斯钙素2、转移抑制基因23-H1在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的探讨宫颈癌组织中糖蛋白激素蛋白斯钙素2(STC2)、转移抑制基因23-H1(NM23-H1)的表达情况及其临床意义。方法收集90例宫颈癌患者(宫颈癌组)的病变组织,再收集30例健康女性(正常组)的宫颈组织,采用免疫组织化学法检测组织中STC2、NM23-H1表达情况,并分析其与宫颈癌患者临床特征的关系。结果宫颈癌组组织中STC2阳性表达率明显高于正常组,NM23-H1阳性表达率明显低于正常组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Spearman相关性分析显示,STC2阳性表达与宫颈癌的发生呈正相关(r=0.358,P﹤0.01),NM23-H1阳性表达与宫颈癌的发生呈负相关(r=-0.361,P﹤0.01)。不同浸润深度、分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况的宫颈癌患者的宫颈癌组织中STC2阳性表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);不同淋巴结转移情况的宫颈癌患者的宫颈癌组织中NM23-H1阳性表达情况比较,差异有统计学意义(P﹤0.05)。Logistic回归分析结果显示,浸润深度﹥1/2肌层、低~未分化、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结转移均是STC2阳性表达的独立危险因素(P﹤0.05),淋巴结转移是NM23-H1阴性表达的独立危险因素(P﹤0.05)。结论宫颈癌组织中STC2、NM23-H1表达存在明显异常,并与宫颈癌的发生、发展密切相关,浸润深度﹥1/2肌层、低~未分化、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结转移是影响STC2阳性表达的独立危险因素,淋巴结转移则是影响NM23-H1阴性表达的独立危险因素。

转移抑制基因nm23-H_1在人非小细胞肺癌中的表达研究

目的探讨ｎｍ２３－Ｈ１基因表达产物的表达水平与肺癌发生、发展和转移的关系。方法应用免疫组织化学法研究人非小细胞肺癌细胞中ｎｍ２３－Ｈ１基因表达产物的表达水平。结果ｎｍ２３－Ｈ１在肺癌组织中的表达水平（５４．０３％）明显低于癌旁正常肺组织（７３．４８％，Ｐ＜０．０１）。有淋巴结转移的原发癌ｎｍ２３－Ｈ１表达水平明显低于无淋巴结转移的原发癌（Ｐ＜０．０１）；转移癌组织表达水平明显低于原发癌组织（Ｐ＜０．０１）；低分化肺癌明显低于中－高分化肺癌（Ｐ＜０．０１）。结论ｎｍ２３－Ｈ１基因可能参与肺癌的发生、发展和转移过程的调控，ｎｍ２３－Ｈ１基因表达水平降低，预示肺癌的转移和预后不良。

肿瘤转移抑制基因Nm23-H1融合蛋白的表达纯化及其功能的初步研究

目的利用人Nm23-H1基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白,并对蛋白其活性进行初步分析。方法将重组质粒pET28a-Nm23-H1转化入E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达并鉴定。用金属螯合层析技术进行蛋白纯化,得到Nm23-H1融合蛋白,用SDS-PAGE及Western blot鉴定纯化蛋白,并用RP-HPLC法、电泳迁移率变动分析实验检测Nm23-H1融合蛋白的核苷二磷酸激酶(NDPK)活性及核酸内切酶(AP)修复活性。结果转化溶原菌后能够表达目的蛋白,蛋白表达量高,为可溶性蛋白。Ni2+柱纯化后得到Nm23-H1融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确。RP-HPLC法就及电泳迁移率变动分析实验证明所纯化的Nm23-H1融合蛋白具有NDPK活性,不具有AP修复活性,但可以增加APE1蛋白的AP修复活性。结论利用原核表达载体pET28a-Nm23-H1在E.coliBL21(DE3)中高效表达和纯化得到具有NDPK活性,但无AP修复活性的Nm23-H1融合蛋白,此蛋白可以增强APE1蛋白的AP修复活性,共同参与细胞的DNA损伤修复。

