微囊藻毒素去毒酶转基因模型的构建

根据已克隆的鲢鱼(Hypophthalmichthysmolitrix)微囊藻毒素去毒酶cDNA全序列设计特异引物,利用PCR方法获得鲢鱼微囊藻毒素去毒酶基因编码区,将该编码区与绿色荧光蛋白连接,分别构建融合表达载体pEGFP-N1-sGST和双顺反子表达载体pIRES2-EGFP-sGST。利用脂质体转染法将融合表达载体pEGFP-N1-sGST转染Hela细胞,60h后检测到绿色荧光基因表达;通过显微注射,将双顺反子表达载体pIRES2-EGFP-sGST注入斑马鱼(Daniorerio)受精卵,获得了转鲢鱼微囊藻毒素去毒酶基因斑马鱼,从而构建了微囊藻毒素去毒酶转基因模型。上述2种转基因模型的成功构建为进一步研究鲢鱼、鳙鱼(Aristichthysnobilis)、罗非鱼(Oreochromisnilotica)等淡水鱼类微囊藻毒素去毒酶基因调控元件、去毒分子机理及研发转基因鲢鱼、鳙鱼、罗非鱼等微囊藻毒素高效生物去毒器奠定了基础。

前列腺特异启动子和部分靶基因在转基因模型中的应用进展

遗传工程小鼠模型已被大量用于前列腺癌发生、发展、恶化和转移的研究。构建小鼠模型的途径主要包括转基因的过表达、基因敲除或敲入,以及使用Cre/lox技术进行条件调控。本文综述了目前构建的有明显遗传表型的转基因小鼠模型所用到的前列腺特异的启动子,以及所用到的靶基因。

淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默病转基因模型小鼠大脑皮质DMT1表达的影响

目的探讨淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默症(AD)APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠模型大脑皮质二价金属离子转运蛋白1(DMT1)表达的影响。方法将APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠60只,分为模型组、淫羊藿组、黄芪组、葛根组、复方组、去铁胺(DFO)组,C57BL/6J小鼠作为健康对照组。用药结束后,取各组小鼠脑组织,分别采用免疫组织化学、实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠大脑皮质DMT1的表达情况。结果免疫组织化学结果显示:阴性对照未见DMT1阳性细胞。与健康对照组相比,模型组DMT1的表达增高;与模型组相比,复方组和DFO组DMT1的表达降低(P<0.05);DFO组与复方组DMT1的表达无明显差异。RT-PCR结果、Western blot结果与免疫组织化学结果相一致。结论淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方可以下调AD模型小鼠大脑皮质DMT1的表达,从而抑制小鼠脑铁超载,缓解铁超载带来的中枢神经系统功能衰退。

中药Ⅰ号方对APP/PS1双转基因模型小鼠APP代谢的影响

目的研究中药I号方对APP/PS1双转基因模型小鼠APP代谢的影响。方法将5月龄APP/PS1双转基因模型小鼠随机分为模型组(vehicle)、中药Ⅰ号方低剂量组(0.6 g/kg)、中剂量组(1.2 g/kg)和高剂量组(2.4 g/kg),并以同窝阴性小鼠作为正常对照组(wild-type,WT),每组16只,雌雄各半。给药小鼠每天灌胃一次,模型组和正常对照组分别给予等体积的双蒸水灌胃。给药四个月后,用免疫组化和Western blot检测淀粉样前体蛋白(APP)及其代谢产物和分解酶的变化。结果 Western blot结果显示,与模型组相比,治疗组低剂量、中剂量和高剂量给药组能显著降低APP分解酶(ADAM10和BACE1)(P<0.01)及APP的分解产物的量,如:β-CTF(C99)、α-CTF(C83)、s APPα、s APPβ(P<0.01)。结论中药I号方通过影响APP的分解过程减少淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)的生成,减少脑内老年斑的沉积。

