环磷腺苷效应元件结合蛋白转录共激活因子在食管癌中的表达及与临床病理的关系

探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)转录共激活因子1(CRTC1)在食管癌组织与癌旁组织中的转录水平和翻译水平变化,及其变化与临床病理的关系。收集25例食管癌鳞癌患者的癌组织及与之配对的癌旁组织,通过qRT-PCR检测CRTC1的mRNA水平,Western blot检测CRTC1的蛋白水平。结果表明:在食管癌中,CRTC1蛋白表达低于癌旁组,而mRNA水平高于癌旁组;CRTC1在转录水平上与肿瘤位置和淋巴结转移有关。由此可见:CRTC1在食管癌中存在异常表达,CRTC1的mRNA有望用于食管癌诊断及淋巴结转移评估。

环磷酸腺苷应答元件结合蛋白调控的转录共激活因子在肿瘤发生发展中作用的研究进展

环磷酸腺苷应答元件结合蛋白(cyclic adenosine monophosphate response element binding protein,CREB)调控的转录共激活因子(CREB-regulated transcription coactivators,CRTCs)是一个新发现的细胞内信号整合子家族,能极大地增强CREB的活性,而CREB作为细胞内的重要转录因子,参与调节细胞众多的生理活动。越来越多的研究表明,CRTCs参与调控细胞的生长、分化、增殖、存活、DNA损伤修复和凋亡相关的信号通路,在肿瘤的发生发展中起着重要作用。本文概要介绍CRTCs在肿瘤领域的研究进展。

具有PDZ结合基序的转录共激活因子对宫颈癌细胞的增殖、侵袭和迁移的影响

目的探索宫颈癌组织中具有PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)的表达情况,以及其在生物学上的作用。方法用免疫组化法对正常宫颈组织和宫颈癌组织样本中TAZ蛋白表达情况进行检测,并用卡方检验分析其与临床病理参数之间的关联。将SiHa细胞分成实验组(质粒转染过表达TAZ载体)和对照组(质粒转染对照载体)。用实时荧光定量聚合酶链反应法检测TAZ mRNA的表达水平,用CCK-8法检测细胞的增殖活力,用Transwell实验法评估细胞的侵袭及迁移能力,用蛋白质印迹法测定上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达水平。结果共收集正常宫颈组织样本28例和宫颈癌组织样本92例。宫颈癌组织和正常宫颈组织中TAZ表达阳性率分别为76.09%(70例/92例)和7.14%(2例/28例),差异有统计学意义(P<0.01)。经卡方分析提示:在宫颈癌组织中TAZ阳性表达与局部病灶深肌层侵犯和淋巴结阳性均呈正相关(均P<0.01)。对照组和实验组的TAZ mRNA表达水平分别为1.00±0.07和2.06±0.12,96 h增殖活力(光密度值)分别为1.67±0.08和2.15±0.05,侵袭细胞数分别为(68.00±5.36)和(100.00±8.51)个,迁移细胞数分别为(136.00±6.20)和(193.00±14.75)个,神经型钙黏蛋白相对表达水平分别为1.00±0.13和1.40±0.09,上皮型钙黏蛋白相对表达水平分别为1.00±0.09和0.27±0.10,波形蛋白相对表达水平分别为1.00±0.11和1.23±0.15,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论宫颈癌中TAZ蛋白呈高表达,可能通过诱导EMT促使肿瘤增殖和转移。

Yes相关蛋白／含PDZ结合基序的转录共激活因子对胰腺癌细胞吉西他滨耐药性的影响

胰腺癌的发病率呈逐年增多趋势，已成为癌症致死的第4位病因，预计将在2030年上升为癌症致死第2位病因。胰腺癌的5年生存率〈5%，约40%的患者在确诊时已经发生局部或远处转移，失去根治性手术的机会。化学治疗在一定程度上能够提高胰腺癌患者的生存率，如吉西他滨，但是胰腺癌的耐药性使其治疗并未达到预期效果。因此，迫切需要深入对胰腺癌耐药性进行研究，增强胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性，提高疗效。

