细胞外信号调节激酶1/2通路在Peroxiredoxin-1抑制转化生长因子-β_1诱导的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白中的作用,及新型过氧化物酶Peroxiredoxin-1(Prx-1)对该作用的影响。方法体外培养肺成纤维细胞随机分为4组:对照组(0.4%血清)、TGF-β1组(5μg/L)、阴性转染组(TGF-β1+阴性对照si RNA)和Prx-1 si RNA转染组(TGF-β1+Prx-1 si RNA)。采用脂质体转染法转染si RNA,实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后Prx-1 m RNA表达;Western blot检测Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、ERK1/2及Prx-1表达;2,7-二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平。结果 Prx-1 si RNA转染肺成纤维细胞后,Prx-1 m RNA表达明显降低,最大抑制率为92%。与对照组比较,TGF-β1组的Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、ROS、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)及Prx-1蛋白的表达水平均明显提高。与TGF-β1组比较,阴性转染组中的上述观察指标无明显变化,但Prx-1转染组的Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、ROS、p-ERK1/2水平进一步提高,而Prx-1蛋白的表达被抑制。结论 TGF-β1能够诱导肺成纤维细胞生成ROS,并促进ERK1/2通路的激活,导致Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白合成增加,而Prx-1 si RNA可通过提高ROS水平进一步促进TGF-β1该作用。

转化生长因子β1和细胞外信号调节激酶1/2在冠心病猝死早期心肌缺血中的表达及意义

目的:了解冠心病猝死(sudden coronary death,SCD)者心肌中TGF-β1和ERK1/2中的表达情况,探讨其对SCD诊断的意义。方法:采用免疫组织化学方法检测转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)在30例SCD心肌样本(SCD组)和15例非心源性即刻死亡心肌样本(对照组)的表达情况。结果:SCD组心肌TGF-β1和ERK1/2的表达明显高于对照组,t值TGF-β1为19.807,ERK1/2为15.478,两种指标组间比较,差异均有统计学意义(P<0.01);TGF-β1和ERK1/2在SCD组中的表达呈正相关(r=0.642,P<0.01)。结论:心肌缺血激活TGF-β1/ERK1/2信号通路,使其在心肌中表达明显升高,检测TGF-β1和ERK1/2可为SCD的早期心肌缺血病理诊断提供客观指标。

纤溶酶原激活物抑制因子1在腹膜透析患者中的表达变化及对基质金属蛋白酶-2/血管内皮生长因子/细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路的调控作用

目的揭示纤溶酶原激活物抑制因子1(plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1)在腹膜透析患者中的表达及其功能。方法选择100例腹膜透析患者作为研究对象,透析7个月后,根据腹膜平衡试验结果将患者分为高转运组和低转运组。透析1个月时和7个月时,使用酶联免疫吸附测定试剂盒检测所有患者透析液中PAI-1、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平。对C57/BL6小鼠连续28 d腹腔注射3 mL含4.25%葡萄糖的腹膜透析液来建立腹膜纤维化(peritoneal fibrosis,PF)小鼠模型。将小鼠按随机数字表法分为3组(n=12):对照组、PF+si-NC组和PF+si-PAI-1组。PF+si-NC组和PF+siPAI-1组小鼠分别腹腔注射300μL阴性对照siRNA(si-NC)或靶向PAI-1的siRNA(si-PAI-1)。通过蛋白质印迹法检测PAI-1、MMP-2、VEGF、磷酸化血管内皮细胞生长因子受体2(phosphorylated vascular endothelial growth factor 2,pVEGFR2)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinases,pErk)的蛋白表达。通过免疫组织化学染色检测巨噬细胞表面标志物(macrophage surface markers,CD68)、VEGF和血小板-内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31)的阳性表达。结果与透析1个月时相比,透析7个月后患者透析液中PAI-1、MMP-2和VEGF的水平均显著升高(P<0.05)。与低转运组相比,高转运组患者透析液中PAI-1、MMP-2和VEGF的水平均显著升高(P<0.05)。PAI-1、MMP-2和VEGF联合诊断高转运的曲线下面积(area under curve,AUC)、敏感性和特异性依次为0.909、82.61和92.45。与PE+siNC组比较,PE+si-PAI-1组的间质细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积和炎症细胞浸润明显减轻。与PE+si-NC组比较,PE+si-PAI-1组腹膜组织的CD68、VEGF和CD31阳性率降低(P<0.05)。与PE+si-NC组比较,PE+si-PAI-1组腹膜组织的PAI-1、MMP-2、VEGF、pVEGFR2和pErk的蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论本研究显示PAI-1、MMP-2和VEGF的联合诊断对腹膜溶质转运速率具有较高的诊断价值。下调PAI-1可能通过抑制MMP-2/VEGF/细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路来抑制血管生成,从而抑制腹膜纤维化。