侧脑室注射鼠神经生长因子对阿尔茨海默病转基因模型小鼠学习能力及行为学的影响

目的探讨鼠神经生长因子(mNGF)侧脑室注射影响阿尔茨海默病(AD)转基因模型小鼠学习记忆能力及行为学的可能机制。方法将20只老年痴呆转基因小鼠(C57BL/6J)采用随机数字表法分为AD转基因模型组(AD组)和实验组,每组10只小鼠,另取老年正常C57BL/6J小鼠10只设为老年组。AD组和实验组分3次(间隔10 d)侧脑室注射mNGF,老年组注射等量0.9%氯化钠注射液。用Morris水迷宫视频跟踪分析系统进行空间探索实验;采用全细胞膜片钳记录海马CA1区诱发的群峰电位(PS)和自发性动作电位(AP);采用免疫组化法检测小鼠海马CA1区脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)表达水平;实时定量聚合酶链式反应检测海马CA1区中BDNF mRNA和NGF mRNA水平。结果治疗第40天,实验组小鼠脑薄片海马回CA1区BDNF[(100.51±2.27) ng/mL]和NGF[(159.85±1.23) ng/mL]蛋白阳性表达及BDNF mRNA[(72.02±0.98)β-actin]、NGF mRNA[(67.08±1.16)β-actin]明显升高,PS[(63.02±1.25) mV]和AP[(58.57±0.93) mV]膜电位降低,三组间的治疗前和第40天比较均差异有统计学意义(均P<0.05)。实验组小鼠跨越平台次数(4.29±0.64)明显高于AD组和治疗前同组[(2.85±0.12),(2.68±0.24)](F=49.815,232.391,P<0.05),实验组逃避潜伏期[(21.73±0.54)s]较AD组[(68.59±2.01)s]明显缩短,与AD组和治疗前同组比差异有统计学意义(F=2 910.165,3 137.281,P<0.05)。老年组运动轨迹主要在原平台位置,AD组则主要分散在外周,而实验组运动轨迹在两者之间。结论鼠神经生长因子能促进AD转基因模型小鼠学习记忆能力,其作用机制可能与mNGF稳定海马CA1区膜电位,上调BDNF和NGF蛋白及其基因表达以营养和修复神经有关。

磁共振成像对扩张型心肌病转基因模型小鼠左右心室对比分析

目的对cTnTR141W扩张型心肌病转基因模型小鼠左、右心室进行对比分析,研究cTnTR141W转基因小鼠作为右心室心肌病的动物模型的可行性。方法利用7.0 T高场强磁共振成像(MRI)技术,定量分析了2、4、6和8月龄对照组及cTnTR141W转基因模型小鼠左、右心室的舒张末容积(EDV)、收缩末容积(ESV)和射血分数(EF)的变化情况,同时对6月龄对照组cTnTR141W转基因模型小鼠心肌组织进行组织学分析。结果转基因阴性对照小鼠相比,cTnTR141W转基因小鼠左、右心室的容积在2月龄时已有增大趋势,而射血分数有减小趋势。右心室射血分数减小出现最早也最显著(P<0.05)。随年龄增加,cTnTR141W转基因小鼠与转基因阴性对照小鼠相比,右心室的结构和功能的病理生理变化与左心室同时趋于严重。该小鼠左、右心室在4月龄后表现典型的扩张型心肌病表型。结论 cTnTR141W转基因模型小鼠左心室和右心室的扩张性心肌病表型同时出现,该小鼠可作为右室性心肌病等右心室功能下降相关疾病研究的动物模型。

“转基因模型猪”将在深圳诞生

国内第一头转基因模型猪2008年10月将在深圳诞生。研究人员表示，通过把人类的某些疾病基因转移到猪身上，在它们身上进行临床实验，将是疾病医学领域的一大突破。

转基因模型猪助力生物钟与人类疾病研究

据光明网2013年11月2日报道，华大基因、丹麦奥尔胡斯大学和华大方舟等机构的研究人员，采用手工克隆技术首次将人体生物钟基因突变体转入到猪体内，成功获得生物节律转基因模型猪，对生物节律的药物新靶点发现及临床前药效学评价具有重要的科学意义和临床意义。