高氧致新生鼠慢性肺疾病中PDZ结合基序转录共激活因子的表达及其意义

目的探讨高氧致新生大鼠慢性肺损伤中PDZ结合基序转录共激活因子(transcriptional co-activator with PDZ-binding motif,TAZ)的表达及其作用。方法建立新生大鼠高氧致肺损伤模型,实验组和对照组分别吸入氧气(85%)和空气。分别在第1、3、7、14、21天留取肺组织,肺组织切片苏木精-伊红染色观察肺组织病理改变,应用实时荧光定量聚合酶链式反应、Western blot和免疫组织化学技术检测肺组织中TAZ、表面活性蛋白C(surfactant protein C,SPC)、水通道蛋白5(aquaporin-5,AQP5)蛋白的动态表达情况。结果实验组肺组织逐渐出现肺泡间隔增厚,肺泡棘消失,肺泡腔增大,数目减少,肺泡结构简单化。与对照组相比,实验组肺组织中第1、3天TAZ、SPC、AQP5表达无差异(P>0.05);第7、14、21天实验组肺组织中TAZ的mRNA和蛋白表达明显降低,SPC的mRNA和蛋白表达明显升高,而AQP5的mRNA和蛋白表达量下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高氧可致新生大鼠肺泡结构紊乱和肺发育停滞;由SPC、AQP5表达结果说明Ⅰ型肺泡上皮细胞损伤严重,Ⅱ型肺泡上皮细胞虽然数量有所增加但其分化能力明显下降,而TAZ表达量减少可能致使大量的Ⅱ型肺泡上皮细胞失去了分化为Ⅰ型肺泡上皮细胞的功能。

PDZ结合域转录共激活因子在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨结肠癌组织中PDZ结合域转录共激活因子（TAZ蛋白）的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测56例结肠癌及对应癌旁组织中TAZ蛋白表达情况，比较不同病理特征患者TAZ的阳性表达率，并分析其表达与结肠癌患者生存预后的关系。结果TAZ蛋白表达主要定位于细胞核，其在结肠癌组织中的阳性率明显高于对应癌旁组织[73．2％（41／56）比12．5％（7／56），P=0．000]。TAZ蛋白在结肠癌组织中的表达与肿瘤大小（P=0．009）、浸润深度（P=0．026）、淋巴结转移（P=0．034）和TNM分期（P=0．002）有关。TAZ阴性表达患者5年生存率明显高于阳性表达患者（66．7％比22．9％，P=0．0017）。多因素回归分析显示，TAZ蛋白阳性表达是影响患者预后的独立因素[HR（95％CI）：3．532（1．266—9．858），P=0．016]。结论TAZ蛋白在结肠癌组织中的表达异常升高，且与结肠癌患者不良预后相关。

抑制具有PDZ结合域的转录共刺激因子表达对结直肠癌细胞株HCT116凋亡的影响及机制

目的探讨RNA干扰技术沉默具有PDZ结合域的转录共刺激因子（TAZ）基因表达对结直肠癌细胞凋亡的影响及其机制。方法合成TAZ的小干扰RNA（TAZ—siRNA）以80nmol／L转染结肠癌细胞株HCT116，抑制TAZ表达；转染48h后细胞计数法（CCK-8）检测细胞的活性，流式细胞仪实验检测细胞凋亡率，实时定量反转录聚合酶链反应（RT—qPCR）和Westernblot检测转染各组HCT116细胞TAZ、B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关X蛋白（bax）和细胞色素C（CytC）基闲mRNA和蛋白表达。结果TAZ—siRNA能有效沉默HCTI16细胞TAZ基因的表达（24h抑制率为40．5％，48h抑制率为82．5％，72h抑制率为69．8％）。有效抑制HCT116细胞中TAZ表达后，转染组细胞的活性（1．01±0．12）明显低于阴性对照组和COH—siRNA组（1．73±0．12和1．68±0．09）；凋亡率在TAZ—siRNA组、阴性对照组、con—siRNA组分别为（33．20±0．35）％、（11．674-0．12）％和（12．03±0．11）％。TAZ—siRNA转染后HCT116中TAZ和bcl-2基因和蛋白表达下调，而bax和CytC基因表达升高和蛋白的表达上调（P〈0．05）。结论利用RNA十扰技术沉默结直肠癌HCTI16细胞TAZ基因后可以显著抑制细胞的活性，并能明显促进细胞凋亡，其机制可能是TAZ通过调控线粒体相关凋亡途径影响细胞凋亡。