转化生长因子β1促进骨髓间充质干细胞Snail表达的信号转导通路

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-Akt信号转导通路在转化生长因子β1(TGF-β1)引起骨髓间充质干细胞(BMSCs)Snail表达改变中的调控作用。方法采用密度梯度离心结合贴壁法分离、培养大鼠BMSCs,用免疫荧光法对培养第3代的细胞进行鉴定。应用Western blotting检测TGF-β1对p-ERK1/2及p-Akt表达的影响,以不同浓度ERK特异性抑制剂(PD98059)或PI3K通路特异性抑制剂(Wortmannin)干预后检测BMSCs ERK、Akt磷酸化水平变化,确定PD98059和Wortmannin分别抑制Snail诱导的BMSCs ERK和Akt磷酸化的有效浓度,进而用RT-PCR、Western blotting技术证实TGF-β1诱导骨髓间充质干细胞Snail mRNA及蛋白表达的影响。结果密度梯度离心结合贴壁法能有效分离、纯化大鼠BMSCs,免疫荧光检测显示,培养的细胞CD29、CD44表达阳性,而CD34、CD45表达阴性;Western blotting分析显示,TGF-β1作用6h后BMSCs p-Akt和p-ERK水平较对照组明显增高;Wortmannin和PD98059可分别以剂量依赖性抑制BMSCs p-Akt和p-ERK水平;可有效抑制TGF-β1诱导的BMSCs ERK及Akt的磷酸化,PD98059和Wortmannin相应浓度分别为30μmol/L和40 nmol/L。PD98059(30μmol/L)、Wortmannin(40 nmol/L)明显抑制了TGF-β1诱导的Snail mRNA及蛋白水平,而两者联合应用对骨髓间充质干细胞Snail mRNA及蛋白表达的抑制作用具有协同作用,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TGF-β1能促进BMSCs的Snail的转录及蛋白的表达,且ERK1/2及PI3K转导通路的激活在此过程中具有调控作用。

TGF-β_1和ERK_1/ERK_2的相互作用及对人胰腺癌细胞生长的影响

目的:研究转化生长因子β1(TGF β1)和细胞外信号调节激酶K1/细胞外信号调节激酶K2 (ERK1/ERK2)对胰腺癌生长的影响及其相互关系,并探讨它们对胰腺癌作用的可能机制。方法:应用免疫组织化学技术检测临床胰腺癌患者病理组织中TGF β1和ERK1/ERK2 蛋白表达情况;MTT法观察不同剂量TGF β1对人胰腺癌Panc 1细胞生长的影响;Western印迹法观察不同剂量TGF β1对ERK1/ERK2 蛋白表达的影响。结果:胰腺癌患者组织TGF β1、ERK1 和ERK2 蛋白均呈显著性高表达,其阳性表达率分别为66.67%(30/45)、86.70%(39/45)和84.44%(38/45),而在对照组织的阳性表达率分别为30%(6/20)、30%(6/20)和20%(4/20),两者间存在显著差异(P<0.05);TGF β1抑制Panc 1细胞生长,随着剂量的增加和作用时间的延长,其抑制作用逐渐增强,到第4 天抑制作用达高峰,随后抑制作用不同程度的减弱,细胞生长速度加快;外源TGF β1不能改变ERK1/ERK2 蛋白的高表达状态。结论:胰腺癌患者病理组织强表达TGF β1 和ERK1/ERK2 蛋白;外源TGF β1在一定阶段抑制胰腺癌细胞系生长,但不改变ERK1/ERK2 的表达;胰腺癌细胞逃避TGF β1 抑制作用的机制之一可能是高水平ERK1/ERK2 的表达。