帕金森病α-Synuclein转基因小鼠模型的建立

目的建立人α-Synuclein野生型及两个突变型A53T和A30P基因的转基因动物模型,研究α-Synuclein在帕金森病发病过程中的作用。方法构建人α-Synuclein表达载体,利用显微注射法制备人α-Synuclein基因的转基因小鼠。通过PCR方法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。通过RT-PCR和Western blotting方法鉴定转基因小鼠脑组织中人α-Synuclein mRNA和蛋白表达情况。采用免疫组化鉴定人α-Synuclein在小鼠脑组织中的表达情况。通过Rotatingrod实验评价转基因小鼠的行为改变情况。结果得到表达水平不同的野生型人α-Synuclein转基因小鼠2个品系。得到表达水平不同的A53T突变型α-Synuclein转基因小鼠2个品系。得到表达水平不同的A30P突变型α-Synuclein转基因小鼠3个品系。免疫组化显示,转基因小鼠大脑海马、新皮层、纹状体区出现人α-Synuclein阳性标记的细胞。Rotating rod实验结果显示转基因小鼠表现出明显的进行性运动能力障碍。结论建立了转人α-Synuclein基因的帕金森病小鼠模型。

cTnT^(R92Q)转基因小鼠肥厚型心肌病模型的建立

目的建立cTnTR92Q肥厚型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnTR92Q基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnTR92Q转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnTR92Q转基因小鼠的基因表型,RT-PCR检测基因表达,光学显微镜和超声检测cTnTR92Q转基因小鼠心脏的病理改变。结果建立了3个不同表达水平的cTnTR92Q转基因小鼠品系。转入的cTnTR92Q基因在心脏组织的表达水平高于内源性cTnT。组织学分析显示cTnTR92Q转基因小鼠心脏变大,心室壁肥厚,心腔变小,心肌细胞排列紊乱,心肌间质纤维增多。超声检查显示心室壁变厚,收缩期容积和舒张期容积显著缩小,射血分数、短轴缩短率明显增加。结论cTnTR92Q转基因小鼠心脏变大,室壁变厚,心腔变小,心肌细胞排列紊乱,间质纤维化以及心肌舒张功能失调,说明成功建立了cTnTR92Q转基因小鼠肥厚型心肌病模型,为研究肥厚型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。

采用转基因酵母模型检测大豆异黄酮酶解前后雌激素活性

采用微生物酶对大豆异黄酮进行了转化,并采用转基因酵母模型检测了大豆异黄酮酶转化前后的雌激素活性。结果显示,酶转化后的大豆异黄酮雌激素活性有较大幅度的提高,是由于染料木苷和大豆苷转化成染料木素和大豆苷原所致。

复方丹参片对阿尔茨海默病转基因细胞模型Aβ表达的影响

目的研究复方丹参片对阿尔茨海默病(AD)转基因细胞模型β-淀粉样肽(Aβ)表达的影响。方法用前期试验已构建成功的转基因细胞模型做为AD转基因细胞模型,0.5、1、2、4倍复方丹参片饲养大鼠,取0.5、1、2、4倍浓度大鼠血清培养AD转基因细胞,并在24、48、72h用Western blot方法检测转基因细胞Aβ的表达情况。结果 24h,1倍剂量组量效关系最佳。结论复方丹参片能减少AD转基因细胞模型Aβ的表达。

在肿瘤研究中转基因小鼠模型的研究进展

随着基因工程技术的飞速发展,转基因小鼠模型对研究肿瘤基因特征、肿瘤抑制基因的表达和功能有着重要的作用。近年来,肿瘤血管生成理论成为肿瘤研究的新热点。与肿瘤血管生成相关的调控基因的研究也越来越受到重视。该文对转基因小鼠模型在肿瘤研究中的进展作了综述,并着重介绍了关于肿瘤血管生成调控基因转基因小鼠模型的研究情况。

