经后增殖方含药血清对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞GDF9表达及凋亡的调控机制

【目的】观察益气血法经后增殖方含药血清对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞生长分化因子9(GDF9)表达及凋亡的调控机制。【方法】制备超排卵大鼠血清(空白血清)和经后增殖方灌胃的超排卵大鼠血清(含药血清)。建立控制性超排卵(COH)大鼠模型,收集卵巢颗粒细胞。实验分为5组:空白血清组,含药血清组,含药血清+SB203580[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂]组,含药血清+PDTC[核转录因子κB(NF-κB)抑制剂]组,含药血清+SB203580+PDTC组。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测p38MAPK、酪蛋白激酶2(CK2)、核转录因子κB抑制因子α(IκBα)、NF-κB、GDF9 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测GDF9蛋白表达水平,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测卵巢颗粒细胞凋亡。【结果】经后增殖方含药血清降低COH大鼠卵巢颗粒细胞的p38MAPK和NF-κB mRNA表达,升高CK2和IκBαmRNA表达,提高GDF9 mRNA和蛋白的表达水平,降低卵巢颗粒细胞的凋亡率。单独添加p38MAPK抑制剂SB203580与单独添加NF-κB抑制剂PDTC均能促进GDF9 mRNA和蛋白表达、降低卵巢颗粒细胞凋亡率。【结论】益气血法经后增殖方含药血清可促进超排卵大鼠卵巢颗粒细胞GDF9表达,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,其机制可能与调控p38MAPK和NF-κB双信号通路基因表达有关。

辅助生殖技术中控制性超排卵方案的应用及卵巢反应监测

控制性超排卵（COH）是目前常规体外授精一胚胎移植（IVF-ET）程序中不可缺少的重要步骤。所谓控制性超排卵是指以药物的手段在可控制的范围内诱发多卵泡的发育和成熟，从而为一系列的辅助生殖技术（ART）奠定基础。20余年来，随着ART的不断开展与深入研究，用于促超排卵的药物有了很大的发展，COH方案和监测方法的研究也日益深入。本文主要对COH的药物、方案及监测方法进行综述。

辅助生育技术中的超排卵方案

控制性超排卵 (COH)是辅助生育技术 (ART)的关键 ,良好的COH方案 ,可获得同步发育的多个卵泡 ,高质量的成熟卵母细胞 ,从而提高受精率和妊娠率。由于超排卵反应存在个体差异 ,选择正确的促超排卵方案有助于提高ART的安全性及成功率。目前已经发展了大量个体化的超排卵方案 ,其中最主要的是基于促性腺激素的方案。

个体化超排卵方案是IVF成功的关键

自从1978年第一例试管婴儿诞生以来,不孕症的治疗得到了长足的发展。在过去的20年里,体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization embryo transfer,IVF-ET）的妊娠率有了极大地提高,这一提高归功于控制性超排卵（contral ovarian hyper-stimulating,COH）方案的应用,COH的目的是使多个卵泡发育。最大限度地提高IVF周期的妊娠率,包括新鲜周期及累积妊娠率。但是,

控制性超排卵中血清孕酮浓度升高对体外受精-胚胎移植的影响

目的 :探讨控制性超排卵 (COH)卵泡发育晚期血清孕酮浓度升高对体外受精 胚胎移植 (IVF ET)的影响。方法 :将 2 0 0 0年 1月至 2 0 0 1年 12月在本所接受IVF或卵细胞浆单精子显微注射 (ICSI)助孕的不孕症患者 5 41例 ,依注射绒毛膜促性腺激素 (HCG)日血清孕酮浓度的不同分为 4组 :1组 ,血清孕酮≤ 2 .86nmol/L者 198例 ;2组 ,血清孕酮 >2 .86～ <6 .36nmol/L者 2 0 9例 ;3组 ,血清孕酮≥ 6 .36～ <9.5 4nmol/L者 81例 ;4组 ,血清孕酮≥ 9.5 4nmol/L者 5 3例 ,回顾性地分析IVF/ICSI结局。结果 :第 4组种植率 (5 .2 3%)和临床妊娠率 (13.2 1%)明显低于其他组 (P <0 .0 1、P <0 .0 5 ) ,流产率 (5 7.14%)呈增高趋势 ,而HCG日血清雌二醇 (E2 )、黄体生成素 (LH)、平均获卵数、第 2次成熟分裂中期卵子数、受精率、卵裂率、优质胚胎形成率 ,4组之间差异无显著性。结论 :在COH卵泡发育晚期血清孕酮浓度≥ 9.5 4nmol/L ,IVF ET后胚胎种植率和临床妊娠率下降 ,流产率增加。