TGF-β_1诱导Ⅱ型肺泡上皮-间充质转化及ERK1/2信号系统的变化

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对Ⅱ型肺泡上皮-间充质转化的作用及与胞外调节激酶1/2(ERK1/2)信号系统的关系。方法体外培养人Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞,分为阴性对照组和TGF-β1处理组(0.05、0.5、5、10μg/L,作用时间48 h)。免疫荧光及Western blot方法检测各组细胞E钙粘素(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vim)和纤维连接蛋白(Fn)的表达。在TGF-β1作用不同时间,采用Western blot及RT-PCR方法检测各组细胞α-SMA、E-cad、Vim、Fn、ERK1/2和p-ERK1/2的表达。结果与阴性对照组比较,TGF-β1组(5μg/L)α-SMA、Vim、Fn蛋白表达显著升高,而E-cad表达显著降低(P<0.05)。作用6 h后,TGF-β1组出现α-SMA mRNA表达显著升高,E-cad显著下降(P<0.05)。作用48 h后,TGF-β1组出现Vim、Fn蛋白表达显著升高,E-cad显著下降(P<0.01)。作用30 min后,TGF-β1组ERK/2磷酸化水平显著升高(P<0.05)。结论 TGF-β1可在体外以浓度和时间依赖方式的诱导A549细胞发生上皮-间充质转化,其机制可能与上调ERK1/2信号转导通路有关。

ERK1/2信号通路的活化参与人脐静脉内皮细胞向间充质转分化的过程

目的建立人脐静脉内皮细胞(HUVECs)向间充质转分化的模型并探讨其可能的信号转导途径。方法以HUVECs为研究对象,分组如下:对照组、转化生长因子-β1(TGF-β1)模型组、TGF-β1+DMSO组以及TGF-β1+抑制剂干预组。TGF-β1模型组应用5ng/mL TGF-β1刺激HUVECs 72h;TGF-β1+DMSO组应用5ng/mL TGF-β1及1μL/mL DMSO刺激HUVECs 72h;TGF-β1+抑制剂干预组分别应用p38MAPK抑制剂SB203580(5mmol/L)或ERK抑制剂U0126(10mmol/L)或JNK抑制剂SP600125(5mmol/L)干预TGF-β1诱导的内皮细胞,倒置显微镜观察内皮细胞形态,应用免疫荧光法检测VE-钙粘蛋白(VE-cadherin)和α-肌动蛋白(α-SMA)在细胞内的分布情况;并应用Western blot法检测VE-cadherin和α-SMA的蛋白表达情况。结果 TGF-β1(5ng/mL)刺激HUVECs 72h后,内皮细胞形态由卵圆形铺路石状向梭形转变,与0h相比,VE-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.05),α-SMA蛋白表达显著上调(P<0.05)。抑制ERK1/2信号转导通路,可维持HUVECs内皮细胞表型以及VE-cadherin在内皮细胞的表达,抑制α-SMA蛋白表达,与TGF-β1模型组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);抑制p38MAPK和JNK通路,与TGF-β1模型组相比,HUVECs表型、VE-cadherin和α-SMA蛋白表达未见明显差异。结论 TGF-β1可诱导内皮细胞向间充质转分化,应用U0126抑制ERK1/2信号途径可抑制内皮细胞转分化的进展,提示ERK1/2的活化可能是该过程重要的信号转导途径。

ERK1/2通路在Peroxiredoxin-1抑制TGF-β_1诱导的肺成纤维细胞增殖中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在新型过氧化物酶Peroxiredoxin-1(Prx-1)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞增殖中的作用。方法体外培养肺成纤维细胞,随机分为对照组、TGF-β1组、阴性转染组、Prx-1 siRNA转染组。各组细胞用0.4%血清培养12 h使其同步化。TGF-β1组、阴性转染组和Prx-1 siRNA转染组均添加5μg/L TGF-β1刺激24 h,阴性转染组和Prx-1 siRNA转染组分别利用脂质体Lipo2000将干扰siRNA和Prx-1 siRNA转染到肺成纤维细胞,培养48 h。Real-time PCR检测转染后Prx-1 mRNA表达;MTT检测细胞增殖、Western blot检测ERK1/2及Prx-1表达、2,7-二氯荧光素二乙酸(DCFHDA)检测活性氧(ROS)水平。结果 Prx-1 siRNA转染肺成纤维细胞后,Prx-1 mRNA表达明显降低,最大抑制率为92%。与对照组比较,TGF-β1组的细胞增殖、ROS、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)及Prx-1蛋白的表达水平均明显增加。与TGF-β1组比较,阴性转染组中的上述观察指标无明显变化,但Prx-1 siRNA转染组的细胞增殖、ROS、p-ERK1/2的水平明显上升,而Prx-1蛋白的表达被抑制。结论 TGF-β1能够诱导肺成纤维细胞生成ROS,并由此促进ERK1/2的激活,最终导致细胞增殖,而Prx-1 siRNA则可通过增加ROS水平进一步促进TGF-β1的作用。