CREB转录共激活因子1在神经退行性相关疾病中的研究进展（英文）

cAMP反应元件结合蛋白（cAMP-responsive element bindingprotein，CREB）作为转录因子，促进启动子中具有cAMP反应元件（cAMPresponseelement，CRE）的基因转录。近年的研究显示，CREB转录共激活因子（CREB-regulated transcription coactivator,CRTC；又名transducer of regulated CREB，TORC）家族可以显著增强CREB靶基因的转录。CRTC家族有3个成员（CRTC1-3），其中CRTC1在脑组织中高表达。一些研究表明CRTC1在神经元树突生长发育、长时程突触可塑性、记忆巩固和再巩固等过程中发挥重要作用；且在神经退行性相关疾病等发病过程中出现表达或活性异常。本文主要针对CRTC1表达或活性异常在神经退行性相关疾病发病过程中的作用及分子机制做一综述。

橄榄苦苷调节Hippo-YAP/TAZ信号通路对膝骨关节炎大鼠滑膜炎症的影响

目的探讨橄榄苦苷(OL)通过调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对膝骨关节炎(KOA)大鼠滑膜炎症的影响。方法采用改良的Hulth法构建KOA大鼠模型,并随机分为Model组、低剂量OL组(20 mg/kg)、高剂量OL组(40 mg/kg)、高剂量OL+VT103组(40 mg/kg+10 mg/kg YAP/TAZ抑制剂),每组12只,另取12只大鼠作为正常对照组(NC组)。观察各组大鼠的情况,Lequesne MG评分对各组大鼠行为学进行评估;ELISA试剂盒检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的表达;苏木精-伊红(HE)染色检测大鼠滑膜组织的病理损伤;qRT-PCR法检测滑膜组织中YAP和TAZ mRNA的表达;Western blot检测大鼠滑膜组织中YAP、磷酸化YAP(p-YAP)、磷酸化TAZ(p-TAZ)、TAZ、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果与NC组比较,Model组大鼠Lequesne MG评分升高、血清中TNF-α和IL-6的表达增加、YAP和TAZ mRNA表达增加、p-YAP/YAP、p-TAZ/TAZ、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与Model组比较,低剂量、高剂量OL组大鼠Lequesne MG评分降低、血清中TNF-α和IL-6的表达减少、YAP和TAZ mRNA表达减少、p-YAP/YAP、p-TAZ/TAZ、Bax蛋白表达降低(P<0.05);VT103可明显减弱OL对KOA大鼠滑膜组织的保护作用(P<0.05)。结论OL可能通过激活YAP/TAZ信号通路减轻膝骨关节炎大鼠滑膜炎症。

P300/环腺苷酸效应元件结合蛋白及其生物学功能

转录共激活因子P300/环腺苷酸效应元件结合蛋白结合蛋白(CBP)因分别与腺病毒癌蛋白E1A及环腺苷酸效应元件结合蛋白相结合而得名。P300/CBP可影响细胞增殖、分化和程序性死亡等。本文就P300/CBP的结构、功能、作用机制以及对转录因子和细胞周期因子等的调控作用等研究进展作一综述。

