心肌营养素-1上调大鼠心肌转录因子GATA4 mRNA的表达

[目的]研究心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)对心肌转录因子GATA4 mRNA表达的影响。[方法]应用RT-PCR半定量技术,分别测定不同刺激剂量CT-1作用24 h及0.1nmol/L的CT-1作用不同时间后,大鼠心肌细胞GATA4 mRNA表达情况。[结果]心肌细胞GATA4 mRNA表达值在0.001 nmol/L、0.01 nmol/L、0.1 nmol/L1、nmol/L及10 nmol/L的CT-1作用24 h后分别为0.504±0.044、0.73±0.029、1.217±0.023、2.109±0.11、2.613±0.089;与对照组0.445±0.024相比,0.01nmol/L以上组均差异显著(P<0.05);在0.1 nmol/L的CT-1作用10 min、30 min1、h、2 h3、h、6 h1、2 h及24 h后分别为0.591±0.2、0.613±0.096、0.618±0.088、0.608±0.132、0.657±0.055、1.109±0.089、1.309±0.111、1.323±0.074;与对照组0.55±0.1067相比,6 h以后均表现为极显著性差异(P<0.01)。[结论]CT-1刺激与大鼠心肌转录因子GATA4 mRNA表达有明显的相关性。

KLF4在肾透明细胞癌侵袭和迁移中的作用及其与SKA1的靶向调控关系探讨

目的探讨肾透明细胞癌(ccRCC)组织中锌指转录调节因子4(KLF4)的表达变化,及其调控纺锤体和动粒相关复合体亚基1(SKA1)促进ccRCC细胞侵袭、迁移的作用。方法从癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库下载440例ccRCC原位癌组织和80例伴有远处转移的ccRCC组织的转录组测序数据,分析KLF4在原位癌组织和伴有远处转移癌组织中的表达差异。取人肾癌细胞786-O、ACHN,分为KLF4过表达组、空载体组、共表达KLF4/SKA1组,采用慢病毒载体技术,分别转染pCMV-KLF4、pCMV、pCMV-KLF4和pCMV-SKA1质粒;采用Transwell小室实验观察各组细胞侵袭和迁移能力,Western blotting法检测细胞上皮间质转化相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达。取786-0、ACHN细胞,分为KLF4干扰组及干扰对照组、KLF4过表达组及空载体组,KLF4干扰组和干扰对照组分别转染siKLF4和siNC,KLF4过表达组和空载体组分别转染pCMV-KLF4、pCMV质粒;采用实时荧光定量PCR法检测细胞SKA1 mRNA表达,Western blotting法检测细胞SKA1蛋白表达;利用Jaspar和ConTra V3在线工具分析预测KLF4在SKA1启动子区的结合位点,并采用双荧光素酶报告实验进行验证。结果KLF4在伴有远处转移的ccRCC组织中的表达低于ccRCC原位癌组织(P<0.01)。在786-O和ACHN细胞中,与空载体组相比,过表达KLF4组细胞侵袭和迁移能力降低(P均<0.01);与过表达KLF4组比较,共表达KLF4/SKA1组细胞侵袭和迁移能力增加(P均<0.01)。与空载体组相比,过表达KLF4组E-cadherin蛋白表达水平升高、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平降低;与过表达KLF4组比较,共表达KLF4/SKA1组E-cadherin蛋白表达水平降低、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平升高(P均<0.05)。与siNC组相比,siKLF4组SKA1 mRNA及蛋白表达水平均升高;与pCMV空载体组相比,pKLF4过表达组SKA1 mRNA及蛋白表达水平均下降(P均<0.01)。SKA1转录起始位点上游850~900 bp启动子序列中存在KLF4的结合位点。双荧光素酶报告实验结果显示,与pSKA1-MUT+pKLF4/pCMV、pSKA1-WT+pCMV组比较,pSKA1-WT+pKLF4组荧光素酶活性降低(P均<0.01)。结论KLF4表达下调与ccRCC恶性进展相关,KLF4可通过结合SKA1启动子区特定序列负向调控SKA1表达,从而抑制ccRCC细胞的侵袭和迁移。

心肌营养素-1对三个主要心肌转录因子转录表达的选择性的研究

目的研究心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)对三大主要心肌转录因子的选择性作用,在转录因子水平探讨CT-1肥大刺激作用的特殊机制。方法应用半定量RT-PCR及免疫组化技术,鉴定CT-1对心肌细胞形态学影响。测定CT-1对大鼠心肌细胞GATA4、MEF2以及NKX2-5基因转录的时间、剂量依赖影响。结果GATA4与NKX2-5的表达均与CT-1具有时间、剂量依赖关系,而CT-1则未对MEF2的表达产生影响。从作用时间上看,NKX2-5的表达在1×10-10mol/L的CT-1刺激1h时即开始明显增加,而GATA4的表达则在3h时显著性增加,NKX2-5的表达增强的时间较GATA4略早。结论CT-1以时间和剂量依赖性的方式上调大鼠心肌细胞GATA4及NKX2-5mRNA表达,对大鼠心肌细胞MEF2mRNA表达没有明显影响。

耐力训练对心肌PERK/eIF2α/ATF4信号通路激活的影响

探讨内质网应激机制在耐力训练对心肌功能影响过程中的作用。方法:通过建立不同运动方式、运动训练状态和不同恢复阶段的动物模型,测定心肌中与内质网应激相关的信号通路PERK/eIF2α/ATF4激活水平的变化。结果:无论是急性运动,还是4或10周的递增负荷耐力训练,都没有显著激活PERK/eIF2α/ATF4信号通路,但是以延长运动时间为特征的耐力训练能够激活PERK/eIF2α/ATF4信号通路。结论:以递增运动时间为特征的耐力训练能够激活PERK/eIF2α/ATF4信号通路,该通路的激活对运动心肌的结构和功能变化可能产生影响。