左归丸含药血清通过ERK/TGF-β/Smads信号级联调控MC3T3-E1细胞增殖与分化

目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)/转化生长因子β(TGF-β)/Sma和Mad相关蛋白(Smads)信号级联在左归丸含药血清干预成骨前体细胞系MC3T3-E1细胞增殖与分化中的作用。方法:以倍美力为阳性对照药,对Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠灌服高、中、低剂量的左归丸混悬液,7 d后腹主动脉取血分离含药血清。采用噻唑蓝(MTT)法检测左归丸含药血清对MC3T3-E1细胞的增殖作用,采用改良钙钴染色法检测碱性磷酸酶(ALP)表达,采用茜素红染色法检测钙化结节,采用Western blotting法检测核结合因子α1(Cbfα1)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)蛋白表达,采用real-time RT-PCR法检测TGF-β1、Smad4和Smad2 mRNA表达。结果:左归丸含药血清对MC3T3-E1细胞的促增殖作用呈剂量和时间相关性,其中以低剂量且体积分数为15%作用48 h后对MC3T3-E1的促增殖作用最大;左归丸含药血清能促进MC3T3-E1细胞ALP表达,增强细胞基质钙化,提高Cbfα1和ColⅠ蛋白分泌,上调TGF-β1、Smad4和Smad2 mRNA表达;加入ERK1/2信号通路特异性阻滞剂PD98059后,MC3T3-E1细胞增殖降低,ALP表达下降,细胞基质钙化减弱,Cbfα1和ColⅠ蛋白分泌降低,Smad4和Smad2 mRNA表达下调,TGF-β1mRNA表达进一步上调。结论:左归丸可能通过干预ERK/TGF-β/Smads信号级联而调控成骨细胞的增殖和分化,这可能是其防治骨质疏松症的机制之一。

CaMKⅡ/ERK信号通路在TGFβ1诱导肝星状细胞增殖中的作用

目的观察Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)信号通路对TGFβ1诱导下人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖的影响。方法 CaMKⅡαsiRNA转染对HSC内CaMKⅡα进行干扰,ERK特异性抑制剂PD98059对ERK信号进行抑制,MST法检测HSC的增殖,Western blotting法检测ERK、p-ERK、JNK、p-JNK表达的变化。结果 CaMKⅡαsiRNA可显著抑制TGFβ1诱导的HSC增殖,差异有统计学意义(P<0.05),对ERK的表达无明显影响,但显著提高p-ERK的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05);PD98059可明显抑制TGFβ1诱导的HSC增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CaMKⅡ/ERK信号参与了TGFβ1诱导的HSC增殖,是肝纤维化发展过程中的重要信号通路。

转化生长因子β1/细胞外信号调节激酶/基质金属蛋白酶通路对腺样囊性癌侵袭和迁移的影响

目的探讨转化生长因子β1/细胞外信号调节激酶/基质金属蛋白酶2(TGF-β1/ERK1/2/MMP-2)通路在腺样囊性癌(ACC)侵袭和迁移过程中的作用及机制。方法以腺样囊性癌ACC-2细胞株为研究对象。用转化生长因子β1(TGF-β1)以及ERK通路抑制剂U0126处理ACC-2细胞。MTT检测ACC-2细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,Westernblot蛋白印迹检测ACC-2细胞中ERK1/2的活化及MMP-2的表达情况,实时荧光定量聚合酶链反应检测ACC-2细胞中MMP-2的mRNA的表达情况。结果 TGF-β1及U0126干预后,ACC-2细胞增殖能力无明显变化;TGF-β1刺激可增强ACC-2细胞迁移、侵袭能力,增加ACC-2细胞p-ERK1/2和MMP-2蛋白以及MMP-2mRNA的表达,而U0126阻断ERK磷酸化后,抑制了TGF-β1刺激的增强作用,ACC-2细胞的迁移、侵袭能力降低,MMP-2蛋白和mRNA的表达均下降。结论 TGF-β1/ERK1/2/MMP-2通路参与了人唾液腺ACC侵袭和迁移能力的调节。TGF-β1可通过上调ERK1/2,继而上调MMP-2,促进人唾液腺ACC细胞的侵袭和迁移能力,ERK1/2可能成为人唾液腺ACC侵袭防治的新靶点。