扁蒴藤素调节YAP/TAZ信号通路对创伤性关节炎大鼠的治疗作用研究

目的探究扁蒴藤素(PM)调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对创伤性关节炎(PTOA)大鼠的治疗作用。方法将SD雄性大鼠随机分为对照组、PTOA组、低剂量PM组(PM-L组,100 mg/kg PM)、高剂量PM组(PM-H组,200 mg/kg PM)和高剂量PM+YAP抑制剂VTPF组(PM-H+VTPF组,200 mg/kg PM+10 mg/kg VTPF),每组12只。记录大鼠热痛阈值、压痛阈值的变化。HE染色观察大鼠软骨组织病理学变化,并进行Mankin s评分,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠软骨组织中炎症因子一氧化氮(NO)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-3水平。TUNEL染色观察大鼠软骨组织细胞凋亡的情况。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测大鼠软骨组织TAZ、IL-1β、TNF-αmRNA水平。Western Blot检测大鼠软骨组织YAP/TAZ信号通路相关蛋白的表达情况。结果与对照组相比,PTOA组大鼠热痛阈值、压痛阈值、软骨组织YAP磷酸化水平、TAZ蛋白水平与mRNA水平显著降低(P<0.05),软骨组织IL-1β、TNF-α及其mRNA水平、NO、MMP-1、MMP3水平、细胞凋亡率、Mankin s评分显著升高(P<0.05),HE显示软骨层变薄,结构不清晰,软骨细胞大量丢失、排列紊乱。与PTOA组相比,PM-L组、PM-H组大鼠相关指标变化与上述相反(P<0.05),软骨组织病变减轻。YAP抑制剂VTPF减轻了PM对PTOA的治疗作用。结论PM可能通过激活YAP/TAZ信号通路,对PTOA大鼠具有一定的治疗作用。

甘草素调节Hippo/YAP/TAZ信号通路对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症反应及纤维化的影响

目的探讨甘草素(LQ)调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)/含有PDZ结合位点转录共激活因子(TAZ)通路对高糖(HG)诱导的肾小球系膜细胞炎症反应及纤维化的影响。方法将HBZY-1细胞分为对照组(Ct组)、高糖组(HG组)、低剂量LQ组(LQ-L组,20μmmol/L)、高剂量LQ组(LQ-H组,40μmmol/L)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-YAP/TAZ组(转染pcDNA3.1-YAP/TAZ)、LQ-H+pcDNA3.1组(40μmmol/L+转染pcDNA3.1)、LQ-H+pcDNA3.1-YAP/TAZ组(40μmmol/L+转染pcDNA3.1-YAP/TAZ)。qRT-PCR、Western blot检测转染效果。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA检测细胞上清中TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、IL-1β水平;免疫荧光检测IV型胶原纤维(Collagen IV)、纤连蛋白(FN)蛋白表达;Western blot检测结缔组织生长因子(CTGF)、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达。结果HBZY-1细胞成功高表达YAP1/TAZ;与Ct组比较,HG组HBZY-1细胞OD450值、TNF-α、MCP-1、IL-1β、Collagen IV、FN蛋白相对荧光强度、CTGF、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达升高(P<0.05);与HG组比较,LQ-L组、LQ-H组HBZY-1细胞OD450值、TNF-α、MCP-1、IL-1β、Collagen IV、FN蛋白相对荧光强度、CTGF、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达降低(P<0.05);与HG组、pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-YAP/TAZ组HBZY-1细胞OD450值、TNF-α、MCP-1、IL-1β、Collagen IV、FN蛋白相对荧光强度、CTGF、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达升高(P<0.05);pcDNA3.1-YAP/TAZ减弱了高剂量LQ对HG诱导的HBZY-1细胞炎症反应及纤维化的抑制作用。结论LQ可能通过抑制Hippo/YAP/TAZ通路抑制HG诱导的HBZY-1细胞炎症反应及纤维化。

