%。结论该方法具有专属性强、操作方便等特点,能够有效用于六神曲中3种毒素的同时检测和安全质量控制。

纳米材料电化学生物传感器检测食品中赭曲霉毒素A的研究进展

赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)是一种污染食品的常见真菌毒素,长期食用OTA污染的食品会严重影响人体健康。随着生物传感器技术的发展,电化学生物传感器成为OTA检测的新方向。纳米材料在电化学传感器中的应用有效提高了其性能。该文综述使用纳米材料检测OTA的电化学生物传感器的原理和特点,并对其发展方向进行展望。

赭曲霉毒素A对动物的危害及脱毒研究进展

赭曲霉毒素A(OTA)是一种由曲霉或青霉产生的次级代谢产物,广泛污染谷物、水果和坚果等农产品和饲料,造成严重的经济损失。此外,越来越多的证据表明,OTA通过多种毒性作用(肾毒性、肝毒性、肠毒性、致癌性、致畸性和免疫毒性)对人类和动物的健康造成巨大威胁。因此,研究OTA的毒性机制,从多方面寻求解毒方法迫在眉睫。本文综述了OTA对动物的危害及其脱毒方法,重点讨论了各种OTA脱毒方法的优势和劣势,并对提高OTA脱毒效率的方法进行了深入探讨,以期降低饲料OTA的含量,有助于减少OTA对动物健康造成的危害。

混菌发酵条件下酵母对葡萄酒中赭曲霉毒素A的去除研究

为探究本土酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)(C)及混菌发酵对葡萄酒中赭曲霉毒素A(OTA)的去除及机理,将其与3株非酿酒酵母(N、I、K)组合进行混菌发酵,比较不同组合对葡萄酒中OTA的去除情况;通过酵母胞内外产物及酵母细胞特性探究酵母对OTA的去除机理。结果表明,4株酵母的OTA耐受能力较好,混合发酵C-K组的OTA去除率(24.09%)显著高于其他组(P<0.05);4组红葡萄酒(C、C-N、C-I、C-K)酿造完成后OTA含量均处于安全范围,其中主发酵阶段OTA含量变化最大(47.41%~63.02%),其次为皮渣分离后和陈酿后;由于酿酒酵母C的细胞壁较厚(192.76 nm),对OTA吸附能力较强,因此其单独发酵时OTA的去除率高达63.02%。该研究探究了本土酿酒酵母及混菌发酵对葡萄酒中OTA的去除情况,为葡萄酒中OTA含量控制提供了参考。

基于核酸适配体与DNA长距自组装的电化学传感器定量检测赭曲霉毒素A

目的开发一种基于核酸适配体与DNA长距自组装的电化学传感器用于赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的快速、灵敏检测。方法在磁珠表面修饰核酸适配体,特异性识别OTA,并释放引物链。通过磁性分离将引物链分离出来,并利用电极界面的捕获探针(sulfhydryl modified captur probe,Cp)捕获引物链,从而引发两条辅助探针的级联杂交,形成长距DNA自组装结构。该结构的负电荷骨架可吸附大量带有正电荷的电活性分子亚甲基蓝(methylene blue,MB),产生显著的电化学信号,从而实现OTA的灵敏检测。结果传感器具有良好的特异性和稳定性,在最佳条件下,传感器的线性范围为0.012~0.120 pg/mL,相关系数为0.99225,检出限为0.6fg/mL。结论基于核酸适配体与DNA长距自组装技术,构建了一种用于OTA简单、快速、准确、灵敏检测的电化学传感器,为OTA的灵敏检测提供了新的视角。

辣椒粉中4种黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A基体标准物质研制

研制辣椒粉中4种黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A基体标准物质。根据欧盟对辣椒粉中4种黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A的最大残留限量标准,选取自然污染辣椒样品,经混匀后分装,密封保存。开展了标准物质候选物的瓶间、瓶内均匀性评估,长期和短期稳定性检验,高效液相色谱法(荧光检测器)和高效液相色谱-稳定同位素稀释质谱法两种不同原理方法定值及标准物质的不确定度评估。研制的标准物质均匀性良好,可在4℃冷藏条件下保存9个月,常温下保存不少于9 d。该标准物质定值结果(k=2)分别为:黄曲霉毒素B1(6.14±0.58)μg/kg、黄曲霉毒素B2(0.91±0.10)μg/kg、黄曲霉毒素G1(0.87±0.10)μg/kg、黄曲霉毒素G2(0.92±0.08)μg/kg和赭曲霉毒素A(22.3±1.9)μg/kg。该标准物质可用于相关检测实验分析方法的确认和过程质量控制。

