程序性细胞死亡对骨关节炎软骨基质稳态的影响

骨关节炎(osteoarthritis,OA)为软骨退行性变为主要病理特征,是中老年患者关节疼痛、肢体残疾、生活质量降低的主要病症,其发病机制尚未完全阐明,目前临床尚无根治方法。软骨细胞外基质的破坏和异常稳态作为OA的标志和软骨再生的治疗靶点,越来越受到人们的重视。细胞程序性死亡是指为保持内环境稳定,由基因主导的细胞自主有序性死亡。已证实,细胞程序性死亡作用下软骨代谢稳态失衡和骨关节炎发生发展密切相关。本文总结细胞程序性死亡对骨关节炎软骨基质稳态的影响及可能的影响途径,不同死亡模式对软骨基质稳态的调控方式、影响特点。

重骨颗粒对膝骨关节炎IL-17、IL-35细胞因子及软骨基质代谢的影响

目的评价重骨颗粒治疗肝肾亏虚型膝骨关节炎临床疗效及对软骨基质代谢的影响。方法选取2020年12月至2021年10月住院或门诊KOA患者,将其随机分为2组,每组30例。治疗组方案为盐酸氨基葡萄糖0.75 g/次,2次/d;对照组为重骨颗粒每次10 g,每日2次,两组均连续服用12周。每组治疗前后采取视觉模拟评分法(VAS)评分、WOMAC骨关节炎评分、Lequesne指数评分、中医证候积分来评定两组疾病活动度并检测C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)水平,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测IL-17、IL-35水平及基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、血清软骨寡聚基质蛋白(COMP)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)、蛋白聚糖水平。结果治疗后各组KOA患者WOMAC评分、VAS评分、Lequesne评分、中医证侯积分等均有明显改善(P<0.01),MMP-13、COMP及IL-17、CRP、ESR水平明显下降(P<0.01);BMP-2、蛋白聚糖及IL-35水平显著上升(P<0.05或P<0.01)。组间比较发现,治疗组疾病活动度评分、MMP-13、COMP及IL-17、CRP下降趋势更显著,BMP-2、蛋白聚糖及IL-35明显升高(P<0.05或P<0.01),总有效率优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论重骨颗粒治疗KOA可能是通过调控细胞因子的表达,减少软骨外基质的降解和破坏,从而改善临床症状,提高患者生活质量,具有较好的临床疗效。

基于金属蛋白酶抑制因子与基质金属蛋白酶之间的平衡探讨针刀对兔膝骨关节炎模型软骨基质降解的影响

目的基于金属蛋白酶抑制因子(TIMP)与基质金属蛋白酶(MMP)之间的平衡探讨针刀对兔膝骨关节炎(KOA)模型软骨基质降解的影响。方法采用随机数字表法将24只6月龄,体重(2.0±0.5)kg的健康雄性新西兰兔按照随机数字表法分为空白组、模型组和针刀组,各8只。KOA兔模型采用改良Videman法即左后肢伸直位石膏固定6周制备而成。针刀组利用针刀松解筋结病灶点,1次/周,共进行4次治疗;空白组与模型组做相同的抓取,但不采取任何干预。干预结束后1周,采用HE染色形态学、番红固绿染色变化观察各组兔软骨组织病理变化;RT-PCR检测软骨细胞CollagenⅡ、水通道蛋白(AQP)3,TIMP1、MMP13表达水平,Western blot检测CollagenⅡ、AQP3、TIMP、MMP13蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组软骨外观凹凸不平,软骨细胞聚集不规则,部分坏死细胞崩解,潮线紊乱,部分断裂;软骨细胞数量显著下降,软骨基质中番红色显著减少,部分有软骨缺损,潮线模糊且不清晰。与模型组比较,针刀组软骨外观更加平滑,结构层次更加清晰分明,细胞趋于整齐排列,潮线较模型组完整;不仅软骨数量增加,软骨基质中番红着色较正常,而且软骨外表相对光滑平整,潮线也相对完整。与空白组比较,模型组软骨组织CollagenⅡm RNA表达下调,AQP3、TIMP1、MMP13 m RNA表达上调(P<0.05);与模型组比较,针刀组软骨组织CollagenⅡm RNA表达上调,AQP3、TIMP1、MMP13 m RNA表达下调(P<0.05)。与空白组比较,模型组软骨组织CollagenⅡ蛋白表达下调,AQP3、TIMP1、MMP13蛋白表达上调(P<0.05);与模型组比较,针刀组软骨组织CollagenⅡ蛋白表达上调AQP3、MMP13蛋白表达下调(P<0.05);针刀组软骨组织TIMP1蛋白与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组行为学评分升高(P<0.05);与模型组比较,针刀组行为学评分下降(P<0.05)。结论针刀治疗通过调节TIMP/MMP的平衡,达到延缓软骨细胞外基质降解的进程,从而有效降低KOA炎症水平。