川陈皮素调节YAP/TAZ信号通路对OGD/R诱导神经元细胞铁死亡的影响

目的探究川陈皮素(NOB)调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的神经元铁死亡的影响。方法常规培养小鼠海马神经元HT22细胞,采用OGD/R诱导HT22建立细胞损伤模型,将HT22细胞随机分为对照组(Control组)、模型组(OGD/R组)、低浓度NOB组(NOB-L组,15μmol/L NOB)、高浓度NOB组(NOB-H组,30μmol/L NOB)和高浓度NOB+YAP激活剂XMU-MP-1组(NOB-H+XMU-MP-1组,30μmol/L NOB+5μmol/L XMU-MP-1)。CCK-8法检测5组HT22细胞活力;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测5组HT22细胞谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平;活性氧(ROS)试剂盒检测细胞ROS水平。特异性荧光探针法检测细胞内铁含量;Western Blot检测5组HT22细胞中YAP/TAZ信号通路相关蛋白和铁死亡指标蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、酰基合成酶长链家族成员4(ACSL4)的表达。结果与Control组比较,OGD/R组HT22细胞OD_(450)(48 h、72 h)、GSH水平、SLC7A11、GPX4蛋白表达显著下降(P<0.05),MDA、ROS水平、铁离子水平、ACSL4、YAP、TAZ蛋白表达显著上升(P<0.05)。与OGD/R组比较,NOB-L组、NOB-H组HT22细胞相关指标变化与上述相反(P<0.05)。YAP激活剂XMU-MP-1减轻了NOB对OGD/R诱导的神经元铁死亡的抑制作用。结论NOB可能通过抑制YAP/TAZ信号通路减轻OGD/R诱导的神经元铁死亡。

25-OH维生素D通过调控TGF-β介导的YAP/TAZ核转位机制对新生儿感染性肺炎的抗炎作用研究

目的探讨25-OH维生素D(25-OH vitamin D,25-OH-VD)对新生儿感染性肺炎(neonatal infectious pneumonia,NIP)的抗炎作用及其作用机制。方法选取2022年1月~2023年1月成都市妇女儿童中心医院收治的65例NIP患儿,根据病情严重程度,分为轻症组(n=34)和重症组(n=31),另选取同期60例健康新生儿为对照组。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清25-OH-VD,白细胞介素-2(inteleukin-2,IL-2)、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和IL-1β水平;蛋白免疫印迹法检测外周血单个核细胞中维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、细胞核转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)/Yes相关蛋白(nucleus-Yes-associated protein,n-YAP)和细胞核转录共激活因子PDZ结合基序(nucleus-transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,n-TAZ)通路相关蛋白表达。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激人肺上皮细胞构建NIP体外模型,分为Control组、LPS组和LPS+VD组;CCK-8检测细胞活力;qRT-PCR检测各组细胞中细胞色素P450家族成员28B1(recombinant cytochrome P45027B1,CYP27B1)和VDR的mRNA表达;免疫细胞化学法检测各组细胞YAP阳性细胞核数;免疫荧光检测各组细胞YAP/TAZ复合物核转位;蛋白免疫印迹法检测各组细胞炎性因子相关蛋白表达。结果与对照组相比,轻症组和重症组患儿血清中IL-2(1.91±0.18μg/L,2.63±0.27μg/L vs 1.05±0.12μg/L),IFN-γ(1.73±0.13μg/L,2.18±0.19μg/L vs 1.03±0.07μg/L),TNF-α(1.79±0.08μg/L,2.38±0.13μg/L vs 0.97±0.04μg/L)和IL-1β(2.18±0.07μg/L,2.59±0.11μg/L vs 0.96±0.02μg/L)含量以及TGF-β(1.67±0.21,2.43±0.42 vs 1.02±0.04),n-YAP(2.08±0.11,4.23±0.37 vs 0.99±0.02)和n-TAZ(2.47±0.42,4.21±0.58 vs 1.03±0.05)蛋白表达逐渐升高,25-OH-VD(12.57±2.21μg/L,7.85±2.03μg/L vs 16.76±1.02μg/L)含量和VDR(0.73±0.09,0.51±0.06 vs 1.03±0.08)蛋白表达逐渐降低,差异具有统计学意义(F=18.983~56.782,均P<0.001)。细胞实验结果显示,与Control组相比,LPS组细胞存活率在12h(76.23%±0.73%vs 116.72%±2.14%),24 h(57.23%±0.94%vs 125.76%±1.67%)和48 h(41.23%±0.56%vs 138.56%±1.35%)时显著降低(t=10.342,26.562,37.821);YAP阳性细胞数(47.35±3.47个vs 12.46±1.34个)和YAP/TAZ复合物核转位率(2.56%±0.32%vs 1.01%±0.06%)升高(t=46.362,26.921);IL-2(2.03±0.09 vs 1.03±0.08),IFN-γ(2.07±0.21 vs 1.02±0.04),TNF-α(2.18±0.11 vs 0.99±0.02)和IL-1β(3.17±0.42 vs 1.03±0.05)的蛋白表达水平升高(t=28.341,26.713,31.235,47.823),差异具有统计学意义(均P<0.001),而两组间CYP27B1和VDR mRNA表达差异无统计学意义(t=0.872,0.786,均P>0.05)。与LPS组比较,LPS+VD组在12 h(85.23%±0.36%),24 h(79.82%±0.63%),48 h(76.28%±0.72%)的细胞存活率和CYP27B1(4.42±0.14),VDR mRNA(5.13±0.56)表达升高,YAP阳性细胞核数(24.41±3.23个)和YAP/TAZ复合物核转位率(1.47%±0.26%)降低,IL-2(1.21±0.06),IFN-γ(1.13±0.42),TNF-α(1.03±0.37)和IL-1β(1.61±0.58)蛋白表达降低,差异具有统计学意义(t=7.263,19.892,23.145,27.872,26.982,14.762,13.623,18.273,25.314,27.873,22.134,均P<0.01)。结论血清25-OH-VD水平与NIP严重程度相关,外源性给予VD补充可通过调控TGF-β介导的YAP/TAZ核转位机制发挥抗炎作用,减轻NIP损伤。