nm23-H_1肿瘤转移抑制基因在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的：研究ｎｍ２３－Ｈ１基因在肝癌中的表达。方法：应用免疫组化方法对１０４例肝细胞癌组织进行了ｎｍ２３－Ｈ１基因蛋白产物的检测，并结合术后随访资料分析了ｎｍ２３－Ｈ１的表达与患者预后的关系。结果：肝癌组织中ｎｍ２３－Ｈ１阳性产物主要表达在细胞浆内，阳性表达率为５１．９２％（５４／１０４）。ｎｍ２３－Ｈ１蛋白的表达与癌旁伴肝硬化病变以及肝细胞癌的侵袭生长和门静脉癌栓转移呈负相关。值得注意的是，ｎｍ２３－Ｈ１基因在肝癌切除术后无瘤生存期大于５～１０年以上病例中的阳性表达率高达８０％（２４／３０），而在术后１２～３２个月复发病例中的阳性表达率仅占２６．０９％（１２／４６）。结论：ｎｍ２３－Ｈ１低表达与癌肿复发密切相关，高表达是患者术后长期生存的一个重要因素。临床开展ｎｍ２３－Ｈ１基因的检测，对癌肿转移的早期诊断、确定合理治疗方案、提高治疗效果具有重要意义。

肿瘤转移抑制基因nm_(23)-H_1在口腔粘膜鳞癌和癌前病变中的表达及意义

目的 :通过观察肿瘤转移抑制基因nm2 3 -H1在正常口腔粘膜 (NM)、口腔粘膜白斑 (LK)及口腔粘膜鳞癌 (OSCC)中的不同表达 ,分析其在OSCC及其癌变过程中的表达规律 ,探讨其与肿瘤的分化、浸润和转移的关系。方法 :采用免疫组织化学SP法检测nm2 3 -H1在 8例NM、12例LK及 5 8例OSCC中的不同表达 ,用x2 检验Fisher精确概率法对检测结果进行统计学分析。结果 :nm2 3 -H1在NM及LK中多数为高染 ,分别占 87 2 5 %和 83 3% ,而在OSCC中低染率为 5 6 90 % ,与前两者相比存在着显著差异 (p<0 0 5 ) ;nm2 3 H1的异常表达与肿瘤的分化程度及有无颈淋巴结转移 ,都存在显著相关性 (p <0 0 5 )。结论 :nm2 3 -H1蛋白表达水平是判断肿瘤有无颈淋巴结转移及其分化程度的参考指标。

转移抑制基因nm23-H_1蛋白表达与结直肠癌的关系

目的:研究转移抑制基因ｎｍ２３－Ｈ１蛋白表达与结直肠癌生物学行为的关系,探讨ｎｍ２３－Ｈ１基因表达在结直肠癌发牛发展中的作用。方法:采用免疫组化技术,对４６例结直肠癌组织中ｎｍ２３－Ｈ１基因的表达状态进行定位观察。结果:结直肠癌ｎｍ２３－Ｈ１基因蛋白阳性表达率为４３．５%;ｎｍ２３－Ｈ１基因的表达与结直肠癌的分化程度及肿块大小无显著性差异(Ｐ＞０．０５),但与结直肠癌的淋巴结转移、临床分期以及侵犯深度有相关差异(Ｐ＜０．０５);随着转移的发生、侵犯深度的增加以及疾病向晚期发展,ｎｍ２３－Ｈ１基因的阳性表达率逐渐下降,直至完全失活。结论:作为肿瘤转移抑制基因,ｎｍ２３－Ｈ１基因在调控癌细胞增殖、抑制癌细胞转移方面起着重要的作用;ｎｍ２３－Ｈ１蛋白可作为临床判断结直肠癌侵袭转移、临床分期和患者预后的指标之一。