荣筋拈痛方调控软骨基质代谢防治膝骨关节炎

背景:前期研究发现荣筋拈痛方能有效抑制软骨基质降解。长链非编码RNA GAS5可作为竞争性内源性RNA吸附miR-21-5p调控基质金属蛋白酶的表达,进而影响关节软骨基质代谢。但荣筋拈痛方是否通过长链非编码RNA GAS5/miR-21调控软骨基质代谢,发挥防治骨关节炎的作用机制有待深入研究。目的:从长链非编码RNA GAS5/miR-21调控软骨基质合成与分解代谢角度,探讨荣筋拈痛方治疗SD大鼠膝骨关节炎的作用机制。方法:SPF级8周龄雄性SD大鼠60只,随机分为4组,即空白组、模型组、治疗组及对照组,每组15只。后3组采用改良Hulth法建立大鼠膝骨关节炎模型。造模后2周,空白组和模型组予生理盐水,治疗组予荣筋拈痛方汤剂,对照组予盐酸氨基葡萄糖胶囊水溶液,每天灌胃一次,共干预12周。药物干预结束后取材,采用苏木精-伊红染色、改良番红O-固绿染色观察软骨组织显微结构形态变化,实时荧光定量PCR法检测长链非编码RNA GAS5、miR-21的表达及基质代谢因子mRNA的表达,Western blot法检测软骨组织中基质代谢因子蛋白的表达。结果与结论:(1)软骨显微结构观察,模型组软骨4层结构紊乱,排列不规律,潮线及黏合线不规则或消失,软骨细胞增生肥大且排列紊乱,软骨下骨增生,胶原、蛋白多糖大量丢失;治疗组和对照组软骨4层结构、潮线可辨,软骨细胞排列较规律,软骨下骨结构较完整,胶原、蛋白多糖部分丢失;(2)与空白组相比,模型组软骨组织中长链非编码RNA GAS5及基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5 mRNA表达量升高(P<0.01或P<0.05),治疗组、对照组与模型组相比表达量降低(P<0.01或P<0.05);模型组软骨组织中miR-21及组织金属蛋白酶抑制因子3、Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA表达量降低(P<0.01或P<0.05),治疗组、对照组与模型组相比表达量升高(P<0.05);(3)与空白组相比,模型组软骨组织中组织金属蛋白酶抑制因子3、Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖蛋白表达降低(P<0.01或P<0.05),治疗组和对照组中表达升高(P<0.01或P<0.05);模型组软骨组织中基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5蛋白表达升高(P<0.01或P<0.05),治疗组和对照组中表达降低(P<0.01或P<0.05);(4)提示荣筋拈痛方下调膝骨关节炎大鼠软骨组织中长链非编码RNA GAS5、基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9等的表达,上调miR-21、组织金属蛋白酶抑制因子3、Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达,影响软骨基质分解和合成代谢,减少软骨基质中胶原、蛋白多糖的丢失,延缓软骨基质降解,减轻软骨组织形态结构的破坏。