维生素K2调节YAP/TAZ信号通路对胆管癌细胞化疗耐药性的影响

目的:探究维生素K2(VK2)调节Yes相关蛋白(YAP)/PDZ结合基序转录共激活子(TAZ)信号通路对胆管癌(CCA)细胞化疗耐药性的影响。方法:将QBC939细胞设为对照组(Control组,空白培养基处理),QBC939/ADM细胞随机分为5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药组、低浓度VK2组、中浓度VK2组、高浓度VK2组、高浓度VK2+YAP激活剂JASP组。CCK-8法检测细胞增殖能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。流式细胞术检测细胞凋亡。采用Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase3和YAP/TAZ信号通路相关蛋白表达。结果:与Control组相比,5-FU组细胞OD450值(48 h、72 h)、细胞迁移率、细胞侵袭数目、细胞YAP、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著上升(P<0.05),细胞凋亡率、细胞Bax、Caspase-3蛋白表达显著下降(P<0.05)。与5-FU组相比,VK2-M组、VK2-H组细胞的相应指标变化与上述相反(P<0.05)。JASP减弱了VK2逆转CCA化疗药物耐药性的作用。结论:VK2可能通过抑制YAP/TAZ信号通路,逆转CCA细胞对化疗药物的耐药性。

和厚朴酚促进肺癌细胞凋亡的分子机制研究

目的:研究和厚朴酚(HNK)对H1299、H460细胞凋亡的影响,并初步探讨其相关分子机制。方法:体外培养非小细胞肺癌(NSCLC)H1299、H460细胞,用不同浓度的HNK处理48 h。采用MTT法检测细胞活力;采用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期抑制情况;采用Western blot检测PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、Bcl-2、caspase-3等蛋白的表达量。结果:H1299和H460细胞经HNK处理后,与对照组相比,各浓度组细胞活力均下降且在各处理时间下细胞活力均下降(P<0.05);Western blot结果显示TAZ、Bcl-2蛋白表达量随着HNK浓度的增加而降低;cleaved-caspase3、cleaved-PARP蛋白表达量随着HNK浓度的增加而增加;caspase-3和PARP蛋白表达量随HNK浓度的增加而无明显变化;不同浓度HNK处理后,与阴性对照组相比,细胞凋亡率增加(P<0.05);HNK处理后过表达TAZ,与阴性对照组相比,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:HNK可以促进NSCLC H1299和H460细胞的凋亡,其机制可能是通过抑制TAZ发挥作用。