转移抑制基因nm23-H_1在人肺癌中的表达

目的 探讨人肺癌中nm 2 3 H1基因的表达水平与肺癌发生、发展和转移的关系。方法 应用免疫组织化学法对 6 9例人肺癌组织中nm2 3 H1基因表达产物NDPK的表达水平及其与肺癌淋巴结转移的关系进行研究。结果 人肺癌组织中nm2 3 H1的表达水平与其性别、年龄、PTNM分期、组织类型无明显关系 ,而与肺癌细胞分化程度以及淋巴结转移有密切关系。肺癌组织中的nm2 3 H1表达低于癌旁正常肺组织 (P <0 .0 5 ) ,有淋巴结转移的肺癌原发灶中nm 2 3 H1的表达水平低于无淋巴结转移的肺癌原发灶 (P <0 .0 5 ) ,肺癌转移灶 (淋巴结 )中的nm2 3 H1的表达水平明显低于肺癌原发灶 (P <0 .0 1) ,分化差的肺癌中的nm 2 3 H1表达水平低于分化较好的肺癌 (P <0 .0 5P <0 .0 0 5 )。结论 nm 2 3 H1基因与肺癌淋巴结转移有关 ,并可能参与肺癌淋巴结转移过程中的调节并起转移抑制基因的作用 ,nm2 3 H1基因表达水平的降低预示肺癌的转移和预后不良。nm2 3 H1基因可能是监测肺癌患者病情发展及评估预后的有用指标。

肿瘤转移抑制基因KISS-1和NM23-H1的原核表达与纯化

从人胎盘组织和乳腺癌细胞中克隆得到肿瘤转移抑制基因KISS-1和NM23-H1,经Blast比对分析与GenBank公布序列同源性达100%。NM23-H1在大肠杆菌中成功表达,大部分为可溶性蛋白,占总蛋白50%以上,经纯化后纯度达到90%;而KISS-1需要与载体的部分序列融合才能够得到有效表达,表达产物为不可溶的包涵体蛋白,占包涵体总量的70%以上,经纯化后KISS-1蛋白可能形成多聚体结构。

人肿瘤转移抑制基因NM23-H1抑制卵巢癌转移机制体内体外实验研究

目的研究卵巢癌的人转移抑制基因NM23H1转移抑制的机制。方法首先构建由人肿瘤转移抑制基因NM23H1及真核细胞表达载体PcDNA3.1/zero构建成重组质粒PcDNA.NM23H1,并将其转染到高转移卵巢癌细胞株HO8910。体外实验:通过细胞DNA合成的流式细胞仪分析,以发现NM23H1对癌细胞生长的改变采用成集落实验,以观察转染组对转化生长因子(TGF)β刺激形成的集落数及细胞数并与对照组对比。同时检测转染组对化疗药物顺铂的敏感性。体内实验:将转染细胞注射于裸鼠皮下观察成瘤时间和肿瘤转移情况。结果NM23H1对卵巢癌细胞生长有一定抑制作用;实验组与对照组比较,实验组所形成的集落少,集落中细胞数目也少;被转染的细胞比对照组对顺铂更敏感,细胞死亡数多;裸鼠体内实验表明NM23H1对卵巢癌有抑制生长作用,主要对淋巴道转移有一定程度的抑制作用。结论NM23H1经高转移卵巢癌细胞株的体外实验发现对卵巢癌细胞生长及转移均有一定抑制作用;可增加对顺铂治疗的敏感性;体内实验表明,NM23H1可抑制癌瘤生长,对卵巢癌淋巴道转移有一定抑制作用。

抗转移抑制基因nm23-H1在单结节型肝癌中的表达

研究ｎｍ２３－Ｈ１基因的表达与单结型肝癌的预后关系，组织切片应用免疫组化ＡＢＣ法染色。５９．４％为阳性染色，４０．６％为阴性染色。两组肿瘤大小、包膜形成，侵及包膜、浆膜、肝内血管和胆管，肝内转移，细胞分化程度没有显著性差异。术后１年复发率阴性染色组（５３．８％）明显高于阳性染色组（５．３％）；３年以上生存率阳性染色组（６３．２％）明显高于阴性染色组（２３．１％）。结果表明：ｎｍ２３—Ｈ１的基因表达。

nm23-H1基因杂合性缺失及突变与大肠癌转移抑制

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交和ＲＴＰＣＲＳＳＣＰ银染、克隆及序列测定检测了３６例大肠癌组织标本中ｎｍ２３Ｈ１杂合性缺失和突变情况。结果：本组标本ｎｍ２３Ｈ１杂合性缺失率为２９．６３％，Ｄｕｋｅ’ｓＤ期及远处转移大肠癌有较高的杂合性缺失发生率；大肠癌中未见ｎｍ２３Ｈ１基因突变。本实验结果提示：ｎｍ２３Ｈ１基因杂合性缺失可能参与大肠癌恶性进展及转移过程的调节，该基因突变在大肠癌中所起的作用可能较小。