体外受精-胚胎移植技术在常规超排卵304个治疗周期中的应用

目的:分析304个常规体外受精与胚胎移植(IVF－ET)超排卵治疗周期资料。方法:使用Buserelin/Metrodin－HP/HCG方案或Decapeptyl/Metrodin－HP/HCG方案超排卵、监测卵泡发育及经阴道超声引导下穿刺取卵、精子优选、体外受精－胚胎移植与黄体期支持等过程。结果:总获卵率86．45%,平均每周期获卵9个,受精率７５．８%,卵裂率96．4%。268个胚胎移植周期中83例获临床妊娠,临床妊娠率31．5%,其中5例流产;河南省首例常规试管婴儿于1999年6月23日顺利分娩,至2000年11月已分娩43例58个婴儿,１例早产死亡,另有35例在妊娠中。结论:作者建立的常规体外受精－胚胎移植技术用于治疗女性原因的不孕症是可靠、有效的。

血清抗苗勒管激素水平预测卵巢储备及在控制性超排卵中的应用

【目的】探讨血清抗苗勒管激素(AMH)水平预测卵巢储备力及在控制性超排卵(COH)中对卵巢反应性的预测价值并指导临床。【方法】回顾性分析2009年6月至12月在本中心接受IVF/ICSI-ET治疗的416周期。根据患者COH卵巢反应将患者分为3组:卵巢低反应组67例、卵巢正常反应组319例、卵巢高反应(OHSS)组30例。根据是否发生中重度OHSS分为OHSS组12例,非OHSS组404例。清晨空腹静脉血测定AMH(无月经周期限制)和FSH、LH、E2水平(月经第2～5天抽血),同时行阴道B超检查测定窦卵泡数(AFC)。以获卵数为评价标准进行诊断试验的诊断价值评价。【结果】与获卵数的相关性由强到弱是AMH水平、AFC、FSH/LH比值、基础FSH水平、基础LH水平,控制年龄因素后的偏相关系数分别为0.494、0.414、-0.310、-0.261、0.233(P<0.01)。预测卵巢低反应ROC曲线下面积除年龄外的前3项为AMH水平0.901、AFC0.889、FSH/LH比值0.734;AMH水平界值≤1.795μg/L,其Youden指数为0.629,高于其他指标。预测卵巢高反应ROC曲线下面积前3项为AFC0.882、AMH水平0.828、FSH/LH比值0.759;AMH水平界值≥3.725μg/L,其Youden指数0.558,仅次于AFC的0.661。预测OHSS时ROC曲线下面积前3项为AMH水平0.879、AFC0.838、FSH/LH比值0.716;AMH水平界值≥5.690μg/L,其Youden指数0.655,高于其他指标。AMH水平、年龄和总促排剂量与获卵数的多元回归模型:获卵数(个)=5.802+1.080×AMH(μg/L)。【结论】血清AMH水平能反应卵巢的储备力,可以在COH前预测卵巢反应和获卵数,是良好的卵巢反应预测指标之一,对临床用药有良好的指导意义。

超排卵对小鼠卵母细胞和胚胎发育潜能的影响

目的比较超排卵对小鼠卵母细胞和胚胎发育潜能的影响。方法建立超排卵妊娠小鼠模型,获取孕4d胚胎,观察获取卵母细胞的数目、受精率、卵裂率、优质胚胎率和囊胚形成率,并与自然周期排卵小鼠的比较。结果超排周期组获取的卵母细胞的数目高于自然周期组;超排周期组的受精率(88.57%)和卵裂率(92.17%)与自然周期组的受精率(92.86%)和卵裂率(96.70%)相似,但超排周期组的优质胚胎率(76.50%)和囊胚形成率(22.50%)低于自然周期组的优质胚胎率(88.64%)和囊胚形成率(43.18%)。结论超排卵能增加卵母细胞和胚胎的数量,不影响受精和卵裂,但会降低优质胚胎率和囊胚形成率,影响卵裂后胚胎的进一步发育的潜能。