基于靶标诱导滚环扩增的无标记适配体生物传感器快速检测赭曲霉毒素A

该文构建一种基于靶标诱导滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)的无标记适配体快速检测赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)生物传感器。该生物传感器探针由RCA引物与OTA适配体两部分组成,在OTA存在的环境中,OTA适配体特异性识别靶标,探针结构被打开,RCA引物与环状DNA模板(circular DNA template,CT)结合开启RCA反应,加入核酸染料SYBR Gold产生荧光信号。此生物传感器具有较高的特异性,检测限为6.6×10^(-2)nmol/L,线性检测范围为6.6×10^(-2)~660 nmol/L,可用于具体的分析检测。此生物传感器无需复杂化学修饰且操作简单,在食品安全检测中具有良好的应用前景。

集成化酶联免疫微流控平台检测红酒中的赭曲霉毒素A

目的基于微流控芯片在自动化、检测成本上的优势,建立高效的间接竞争酶联免疫吸附法检测红酒中的赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的方法。方法设计按压阀控制的微流控芯片,将含有OTA的样本以及其余4种免疫检测试剂注射进入芯片中。通过负压泵驱动这些试剂分别流经包被有OTA的硅膜夹层进行检测。确定抗原和抗体的工作浓度,绘制拟合标准曲线,计算检出限,分析真实样本的加标回收率。结果抗原为鸡蛋卵白蛋白(ovalbumin,OVA)偶联的OTA,孵育质量浓度为5.0μg/mL,捕获抗体为鼠抗OTA抗体,工作质量浓度为5.0μg/mL,检测抗体为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的羊抗小鼠免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG),稀释倍数为1:1000,OTA的线性范围为1~32 ng/mL,检出限为0.632 ng/mL,干红葡萄酒中的回收率为94.48%~105.76%;相对标准偏差为6.54%~11.18%。结论建立的方法检测成本低,灵敏度高,准确性好,可用于红酒中OTA的定量检测,为检测食品中的生物标志物提供参考。

我国饲料原料和配合饲料中T-2毒素、赭曲霉毒素A和伏马毒素的污染研究

本试验旨在研究我国饲料原料和配合饲料中T-2毒素、赭曲霉毒素A(OTA)和伏马毒素(FUM)的单独及联合污染情况。分别对从我国不同地区采集474、385和1905份饲料原料和配合饲料样品,进行T-2毒素、OTA和FUM含量检测。结果显示:饲料原料和配合饲料中T-2毒素、OTA和FUM总污染率分别为26.8%、61.8%和59.3%,其含量平均值分别为0~45.8μg/kg、0.3~11.1μg/kg和0~16.3 mg/kg。值得注意的是,分别有0.4%、0.3%和0.5%的饲料原料和配合饲料中T-2毒素、OTA和FUM含量超过了我国《饲料卫生标准》,并且,60%以上的饲料原料中霉菌毒素的联合污染率达30.3%~88.9%。由此可见,我国饲料原料和配合饲料中T-2毒素、OTA和FUM的污染较严重,生产中加强监测我国饲料原料和配合饲料中上述霉菌毒素的污染情况和实施相关防控措施尤为重要。

