D101型大孔树脂吸附纯化车前草中熊果酸的研究

目的:研究从车前草提取液中富集纯化熊果酸的工艺。方法:车前草脱脂后超声提取液经酸碱沉淀初纯化,再用大孔吸附树脂进一步富集纯化熊果酸。结果:D101型大孔树脂富集纯化熊果酸的最优条件为采用质量浓度为0.7 mg/mL的车前草样品液上柱,调节pH值=7,再以90%的乙醇作为洗脱剂进行洗脱;洗脱液浓缩后经测定与熊果酸标准品的紫外出峰位置一致,纯度达79.59%。结论:该方法简便可行,为车前草熊果酸的提取及纯化提供了良好的理论和实验依据。

车前草苷通过抑制NF-κB/IL-6信号通路减弱LPS诱导的人牙龈成纤维细胞的炎症反应

目的:探究车前草苷(PMS)通过抑制核因子-κB(NF-κB)/白细胞介素-6(IL-6)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞的炎症反应的影响。方法:将培养的人牙龈成纤维细胞(HGnF)随机分为:对照组、模型组(10mg/L LPS)、PMS低、高剂量组(50、100μg/mL PMS+10mg/L LPS)、激活剂组(10μM BAY11-7085+10mg/L LPS)、PMS高剂量+激活剂组(10μM BAY11-7085+100μg/mL+10mg/L LPS)。CCK-8法检测HGnF细胞活力,ELISA法检测HGnF细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素18(IL-18)含量,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-1β及NF-κB/IL-6信号通道相关蛋白表达水平。结果:低、高剂量PMS可升高LPS诱导的HGnF细胞活力,降低上清液IL-1β、IL-6、IL-18含量、细胞IL-1β、iNOS及p-NF-κB/NF-κB、IL-6表达水平(P<0.05);激活剂BAY11-7085逆转了高剂量PMS对LPS诱导的HGnF细胞的上述指标的作用(P<0.05)。结论:PMS可能通过抑制NF-κB/IL-6信号通路改善由LPS诱导HGnF细胞的炎症。

超声辅助低共熔溶剂提取车前草总黄酮的工艺研究

为探究车前草总黄酮的最佳提取工艺,以总黄酮提取率为评价指标,在提取温度、反应时间、低共熔溶剂含水量、摩尔比等单因素试验基础上进行响应面优化。结果表明,车前草总黄酮的最佳提取工艺为提取温度34℃,反应时间41 min,低共熔溶剂含水量47%,摩尔比2.2:1。在此条件下,总黄酮的提取率可达6.28%。研究为车前草的开发及综合利用提供理论支撑。

车前草黄酮提取优化及其对过氧化氢损伤肝细胞的保护作用

目的通过响应面法优化富含车前子苷的车前草黄酮提取工艺,并探究车前草黄酮对过氧化氢(H_(2)O_(2))损伤的L02细胞的保护作用及其作用机制。方法通过单因素研究乙醇浓度、提取温度、液料比对车前草黄酮得率及其中车前子苷转移率的影响,在此基础上使用Central-Composite中心组合试验设计和响应面分析法筛选出车前草黄酮提取得率最高,车前子苷转移率最大的提取条件。通过测定该车前草黄酮对过氧化氢诱导的人正常肝细胞L02存活率、细胞凋亡、线粒体膜电位的影响,及其对L02细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化物歧化酶(SOD)含量,HO-1、Nrf2、SOD蛋白表达量的影响来探究车前草黄酮对过氧化氢损伤的L02细胞的保护作用。结果研究结果表明,提取温度80℃、乙醇浓度65%、液料比为15∶1时,提取得到的车前草黄酮得率和车前子苷转移率均最大,分别为1.82%和35.01%。该条件下提取得到的车前草黄酮在25~100μg·mL^(-1)内可明显降低过氧化氢损伤的L02细胞的凋亡率(P<0.001),降低其线粒体膜电位损伤程度(P<0.001),增加细胞内SOD和GSH的表达量(P<0.001),降低细胞中MDA含量(P<0.01,P<0.001)。此外,该车前草黄酮可以调节过氧化氢损伤的L02细胞中HO-1、Nrf2、SOD的表达量,降低过氧化氢损伤肝细胞中HO-1、Nrf2蛋白表达水平,并增加细胞中SOD蛋白的表达量(P<0.05,P<0.01)。结论使用响应面法筛选出的车前草黄酮提取工艺操作简便,关键有效成分车前子苷的含量丰富,可为车前草黄酮的实际生产提供参考。该方法提取得到的车前草黄酮可降低过氧化氢损伤的肝细胞的氧化应激水平,对L02细胞具有一定的氧化损伤保护作用,研究结果可以为车前草黄酮作为护肝保健品的开发应用奠定基础。