控制性超排卵中血清促黄体生成素浓度过低对体外受精-胚胎移植的影响

目的 :探讨控制性超排卵中血清促黄体生成素 (L H)浓度过低对体外受精 -胚胎移植的影响。方法 :为 2 0 0 0年 6月至 2 0 0 1年 8月在本所接受体外受精 (IVF)或卵母细胞单精子显微注射 (ICSI)助孕的不孕症患者 ,对其中具有正常促性腺激素功能的妇女 16 0例采用促性腺激素释放激素激动剂 (Gn RH- a)长方案并单纯用人基因重组促卵泡生长素 (r- FSH)进行控制性超排卵 (COH) ,以注射绒毛膜促性腺激素 (HCG)日血清 L H浓度分为两组 ,低 L H组为血清 L H≤ 0 .5 m IU/ml,对照组为血清 L H>0 .5 m IU/ml,其中低 L H组 72个周期 ,占 4 5 % ,对照组 88个周期 ,总共 16 0个周期。按本所常规方法过行 IVF/ICSI。我们对这 16 0例临床资料进行回顾性分析。结果 :低 L H组平均 r- FSH用药量和用药时间明显多于对照组 (30 .2 1± 8.12支与 2 7.17± 7.99支 ,10 .93± 1.2 5 d与 10 .0 2± 1.18d,P<0 .0 1) ;r- FSH刺激第 8天的血清 L H浓度和雌二醇 (E2 )浓度 (2 .0 5± 1.4 9m IU/ml与 2 .6 2± 1.5 8m IU/ml,182 7.3± 897.6 pg/ml与 2 0 93.3±92 3.7pg/ml,P<0 .0 5 )、注射 HCG日血清 L H浓度和 E2 浓度 (0 .15± 0 .16 m IU/ml与 1.6 0± 0 .92 m IU/ml,1916 .8±989.5 pg/ml与 3495 .2± 938.2 pg/ml,P<0 .0 0 1)?

卵巢间质动脉血流预测卵巢储备功能及超排卵反应性的研究

目的:探讨卵巢间质动脉血流超声学指标预测卵巢储备功能及超排卵反应性的可靠性。方法:经阴道彩色B型超声检测164例月经第2天(M2)卵巢间质动脉血流搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、收缩期峰值流速(S)/舒张期低值流速(D),预测卵巢储备功能和超排卵反应性,并与用基础FSH值+窦卵泡数+卵巢体积的传统预测方法进行比较;用回收卵母细胞数回顾判断卵巢间质动脉血流指标预测卵巢储备功能及超排卵反应性的可靠性。结果:卵巢储备功能正常组与异常组比较,M2的PI(P<0.05))、RI(P<0.05)有统计学意义;超排卵反应良好组与反应不良组比较,两组M2,PI,RI,S/D(P<0.05)有差异。用卵巢间质动脉血流超声指标预测卵巢储备功能,与传统判断卵巢储备功能结果相一致,预测的可靠性为78.66%(129/164);卵巢基础间质动脉血流预测卵巢反应性的可靠性为76.22%(125/164)。结论:卵巢间质动脉血流PI、RI和S/D可用于预测卵巢储备功能及超排卵反应性。

寿胎丸加减方对超排卵小鼠种植窗期子宫内膜整合素β3蛋白表达的影响

目的探讨寿胎丸加减方对超排卵小鼠种植窗期子宫内膜整合素β3蛋白表达的影响。方法将70只昆明未孕小鼠按随机数字表法分为3组:中药组30只、阿司匹林组30只和对照组10只。建立控制性排卵小鼠模型。模型建立成功后,中药组、阿司匹林组、对照组分别给予寿胎丸加减中药、阿司匹林、0.9%氯化钠注射液进行干预。在小鼠种植窗期取子宫中段组织,采用免疫组化PV二步法检测子宫内膜组织中整合素β3蛋白的表达。结果中药组小鼠子宫内膜整合素β3蛋白强阳性表达率明显高于阿司匹林组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。阿司匹林组小鼠子宫内膜整合素β3蛋白强阳性表达率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论寿胎丸加减方可提高超排卵小鼠种植窗期子宫内膜整合素β3蛋白的表达水平,改善子宫内膜的容受性。

