肾小管上皮细胞fractalkine的表达介导对巨噬细胞的趋化作用

[目的]探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK-52E上调表达趋化因子fractalkine的时间和剂量效应,并观察肾小管上皮细胞fractalkine表达是否介导了对巨噬细胞的趋化作用.[方法]应用免疫荧光细胞化学技术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹法检测TNF-α诱导的NRK-52E fractalkine表达,应用Transwell装置观察NRK-52E对大鼠巨噬细胞株RAW 264.7的趋化效应,以及fractalkine中和抗体对趋化效应的影响.[结果]正常培养的NRK-52E可表达少量的fractalkine,TNF-α(40 ng/mL)刺激后1 h,fractalkine的mRNA和蛋白表达增加尚不明显,在刺激后6 h表达即明显增加,持续至24～48 h.10 ng/mL TNF-α即可诱导fractalkine mRNA和蛋白表达增加,20 ng/mL及40 ng/mL TNF-α诱导fractalkine表达增加的效应更加明显.NRK-52E fractalkine表达上调可明显增强其趋化巨噬细胞的效应,而fractalkine中和抗体可明显抑制此种趋化效应.[结论]TNF-α能够以时间和剂量依赖方式上调肾小管上皮细胞fractalkine的mRNA和蛋白表达,且fractalkine在介导肾小管上皮细胞对巨噬细胞的趋化作用中起重要作用.

雷公藤内酯醇抑制RANTES和MIP-1α对佐剂性关节炎大鼠外周血T淋巴细胞趋化作用的研究

探讨雷公藤内酯醇对佐剂性关节炎大鼠外周血T淋巴细胞与RANTES和MIP - 1α趋化反应的影响。建立大鼠佐剂性关节炎模型 ,应用雷公藤内酯醇 (0 .2～ 0 .4mg/kg ,ip)后 ,分离大鼠外周血T淋巴细胞 ,观察RANTES和MIP - 1α对T淋巴细胞趋化反应的影响 ,检测病变关节肿胀度 ,观察病变关节组织的炎症病理变化。雷公藤内酯醇在 0 .2～ 0 .4mg/kg范围内 ,能明显减轻佐剂性关节炎病变关节肿胀度 ,减轻病变组织的炎症反应程度 ,显著抑制RANTES和MIP - 1α对T淋巴细胞的趋化作用。指出 ,雷公藤内酯醇能明显抑制RANTES和MIP - 1α对佐剂性关节炎大鼠外周血T淋巴细胞趋化作用。

CXCL9对单个核细胞的趋化作用及其机制探讨

目的观察趋化因子CXCL9对人外周血单个核细胞的趋化作用,并探讨其对CXCR3受体后信号通路的影响。方法分离人外周血单个核细胞并进行培养,Transwell小室趋化实验检测不同浓度的趋化因子CXCL9对外周血单个核细胞的趋化作用;Western blot方法检测CXCL9刺激外周血单个核细胞时ERK1/2及PI3K/Akt信号通路的蛋白表达变化,并检测上述通路抑制剂PD98059和Wortmannin处理细胞后,CXCL9对ERK1/2、PI3K/Akt信号通路的影响有无变化。结果与空白对照组相比,不同浓度的CXCL9刺激对人外周血单个核细胞均有明显的趋化作用,并且CXCL9刺激人外周血单个核细胞能激活ERK1/2及PI3K/Akt信号通路,其关键蛋白ERK1/2及Akt磷酸化水平显著增加;通路特异性抑制剂PD98059和Wortmannin的应用能明显抑制CXCL9对这两条信号通路的激活。结论 CXCL9能趋化人外周血单个核细胞发生迁移,ERK1/2及PI3K/Akt信号通路可能在此过程中发挥重要作用。