可塑形脱细胞软骨基质材料的制备及性状研究

目的利用牛膝关节透明软骨进行脱细胞处理,制备新型可塑形生物材料,探讨脱细胞软骨基质作为组织工程载体材料的可行性。方法采集新鲜牛膝关节,切取关节表面透明软骨,冻干后低温粉碎为软骨微粒,胰酶、TritonX-100及低张Tris-HCl溶液联合作用进行脱细胞处理,冷冻干燥塑形,紫外线交联后制备脱细胞软骨基质材料。采用组织学、免疫组织化学、扫描电镜、孔隙率测定及生物力学检测等对材料的理化性状进行观察分析。取4只成年新西兰白兔骨髓制备BMSCs,传至第3代进行实验。观察浓度分别为100%、10%及1%的材料浸提液培养BMSCs0、24、48及72h后相对乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率,以含5%FBS的DMEM培养基作为阴性对照,观察细胞毒性作用;并将浓度为1×107个/mL的BMSCs单细胞悬液与材料复合培养,观察细胞黏附情况。结果制备的脱细胞软骨基质材料呈白色多孔状结构。HE染色示材料由纤维状的软骨微粒形成网状结构,基质内无细胞成分残留;阿尔新蓝染色示微颗粒呈蓝色。材料Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性。扫描电镜材料为多孔状海绵结构,孔径30～150μm。压汞法测定材料平均孔隙率为89.37%,平均孔径为90.8μm。力学分析示脱细胞软骨基质材料的压缩模量为(17.91±0.98)MPa,未经脱细胞处理的软骨微粒材料压缩模量为(15.12±0.77)MPa,差异无统计学意义(P>0.05);与正常牛关节软骨的(26.30±1.98)MPa比较差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞毒性实验显示,培养0、24、48及72h,100%、10%、1%浓度材料浸提液条件培养基和阴性对照DMEM培养基相对LDH释放率差异无统计学意义(P>0.05)。细胞黏附实验显示细胞可黏附于材料上,生长状态良好。结论牛关节软骨经脱细胞处理后,制成的多孔状脱细胞软骨基质材料,既保持了软骨基质中的主要成分,又具有良好的理化性质和生物相容性,可作为组织工程研究的一种新型载体材料。

羟基丁酸-羟基辛酸共聚体/脱细胞软骨基质支架的细胞黏附性

背景:羟基丁酸-羟基辛酸共聚体[poly(hydroxybutyrate-co-hydroxyoctanoate),PHBHOx]是一种新型的多聚羟基烷酸类材料,具有优良的可塑性、生物相容性、生物可降解性等性能,但同其他酯类材料相似,PHBHOx亲水性能较差,单纯PHBHOx材料支架细胞黏附性能明显不足。目的:观察羟基丁酸-羟基辛酸共聚体/脱细胞软骨基质支架的细胞黏附性。方法:取新鲜猪膝关节表面透明软骨,采用非离子型去污剂TritonX-100、低渗Tris-HCl以及Dna酶和Rna酶等进行脱细胞处理。低温粉碎后与PHBHOx以不同比例复合,采用溶剂浇铸-颗粒沥滤技术制备支架。分离培养猪关节软骨细胞,进行细胞-支架黏附实验并通过MTT比色法和扫描电镜观察软骨细胞在支架上的黏附存活情况。结果与结论:PHBHOx/脱细胞软骨基质支架的细胞黏附率较对照组显著提高,软骨细胞在支架上黏附紧密,生长良好。提示复合脱细胞软骨基质可以明显提高单纯PHBHOx支架的细胞黏附性能。