输卵管积水腹腔镜手术处理方式对体外受精胚胎移植中卵巢超排卵的影响

目的评价输卵管积水腹腔镜手术处理方式对体外受精胚胎移植（IVF—ET）中卵巢超排卵的影响。方法2002年1月-2005年1月因输卵管积水致不孕65例，共治疗67个周期，在IVF—ET前进行腹腔镜输卵管切除和输卵管近端结扎远端造口手术预处理，分为3组。A组：行双侧输卵管切除术47例，48个治疗周期；B组：行双侧输卵管近端结扎远端造121术18例，19个治疗周期；C组：选择与A、B组同期进行，因输卵管近端阻塞无积水者，行IVF—ET治疗的不孕58例，58个治疗周期。结果A组的受精率、卵裂率、胚胎移植率、临床妊娠率分别为85％±21％、95％±17％、49％（55／113）、79％（38／48）；B组为83％±17％、98％±7％、47％（21／45）、68％（13／19）；C组为81％±22％、92％±16％、41％（57／140）、66％（38／58）。3组比较差异无显著性（F=0．48，P=0．620；F=1．22，P=0．297；x^2=1．691，P=0．429，x^2=2．471，P=0．291）。Gn用量、用药天数及获卵数A组分别为（29.4±10.3）支、（9．4±1.7）d、（11.4±5．6）个；B组为（24．7±7．7）支、（9．0±1．8）d、（12．8±6．1）个；C组为（28．4±8．8）支、（9.1±1.8）d、（11．4±5．3）个。3组比较差异无显著性（F=1.77，P=0.174；F=0．52，P=0．593；F=0．51，P=0．599）结论采取腹腔镜下输卵管切除或近端结扎远端造口术，进行输卵管积水预处理，并不减弱卵巢的超排卵反应，所以这两种方法均可以作为IVF—ET前处理输卵管积水的主要选择。

FSH/LH值与控制性超排卵中卵巢反应性关系的临床研究

目的:探讨FSH/LH值在控制性超排卵(COH)中与卵巢反应性的关系。方法:对336个周期分为超排卵治疗不反应组(34个周期)、低反应组(59个周期)、正常反应组(243个周期),比较3组FSH、LH,以及使用促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)后FSH、LH水平,促性腺激素(Gn)的用量等。激素测定采用酶联免疫分析法。结果:不反应组的FSH基础值为9.9±4.9U/L,分别与低反应组的8.1±5.1U/L及正常反应组的6.6±2.5U/L比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。不反应组的FSH/LH基础值为2.8,分别与低反应组(2.1)及正常反应组(1.5)比较差异均有统计学意义(P<0.05)。使用GnRHa启动日不反应组FSH/LH比值为5.1,低反应组为4.1,两者与基础水平比较均有明显增高,而正常反应组增高不明显。结论:GnRHa降调节后,FSH/LH值可用于预测卵巢对Gn的反应性而作为判断COH结果的预测指标。

超排卵时卵巢对促性腺激素的反应与颗粒细胞促卵泡激素受体的表达

目的 :探讨促排卵周期卵巢对促性腺激素反应性与颗粒细胞促卵泡激素受体 (FSHR)表达的关系。方法 :根据取卵时卵泡发育数不同 ,将卵巢对促排卵药物的反应分为低反应型 (卵泡数≤ 3个 )、中反应型 (卵泡数 4～13个 )和高反应型 (卵泡数≥ 14个 ) ,分别为 11例、15例和 13例。采用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)测定 3种反应类型的卵泡颗粒细胞 FSHR m RNA的表达量。结果 :低反应型 FSHR m RNA表达量显著低于中、高反应型 (相对积分值分别为 0 .5 4± 0 .0 7、0 .90± 0 .17和 1.2 0± 0 .4 5 ,P<0 .0 5 )。结论 :卵巢对促性腺激素的反应与颗粒细胞FSHR m RNA的表达量高低有关。

护卵汤对GnRHa超排卵大鼠血清生殖激素的影响

目的观察护卵汤对GnRHa超排卵大鼠血清生殖激素的影响,为护卵汤辅治辅助生殖技术(ART)提供理论依据。方法模仿人类辅助生殖中的长周期,对大鼠进行GnRHa垂体降调节预处理后再用HMG等药物超排卵(模型组),同时随机给予不同剂量的护卵汤辅助治疗(护卵汤低、中、高剂量组),以及自然周期未使用任何药物的大鼠为正常对照(正常组)。在HCG日用放射免疫法检测血清FSH、LH、E2、P含量。结果护卵汤各剂量组血清E2和FSH含量均比正常组显著增高,比较差异有显著统计学意义(P<0.01);护卵汤高剂量组血清LH含量较正常组增高,护卵汤低、中剂量组血清P含量较正常组增高,比较差异有统计学意义(P<0.05);模型组血清FSH含量较正常组增高,比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。护卵汤各剂量组血清E2含量均较模型组增加,其中护卵汤中、高剂量组与模型组的比较差异有统计学意义(分别为P<0.05和P<0.01),低剂量组与模型组的比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 GnRHa超排卵影响大鼠的生殖内分泌环境;而护卵汤能改善GnRHa超排卵大鼠的生殖内分泌环境,增强卵巢功能,增加血清E2的含量。