河流弧菌对牙鲆表皮粘液的趋化作用

病原菌对粘液的趋化作用在其对粘液层定植过程中起着重要作用,趋化作用是病原菌的毒力机制之一。为了解病原性河流弧菌对牙鲆表皮粘液的趋化作用,本文采用改良的毛细管法研究了细菌浓度、孵育时间、孵育温度、pH、NaCl浓度、碳水化合物等对河流弧菌趋化作用的影响。试验结果表明,在较低浓度下,河流弧菌对牙鲆表皮粘液的趋化量随着菌浓度的升高而增大;在室温下河流弧菌的趋化量随着孵育时间的延长而增加,60 min趋于饱和;孵育温度在4-15℃范围内趋化作用随温度升高而增强,15℃时达最大值;pH为8时细菌的趋化性最强;NaCl浓度超过0.8%,河流弧菌的趋化性随着浓度升高而显著减弱（P〈0.05）;8种碳水化合物中甘露醇、乳糖、甘露糖能够极显著地促进河流弧菌对牙鲆表皮粘液的趋化作用（P〈0.01）。以上结果说明,牙鲆表皮粘液对河流弧菌有较强的趋化作用,该趋化作用受环境因子的影响较大;本文所揭示的河流弧菌趋化特性将对养殖牙鲆疾病防治提供有价值的参考。

凤眼莲根分泌物氨基酸组分对根际肠杆菌属F_2细菌的趋化作用

凤眼莲（Ｅｉｃｈｈｏｒｎｉａｃｒａｓｓｉｐｅｓ）的根分泌物中含有Ｍｅｔ等多种氨基酸，其中Ｍｅｔ、ＧＡＢＡ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ和Ｌｅｕ（１０－７～１０－２ｍｏｌ·Ｌ－１）均对凤眼莲的根际肠杆菌属Ｆ２（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｓｐ．Ｆ２）细菌有强烈的正趋化作用；Ｇｌｕ、Ｔｈｒ和Ｈｉｓ（１０－７～１０－３ｍｏｌ·Ｌ－１）也对该菌有一定的正趋化作用；而Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ和Ｔｙｐ则对该菌表现出一定的负趋化作用．对细菌的正趋化作用存在一个趋化物的最适浓度范围．具有正趋化作用的氨基酸在凤眼莲根际的浓度都较高，而具有负趋化作用的浓度则较低，这正是凤眼莲与该根际细菌结合为根际微生态系统的原因之一．

心房颤动患者血清TNF-α、TGF-β水平及其对心肌成纤维细胞趋化作用的影响

目的研究心房颤动与非心房颤动患者血清中转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的动态变化及其对心肌成纤维细胞趋化运动诱导能力的差异。方法采用酶联免疫吸附法检测心房颤动与非心房颤动患者血清中TGF-β、TNF-α蛋白含量;培养新生SD大鼠的心肌成纤维细胞,取3~4代细胞采用Transwell装置检测不同浓度(1μg/L、10μg/L、50μg/L)的TGF-β、TNF-α诱导成纤维细胞运动的能力差异。结果血清中TGF-β、TNF-α含量各组均有明显差异,其中持续性心房颤动组最高,非心房颤动房性心律失常组明显高于阵发性心房颤动组,对照组最低;在不同浓度(1μg/L、10μg/L、50μg/L)TGF-β、TNF-α的趋化诱导作用下,迁移至下室的细胞50μg/L组较其它浓度组明显增高,10μg/L组次之,与其它各组比较均具有统计学意义。Logistic回归分析表明,迁移至滤膜下的细胞数与血清中TGF-β、TNF-α含量有相关性。结论各组血清中TGF-β、TNF-α含量不同,说明心房颤动的发生与潜在的炎症状态有关;TGF-β、TNF-α对心肌成纤维细胞具有趋化作用,心房颤动患者心肌成纤维细胞的趋化作用部分是由TNF-α、TGF-β介导的;血清中TNF-α、TGF-β水平变化间接反映了心肌损伤的存在、范围和程度。

丛枝菌根(AM)对根瘤菌趋化作用研究

对紫穗槐非接种(AM-+Rh-)、单接种根瘤菌(Rh+)、单接种AM真菌(AM+)和双接种(AM++Rh+)处理,研究AM真菌、根瘤菌对宿主植物紫穗槐侵染情况,并采用经过改良的根部微生物趋化试验手段研究AM真菌侵染根系后分泌物对根瘤菌的趋化性。实验结果表明:在接种AM++Rh+情况下,使宿主先于AM+、Rh+处理形成根瘤,且双接种能够显著提高菌根侵染率;在共生体形成期间,AM真菌与根瘤菌之间存在着识别互动反应和一定的信号物质,接种AM真菌对根瘤菌有正趋化作用;同时,外界温度对AM真菌-宿主植物-根瘤菌三者共生体初始信号识别也起到一定的调控作用。