力学环境对软骨基质代谢的影响

正常关节软骨所受压力是由动态压力与静态压力交替完成。压力引起软骨一系列生理变化包括细胞及细胞外基质成分变形、组织内液体流动、水流电位和生理生化变化。这些变化直接调控细胞外基质代谢。体外构建有良好功能的组织工程化软骨是目前软骨病变、缺损理想的修复方法。研究力学环境对软骨基质代谢的影响 ,对构建组织工程化软骨有深远意义。

lncRNA-H19通过靶向miR-106a-5p在骨关节炎软骨基质降解和钙化中的调控作用

目的:探讨长链非编码RNA H19通过靶向microRNA(miR)-106a-5p对骨关节炎(OA)软骨基质降解和钙化的调控作用。方法:收集临床骨关节炎软骨组织和健康软骨组织,采用实时荧光定量PCR检测软骨组织中lncRNA-H19、miR-106a-5p mRNA表达水平;将人软骨细胞系(HC-A)分为H19干扰组(si-H19)、阴性转染组(si-Control)、miR-106a-5p mimic组(miR-106a-5p)、mimic阴性对照组(miR-106a-5p-NC)、miR-106a-5p抑制剂组(inhibitor)、阴性抑制剂对照组(inhibitor-NC)组、inhibitor+si-H19和inhibitor-NC+si-H19组,检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)和骨涎蛋白(BSP)mRNA表达水平;Western blot检测软骨细胞基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-13和II型α1胶原纤维(COL2A1)的水平;CCK-8检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:OA软骨组织中lncRNA-H19 mRNA表达上调(P<0.05),miR-106a-5p mRNA表达下调(P<0.05);沉默lncRNA-H19可明显抑制软骨细胞凋亡,促进软骨细胞增殖(P<0.05),并下调MMP-1和MMP-13的表达水平(P<0.05),上调COL2A1的表达(P<0.05)。沉默lncRNA-H19可抑制软骨细胞ALP、OCN、BSP mRNA水平和ALP活性(P<0.05)。沉默miR-106a-5p逆转了沉默lncRNA-H19对软骨细胞基质降解和钙化标志物的抑制作用(P<0.05)。结论:lncRNA-H19可通过抑制miR-106a-5p表达,促进细胞外软骨基质的降解和钙化,从而参与OA的进展。

同种脱细胞软骨基质与软骨细胞体外培养的实验研究

目的研究脱细胞软骨基质能否作为一种软骨细胞培养支架及其对软骨细胞的影响。方法将脱细胞软骨基质与软骨细胞体外复合培养,通过相差显微镜和组织学分析,观察脱细胞软骨基质变化及软骨细胞的生长情况。结果软骨细胞能在脱细胞软骨基质表面生长,脱细胞软骨基质经过培养无降解变形,结构与培养前基本相同。结论脱细胞软骨基质对软骨细胞无毒性作用,作为一种天然软骨细胞培养支架,脱细胞软骨基质在细胞空穴之间的贯通方面需要改进。

同种脱细胞软骨基质与软骨细胞复合物修复兔甲状软骨缺损的实验研究

目的探讨脱细胞软骨基质(acelluarcartilaginousmatrix,ACM)与软骨细胞复合后植入兔体内,能否形成软骨修复甲状软骨缺损。方法分离培养兔甲状软骨细胞,与ACM体外复合培养,形成ACM-软骨细胞复合物,进行组织学分析及用于修复兔甲状软骨缺损。新西兰大白兔18只,制成两侧甲状软骨缺损模型,随机分为3组,每组6只。对照组:只制备缺损,不作修复;ACM修复组:采用单纯ACM修复缺损;实验组:用ACM-软骨细胞复合物修复。术后8周处死动物,取出标本,进行大体和组织学观察。结果体外培养时,软骨细胞能在ACM表面生长,未长入基质内。动物实验结果,对照组:甲状软骨缺损处被肌肉、结缔组织充填;ACM修复组:ACM内炎性细胞浸润,轻度吸收变形;实验组:复合物植入体内后8周未形成软骨,甲状软骨缺损修复不理想。结论ACM体外培养和体内植入均未能为软骨细胞生长提供支持,作为一种天然细胞培养支架,尚有待进一步改进与完善。