复方丹参片对阿尔茨海默病转基因细胞模型Tau蛋白表达的影响

目的研究复方丹参片对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)转基因细胞模型微管相关蛋白(Tau蛋白)表达的影响。方法将SD大鼠随机分成复方丹参片0.5、1、2、4倍剂量组、空白对照组及多奈哌齐组,分别灌服相应药液,空白组给予等容积生理盐水,1次/日,连续7 d之后,取各组血清培养AD转基因细胞,于24、48、72 h采用Western Blot法分析AD转基因细胞Tau蛋白表达情况。结果与空白对照组相比,24 h时复方丹参片1、2、4倍剂量组能降低Tau蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.01);48 h时复方丹参片2、4倍剂量组差异有统计学意义(P<0.01);72 h时各剂量组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论复方丹参片2倍剂量48 h时能显著减少AD转基因细胞模型Tau蛋白表达。

我国临床前药物致癌试验转基因动物模型研究进展

目的:综述我国临床前药物致癌试验转基因动物模型研究进展。方法:介绍致癌试验常用转基因动物模型的构建、利用转基因动物模型开展致癌试验的优势、国际认可及国际监管机构新药申报中的应用、国内外致癌试验相关指导原则、我国开展基于转基因动物致癌试验面临的困境以及转基因动物模型构建的最新进展。结果与结论:基于转基因动物模型的致癌试验具有诸多优势也是目前国际趋势,在我国建立临床前药物致癌试验转基因动物模型非常必要。

基于凝血因子IX基因剔除小鼠建立血友病乙转基因动物模型

为在凝血因子IX基因剔除小鼠基础上建立基因组中整合有含特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体的转基因小鼠家系 ,为血友病乙的研究提供更接近临床实际的动物模型。利用体外定点突变技术 ,构建含有特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体 ,该载体包括由人凝血因子IX编码区及第一内含子构成的人凝血因子IX基因(hFIXml)、4个拷贝的MCK增强子 (MCKe)、鸡 β -肌动蛋白启动子 (bA)及PolyA ,命名为pMe4bAIXml质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 817只凝血因子IX基因剔除小鼠受精卵雄原核 ,再将它们分别回输 4 5只假孕受体母鼠的输卵管中 ,共产仔 6 9只 ,存活 6 3只。采用PCR与基因组Southern杂交筛选法鉴定小鼠 ,证实 6只小鼠基因组中整合有含特定点突变的pMe4bAIXml质粒 ,并对 1只小鼠的PCR产物进行测序 。

淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔采末病转基因动物模型的学习记忆能力及病理学影响

目的观察淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠的学习记忆能力及病理学影响。方法 6月龄♂APPswe/PS1ΔE9双转基小鼠20只,随机分为模型组和复方组。复方组灌胃给予淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方3个月,模型组给予等量生理盐水。6月龄♂C57BL/6J小鼠10只为阴性对照组。灌胃结束后,采用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力情况,并于水迷宫后灌注处死各组小鼠,采用改良Bielschowsky银染法以及尼氏染色法观察小鼠大脑组织病理学变化。结果水迷宫定位航行实验结果显示,APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠的逃避潜伏期与C57对照组小鼠相比明显延长(P<0.05),复方组小鼠的逃避潜伏期与模型组小鼠相比明显缩短(P<0.05);空间探索实验结果显示,APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠与C57对照组小鼠相比跨台次数减少(P<0.05),复方组小鼠跨台次数与模型组小鼠相比明显增多(P<0.05)。APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠的游泳速度与C57对照组小鼠相比增大(P<0.05),复方组小鼠的游泳速度与模型组小鼠相比差异无显著性(P>0.05)。改良Bielschowsky银染法结果显示,C57对照组小鼠大脑皮质未见明显改变,神经原纤维排列有序、稀疏。模型组小鼠大脑皮质神经原纤维增粗、肿胀,密集成宽带状,深染,神经纤维缠结明显,分布有大量老年斑,复方组小鼠大脑皮质神经纤维缠结情况减轻,可见少量老年斑。尼氏染色结果显示,C57对照组小鼠海马各区神经细胞排列整齐且密集,胞质中尼氏体丰富,大脑皮层尼氏小体呈深蓝色,细胞核淡蓝色,背景略呈浅蓝色;模型组小鼠神经元水肿,细胞数量减少,排列稀疏,细胞间隙增大,胞质内尼氏体减少,分界不清,染成淡蓝色;复方组小鼠较模型组小鼠神经元水肿减轻,细胞数量增多,排量相对整齐,分界清晰。结论APP/PS1双转基因AD小鼠能够较好地模拟AD患者的表现及病理过程,提供有效的实验动物模型。淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方可以有效地改善APP/PS1双转基因AD模型小鼠的学习记忆能力,减轻其大脑皮质神经纤维缠结、老年斑以及神经元水肿等改变。