车前草提取物对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

该实验研究了车前草提取物(Plantain Extract,PE)对急性酒精性肝损伤小鼠的保护作用。通过灌胃体积分数52%的食用酒精建立小鼠急性酒精性肝损伤模型,测定小鼠肝脏指数、血清谷丙转氨酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate Aminotransferase,AST)活性和甘油三酯(Triglycerides,TG)的含量,以及肝组织中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性和总谷胱甘肽(Total Glutathione,T-GSH)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量,并对小鼠肝组织进行病理学观察。结果显示,与模型组相比,阳性对照组和给药组小鼠肝脏指数显著下降(P<0.01),给药组最大降幅为20.18%,高剂量组血清中ALT、AST和TG水平显著降低27.29%、36.03%、45.69%,肝组织中CAT和SOD活性、T-GSH含量均显著增加16.36%、18.42%、28.66%及MDA含量显著降低36.89%,且肝组织病理切片显示给药组小鼠肝损伤程度均有显著改善。由此可见,PE对急性酒精诱导的肝损伤具有明显的保护作用。

电感耦合等离子体质谱法结合化学计量学分析车前草药材中12种元素

目的建立同时测定车前草药材中12种元素的电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法,并进行化学计量学分析。方法射频功率为1800 W,等离子体气流量为15 L/min,载气流量为1 L/min,采样深度为12 mm,辅助器流量为1 L/min,雾化室温度为2.0℃,测量模式为动能歧视(KED)模式,碰撞气体积流量为6.0 mL/min,进样冲洗时间为35 s,蠕动泵泵速为50 r/min,扫描3次。根据3个产地15批车前草药材样品中12种元素的含量测定结果,建立特征图谱,并进行主成分分析。结果镉(Cd)、铅(Pb)、铜(Cu)、钠(Na)、锌(Zn)、钾(K)、铝(Al)、汞(Hg)、钙(Ca)、镁(Mg)、砷(As)、铁(Fe)质量浓度分别在0~100 ng/mL、0~100 ng/mL、0~500 ng/mL、0~500 ng/mL、0~1000 ng/mL、0~500 ng/mL、0~500 ng/mL、0~20 ng/mL、0~500 ng/mL、0~1000 ng/mL、0~100 ng/mL、0~1000 ng/mL范围内与仪器响应值线性关系良好(r≥0.9992,n=6);精密度、重复性、稳定性试验结果的RSD均小于5%;平均加样回收率为82.72%~91.10%,RSD为1.55%~4.69%(n=6)。15批车前草12种无机元素的平均含量分别为0.36,1.58,9.16,10.51,54.71,9.35,34.86,0.16,16.81,112.64,1.08,100.04 mg/kg。3个产地车前草药材中12种元素特征图谱的峰形基本相似。Mg、Fe、Zn、Al是车前草药材的特征元素;15批车前草药材样品的质量存在一定差异,其中贵州毕节所产的质量较好。结论建立的ICP-MS法操作简单、结果准确,可用于车前草药材中12种元素的含量测定;特征图谱及主成分分析可为车前草药材的开发利用和质量控制提供参考。