血小板源性生长因子对大鼠肾小球系膜细胞增殖及信号转导的影响

目的探讨血小板源性生长因子（PDGF）是否通过细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）途径诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖和胶原蛋白的表达。方法MTT法检测肾小球系膜细胞代谢活性，免疫细胞化学法检测胶原蛋白的表达，Western blot法检测ERK1／2及磷酸化-ERK1／2蛋白表达。结果10-100ng／ml PDGF能够促进系膜细胞增殖并诱导Ⅰ型与Ⅳ型胶原表达，表现出部分浓度相关性。PDGF作用细胞内磷酸化-ERK1／2表达灰度值增加，而ERK1／2蛋白表达不明显．结论PDGF作用系膜细胞后能够通过ERK1／2通路促进细胞增殖及胶原蛋白的表达。

TGF-β_1/Smads和ERK表达异常在高盐饮食诱导的大鼠血管重构中的作用

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads和细胞外信号调节激酶(ERK)表达在高盐饮食诱导的大鼠血管重构中的作用及替米沙坦的干预效应。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常盐对照组(C组),8%高盐模型组和8%高盐+替米沙坦干预组(T组),每2周测量尾动脉压1次,根据尾动脉压又将8%高盐模型组分为模型高血压组(MH组)和模型正常血压组(MN组),喂养共24周。HE染色和Masson染色观察主动脉和肠系膜动脉重构。通过real-time PCR测定主动脉中膜TGF-β1、Smad2和Smad3和Smad7 mRNA表达,同时免疫组化法检测主动脉和肠系膜动脉中膜增殖细胞核抗原(PCNA)、TGF-β1、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)及Smad7的蛋白表达和分布。结果:与C组相比,MH组大鼠血压升高(P<0.05),MH组和MN组主动脉和肠系膜动脉中膜胶原容积分数(CVF)和中膜厚度(MT)显著增加(P<0.01),主动脉TGF-β1、Smad2和Smad7 mRNA表达增高(P<0.05),主动脉和肠系膜动脉中膜PCNA、TGF-β1、p-Smad2/3和p-ERK 1/2蛋白表达显著升高(P<0.05),Smad7表达明显降低(P<0.05);经替米沙坦干预后,主动脉和肠系膜动脉中膜CVF和MT减小(P<0.01),PCNA、TGF-β1、p-Smad2/3和p-ERK1/2表达减少(P<0.05),Smad7表达上升(P<0.05)。结论:TGF-β1/Smads和ERK表达异常共同参与高盐饮食致主动脉和肠系膜动脉重构的机制;替米沙坦抗动脉重构的作用可能部分是通过阻断血管紧张素Ⅱ1型(AT1)受体影响TGF-β1/Smads和ERK表达实现的。

阻断ERK2信号转导通路对血小板源生长因子-BB诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移和表达转化生长因子-β1的影响

目的观察ERK2信号转导通路在血小板源生长因子（PDGF—BB）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖、迁移和表达转化生长因子（TGF）-β1中的作用。方法将原代培养的大鼠VSMC分为4组：（1）对照组；（2）PDGF刺激组；（3）Ad—LacZ组；（4）Adanti—ERK2组。用Western blot检测细胞磷酸化ERK2蛋白水平；噻唑蓝（MTF）比色法测定细胞增殖率；流式细胞仪检测细胞细胞周期；Boyden小室测定细胞的跨膜迁移能力；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细胞培养液上清中TGF—β1的浓度。结果Adanti-ERK2组和对照组细胞增殖率、S期细胞百分比及跨膜迁移细胞数目明显低于PDGF刺激组和Ad—LacZ组（细胞增殖率：2．75％、0．00％比64．45％、61．88％；S期细胞百分比：14．18％、13．58％比38．14％、32．99％；跨膜迁移细胞数：8．2±3．2、6．3±2．6比24．8±6．1、23．3±5．8，均P〈0．05）；（2）Adanti—ERK2组和对照组细胞培养上清液中TGF-β1含量明显低于PDGF刺激组和Ad—LacZ组（P〈0．05）；而Adanti—ERK2组明显高于对照组（P〈0．05）。结论ERK2信号转导通路参与调控PDGF—BB诱导的VSMC增殖、迁移和基因表达。反义ERK2基因预先转染阻断ERK信号转导能显著抑制PDGF-BB刺激的VSMC增殖、迁移，阻断细胞周期由G1期进入S期，并且部分下调TGF—β1的合成分泌。