抑制火腿中黑曲霉生长及其合成赭曲霉毒素A菌株的筛选、鉴定及生长特性

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)是干腌火腿中常见的真菌毒素之一,对消费者健康构成极大威胁。黑曲霉(Aspergillus niger)A-8是贵州盘县火腿中OTA的主要产生菌,为筛选出有效抑制A.niger A-8产OTA的菌株,以具有潜在生防能力的菌株QF3、KF4和RS18为试验菌株,研究其抗真菌活性,NaCl含量对其生长及抗真菌活性的影响,以及3株菌在火腿培养基中抑制A.niger A-8产OTA的能力。对3株菌进行溶血性,形态学和16S rDNA鉴定以及生长特性研究。结果表明,3株菌对A.niger A-8均具有较强抗真菌活性。高浓度(8%)的NaCl能抑制3株菌的生长,但不影响其抗真菌活性。28℃时,3株菌能抑制A.niger A-8在火腿培养基中合成OTA。模拟火腿发酵温度18℃时,只有菌株RS18对A.niger A-8产OTA抑制效果显著(P<0.05)。菌株QF3、KF4和RS18均不具有溶血性。经过鉴定,菌株QF3为耐盐魏斯氏菌(Weissella halotolerans),菌株KF4和RS18为植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)。3株乳酸菌在17~42℃和pH5~9时都表现出良好的生长特性。综上所述,菌株RS18在火腿发酵温度同样具有抑制OTA产生的活性,有潜力成为防控自然发酵干腌火腿中OTA污染的生防菌。此外,关于耐盐魏斯氏菌抑制黑曲霉生长和OTA合成的效应为首次报道。这项研究为中式干腌火腿自然发酵过程中OTA污染防控提供了重要的生防思路。

不同澄清剂体外吸附葡萄酒中赭曲霉毒素A的效果评价

以‘赤霞珠’干红葡萄酒为研究对象,分析不同质量浓度壳聚糖、明胶和皂土处理对葡萄酒中赭曲霉毒素A(ochratoxin,OTA)吸附效果及理化品质的影响。采用HPLC对酒样中OTA进行分析,结果表明,对于初始质量浓度为3.3μg/L的OTA,1.0 g/L壳聚糖处理48 h可以达到75.87%的吸附率,OTA吸附率相比同质量浓度下的明胶和皂土分别提高了11.27%和21.02%,且OTA吸附率随着澄清剂质量浓度的增加而增大。而澄清剂在吸附葡萄酒中OTA的同时也会引起多酚类物质的损失,0.6 g/L壳聚糖处理下多酚类物质的损失率最小,引起总酚、总花色苷和单宁的损失率分别为15.78%、13.48%、-11.41%,透光率为78.02%,其次为1.0 g/L壳聚糖处理。以澄清剂对OTA吸附率最高、对多酚类物质影响较小为目的筛选出1.0 g/L壳聚糖作为吸附葡萄酒中OTA的最佳处理,在此处理下,OTA吸附率可达75.87%,透光率为78.22%,可为选择适宜的OTA吸附剂提供技术支撑。

低温放电等离子体对葡萄干中赭曲霉毒素A的降解效果及降解机理

采用低温放电等离子体对葡萄干中赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)进行降解,研究不同时间下初始质量浓度、放电电压对葡萄干中OTA降解率的影响。结果表明,葡萄干中初始质量浓度为50?μg/mL的OTA经等离子体在放电电压75 kV时处理10 min被完全降解。利用高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱检测并鉴定经低温放电等离子体处理的OTA降解产物,结合一级和二级质谱,推测出相对分子质量分别为m/z 426.0715(B)和m/z 158.1540(C)的2种主要降解产物结构及OTA可能的降解路径。等离子体处理前后葡萄干的理化品质没有发生显著变化,挥发性物质除酸类物质中3-甲基丁酸、乙酸、辛酸含量有明显的下降,甲酸、戊酸、2-乙基己酸含量有明显上升外,大部分的酸、醛、醇和酮类物质的相对含量未出现明显变化。研究结果表明低温放电等离子体可以有效地降解OTA,并对葡萄干品质没有显著影响,可为OTA污染的食品降解研究提供参考。

基于荧光探针技术检测粮油储运中的赭曲霉毒素A

为实现粮油储运中真菌毒素的快速检测,本文建立基于荧光探针技术检测赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的荧光传感方法。通过制备硫化铜纳米颗粒(Copper Sulfide Nanoparticles,CuS NPs)以及在CuS NPs上修饰OTA单体克隆抗体(Antibody,Ab)形成硫化铜纳米颗粒-OTA单克隆抗体免疫信号标记物(CuS-Ab NPs)进行荧光检测,采用外标法定量。结果显示,OTA浓度在0.1~200.0 ng·mL^(-1)线性关系良好,方法检出限为0.01 ng·mL^(-1),加标回收率为93.89%~109.96%,相对标准偏差为2.37%~5.12%。该方法检测灵敏度及准确性高、特异性好,适用于粮油储运中OTA的检测。