人趋化素样因子1对人动脉血管平滑肌细胞的趋化作用

目的:观察人趋化素样因子1(chemokine-like factor1,CKLF1)对人外周动脉血管平滑肌细胞(arterial smooth muscle cells,ASMCs)的趋化作用。方法:收集用CKLF1真核细胞表达载体(pEGFP-N1-CKLF1)瞬时转染293T细胞72h后的上清培养液,采用细胞迁移实验检测CKLF1对ASMCs的趋化作用。结果:未稀释和10倍稀释的上清培养液孵育后的实验组迁移细胞数与对照组(pEGFP-N1)迁移细胞数相比,差异有统计学意义(114±4vs41±4,P<0.05;74±4vs34±3,P<0.01)。而100倍和1000倍稀释的上清培养液孵育后实验组迁移细胞数和对照组的迁移细胞数相比,差异无统计学意义(28±4vs25±5,P>0.05;26±5vs23±5,P>0.05)。ASMCs分别被不同浓度百日咳毒素(pertussis toxin,PTX)处理后,PTX浓度为0和2μg/L时,10倍稀释的上清培养液实验组迁移细胞数与对照组迁移细胞数相比,差异有统计学意义(74±4vs34±3,P<0.01;45±3vs34±3,P<0.01)。PTX浓度为10μg/L,10倍稀释的上清培养液实验组迁移细胞数与对照组迁移细胞数相比,差异无统计学意义(37±4vs34±3,P>0.05)。结论:CKLF1对人动脉平滑肌细胞具有明显趋化作用,且该趋化作用可被PTX所阻断。

雷公藤内酯醇对佐剂性关节炎大鼠T淋巴细胞的趋化作用

目的观察雷公藤内酯醇对佐剂性关节炎大鼠外周血T淋巴细胞与趋化因子(MCP-1)趋化作用的影响。方法以佐剂性关节炎大鼠模型为研究对象,应用雷公藤内酯醇(0.2～0.4mg/kg,腹腔注射1次/d,共5d)后,分离大鼠外周血T淋巴细胞,观察MCP-1对T淋巴细胞趋化作用,检测病变关节肿胀度、外周血肿瘤坏死因子(TNF-α)含量。结果雷公藤内酯醇在0.2～0.4mg/kg范围内能明显减轻佐剂性关节炎病变关节肿胀度,减少外周血TNF-α含量,显著抑制MCP-1对T淋巴细胞趋化作用。结论雷公藤内酯醇具有抑制MCP-1对佐剂性关节炎大鼠外周血T淋巴细胞趋化作用的能力。

蛇葡萄素对免疫细胞的趋化作用

目的:观察蛇葡萄素在一定浓度下对中性粒细胞和单核细胞的趋化作用。方法:分别与趋化因子IL-8、MCP-1作对照,在琼脂糖中进行化学增活和化学趋化实验。结果:蛇葡萄素在25.6μg/m、l51.2μg/m l浓度下,具有显著诱导中性粒细胞和单核细胞产生趋化的作用。浓度为25.6μg/m l的蛇葡萄素与150 ng/m l IL-8或50 ng/m l的MCP-1的增活效应无显著差异(P>0.05)。浓度为12.8μg/m l的蛇葡萄素的趋化效应强于150 ng/m l的IL-8或100 ng/m l的MCP-1(P<0.05)。蛇葡萄素与IL-8及MCP-1对中性粒细胞和单核细胞的趋化作用均存在协同作用(P<0.05)。结论:蛇葡萄素对中性粒细胞和单核细胞均有化学增活和化学趋化效应,且在对免疫细胞的化学增活方面,蛇葡萄素与IL-8及MCP-1均存在协同作用。

低剂量颗粒溶素对单核细胞和T细胞具有趋化作用

目的探讨低剂量颗粒溶素(GNLY)对免疫细胞的趋化作用。方法抽取健康人全血,分离出外周血单个核细胞(PBMC),经免疫磁珠法纯化出单核细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD45RA+T细胞、CD4+/CD45RO+T细胞、CD8+/CD45RA+T细胞和CD8+/CD45RO+T细胞,再用96孔微孔趋化板进行趋化反应。结果颗粒溶素可趋化一些T细胞系、单核细胞系,趋化指数≥2(P<0.05),而对B细胞系的趋化指数为<2。用百日咳毒素预处理过的T细胞系、单核细胞系不再对颗粒溶素有反应,提示颗粒溶素介导的趋化作用涉及G蛋白偶连受体。结论颗粒溶素不仅是一种细胞毒性分子,而且具有化学趋化作用。颗粒溶素在10～100μmol发挥细胞毒活性而在相对较低的浓度下发挥趋化作用且此效应涉及G蛋白偶连受体。