枢椎软骨基质融合程度对齿突骨折类型影响的生物力学评估

目的:探讨枢椎软骨基质融合程度对齿突骨折类型的影响。方法:基于正常成人颈椎CT图像建立枢椎精细三维有限元模型。在齿突寰齿关节面上施加前后方向载荷,通过分别降低枢椎松质骨软骨基质融合部位的弹性模量以模拟该部位松质骨不同融合程度,分析枢椎齿突在两种不同约束条件下的应力、应变分布情况,以及枢椎发生骨折的可能类型。结果:两种约束条件下,枢椎有限元计算预测结果发现枢椎软骨基质的融合程度对枢椎高应力集中带分布无明显影响,最大von Mises等效应力值改变亦不明显。结论:枢椎体内软骨基质融合程度对齿突骨折类型无明显影响。

兔实验性骨关节病髁突软骨细胞表达软骨基质分子的变化及白细胞介素1β的影响

目的 :研究外源性炎症因子白细胞介素 1β(interleukin 1β,IL 1β)对颞下颌关节骨关节病与正常髁突软骨细胞代谢活动的影响 ,探讨其在颞下颌关节骨关节病进展过程中所发挥的作用。方法 :采用 2 0 μg·L-1重组白介素1β(recombinedhumaninterleukin 1β ,rhIL 1β)刺激体外贴壁培养条件下的成兔正常成熟髁突软骨细胞与兔实验性颞下颌关节骨关节病模型髁突软骨细胞 ,RT PCR方法检测、比较细胞对软骨基质成分Ⅱ型胶原、蛋白多糖聚糖体、胶原酶以及内源性生长因子胰岛素样生长因子 1(insulin likegrowthfactor 1,IGF 1)和转移生长因子 β1(trans forminggrowthfactor β1,TGF β1)的mRNA表达变化。结果 :在 2 0 μg·L-1rhIL 1β的刺激下 ,(1)正常成熟髁突软骨细胞Ⅱ型胶原和软骨蛋白多糖聚糖体的表达均明显降低 ,胶原酶表达水平变化不明显 ;(2 )在IL 1β的作用下 ,骨关节病软骨细胞对Ⅱ型胶原和胶原酶的表达水平降低 ,对软骨蛋白多糖聚糖体的表达水平无明显影响 ;(3)IL 1β对正常和骨关节病髁突软骨细胞内源性生长因子IGF 1和TGF β1的表达均无明显影响。 结论 :蛋白多糖聚糖体的合成 ,导致髁突软骨病变发生 ,而且能不断干扰骨关节病髁突软骨细胞代谢 ,导致关节软骨基质环境进一步恶化。

陈元膏摩对膝骨性关节炎大鼠血清TNF-α、TGF-β及软骨基质的影响

目的探索陈元膏摩对膝骨性关节炎(knee osteoarthritic,KOA)的作用机制及临床意义,为该法在临床中的应用提供理论依据。方法 52只清洁级雄性SD大鼠,分别为空白组、模型组、凡士林手法组、陈元膏摩组,用管型石膏将模型组、凡士林手法组、陈元膏摩组三组大鼠的左下肢膝关节固定8周,形成KOA中期改变的动物模型。空白组、模型组两组不做干预,凡士林手法组施以凡士林膏结合手法治疗,陈元膏摩组施以陈元膏结合摩法治疗,治疗8周;疗程结束后,通过免疫组织化学方法测量大鼠血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、转化生长因子β(transforming growth factor-beta,TGF-β)含量水平;HE染色法观察四组大鼠关节软骨基质的病理变化程度并进行Mankin评分。结果凡士林手法组、陈元膏摩组两组的Mankin评分及血清TNF-α浓度均低于模型组,且陈元膏摩组与凡士林手法组相比TNF-α浓度较低(P<0.05);凡士林手法组、陈元膏摩组两组的血清TGF-β浓度均高于模型组,且陈元膏摩组与凡士林手法组相比TGF-β浓度较高(P<0.05)。结论陈元膏摩可以减轻KOA关节软骨基质的破坏及关节病损,早期应用可抑制炎症细胞因子TNF-α的破坏作用,促进转化生长因子TGF-β的修复。