基于网络药理学和分子对接分析车前草防治畜禽腹泻的作用机制

为了运用网络药理学和分子对接技术分析车前草的药理活性及其防治畜禽腹泻的作用机制,本试验利用传统中药系统药理学分析平台(TCMSP)获得车前草的有效活性成分和靶点,利用Cytoscape 3.7.1软件构建车前草-活性成分-靶点网络;通过GeneCards和OMIM数据库查询腹泻疾病靶点,提取药物与疾病交集靶点;通过STRING数据库对交集靶点进行蛋白质相互作用网络(PPI)分析,使用Cytoscape 3.7.1软件进行可视化处理绘制PPI图;利用DAVID数据库对靶点进行富集分析;通过分子对接技术对有效活性成分和关键靶点进行对接验证。结果显示,车前草活性成分有木犀草素、黄芩素、豆甾醇、高车前素、6-羟基木犀草素、谷甾醇和黄芩苷,可作用于α-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、肿瘤蛋白P53(TP53)、肿瘤坏死因子(TNF)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(CASP3)、白细胞介素6(IL-6)、表皮生长因子受体(EGFR)、细胞周期蛋白D1(CCND1)和基质金属蛋白酶9(MMP9)等关键靶点;GO功能富集分析显示与生物过程相关的条目154条,与细胞组分相关的条目55条,与分子功能相关的条目105条;KEGG通路条目82条,主要参与调控癌症和磷脂酰肌醇-3激酶-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(PI3K-AKT)信号通路;车前草的有效活性成分木犀草素和黄芩素与关键靶点AKT1可稳定结合。结果表明,车前草可以通过木犀草素、黄芩素、豆甾醇和高车前素等多种活性成分作用于AKT1、TP53、TNF、CASP3和IL-6等关键靶点上,通过参与多种癌症和PI3K-AKT信号通路的调控防治畜禽腹泻。

车前草对蛋鸡免疫功能的影响

近年来,我国蛋鸡规模化养殖快速发展,满足了国民对鸡蛋、鸡肉及相关附属品的需求。在大规模养殖中,蛋鸡流行性疾病防制成为重要问题,养殖场要从多方面入手,提高蛋鸡免疫力,保证生产性能,抵抗环境应激、疾病及营养不良等因素影响,同时减少对抗生素药物的依赖,避免因药物使用不当导致耐药性与食品安全问题。车前草含有多种抗炎成分,可以帮助减轻蛋鸡体内炎症反应,提高蛋鸡的抵抗力,通过研究,进一步探究车前草对蛋鸡免疫功能的具体影响。

不同产地车前草总灰分及浸出物含量分析

为了比较不同产地的车前草以及清洗前后总灰分和浸出物含量的变化,以此为(亳州)中药饮片企业制定针对性的车前草总灰分和浸出物质量标准提供依据。通过安徽亳州康美药材市场收集八个产地的车前草样品,按照2020版《中国药典》测定方法对其总灰分和浸出物进行测定。结果显示:山西、河南产的车前草样品灰分含量符合要求,甘肃、贵州、四川、江苏、山东、亳州样品中灰分含量均高于药典标准,分别高出:2.43%、2.56%、5.52%、1.88%、0.36%、2.41%,清洗后均符合药典要求。各产地浸出物含量无论清洗前后均符合药典标准,不低于14%。不同产地的车前草样品总灰分含量范围:11.72%~20.63%;清洗后样品总灰分含量范围在:10.90%~16.00%;不同产地的车前草样品浸出物含量范围在:15.35%~32.85%;清洗后浸出物含量范围在:17.10%~28.30%。因此,不同产地的车前草总灰分含量、浸出物含量均存在差异,清洗后总灰分变化呈下降趋势。