TGF-β_1和ERK2在肺癌组织中的表达及意义

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和细胞外信号调节激酶2(ERK2)在肺癌发生、发展中的作用。方法选取77份肺癌组织标本和20份肺良性病变组织标本。标本常规石蜡包埋行免疫组织化学染色,检测TGF-β1和ERK2蛋白表达。分析TGF-β1、ERK2蛋白表达与肺癌主要病理特征的关系。对TGF-β1与ERK2蛋白表达关系行Spearman等级相关分析。结果肺癌组织中TGF-β1、ERK2蛋白表达阳性率均明显高于肺良性组织,P均<0.05。TGF-β1、ERK2蛋白表达在低分化肺癌、淋巴结转移组织中的表达均明显高于高分化、中分化和无淋巴结转移组织。TGF-β1与ERK2表达呈明显正相关,P<0.000 1(r=0.646)。结论 TGF-β1、ERK2蛋白在肺癌组织中呈高表达,TGF-β1/ERK转导通路可能在肺癌的发生、发展及淋巴转移过程中起重要作用,检测二者水平有助于肺癌的病情判断。

福辛普利对胞外调节蛋白激酶在糖尿病肾病中表达的影响及其作用机制

目的:观察福辛普利对糖尿病肾病(DN)大鼠肾皮质中磷酸化胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)基因的表达及肾脏病理变化的影响。探讨福辛普利对DN肾脏的保护作用机制。方法:雄性Wistar大鼠33只,随机取10只为对照组(A组),其余大鼠高糖高脂饲料喂养1个月后,腹腔注射链脲佐菌素建立早期DN模型,将大鼠分为模型组(B组)、福辛普利组(C组)。C组在成模后2周开始给药福辛普利10g/(kg·d)灌胃;A组及B组灌服相应容量(10mL/kg)的生理盐水,1次/d,连续6周。检测血糖、肾小球滤过率、尿微量白蛋白、肾肥大指数,用Westernblot方法检测肾皮质p-ERK1/2;用RT-PCR技术检测TGF-β1基因的表达。结果:治疗后6周B组和C组血糖值均明显高于A组。C组血糖值与B组之间未见明显差异。治疗6周B组和C组尿微量白蛋白、肾小球滤过率、肾肥大指数和肾小球系膜细胞基质相对面积均明显高于A组(均P<0.01)。治疗后上述指标C组低于B组(均P<0.01)。C组肾皮质p-ERK1/2、TGF-β1基因的表达均明显低于B组,肾组织病变明显减轻。结论:(1)p-ERK参与了DN的发生与发展。(2)福辛普利抑制DN大鼠肾皮质中ERK的活性,并下调TGF-β1基因的过度表达,减轻肾组织病理改变。(3)福辛普利对DN肾脏的保护作用,可能与抑制ERK活性有关。(4)ERK活化与DN高血糖、肾小球高滤过、TGF-β1基因的过度表达有关。

ERK1/2信号蛋白在单侧尿路梗阻大鼠肾组织中的表达

目的:探讨单侧尿路梗阻(UUO)模型大鼠肾组织细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的表达及意义。方法:42只SD大鼠随机分为模型组和假手术组。模型组采用UUO术,术后1,3,7,14,21 d和28 d处死动物取肾组织,观察肾组织病理改变;用免疫组化法测定肾组织TGF-β1、磷酸化ERK1/2和CollagenⅠ表达。结果:病理结果显示,UUO 3 d肾小管上皮细胞肿胀、肾间质炎症细胞浸润;UUO 14 d肾组织大量炎症细胞浸润和纤维组织增生,28 d肾小管结构基本破坏,纤维组织弥漫增生。免疫组化显示,正常肾组织有基础TGF-β1、磷酸化ERK1/2和CollagenⅠ的表达。UUO3 d TGF-β1增加明显,7 d达高峰,此后表达减少;磷酸化ERK1/2的表达在UUO术后3 d明显增加,并持续增加到第7 d,此后表达减少;而UUO术后3 d肾组织CollagenⅠ表达亦明显升高,并持续增加到28 d。模型组肾组织TGF-β1、磷酸化ERK1/2的表达时相一致并呈明显正相关,并与肾间质CollagenⅠ的积聚密切相关。结论:磷酸化ERK1/2信号蛋白在单侧尿路梗阻大鼠肾组织中的表达明显增高,可能在梗阻性肾病肾间质纤维化过程中起重要作用。