低温放电等离子体处理对赭曲霉毒素A降解效果及对无核白葡萄干品质的影响

为研究低温放电等离子体对赭曲霉毒素A(ochratoxins A,OTA)的降解效果及对无核白葡萄干品质的影响,以赭曲霉毒素A为目标毒素,分析低温放电等离子体在不同处理时间、不同电压和不同初始浓度下对目标毒素的降解效果,并评估低温放电等离子体处理对无核白葡萄干中的理化指标及色差和香气成分的影响。结果表明:低温放电等离子体不同处理条件对OTA的降解效果明显,不同处理条件均使得赭曲霉毒素A降解率达90.00%以上,以75 kV低温放电等离子体处理5 min后,50μg/mL OTA的降解率高达99.21%。低温放电等离子体处理对无核白葡萄干的理化性质、蛋白浓度、色差均未出现显著影响(P>0.05),无核白葡萄干的香气成分也得到了良好的保持。因此,低温放电等离子体对赭曲霉毒素A具有较明显的降解效果,并且不会对无核白葡萄干的品质产生影响。

采食赭曲霉毒素A污染日粮猪只的可食用组织及生物体液中OTA残留比较

赭曲霉毒素A(OTA)是一组由曲霉菌(较温暖地区)或青霉菌(较寒冷地区)等真菌产生的次级代谢有毒产物,广泛污染多种农作物(Peraica等,1999;Marin等,2009)。环境温度和水分含量是造成谷物收获和储存期间OTA污染的主要因素(Abramson等,1987)。早期研究已经引起人们对OTA污染农作物、饲料以及人类和动物接触该污染物的关注(Petzinger and Weidenbach 2002;Binder等,2007;PfohlLeszkowicz和Manderville2007;Amezequ等,2009)

葡萄及其制品中赭曲霉毒素A的污染现状及检测技术研究进展

赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)是由青霉属与曲霉属真菌产生的次级代谢产物之一,容易污染葡萄及其制品,是葡萄产业面临的重要问题之一。OTA具有急性、慢性、亚慢性毒性,对消费者健康存在潜在威胁。鉴于OTA的污染和毒性,世界各地对其制定了严苛的限量标准。因此,快速、高效、灵敏的OTA检测技术的开发与应用备受关注。本文综述了葡萄及其制品中OTA的污染现状,以及葡萄和葡萄制品生产过程中影响OTA污染的因素,总结近年来OTA传统检测技术的发展,重点介绍标记型与非标记型电化学适配体传感器的研究进展,讨论不同检测技术的优势和局限性,展望OTA检测技术的发展,以期为葡萄及其制品中OTA的研究提供理论基础。

食品中赭曲霉毒素A的产生机制及污染防控策略

赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)主要是由曲霉属(Aspergillus)和青霉属(Penicillium)真菌产生的有毒次级代谢产物,具有肾毒性、肝毒性、致畸性、神经毒性以及潜在致癌性,是世界范围内重点关注的真菌毒素之一。当前关于OTA产毒菌的分类、OTA合成途径及调控机制仍存在争议,制约了食品中OTA污染的高效精准控制。对曲霉属和青霉属中主要OTA产毒菌进行了系统梳理,特别是基于基因组比较数据将一度被认为是主要产毒菌的A.ochraceus中的部分菌株重新鉴定为A.westerdijkiae,介绍了主要产毒菌的产毒能力;系统介绍了OTA生物合成基因簇及关键合成与调控基因,特别是近年发现的新基因——环化酶otaY基因,其可能参与催化OTA生物合成途径初始步骤中的聚酮环化反应,基于最新研究结果进一步完善了OTA生物合成途径;针对食品生产不同环节,介绍了生物、物理和化学防控脱毒策略,重点介绍了针对产毒菌的生物防治方法,针对OTA毒素的生物降解菌及脱毒酶,并比较了不同方法的优缺点。最后,提出了食品OTA污染控制应基于“全链条控制”和“源头防控”的思路,保障食品安全、粮食安全和人民生命健康;分析了生物防治和生物脱毒技术的优缺点,指出绿色、安全的生物防控策略具有广阔的应用前景,是未来研究的重点方向。