甜橙黄酮调节YAP/TAZ轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探究甜橙黄酮(Sinensetin, SIN)调节Yes相关蛋白(YAP)/PDZ结合域的转录共刺激因子(TAZ)轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响。方法:免疫组织化学和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测120例宫颈癌组织、癌旁组织中YAP、TAZ表达。以不同浓度SIN(0、5、10、25、50、100、200μg/mL)处理宫颈癌细胞,检测细胞活力。将SiHa细胞分为对照(control)组、SIN低、中、高剂量(SIN-L、M、H)组、SIN-H+XMU-MP-1组,EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测YAP、TAZ、PCNA、Bax、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白表达水平。构建宫颈癌裸鼠模型,分为NC组、SIN组、SIN-H+XMU-MP-1组,测量肿瘤质量与体积,HE染色观察肿瘤组织形态,免疫组化法检测肿瘤组织Ki67、YAP、TAZ蛋白表达。结果:120例宫颈癌组织中YAP阳性率、TAZ阳性率显著升高(P<0.05);宫颈癌组织中YAP、TAZ mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。宫颈癌细胞CaSki、C-33A、HeLa、SiHa细胞活力随着SIN浓度的升高而逐渐降低(P<0.05),选择SiHa作为后续实验细胞,选择25、50和100μmol/L的SIN作为后续实验浓度。与对照组相比,SIN-L、M、H组细胞EdU阳性率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、N-cadherin蛋白表达显著下降,凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05);与SIN-H组相比,SIN-H+XMU-MP-1组细胞EdU阳性率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、N-cadherin蛋白表达显著升高,凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05)。SIN能够抑制肿瘤体积和质量,促进肿瘤组织坏死,降低Ki67、YAP、TAZ阳性表达。结论:SIN能够抑制宫颈癌细胞增殖和上皮间质转化,促进凋亡,其作用机制可能与抑制YAP/TAZ轴有关。

敲低转录共激活子对胶质瘤细胞生物学特性的影响

目的 研究敲低带PDZ结合域的转录共激活子（transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ）表达后对胶质瘤细胞株细胞生物学特性的影响.方法 采用TAZ小干扰RNA（TAZsiRNA）敲低LN229和SNB19细胞株中TAZ表达,用实时定量聚合酶链式反应（real time-PCR） 及蛋白免疫印迹法（Western blot）分别鉴定转染后TAZ敲除效果,噻唑兰比色法检测两种细胞株的增殖能力变化;流式细胞术检测细胞凋亡的改变;划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化;Western blot法检测凋亡、增殖及侵袭等相关蛋白的表达变化.结果 转染TAZ siRNA可显著敲低LN229和SNB19细胞株中TAZ mRNA及蛋白表达水平;两种细胞株中TAZ被抑制后,细胞增殖率均下降且呈逐渐下降趋势,而细胞凋亡率分别增高至（12.05±0.65）％和（8.02 ±0.66）％（LN229：F=414.2,P=0.000;SNB19：F=156.8,P=0.000）;两细胞株TAZ siRNA组细胞穿膜细胞数与对照组和无义序列组相比明显降低,划痕间隙融合能力也显著降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;Western blot法检测显示转染后细胞增殖核抗原（Kiel 67 antigen,Ki-67）、B淋巴细胞瘤2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、基质金属蛋白酶9（matrix metallopeptidase 9,MMP-9）等增殖、凋亡及侵袭相关蛋白表达明显下调.结论 敲低TAZ可抑制胶质瘤细胞株LN229和SNB19增殖和侵袭能力,提示TAZ可能成为治疗胶质瘤的新靶点.