基于网络药理学与分子对接和体外试验探讨车前草治疗肝癌的作用机制

目的采用网络药理学结合分子对接及体外试验验证,探究车前草治疗肝癌的活性成分、关键作用靶点及潜在的分子机制。方法通过TCMSP和SwissTarget Prediction数据库获取车前草主要活性成分及潜在靶点,构建“成分-靶点”网络。检索DisGeNET和GeneCards数据库获取肝癌相关的疾病靶点,运用String数据库结合Cytoscape软件对交集靶点进行PPI网络分析,选取车前草主要活性成分与核心靶点进行分子对接验证。进一步通过体外肝癌Hep3B细胞试验验证车前草活性成分抗肿瘤活性,采用CCK-8试验、平板克隆形成试验及软琼脂克隆形成试验检测增殖抑制作用,采用K-LISAAKT活性试剂盒检测AKT活性水平,采用qRT-PCR检测mRNA的表达。结果车前草的活性成分有山萝花苷、6羟基木犀草素、豆甾醇、黄芩苷、豆甾醇棕榈酸酯、谷甾醇、木犀草素、黄芩素、高车前素和β-谷醇棕榈酸酯;获得车前草和肝癌交集基因168个,PPI网络图表明交集基因之间关系密切,其中潜在靶标为AKT1、TNF、ESR1、EGFR等;富集分析得到GO功能316个,以及相关通路94条,相关的通路主要有PI3K-AKT信号通路等;分子对接结果显示,主要活性成分木犀草素与核心靶点(AKT1、EGFR、TNF、ESR1、SRC、MAPK3)结合稳定。体外试验结果显示,木犀草素对肝癌细胞具有抑制增殖作用,干预肝癌细胞克隆形成以及降低AKT信号通路的活性,且BCL2、FASL等凋亡相关基因mRNA表达升高。结论车前草能够通过多靶点、多通路治疗肝癌,其主要活性成分为木犀草素。木犀草素可能通过抑制AKT1等关键靶点从而抑制PI3K-AKT信号通路,进而达到抑制肝癌细胞增殖、促进凋亡的作用,具有潜在的抗肝癌活性。

一测多评法同时测定车前草中4种活性成分的含量

目的:建立一测多评法(Quantitative Analysis of Multi-Components by Single Marker,QAMS)同时测定车前草中原儿茶酸、儿茶素、槲皮素和木犀草素的含量,并验证此方法的可行性及适应性。方法:以槲皮素为内标物,建立其与其他3种成分间的相对校正因子,并计算4种成分含量,实现一测多评。结果:槲皮素与其他3种成分的相对校正因子分别为1.199 2、0.861 3、1.606 9;采用一测多评法测定的10批次车前草中4种活性成分的含量与外标法测定结果无显著差异。结论:该方法准确稳定,可用于车前草多指标质量控制。

基于肾脏功能以及肠道屏障完整性探讨车前草对高尿酸血症大鼠的影响

目的:研究高尿酸血症(HUA)大鼠模型在车前草水煎液干预下,机体的肾脏功能、肠道屏障完整性以及炎症因子的变化。方法:诱导HUA大鼠模型,实验结束后检测血清尿酸(UA)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、腺苷脱氨酶(ADA)的含量,检测肾脏尿酸转运蛋白ATP结合盒亚家族G成员2(ABCG2)、尿酸转运蛋白葡萄糖易化转运蛋白9(GLUT9)、炎症小体(NLRP3)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肠道组织紧密连接蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(Z_(O)-1)的含量。结果:车前草水煎液可降低HUA大鼠血清UA、CR、BUN水平(P<0.05),抑制XOD和ADA的活性(P<0.05),并增加ABCG2、Occludin和Zo-1的表达(P<0.05),降低NLRP3、TNF-α和GLUT9的表达(P<0.05)。结论:HUA大鼠模型出现炎症、肾和肠道功能损伤等症状,在车前草水煎液的干预下得到改善。

车前草穗枯病研究Ⅱ.病原菌生物学特性

对车前草穗枯病菌菌丝生长条件和人工诱导产孢进行系列试验,结果表明菌丝生长适宜温度15～30℃,最适25℃;适宜pH值4.01～7.02,最适4.98;不同碳源对菌丝生长有一定影响,以蔗糖最佳;光照对菌丝生长影响不大。产孢试验表明,PDA及其他各种培养基上不能产生子座、分生孢子器和分生孢子,采用光暗交替、变温处理、紫外线照射和菌丝切割等多种方法也不能产生,而用灭菌的车前草叶片和穗轴接种培养,便可获得成功产孢,但产生的子座比自然病株上的明显偏大,分生孢子器及分生孢子则差异不明显。

