犬淋巴细胞转化增殖试验最佳条件的确定

试验选择杂种牧羊犬作为实验犬,用MTT法检探讨了不同浓度犊牛血清(FCS)、淋巴细胞、植物血凝素P(PHA-P)和刀豆蛋白A(ConA)对犬淋巴细胞增殖的影响。确定了犊牛血清含量为10%,淋巴细胞浓度为5×106个/ml,用丝裂原PHA-P刺激的最佳浓度为12.5μg/ml时,MTT法测定能够刺激犬淋巴细胞转化增殖,但t检验分析表明其促进淋巴细胞增殖的效果并不显著;当其它条件不变,所用的丝裂原为Con A时,它在浓度为0.5～2.5μg/ml范围内均可以显著刺激T细胞的增殖(P<0.05),且在浓度为2.5μg/ml时刺激效果最佳。

萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2的分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响

目的 :探讨萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL 2分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响。方法 :实验小鼠随机分成实验组 (低剂量组 4 g/kg/d :高剂量组 :8g/kg/d)和对照组 (与实验组用同体积的生理盐水 ) ,连续用药 1 0天。用3H—TdR掺入法进行检测。结果 :与对照组相比萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL 2分泌有明显促进作用并能明显提高小鼠脾淋巴细胞转化增殖 ,并有一定的量效关系。结论 :萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠免疫功能有明显的促进作用 ,这可能与其促进细胞因子的分泌和淋巴细胞转化增殖有关。

猪淋巴细胞转化增殖试验反应的最佳条件探讨

为了确定猪淋巴细胞转化增殖试验反应的最佳条件,研究以东北民猪为试验猪,采用MTT法研究不同浓度犊牛血清(FCS)、淋巴细胞、植物血凝素P(PHA-P)对猪淋巴细胞增殖的影响。结果表明:当培养时间为60 h、犊牛血清浓度为10%、淋巴细胞浓度为2×106个/m L、PHA-P刺激的最佳浓度为12.5μg/m L时,可显著刺激T淋巴细胞的增殖。

牦牛脾脏转移因子对小鼠淋巴细胞转化增殖的影响

为了研制一种能够增强动物抗病力的生物活性免疫制剂。采用冻融-透析法提取牦牛脾脏中非特异性转移因子(nTF),并用MTT法检测牦牛TF对小鼠淋巴细胞转化增殖的影响。结果表明:(淋巴细胞+刀豆蛋白+TF)对小鼠脾淋巴细胞的转化增殖效果优于(淋巴细胞+TF)组和(淋巴细胞+脂多糖+TF)组,差异显著(P<0.05);注射TF组对小鼠脾淋巴细胞的转化增殖的效果优于注射生理盐水对照组(P<0.05)。牦牛脾脏转移因子对小鼠脾淋巴细胞增殖有促进作用,协同刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)对淋巴细胞增殖的效果有增强趋势。

不同动物来源转移因子对肉鸭T细胞转化增殖影响的比较研究

为了解不同动物来源转移因子(TF)对T细胞的作用,本研究应用不同动物来源TF进行肉鸭T细胞体外转化增殖(MTT法)和T细胞体内转化增殖实验(α-乙酸萘酯酶染色方法)。实验结果进行t检验分析,各实验组TF与对照组数据进行比较极显著差异,p<0.01;乌骨鸡来源TF与其他实验组数据进行比较极显著差异,p<0.01;T细胞体内转化增殖实验结果表明TF口服作用24h内极显著提高T细胞转化增殖效果,而且240h内T细胞的增殖效果与对照组相比仍然保持极显著差异。实验结果表明不同动物来源TF对樱桃谷商品肉鸭T细胞的转化增殖效果均有显著的影响,其中乌骨鸡来源TF效果最佳。