人SR-AI转基因小鼠模型的主要形态学特性、血液学指标和血脂水平的研究

目的 明确人SR AI转基因小鼠的一些形态、脏器、血液学和血浆脂质参数 ,为人SR AI转基因小鼠模型的应用提供相关依据。方法 用游标卡尺和电子称量天平测量人SR AI转基因小鼠的吻长、眶间距、体长、尾长及 12个脏器系数并与C57BL 6J小鼠进行比较分析 ;用SysmexK 45 0 0型全血自动多参数血液分析仪检测其血液学指标 ;并用酶法分别测定血浆总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇含量。结果 人SR AI转基因小鼠外部形态指标和脏器系数与C57BL 6J小鼠比较差异没有显著意义 (P >0 .0 5 ) ;转基因小鼠的各项血液学指标无明显改变 ,血脂蛋白成分的改变亦未显示统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,甘油三酯的浓度略有增高 (P <0 .0 5 )。结论 人SR AI转基因小鼠的外部形态指标、脏器系数及各项血液学指标均无明显改变 。

阿尔茨海默病转基因动物模型的学习记忆能力改变及病理学观察

目的观察APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠的学习记忆功能及其病理学改变。方法 9月龄雄性APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠和9月龄雄性C57BL/6J小鼠各10只,采用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力情况,并于水迷宫后灌注处死各组小鼠,采用改良Bielschowsky银染法以及尼氏染色法观察小鼠大脑组织病理学变化。结果水迷宫定位航行实验结果显示,APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠的逃避潜伏期与C57对照组小鼠相比明显延长(P<0.05);空间探索实验结果显示,APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠与C57对照组小鼠相比跨台次数减少(P<0.05)。改良Bielschowsky银染法结果显示,C57对照组小鼠大脑皮质未见明显改变,神经原纤维排列有序、稀疏。APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠大脑皮质神经原纤维肿胀,密集成宽带状,可见神经纤维缠结,有老年斑散在分布。尼氏染色结果显示,C57对照组小鼠海马各区神经细胞排列密集、整齐,胞浆中尼氏体丰富,大脑皮质尼氏小体呈深蓝色,细胞核淡蓝色,背景略呈浅蓝色;APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠神经元水肿,细胞数量减少,排列稀疏,细胞间隙增大,胞浆内尼氏体减少,分界不清,染成淡蓝色。结论 APPswe/PS1ΔE9双转基因AD小鼠能够较好的模拟AD患者的表现及病理过程,提供有效的实验动物模型。

扩张型心肌病转基因模型

扩张型心肌病（DCM）是导致慢性心力衰竭的重要病因。约25％的人类特发性DCM为遗传性，目前仅发现少量的相关缺陷基因。而与肥厚型心肌病（HCM）相关的基因变异已有诸多发现。DCM和HCM是心肌病的最常见类型，约10％的HCM患者最终会进展为以左心室扩张为主的DCM。为阐明DCM的病理生理特征并探索治疗策略，国内外已进行了大量的DCM动物模型研究。绝大多数模型成功模拟了人类DCM的临床特征，包括左心室扩张或房室扩张、左心室收缩和舒张功能严重受损、左心室壁变薄等。本研究旨在概述DCM的转基因动物模型，探讨其对阐明DCM的可能发生机制及扩展相关治疗手段的价值。