微小RNA-125a-5p对人鼻咽癌细胞增殖的影响及机制

目的探究微小RNA-125a-5p(miR-125a)对人鼻咽癌细胞(HK-1细胞)增殖的影响及机制。方法常规培养HK-1细胞及人胚肾细胞永生化细胞系(293T细胞),将HK-1细胞随机分为对照1组、过表达miR-125a组(转染miR-125a mimics)、沉默miR-125a组(转染miR-125a inhibitor);另取部分HK-1细胞随机分为对照2组、miR-125a过表达组(转染miR-125a mimics)及回补组[转染miR-125a mimics同时过表达含PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)]。转染48 h后检测miR-125a表达验证转染效率。用RT-qPCR法检测miR-125a-5p、TAZ mRNA;用Western blotting法检测TAZ蛋白;CCK-8实验、集落形成实验检测细胞增殖能力;通过预测网站TargetScan(http://www.targetscan.org/)和miRDB(http://mirdb.org/)预测miR-125a与TAZ的结合位点。将293T细胞随机分为4组,WT+miR-ctrl组共转染TAZ野生型(TAZ-WT)和miR-125a空载对照(miR-ctrl)、Mut+miR-ctrl组共转染TAZ突变型(TAZ-MUT)和miR-ctrl、WT+miR-125a组共转染TAZ-WT和miR-125a模仿物(miR-125a)、Mut+miR-125a组共转染TAZ-MUT和miR-125a,用双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-125a的下游靶点。结果对照1组、过表达miR-125a组、沉默miR-125a组miR-125a的相对表达量比较差异有统计学意义(P均<0.05)。对照1组、过表达miR-125a组、沉默miR-125a组转染后第2、3、4、5、6天增殖活力(OD450值)比较差异均有统计学意义(P均<0.05)、集落形成数比较差异有统计学意义(P均<0.05)。对照1组、过表达miR-125a组、沉默miR-125a组TAZ蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(P均<0.05)。网站预测显示miR-125a与TAZ存在结合位点,设计突变型序列(TAZ-3’UTR MT),miR-125a与TAZ的非编码区结合,miR-125a的直接下游靶点为TAZ。WT+miR-125a组相对荧光强度低于WT+miR-ctrl组、Mut+miR-ctrl组(P均<0.05),Mut+miR-125a组相对荧光强度与WT+miR-ctrl组、Mut+miR-ctrl组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。对照2组、miR-125a mimics组、miR-125a mimics+TAZ组转染后第2、3、4、5、6天增殖活力比较差异有统计学意义(P均<0.05),集落形成数比较差异有统计学意义(P均<0.05)。结论miR-125a可抑制鼻咽癌细胞增殖,其作用机制与抑制其下游靶点TAZ的表达有关。

p53和TAZ在三阴性乳腺癌中的表达和意义

目的:研究三阴性乳腺癌(TNBC)组织中p53与TAZ的表达和意义,并探讨其与TNBC病人临床病理特征的关系。方法:收集病理确诊的浸润性乳腺癌60例[TNBC组30例,非三阴性乳腺癌(non-TNBC)组30例],应用免疫组织化学方法检测60例乳腺癌组织中p53和TAZ的表达情况,并分析它们与TNBC病人的年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期及组织学分级等的关系。结果:TAZ在TNBC组织中的表达高于non-TNBC组(P<0.01);年龄≤45岁、肿瘤>2 cm的p53的阳性表达率较高(P<0.05),肿瘤>2 cm、组织学分级Ⅰ~ⅡTAZ的阳性表达率较高(P<0.01和P<0.05);在TNBC中,p53与TAZ的表达呈正相关(rs=0.381,P<0.05)。结论:TAZ可能与TNBC的发生发展有关。