犬红细胞培养上清液对淋巴细胞增殖转化的影响

无菌采取犬血、肝素抗凝、分离出红细胞,制备不同浓度的红细胞悬液,接种24孔板中进行培养,在培养不同时间分别收集红细胞培养上清液,采用淋巴细胞增殖转化试验,检测其单独及协同不同丝裂原(PHA-P、ConA和LPS)对犬淋巴细胞增殖转化的影响,淋转结果用MTT法测定。结果显示,无论单独或是协同不同丝裂原(PHA- P、ConA和LPS),红细胞培养上清液对淋巴细胞均有明显的促增殖转化作用(P<0．05);单独及协同丝裂原PHA-P、ConA和LPS刺激淋巴细胞时,红细胞浓度分别为1×108,1×109,5．0×107和1×108mL1,培养时间分别为56,72, 56和72 h的红细胞培养上清效果最佳。表明,犬红细胞培养上清液对犬淋巴细胞的增殖转化有明显的促进作用。

谱系示踪技术在乳腺上皮增殖、转化及肿瘤转移过程中应用

乳腺上皮细胞在哺乳动物中起合成和分泌乳汁的功能,同时介导乳腺肿瘤的发生,但乳腺癌转移过程存在很大争议。研究利用遗传谱系示踪技术追踪乳腺上皮细胞,示踪其增殖、转化形成乳腺肿瘤细胞,并迁移形成肺转移灶的过程。利用小鼠为实验模型,采用KitCreER转基因小鼠与报告基因小鼠R26-Ai47结合靶向示踪乳腺上皮细胞,然后结合乳腺原位肿瘤小鼠模型MMTV-PyMT形成3基因型,观察在青春期和老年期小鼠乳腺肿瘤细胞向肺转移的情况。结果:KitCreER可特异性标记乳腺管腔上皮细胞,可发生增殖转化贡献形成乳腺肿瘤细胞,肿瘤细胞在青春期不发生肺转移灶但在老年期会形成明显的肺转移灶。从分子遗传学角度解析乳腺上皮细胞在乳腺癌中的作用特点。

犬转移因子对犬淋巴细胞体外增殖的影响

无菌采取犬抗凝血,分离并制备不同浓度外周血单个核细胞(PBMC)悬液。应用正交试验,测定植物血凝素,犊牛血清对不同浓度PBMC增殖的影响。用 MTT法测定不同浓度犬转移因子(TF)对 PBMC 增殖的影响。结果表明,当 PBMC 为 5×109 个/L,植物血凝素为 12. 5 mg/L, 犊牛血清为100 mL/L,PBMC 增殖效果最佳。TF 浓度在0.39 g/L^100 g/L时,对 PBMC转化增殖均有促进作用,在浓度为 1.56 g/L时促淋转效果最佳。且TF单独作用于 PBMC的效应明显优于PHA P的协同作用。TF对 PB MC有良好的刺激增殖效果。

锌指蛋白基因抑制人平滑肌细胞表型转化的实验研究

目的探讨锌指蛋白基因A20抑制氧化型低密度脂蛋白诱导平滑肌细胞增殖及表型转化的影响。方法用DOTAP脂质体转染pEGFPEHA20-N1原代培养的平滑肌细胞,经G418筛选,A20表达经免疫荧光鉴定。Brdu检测转染前后氧化型低密度脂蛋白诱导平滑肌细胞增殖情况及α-SM-actin抗体检测细胞表型转化情况。结果 A20基因在平滑肌细胞得到有效表达,少量的氧化型低密度脂蛋白能诱导平滑肌细胞增殖,平滑肌细胞α-SM-actin骨架蛋白表达减少,而A20转染的平滑肌细胞增殖不明显,α-SM-actin骨架蛋白表达呈强阳性。结论 A20基因在动脉粥样硬化中能抑制平滑肌细胞的病理性增生。

不同年龄犬红细胞培养上清对淋巴细胞增殖的作用

【目的】测定不同年龄犬红细胞刺激淋巴细胞增殖的能力，探索红细胞的免疫功能及其实现方式。【方法】无菌采取1～3月龄幼犬及18～20月龄成年犬的犬肝素抗凝血，分离红细胞，制备5．0×10^7mL。红细胞悬液，接种在24孔细胞培养板中培养56h后，收集红细胞上清；采用淋巴细胞转化增殖试验，分析了红细胞培养上清液单独及协同刀豆蛋白A（ConA）对淋巴细胞转化增殖的影响。【结果】无论自体或是异体，幼犬的红细胞培养上清对淋巴细胞的刺激效果均明显优于成年犬（P〈0．05）；无论幼犬还是成年犬的红细胞培养上清，其自体刺激淋巴细胞增殖的效果均明显优于异体（P〈0．05）。【结论】幼体红细胞参与T细胞免疫调控的作用强于成年个体，这对于幼体免疫系统的快速发育成熟非常有益。