护卵汤对GnRHa超排卵大鼠卵巢细胞因子及受体的影响

目的观察护卵汤对丙氨瑞林(GnRHa)超排卵大鼠卵巢细胞因子及受体的影响,为护卵汤辅治辅助生殖技术(ART)提供理论依据。方法模仿人类辅助生殖中的长周期,对大鼠进行GnRHa垂体降调节预处理后再用HMG等药物超排卵(模型组),同时给予中药护卵汤辅助治疗(护卵汤组),以及自然周期未使用任何药物的大鼠为正常对照(正常组)。在注射绒毛膜促性腺激素(HCG)日摘取卵巢组织用抗体芯片法检测卵巢细胞因子及受体的表达。结果与正常组相比,模型组卵巢微环境中生长激素(GH)、生长激素受体(GHR)、白细胞介素-1β(IL-1β)等十几种细胞因子及受体表达减少,瘦素(Leptin,OB)、γ干扰素(IFN-γ)等表达增多;与模型组相比,护卵汤组卵巢微环境中GHR、IL-1β、转化生长因子-β1(TGF-β1)等十几种细胞因子及受体表达增多,IFN-γ、Leptin(OB)、肿瘤坏死因子(TNF-α)等表达减少。结论 GnRHa超排卵对大鼠卵巢微环境有不利影响;护卵汤能改善GnRHa超排卵大鼠卵巢微环境,从而有利于卵泡发育及卵子质量。

益气血法对超排卵小鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2、Bax、Caspase3表达的影响

目的观察经后增殖方对超排卵小鼠卵巢凋亡相关基因及其蛋白表达的调节作用,探讨中药益气血法对超排卵小鼠卵巢颗粒细胞凋亡及卵泡质量的影响。方法建立超排卵小鼠模型,30只小鼠随机分为空白组、模型组、中药治疗组。采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测Bcl-2、Bax、Caspase3基因和蛋白的表达水平。结果中药治疗组Bax、Cas-pase3 mRNA的表达水平与模型组比较(0.895 vs 1.779,0.674 vs 2.066,均P<0.05),差异均有统计学意义;中药治疗组Bcl-2、Bax、Caspase3 mRNA的表达水平与空白组比较(1.11 vs 1.26,0.89 vs 0.79,0.67 vs 0.96),差异均无统计学意义(P>0.05);中药治疗组Bcl-2、Bax、Caspase3蛋白的表达水平与模型组比较(0.62 vs0.41,0.79 vs 1.06,0.49 vs 0.89),差异均有统计学意义(P<0.05),与空白组比较(0.62 vs 0.64,0.79 vs 0.73,0.49 vs 0.50)差异均无统计学意义(P>0.05)。结论经后增殖方能促进Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax、Cas-pase3基因及蛋白的表达,抑制超排卵小鼠卵巢颗粒细胞凋亡至接近自然排卵小鼠的水平,提高超排卵小鼠卵泡质量。

GnRHa超排卵对小鼠子宫内膜形态学和雌、孕激素受体表达的影响

探讨 Gn RHa长周期辅助超排卵对小鼠分泌期子宫内膜组织形态和性激素受体表达的影响。方法 :将 40只小鼠随机分成 4组 ,其中 2组给 Gn RHa+h MG+h CG为用药组 ,另 2组为对照组给等体积生理盐水 ,在促排卵和排卵后 2 4、48h利用多功能图象分析仪定量测定子宫内膜厚度、腺体和腺腔面积、周长、最大直径、腺上皮细胞总面积和平均高度 ;SP免疫组化法定量测定腺上皮细胞雌、孕激素受体表达。结果 :( 1 )用药组在注 h CG后 2 4、48h子宫内膜厚度与对照组相比差异无显著性 ( P>0 .0 5 )。 ( 2 )用药组在注 h CG后此两时段腺体和腺腔面积、周长、最大直径以及腺上皮细胞总面积和平均直径均显著小于对照组 ( P均 <0 .0 5 )。同时用药组部分内膜间质和腺体发育不同步。( 3 )用药组在注 h CG后两时段内膜腺上皮细胞 ER、PR免疫组化阳性率和染色强度均显著低于对照组同期值 ( P均 <0 .0 5 )。结论 :Gn RHa辅助超排卵对小鼠子宫内膜组织结构和 ER、PR表达有不利影响 ,提示该方案并不能完全促进生理状态的子宫内膜形成 。