转移抑制基因nm23-H_1在喉癌、下咽癌及其转移淋巴结中的表达

目的 :检测nm2 3-H1蛋白在喉癌、下咽癌及其淋巴结、声带息肉中的表达 ,阐明nm2 3-H1蛋白免疫反应下降与喉癌转移之间的关系。方法 :用常规链霉亲和素 -生物素 -过氧化物酶法 (SABC法 )nm2 3-H1多克隆抗体研究nm2 3-H1蛋白在 5 3例喉癌及其淋巴结、9例声带息肉中的表达。结果 :声带息肉及未转移淋巴结中均无基因产物的表达 ,喉癌及转移淋巴结中nm2 3-H1蛋白有不同程度的表达 ,喉癌的阳性表达率为 6 2 .5 % (n=32 ) ,转移淋巴结为 2 7.3% (n=11) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。 结论 :在喉癌转移淋巴结中nm2 3-H1基因表达较在喉癌中显著下降 ,nm2 3-H1。

转移抑制基因nm23-H_1与人类食管癌生物学特性关系的研究

目的 :研究转移抑制基因 nm2 3- H1与人类食管癌生物学特性的关系。方法 :采用 RT- PCR技术检测 33例食管癌及相应正常粘膜组织中 nm2 3- H1基因的变化 ,采用免疫组织化学染色技术检测33例食管癌及其相应的正常食管组织中转移抑制基因 nm2 3- H1蛋白 (NDPK)的表达情况。结果 :33例食管癌中有 2例 nm2 3- H1基因发生突变 ,并且该 2例均有淋巴结转移。 nm2 3- H1蛋白表达水平随浸润程度的增加表达下降 (P<0 .0 5 )。 nm2 3- H1蛋白在 LN(+ )组食管癌中表达率为 5 6 .3% ,在 L N(- )组表达率为 88.2 % ,两者差异有显著性 (P<0 .0 5 )。在临床病理分期方面 ,nm2 3- H1在 、 期表达水平明显低于 、 期。结论 :人类食管癌的发生、发展、浸润、转移与转移抑制基因 nm2 3- H1关系密切。

人卵巢癌中肿瘤转移抑制基因nm23-H1编码蛋白的表达

目的：探讨人卵巢癌标本中，肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３－Ｈ１编码蛋白ＮＤＰＫ－Ａ表达的临床意义及其与预后的关系。方法：应用免疫组织化学抗生蛋白链菌素－过氧化酶结合（Ｓ－Ｐ）法，检测５８例人卵巢癌标本中ｎｍ２３－Ｈ１蛋白水平。结果：ｎｍ２３－Ｈ１蛋白的表达与患者手术时是否有淋巴结及大网膜转移相关（Ｐ＜０．０５），但原发灶与转移灶间的阳性表达率相差不显著；与患者术后生存时间密切相关（Ｐ＜０．０１），术后生存时间超过两年者，其阳性表达率明显高于不足两年者。结论：ｎｍ２３－Ｈ１基因产物在人卵巢癌的扩散和转移过程中确实发挥抑制作用，它在卵巢癌组织中的表达。