TGF-β1对HepG2细胞表达VEGF的作用

目的:研究ERK在TGF - β1刺激肝癌细胞表达血管内皮生长因子中的作用。方法:体外培养肝癌细胞系HepG2 ,施加外源性TGF - β1,并使用细胞外信号调节激酶ERK1/2的特异性阻断剂。免疫组化以及RT -PCR检测VEGF蛋白和mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,施加外源性TGF - β1能够使肝癌细胞VEGF的蛋白及mRNA的表达显著增多,但是同时使用阻断剂组的VEGFmRNA表达与TGF组相比没有明显差异。结论:TGF - β1刺激肝癌细胞HepG2表达VEGF可能通过ERK/MAPK以外的信号通路实现。

转化生长因子β1及Smad信号转导通路在肾小球硬化中的作用

目的探讨转化生长因子β1(TGF—β1)及其信号转导分子Smad2、Smad3、细胞外基质(ECM)在肾小球硬化过程中的表达及其意义。方法以20例正常肾组织为对照组,对38例各种不同组织学类型的肾活检标本,用免疫组织化学染色方法观察TGF—β1、Smad2、Smad3、纤连蛋白(FN)在肾小球中的染色强度,并对检测结果作图像分析处理。以体外培养的人系膜细胞为对象,观察TGF-β1对系膜细胞表达Smad2、Smad3、FN的影响。Smad2、Smad3、FN的基因表达采用RT—PCR检测;Smad2、Smad3、FN的蛋白表达采用Western印迹检测。结果所有增生、硬化病理类型肾小球肾炎中病变肾小球TGF—β1、Smad2、Smad3、FN蛋白表达均显著高于对照组(P<0.05),且TGF—β1、Smad2、Smad3在肾小球中的表达与FN在肾小球中的蓄积呈显著正相关(P<0.05)。外源性TGF—β1刺激人肾系膜细胞后,系膜细胞Smad3mRNA和蛋白表达显著增高(P<0.05);Smad2mRNA和蛋白表达无明显改变(P>0.05);FNmRNA和蛋白表达显著增高(P<0.05)。结论TGF—β1及其信号转导分子Smad蛋白可能参与了ECM在病变肾小球中的过量蓄积,从而在肾小球硬化过程中起重要作用。

肠炎清对溃疡性结肠炎大鼠TGF-β_(1)/Smad3/ERK通路的影响

目的:观察肠炎清对溃疡性结肠炎(UC)大鼠的保护作用及对TGF-β_(1)/Smad3/ERK信号通路的调控作用。方法:将25只雌性SD大鼠随机分为5组:空白对照组、模型组、美沙拉嗪组、肠炎清低剂量组和肠炎清高剂量组,除空白对照组外,其余大鼠均采用2,4,6三硝基苯磺酸(TNBS)诱导,建立UC模型。造模24 h后,模型组、空白对照组分别用0.9%生理盐水灌胃;美沙拉嗪对照组以30 mg/kg艾迪莎混悬液灌胃;肠炎清高剂量组以147.2 g/kg肠炎清灌胃;肠炎清低剂量组以36.8 g/kg肠炎清灌胃;1次/d,时间固定,持续7 d。检测结肠黏膜组织中转化生长因子(TGF)-β_(1)、Smad3、胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的水平及TGF-β_(1)信号通路活化的程度。结果:模型组ERK表达水平最低,低于溶媒对照组、美沙拉嗪组、肠炎清高剂量组和低剂量组,肠炎清剂量组该指标水平随剂量升高而上升,且高剂量肠炎清组ERK表达水平显著高于模型组。模型组TGF-β_(1)和Smad3高于美沙拉嗪组组、空白对照组和肠炎清低剂量组及高剂量组。结论:肠炎清对UC大鼠肠黏膜具有保护作用,其机制可能与通过下调TGF-β_(1)-Smad3通路,提高ERK表达有关。