透骨消痛胶囊对早期骨关节炎软骨细胞超微结构与软骨基质的影响

目的:观察透骨消痛胶囊对大鼠早期骨关节炎模型软骨细胞超微结构及软骨基质的影响。方法:24只雄性大鼠按照体质量随机分成正常组、模型组、中药组,每组8只。采用膝关节腔注射木瓜蛋白酶建立骨关节炎大鼠模型,给予透骨消痛胶囊水溶液干预4周后处死大鼠,取股骨髁关节软骨进行电镜和光镜制样,观察软骨细胞显微、超微结构;组织化学法定量软骨基质蛋白多糖、Ⅱ型胶原含量。结果:软骨细胞超微结构观察,与正常组比较,模型组软骨细胞增生、簇聚,细胞器大量减少或肿胀;与模型组比较,中药组软骨细胞聚集减少,粗面内质网、高尔基复合体、线粒体等细胞器数量增多。软骨基质含量检测发现,与正常组比较,模型组蛋白多糖和Ⅱ型胶原含量均显著降低(P<0.01);与模型组比较,中药组蛋白多糖和Ⅱ型胶原含量均显著升高(P<0.01)。结论:透骨消痛胶囊可减轻早期骨关节炎软骨细胞变性、内质网和线粒体等损伤,增加软骨基质合成,从而延缓骨关节炎软骨退变。

持续性高正加速度下颞下颌关节软骨基质成分与相关炎性因子的mRNA变化

目的建立不同持续性高正加速度(+Gz)环境下的动物模型,研究颞颌关节紊乱病(temporomandibular joint di sorder,TMD)软骨关节基质成分Ⅱ型胶原、多糖聚糖体、胶原酶,以及IGF-1、TGF-β1、TNF-α、IL-2与IL-3的变化情况。方法分离并体外培养正常与+Gz下的颞下颌软骨细胞,提取总m RNA,荧光定量PCR检测。结果Ⅱ型胶原、多糖聚糖体、胶原酶,以及IGF-1、TGF-β1明显减少,TNF-α、IL-2与IL-3显著增高。结论在+Gz下,颞下颌关节软骨基质成分受到严重影响,修复能力下降,炎性反应增加。

羟基丁酸-羟基辛酸共聚物/脱细胞软骨基质复合支架的制备与体外降解

背景:羟基丁酸-羟基辛酸共聚物具有高生物相容性和降解性,但单一材料无法满足组织工程支架的要求。脱细胞软骨基质是制备复合支架的常用材料,具有良好的生物相容性和无抗原性等优点。目的:将羟基丁酸-羟基辛酸共聚物、脱细胞软骨基质以不同比例混合制备复合支架,观察其体外降解速率。方法:取新鲜猪关节软骨,用含有双抗的PBS液浸泡,放入含有苯甲基磺酰氟的tri-HCl缓冲液,加入DNase酶和RNase酶,用D-Hank’s液冲洗等步骤制备脱细胞软骨基质。采用溶剂浇注-颗粒沥滤的方法与羟基丁酸-羟基辛酸共聚物按不同浓度混合,制备出不同比例的复合支架。结果与结论:脱细胞软骨基质的比例不同,复合材料的完全降解时间也不同,8%含量的脱细胞软骨基质最符合软骨组织工程支架的要求。

牵张应力对软骨基质代谢影响的研究进展

软骨基质的代谢可以显著地影响关节软骨的生物力学功能。研究牵张应力对软骨基质代谢的影响不仅有利于阐明生物力学因素在骨性关节炎发病机制中的作用，而且为软骨组织工程中相关力学因素的研究提供了新的思路与技术方法，为最终利用组织工程治疗软骨损伤提供相关理论依据。本文就牵张应力对软骨基质代谢的影响作一综述。