车前草研究综述

车前草是一种在传统中医中具有悠久历史的药用植物,药用价值高,具有清热凉血、清肝明目、降血糖和降血脂等多种生物学功效,通过对车前草的植物文化、植物形态、生长特点、药理作用、药膳配伍及其毒副作用进行综述,为车前草的进一步研究提供参考。

车前草及芒苞车前草化学成分及其形态学研究

从车前草 ( plantagoasiaticaL .)和芒苞车前 (plantagoaristataM)分得 1 0个化合物。鉴定 8个 ,分别是 β 谷甾醇 ( β sistosterolⅠ )、熊果酸 (ursonicacidⅡⅣ )、胡萝卜苷 (DaucosterineⅢⅡ )、桃叶珊瑚苷 (AucubinⅨⅫ )、8 epiloganicacid(Ⅹ )和梓醇 (catapolⅩⅢ )。其中木犀草苷为首次从车前草中分离得到的已知成分 ,胡萝卜苷和 8 epiliganicacid为首次从车前科中分离得到的已知成分。对芒苞车前的外部形态和显微特征进行了鉴定。

车前草白粉病的病原菌鉴定

为了探明河南商丘地区车前草白粉病病原菌的系统进化关系,为其防治提供理论依据,采用形态学、致病性、分子系统学鉴定方法对该地区的车前草白粉病病原菌进行鉴定。结果表明:1)商丘地区车前草白粉病病原菌的分生孢子呈近柱形或桶形,无纤维体,大小为(25～36)μm×(13～17)μm,3～5个串生;分生孢子梗稍弯曲,无分枝,大小为(149～215)μm×(11～16)μm,其脚胞呈柱状,大小为(45～64)μm×(10～15)μm;病原菌接种叶片与自然状态叶片的病症相似,均为不定形的污白色斑。2)对核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列进行PCR扩增、测序获得594bp目的片段(GenBank登录号:JQ 845878),经MEGA3.1软件序列分析发现其与来自污色高氏白粉菌(Golovinomyces sordidus)的AF 011309、AB077658序列聚为1枝,而与来自同属另3个种的ITS序列的亲缘关系较远。结论:河南省商丘地区的车前草白粉病病原菌为G.sordidus。

车前草穗枯病研究——Ⅲ杀菌剂室内毒力测定

车前草穂枯病是江西吉安车前草产区发生最严重的一种真菌病害。本文采用菌丝生长速率法测定了6种杀菌剂对车前草穂枯病菌的毒力,结果表明菌毒神丹的毒力最强,EC50值为3.2921μg/mL;多菌灵的毒力最弱,EC50值为8 316.0393μg/mL;其他4种药剂已蒜素、奥普安、代森锰锌和菌毒克的毒力介于其间,EC50值依次为7.8253μg/mL,32.9139μg/mL、140.7006μg/mL和400.4089μl/mL。

野生车前草抗穗枯病种质资源鉴定

为发掘和利用野生车前草抗穗枯病种质资源,本文采用车前草穗枯病菌(Diaporthe angelicae)强致病力菌株进行挑战接种,对从江西7县多点采集的175份野生车前草种质进行抗病性鉴定,结果表明有2、5、71和97份种质分别表现为高抗、抗病、感病和高感,可见野生车前草种质普遍对穗枯病不抗病。2份高抗穗枯病野生车前草种质的成功筛选为车前草抗穗枯病品种的传统和分子育种奠定了良好的基础。

车前草化学成分及新生物活性研究进展

从化学成分和新报道的生物活性两个方面对3种车前草的研究现状做一综述,为今后研究和开发利用车前草提供参考。

响应面法优化超声辅助提取车前草中的熊果酸

目的:优化超声辅助提取车前草中的熊果酸工艺。方法:在单因素试验基础上,采用响应面法,以熊果酸的提取率为响应值,通过回归分析各工艺参数与响应值之间的关系,并由此预测最佳的工艺条件。结果:超声提取的最佳条件为提取温度75℃、乙醇体积分数90%、功率480W、液固比5:1(mL/g)、提取时间25min,该条件下提取3次,熊果酸的提取率达到0.144%。结论:响应面法优化超声辅助提取车前草中熊果酸的预测准确、方便,所得的最佳提取工艺条件高效、可行。