塞替派诱发永生化人支气管上皮细胞的恶性转化(一)

目的 研究塞替派对人类支气管上皮细胞的致癌转化效应。方法 利用永生化人支气管上皮细胞(BEAS 2B)为靶细胞模型 ,以塞替派诱导BEAS 2B细胞的恶性转化 ,并伴随研究了塞替派转化细胞 (EBAS TE)的增殖动力学、细胞周期和锚着独立生长能力等转化表型特征。结果 经传代和软琼脂培养基筛选 ,BEAS TE具有较为稳定的转化表型和细胞生物学特性。结论 塞替派对人支气管上皮细胞具有较强的恶性转化效应。

蛋白调控在细胞转化的作用地位探讨——《癌细胞“转染现象”探讨与分子病理学分析》文稿的后续讨论

在《癌细胞“转染现象”探讨与分子病理学分析》及《受体与细胞增殖转化作用关系的探讨》文稿中作者曾经提出了：增殖受体上调是细胞增殖增强的主要原因；细胞增殖是细胞演变的基础；调节增殖系统调控紊乱是癌变的本质的基本理论观点。提出了从肿瘤演变过程入手，研究分析物质作用环节及作用性质改变的地位，

白蜡虫免疫调节作用试验研究

对白蜡虫的特异性和非特异性免疫调节功能进行了试验研究,结果表明:特异性免疫的血清溶血素试验中,白蜡虫高剂量组小鼠的溶血素生成量明显高于对照,淋巴细胞转化增殖试验中,白蜡虫高剂量组小鼠的淋巴细胞转化增殖明显。非特异性免疫的小鼠碳粒廓清试验、免疫器官的变化未出现阳性结果。试验结果表明白蜡虫对机体的细胞和体液特异性免疫都有提高的作用,说明白蜡虫具有免疫调节功能,具有较高的资源开发利用价值。

玉竹提取物A对小鼠免疫性肝损伤治疗作用的研究

本试验旨在研究玉竹提取物A(extraction A of polygonatum odoratum,EA-PAOA)对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠免疫性肝损伤的治疗作用,探讨其发挥此作用的可能机制。将昆明小鼠随机分成正常对照组、模型对照组、试验1组(EA-PAOA 0.5 g/kg)、试验2组(EA-PAOA 1 g/kg)、试验3组(EA-PAOA 2 g/kg)。除正常对照组外,其余各组均尾静脉注射20mg/kg的ConA 0.5 mL,每天06∶00注射1次,连续5 d。每天注射ConA 2 h后,EA-PAOA 3个试验组分别腹腔注射不同浓度的EA-PAOA 0.5 mL,每天3次,共4 d,第5天只在注射ConA后2 h注射1次EA-PAOA。末次注射EA-PAOA后6 h,摘眼球取血低温保存,待测谷丙转氨酶活性(ALT)、3个细胞因子;取肝待行肝脏组织病理学检查注射;取脾待行淋巴细胞增殖试验(MTT法)和流式细胞术以检测T淋巴细胞亚群。结果显示,EA-PAOA 3个试验组血清中,ALT、IFN-γ、TNF-α水平明显降低,IL-10水平明显升高,能显著抑制T淋巴细胞的转化增殖,与模型对照组相比差异极显著(P<0.01);但流式细胞术检测T淋巴细胞亚群发现,5组CD4+T和CD8+T淋巴细胞的数量和比例并无明显差别,都与正常对照组无显著差异;EA-PAOA 3个试验组肝脏组织病理改变较模型对照组明显改善。表明EA-PAOA可能是通过抑制T淋巴细胞的转化增殖,抑制其活性,调节Th1和Th2的数量及比例,降低血清中IFN-γ、TNF-α水平,提高IL-10水平,以此发挥其治疗免疫性肝损伤的功能。