基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞的趋化作用

骨髓干细胞主要由造血干细胞和间充质干细胞组成,其中骨髓间充质干细胞除具有自我更新和多向分化的潜能外,更具有很强的可塑性,在一定的诱导条件下能向多细胞分化,且其相对容易获得,成为近年来研究的热点.许多体内外试验证实,细胞因子可以影响移植细胞的微环境,进而影响骨髓干细胞的动员、迁移及分化.基质细胞衍生因子1是一类对免疫细胞有趋化作用的小分子蛋白,属于CXC趋化因子之一,具有广泛的生物学活性,对骨髓干细胞亦有趋化作用,现就SDF-1对骨髓间充质干细胞的趋化作用作一综述.

血小板衍生生长因子C对体外培养的人卵巢透明细胞癌细胞的增殖和趋化作用

目的观察血小板衍生生长因子-C(platelet-derived growth factor-C,PDGF-C)对体外培养的人卵巢透明细胞癌(ovarian clear cell carcinoma,OCCC)ES-2细胞的增殖和趋化作用。方法体外培养ES-2细胞,添加不同浓度的PDGF-C进行干预,应用CCK8试剂盒法评价细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,利用Transwell细胞迁移实验、细胞划痕实验测定细胞迁移能力。结果与未加PDGF-C的对照组相比,PDGF-C能明显刺激ES-2细胞的增殖,在第4天增殖达高峰,PDGF-C促增殖最佳作用浓度是20μg/L;经不同浓度PDGF-C的刺激,处于细胞周期G1期的ES-2细胞比例较对照组明显降低(P<0.05),处于S期的ES-2细胞比例显著升高(P<0.05),而处于G_2+M期的细胞比例则无明显变化(P>0.05)。同时,PDGF-C提高了ES-2细胞的迁移能力。结论 PDGF-C可促进体外培养的ES-2细胞的增殖、迁移能力。

LPS的直接诱导对肺微血管内皮细胞IL-8的表达及对PMN趋化作用影响的研究

目的探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)IL -8表达的影响及诱导发生的PMVEC对多形核中性粒细胞 (PMN)趋化作用的影响。方法100ng/mlLPS刺激PMVEC0、1、2、4、6、8h或1、10、100ng/mlLPS刺激6h,ELISA和原位杂交试验分别检测培养液上清中分泌的IL -8及PMVEC内IL-8mRNA的表达 ,同时琼脂糖平板法检测对PMN的趋化作用 ,并通过抗IL -8的抗体抑制试验观察对趋化作用的影响。结果LPS能显著促进PMVEC表达IL -8 ,包括促进IL-8mRNA的表达及IL -8的分泌。在时间上mRNA的表达先于IL -8分泌。LPS能促进PMVEC对PMN的趋化 ,随刺激作用的持续 ,诱导的PMVEC对PMN的趋化作用加强。抗IL -8抗体能显著抑制对PMN的趋化作用(P<0.01)。结论表明细菌致病因子LPS的直接诱导确能促进PMVEC高效表达和分泌IL -8 ,从而为PMN的迁移提供必需的物质条件,发挥对PMN的趋化作用而参与导致肺损伤。