肿瘤转移抑制基因nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞株的转染及表达

目的:探讨nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞株的转染及表达。方法:采用已经通过基因工程技术构建的nm23-H1基因的真核表达载体,利用电穿孔基因转染技术将nm23-H1基因导入人膀胱癌T-24细胞,利用G418筛选、免疫组织化学、流式细胞方法检测nm23-H1基因的转录和表达情况。结果:以电穿孔转染技术将nm23-H1基因转染T-24细胞后,经400ml/L的G418筛选后可形成抗性克隆;免疫组织化学和流式细胞结果显示转基因细胞中有nm23-H1蛋白的阳性高表达。结论:nm23-H1基因可被成功转染入人膀胱癌T-24细胞并能有效表达。

nm23-H1基因抑制口腔癌细胞的侵袭转移行为机制的实验研究

[目的]将nm23-H1导入口腔癌BcaCD885细胞株,观察nm23-H1对BcaCD885细胞株侵袭转移能力的影响,并对相关机制进行分析。[方法]制备高纯度的nm23-H1真核表达质粒,并用阳离子脂质体介导的转染技术,完成转染方法的建立。检测转染前后的NDPKA的表达并观察转染前后细胞的侵袭转移行为能力的变化。[结果]将nm23-H1转染口腔癌细胞,获得了稳定表达,发现BcaCD885细胞株nm23-H1基因的转染前后表达水平有明显差异,实验组和对照组的侵袭细胞相对数目分别为41.1％±1.2％和64.5％±6.3％,趋化运动细胞相对数目为50.0％±6.3％和81.0％±3.9％,实验组的粘附能力也显著降低。[结论]nm23-H1对BcaCD885细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用。

转移抑制基因nm23-H_1表达与皮肤癌关系的研究

目的:研究有或无转移性皮肤癌nm23-H1的表达可否作为预后判断的指标。方法:用免疫组织化学技术SP法检查38例基底细胞癌及71例皮肤鳞状细胞癌,比较其nm23-H1过表达率。结果:基底细胞癌过表达率71%(30/38),无转移鳞癌过表达率68%(26/44),有转移鳞癌为0.8%(1/12)。但阴茎鳞癌nm23-H1过表达并不降低转移率。结论:抑制转移基因nm23-H1)过表达与皮肤癌转移呈反相关,差别有显著意义,可作为判断预后指标之一。

人喉鳞癌肿瘤转移抑制基因nm23-H1的分子遗传学研究

目的 在DNA水平上 ,进一步证实nm2 3基因与喉鳞癌转移的关联及在喉鳞癌中的突变模式。方法 应用PCR体外扩增技术、PCR SSCP银染技术及DNA测序技术对 2 3例喉鳞癌及对照正常组织基因组nm2 3 H1基因进行了分子遗传学研究。结果 在部分喉鳞癌转移灶组织中存在nm2 3 H1基因点突变 ,3个突变位点分别位于第 82个密码子 (TTT CTT) ,第 10 6密码子 (GTT ATT)和第 12 1密码子 (ATG—GTG)。除第 10 6密码子为无意义突变外 ,其余二处突变编码的氨基酸分别由苯丙氨酸及蛋氨酸变成谷氨酸及组氨酸。结论 ①应用PCR SSCP银染技术检测喉癌nm2 3 H1转移抑制基因突变是一种快速、有效的实验手段。它具有敏感性高 ,不需特殊仪器和昂贵试剂 ,实验成本低廉 ,实验步骤简便等优点。②nm2 3 H1基因突变在喉鳞癌的转移中起一定的作用。一方面可能使微管聚合异常而引起减数分裂时纺锤体的异常 ,从而导致癌细胞染色体非整倍体的形成 ,进而促进肿瘤的发展 ;另一方面它可能通过影响细胞骨架而引起细胞运动 。

肿瘤转移抑制基因nm23-H_1 mRNA在乳腺癌中的转录表达

目的 探讨nm23-H1基因mRNA在乳腺癌组织中的表达及其与临床的关系.方法 采用半定量RT—PCR方法,检测30例乳腺癌组织nm23-H1的表达.结果 ①淋巴结阳性的原发灶组织nm23-H1 mRNA表达明显低于淋巴结阴性的原发灶组织,Ⅲ期乳腺癌组织nm23-H1 mRNA水平较I、Ⅱ期的明显低.②多因素分析发现淋巴结转移与nm23-H1 mRNA的表达有显著性相关.结论 nm23-H1基因mBNA表达强度与淋巴结转移呈负相关.在乳腺癌转移过程中,nm23-H1 mRNA起重要的作用.