乳双歧杆菌M8对免疫抑制模型大鼠免疫功能的影响

目的:探讨给予乳双歧杆菌M8后免疫抑制模型大鼠淋巴细胞亚群百分比、T淋巴细胞转化增殖活性、血清免疫球蛋白和细胞因子表达水平,阐明乳双歧杆菌M8对免疫抑制模型大鼠免疫功能的影响。方法:50只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、低剂量乳双歧杆菌M8组、中剂量乳双歧杆菌M8组和高剂量乳双歧杆菌M8组,每组10只。各组大鼠适应性灌服益生菌乳双歧杆菌M86 d,第7天开始除空白对照组外,其余4组大鼠每日给予环磷酰胺(CTX),连续3 d,构建大鼠免疫抑制模型,造模完成后低、中和高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠给予0.01、0.10和1.00 g乳双歧杆菌M8,空白对照组和模型对照组大鼠灌服等体积无菌生理盐水。流式细胞术检测各组大鼠全血淋巴细胞亚群(CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞)百分比,CCK-8法检测各组大鼠T淋巴细胞转化增殖活性,ELISA法检测各组大鼠血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠全血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞百分比明显降低(P<0.05);与模型对照组比较,高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠全血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞百分比明显升高(P<0.05或P<0.01),B淋巴细胞和NK细胞百分比明显升高(P<0.01)。与空白对照组比较,模型对照组大鼠T淋巴细胞转化增殖活性降低(P<0.01);与模型对照组比较,中和高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠T淋巴细胞转化增殖活性升高(P<0.01)。与空白对照组比较,模型对照组大鼠血清IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α水平降低(P<0.01);与模型对照组比较,中和高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠血清IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α水平升高(P<0.05或P<0.01)。结论:灌服乳双歧杆菌M8可以提高免疫抑制模型大鼠的特异性和非特异性免疫应答调控能力,乳双歧杆菌M8对免疫抑制大鼠免疫调节有一定促进作用。

补充中药多糖对耐力训练大鼠淋巴细胞免疫功能低下的预防作用

目的:探讨2种中药多糖对耐力训练大鼠淋巴细胞数量和免疫功能低下的预防作用,为改善耐力训练引起的细胞免疫功能低下寻找有效的干预措施。方法:120只雄性Wistar大鼠随机分为6组,耐力训练+黄芪多糖组、耐力训练+牛膝多糖组、单纯耐力训练组、安静+黄芪多糖组、安静+牛膝多糖组、安静对照组,每个组中均分为4周组(7只大鼠)和6周组(13只大鼠)。大鼠进行6周递增负荷游泳训练后,观察大鼠运动能力、淋巴细胞数量和功能的改变。结果(:1)6周耐力训练后可造成大鼠外周血淋巴细胞数量、T细胞数量下降,T淋巴细胞增殖转化能力降低(;2)6周耐力训练同时补充黄芪多糖和牛膝多糖有防止大鼠外周血淋巴细胞数量、T细胞数量下降,以及T淋巴细胞增殖转化能力降低的作用;(3)长时间耐力训练同时补充牛膝多糖可延长大鼠游泳至力竭时间。结论:2种中药多糖有预防耐力训练大鼠淋巴细胞免疫明显下降的作用。

复方党参口服液的免疫增强功能研究

目的:研究复方党参口服液对环磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的影响。方法:昆明种小鼠240只,分为4批,每批60只。每批小鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物组、复方党参口服液高、中、低剂量组,每组10只,各组均连续灌胃4周,小鼠于给药3周后开始腹腔注射环磷酰胺40 mg·kg-1,每天1次,连续2 d,建立小鼠免疫力低下模型;通过碳粒廓清试验、迟发型变态反应试验、脾淋巴细胞增殖转化试验、外周血白细胞计数、免疫器官指数五项相关免疫学指标,综合评价复方党参口服液对免疫低下小鼠免疫功能的调节作用。结果:与模型组比较,复方党参口服液可显著提高免疫功能低下小鼠的碳廓清吞噬指数、增强小鼠的迟发型变态反应的DTH程度;对抗环磷酰胺所致的小鼠外周血白细胞数、胸腺指数、脾脏指数以及脾淋巴细胞增殖转化能力的降低,显示出该制剂对免疫低下小鼠单核-巨噬细胞功能、细胞免疫功能的增强作用。结论:复方党参口服液可显著增强免疫低下小鼠的免疫功能,对免疫失衡机体具有一定的调节作用。