层粘连蛋白对肝癌细胞的趋化作用及其伪足形成的影响

采用微吸管实验技术将研究层粘连蛋白(Laminin,LN)(LN)作包被液预裱衬处理微吸管后,LN趋化液对了解探讨肝癌(HCC)细胞响应LN时的趋触效应趋化作用以及基质在对微吸管表面的粘附的作用对肝癌细胞(HCC)以及肿瘤细胞伪足形成的影响。研究不同浓度LN趋化液对HCC细胞与不同浓度LN的趋化作用。定量描述肝癌细胞(HCC)在层粘连蛋白LN(Laminin,LN)趋化作用下伪足的形成、生长的动态过程。结果显示,当微吸管未经LN预裱衬处理,而仅放置空白趋化液时未见有伪足形成;微吸管内壁经100μg/mlLN预裱衬后再加入空白趋化液时,仍未见伪足形成;对微吸管内表面与未经LN预裱衬处理或比较,微吸管中经加入50μg/ml LN趋化液预裱衬处理微管内加入50μg/ml LN趋化液时肝癌细胞所形成的伪足峰值长度的比较,在两种情况下,二者无显著性差异(P>0.05)。当LN趋化液浓度趋化剂LN浓度≤200μg/ml,HCC细胞伪足峰值的生长长度随浓度的增加而增大加;当LN浓度≥200μg/ml,伪足的生长呈现饱和性。提示微吸管内表面裱衬LN对肝癌细胞伪足形成的趋化作用可忽略。在HCC细胞响应LN趋化作用生成伪足具有一定范围的浓度依赖性和时间依赖性。LN在一定浓度范围内,对HCC细胞的趋化作用具有浓度依赖性。

血小板第四因子对脐血CD34^+细胞趋化作用的研究

目的 :研究PF4及其小肽PF417 70对新鲜脐血CD34+细胞的趋化作用及对粘附分子表达的影响。方法 :采用免疫磁珠法 (MACS)分选CD34+细胞 ,利用Transwell穿孔板测定PF4对CD34+细胞的趋化作用 ;流式细胞仪检测免疫荧光标记的粘附分子及CXCR4的表达。结果 :①PF4对脐血CD34+细胞有趋化作用 ,PF4组的趋化百分比为 15 7.43%± 5 0 .0 6 %(P <0 .0 5 ) ,PF417 70组为 187.0 2 %± 10 .6 9%(P <0 .0 5 )。②PF4作用于CD34+细胞时 ,CD49d和CXCR 4表达增加 ,对其它粘附分子CD31,CD44 ,CD11a ,CD6 2 p ,CD6 2E的表达没有影响。 结论 :PF4对脐血CD34+细胞有趋化作用 ,促进整合素CD49d及CXCR4的表达 ,PF4有助于脐血干细胞的归巢。

hMIP-1β基因转染小鼠结肠腺癌CT26细胞对免疫细胞的体内外趋化作用

探讨转染人巨噬细胞炎性蛋白1β(human macrophage inflammatory protein-1 beta,hMIP-1β)基因的小鼠结肠腺癌CT26细胞的生物学特性、致瘤性及对免疫细胞的体内外趋化作用。利用重组腺病毒载体携带hMIP-1β基因(AdhMIP-1β)转染CT26细胞。X-gal染色法检测基因转染效率;ELISA法检测基因转染CT26细胞培养上清中hMIP-1β的含量;Boyden趋化小室法检测培养上清对CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞及未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)的趋化作用。小鼠皮下接种转染hMIP-1β基因的CT26细胞,观察其体内致瘤性和对免疫细胞的趋化作用。结果显示,腺病毒载体可携带hMIP-1β基因转染CT26细胞并高效表达hMIP-1β(P<0.01),培养上清含hMIP-1β且对免疫细胞有明显趋化作用。转染hMIP-1β基因的CT26细胞皮下接种后成瘤率降低,肿瘤生长速度减慢,肿瘤内可见明显坏死灶,坏死灶内和周围可见较多淋巴细胞浸润。提示hMIP-1β基因转染CT26细胞后,通过分泌hMIP-1β趋化淋巴细胞等免疫细胞到肿瘤局部发挥有效的抗肿瘤作用,从而为肿瘤的免疫治疗提供新的思路和策略。

重组基质细胞衍生因子1α对单核细胞的趋化作用

目的探讨pcDNA3.1-基质细胞衍生因子1α重组质粒对单核细胞的趋化作用。方法将pcDNA3.1-基质细胞衍生因子1α质粒用脂质体的方法导入人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞中,G418筛选细胞克隆。通过逆转录聚合酶链反应法在转录水平检测基质细胞衍生因子1α在转基因ECV304细胞中的表达。通过Transwell实验研究基质细胞衍生因子1α对单核细胞的趋化作用。结果获得了稳定表达基质细胞衍生因子1α基因的ECV304细胞克隆,pcDNA3.1-基质细胞衍生因子1α重组质粒对单核细胞具有趋化作用。结论重组大鼠基质细胞衍生因子1α对单核细胞具有明显的趋化作用。