多孔左旋聚乳酸-脱细胞软骨基质支架性能研究

目的研究不同实验条件下制备的多孔左旋聚乳酸-脱细胞软骨基质支架的结构与性能,分析其作为软骨组织工程支架材料的可行性。方法在三种实验温度下,应用热致相分离法将左旋聚乳酸与猪脱细胞软骨基质按不同比例混合,制备生物多孔复合物支架,并对各支架材料孔径、孔隙率、亲水性、生物力学强度和降解率进行研究。结果多孔左旋聚乳酸-脱细胞软骨基质支架孔径为100～300μm,形态自然圆润,取向规则,脱细胞软骨基质在左旋聚乳酸三维结构中均匀分布,其结构和性能均符合软骨组织工程支架材料的要求。结论左旋聚乳酸-脱细胞软骨基质支架可用于软骨组织工程研究。

独活寄生汤对膝骨关节炎大鼠关节软骨基质的影响

目的观察独活寄生汤对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨基质的影响,探讨独活寄生汤治疗KOA的作用机制。方法 2月龄清洁级雄性SD大鼠80只,喂养1周后分为正常组20只和造模组60只。造模组分别在第1、4、7天右膝关节腔注射0.2 m L 4%木瓜蛋白酶。成功造模后,造模组分为模型组、治疗组和对照组各20只。正常组、模型组按照10 m L/(kg·d-1)的剂量灌服生理盐水;治疗组按照9.3 g/(kg·d-1)的剂量灌服独活寄生汤;对照组按照0.15 g/(kg·d-1)的剂量灌服奥泰灵。2周为1个疗程,共治疗4个疗程。每2个疗程后,处死一批动物,腹主动脉采血,ELISA法测定Ⅱ型胶原C端肽(CTXⅡ)和Ⅱ型胶原C前肽(CPⅡ);取右侧胫骨平台于4%多聚甲醛中固定、包埋,甲苯胺蓝染色观察糖胺聚糖变化;Masson染色观察胶原变化。结果与正常组比较,模型组糖胺聚糖含量减少,Ⅱ型胶原表达降低,CTXⅡ显著升高(P<0.05),CPⅡ显著降低(P<0.05)。治疗组治疗后,糖胺聚糖含量增加,Ⅱ型胶原表达增加,CTXⅡ含量降低(P<0.05),CPⅡ含量升高(P<0.05)。结论独活寄生汤可通过抑制软骨基质主要成分丢失,有效减轻KOA大鼠关节软骨基质破坏。

组织工程修复软骨基质蛋白聚糖代谢的初步探讨

目的检测软骨修复组织中蛋白聚糖相关代谢指标,初步探讨在软骨修复过程中基质蛋白聚糖的代谢变化以及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)和蛋白聚糖酶(aggrcanases)的作用。方法松质骨骨基质明胶(bone matrix gelatin,BMG)复合同种异体软骨细胞构建组织工程化软骨,体内植入修复兔膝关节骨软骨缺损。术后6个月取材检测蛋白聚糖合成表位3-B-3(-)、MMPs、MMPs裂解表位BC-4以及aggrcanases裂解表位BC-13的表达情况。结果在修复组织中,蛋白聚糖合成表位3-B-3(-)表达增加,MMPs及其裂解表位BC-4表达减低,而aggrcanases裂解表位BC-13表达阴性。结论利用蛋白聚糖合成表位3-B-3(-)、MMPs、BC-4、BC-13的表达情况可以初步了解修复软骨组织中蛋白聚糖的代谢变化,修复软骨组织蛋白聚糖的合成大于分解,MMPs在兔关节修复软骨基质蛋白聚糖的基础代谢和重塑中具有重要作用。