伤寒Ty21a-CpG佐剂疫苗诱导的体液免疫应答研究

目的探讨以CpG-ODN作为佐剂,对伤寒Ty21a疫苗诱导的特异性抗体应答及B细胞增殖的影响。方法分别用含CpG-ODN10μg、30μg、50μg的伤寒Ty21a疫苗于第0、14、28天灌胃免疫NLH小鼠,末次免疫后7d,分别采集各组动物血清及脾淋巴细胞。用凝集反应检测伤寒抗体效价,MTT法检测B淋巴细胞的增殖能力。结果CpG-ODN30μg组伤寒抗体效价及B细胞的增殖活性明显高于另外两个实验组和阳性对照组。结论CpG-ODN可增强伤寒Ty21a疫苗诱导的特异性抗体应答及B细胞增殖。

P-glycoprotein的新功能在肿瘤研究中的进展

肿瘤多药耐药性(multiple drug resistance,MDR)的发生往往伴随着多药耐药基因如MDR1、MRP1和BCRP等高表达,其中MDR1基因编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是目前公认可以诱发癌细胞发生MDR的重要分子。传统研究认为P-gp主要是作为一个药物泵将化疗药物从细胞内排出从而导致MDR。然而系列研究发现,除了介导MDR以外,P-gp还能够调节癌细胞的生长、增殖、凋亡、迁移和侵袭等其他生物学行为;而且研究表明P-gp的这些作用可以依赖,也可以不依赖于其药物泵的功能。这些结果表明P-gp能够通过一些新的机制促进肿瘤的进展。本文主要针对P-gp在促进肿瘤进展中的作用进行综述。

博来霉素和内毒素对鼠肺成纤维细胞增殖及表型转化的影响

目的探讨博来霉素(BLM)和内毒素(LPS)对肺成纤维细胞增殖及表型转化的影响及可能机制。方法分离、鉴定新生SD大鼠肺成纤维细胞,分为对照组、BLM组和LPS组。实验组加入不同浓度梯度的BLM(0.0001、0.001、0.01、0.1、1 mg/L)和LPS(0.01、0.1、1、10、100 mg/L)。分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白含量。根据MTT结果进一步将BLM/LPS组分为低浓度组(分别为0.001、0.1 mg/L)和高浓度组(分别为1、10 mg/L),并且采用蛋白质印迹法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,透射电镜观察细胞超微结构,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤。结果HE染色显示原代培养的细胞呈成纤维细胞典型的纺锤形,免疫组织化学法鉴定示波形蛋白表达阳性。与对照组相比,在一定浓度范围内,BLM组和LPS组细胞增殖增高(P<0.05),且前者更显著;在较低浓度时,BLM组TGF-β1含量明显增高(P<0.05),随着浓度的增加,TGF-β1含量减少(P<0.05);而LPS各组TGF-β1含量比较差异无统计学意义。BLM/LPS低浓度组α-SMA蛋白表达增多(P<0.05);高浓度组α-SMA蛋白表达均明显减少(P<0.05),BLM组更显著。透射电镜显示,BLM低浓度组可见细胞核呈分叶状;BLM高浓度组细胞器明显水肿;LPS低浓度组和高浓度组均可见水肿的细胞器及分叶状细胞核。单细胞凝胶电泳结果显示,BLM与LPS低浓度组均可见明显彗星尾,二者彗星尾长差异无统计学意义;高浓度组彗星尾长进一步增加,且BLM组更明显。结论在一定浓度范围内,BLM和LPS均可促进肺成纤维细胞增殖及表型转化,且前者作用明显强于后者;BLM和LPS均可致不同程度的肺成纤维细胞DNA损伤,这可能与肺成纤维细胞不同程度增殖及表型转化有关。