功能性鱼软骨多糖制备工艺优化及食用安全性评价

低分子质量硫酸软骨多糖(chondroitin sulfate,CS)具有比高分子质量CS更好的生物利用度和生物活性。为获得抗结直肠癌活性较高的低分子质量CS,使用杂交鲟(Acipenser schrenckii×Huso dauricus)SC(sturgeon chondroitin sulfate,SCS)为原料,以对结直肠癌细胞HT-29细胞增殖抑制率为指标,采用酶促解聚法结合响应面法确定制备具有抗结直肠癌活性低分子质量SCS的最佳酶解条件为酶添加量0.103 IU/mg、底物质量浓度1.005 mg/mL、酶解时间87 min。在此基础上,利用超滤法制备低分子质量高活性的组分SCS-F2;为探讨SCS-F2的食用安全性,利用动物模型评价SCS-F2的急性毒性,结果表明,SCS-F2对小鼠体质量、饮食及血液学指标及机体脏器组织无不良影响,且可减低结肠组织的异常隐窝灶,说明SCS-F2对结直肠癌变具有一定的抑制和预防作用且满足食品保健品安全要求。因此,SCS-F2安全无毒,具有抗结直肠癌活性。

猪软骨多糖作为免疫佐剂的肝癌疫苗激发抗肿瘤细胞免疫

探讨以猪软骨多糖作为免疫佐剂的肝癌疫苗对小鼠细胞免疫抗肿瘤的影响。以猪软骨多糖作为免疫佐剂,采用共同培养的方法制备小鼠肝癌H22细胞全细胞肝癌疫苗,免疫小鼠后,分别以脾淋巴细胞、巨噬细胞为对象检测肝癌疫苗对小鼠机体细胞免疫的影响。结果表明,以猪软骨多糖为免疫佐剂的全细胞肝癌疫苗能明显刺激脾淋巴细胞活化、增强巨噬细胞的吞噬能力。以猪软骨多糖为免疫佐剂的肝癌疫苗能增强机体的细胞免疫,为软骨多糖用于肿瘤的免疫治疗和免疫预防提供了试验依据,为进一步的临床免疫治疗肿瘤奠定了基础。

软骨多糖抑制Hca-F肝癌细胞转移的初步研究

目的:研究软骨多糖抑制小鼠淋巴结高转移肝癌细胞Hca-F侵袭转移的作用。方法:以615近交系小鼠右脚垫皮下注射肝癌细胞Hca-F建立转移模型,设模型组和给药组。检测软骨多糖抑瘤率、淋巴道转移抑制率、淋巴结石蜡切片HE染色观察肿瘤细胞侵袭情况和采用ELISA试剂盒测定血清中TNF-α的含量。结果:软骨多糖具有明显的抑瘤作用,抑瘤率达61.9%;淋巴结转移抑制率为22.2%;通过比较模型组和给药组瘤细胞转移部位淋巴结的HE染色,发现给药组转移情况明显低于模型组;ELISA检测表明给药组血清中TNF-α的含量明显低于模型组(P<0.05)。结论:软骨多糖一定程度上能够抑制肝癌细胞Hca=F向周围淋巴结转移,为开发治疗恶性肿瘤的药物提供了选择。

魟鱼软骨多糖对Lewis肺癌MMP-9表达的影响

目的:鱼软骨多糖(RCG)对Lewis肺癌基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。方法:建立小鼠Lewis肺癌模型,将动物分为生理盐水组、不同剂量鱼软骨多糖组、环磷酰胺组,观察肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算原发瘤抑制率;采用RT-PCR和Western blot检测瘤组织MMP-9基因和蛋白表达。结果:该多糖各剂量组小鼠的肿瘤生长曲线平缓,小鼠原发瘤抑制率、肺转移数与生理盐水组比较差异有显著性(P<0.05;P<0.01);与生理盐水比较,鱼软骨多糖各剂量组,MMP-9 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:鱼软骨多糖明显抑制小鼠Lewis肺癌原发瘤的生长和转移,可能与其抑制肿瘤MMP-9基因和蛋白表达有关。

软骨多糖对小鼠肉瘤细胞S_(180)抑制作用的实验研究

[目的]研究软骨多糖对S180荷瘤小鼠的生命延长率和抑瘤率的影响。[方法]以小鼠肉瘤S180细胞腹腔及皮下造模,设对照组﹑低剂量组﹑高剂量组3组,分别观察软骨多糖对各组小鼠的生存时间、生命延长率和抑瘤率的影响。[结果]高剂量组小鼠的生存时间为19.0天,生命延长率为25.0%,抑瘤率为73.5%,而低剂量组小鼠分别为16.5天,8.6%和27%。[结论]软骨多糖能有效抑制小鼠肉瘤S180细胞的生长,是一种新型的抑癌物质。

魟鱼软骨多糖对大鼠膀胱肿瘤生长的抑制作用

目的:探讨魟鱼软骨多糖连续膀胱灌注对大鼠膀胱肿瘤生长的作用和机制。方法:40只雌性Wistar大鼠,随机分为对照组(n=20)和魟鱼软骨多糖(RCG)组(n=20),制作N-甲基亚硝基脲诱导大鼠原位膀胱癌模型,于第8周行分别连续(每周1次,共6次)膀胱灌注生理盐水和魟鱼软骨多糖制剂,于第14周进行病理观察、测量膀胱总重量,微血管密度和凋亡指数。结果:第14周时,对照组(n=16)和RCG组(n=15)大鼠膀胱均可见明显肿物,光镜下可见癌组织侵入肌层。RCG组大鼠膀胱的重量和肿瘤的MVD小于对照组(t=3.005,P=0.005;t=2.841,P=0.008);RCG组大鼠膀胱肿瘤的AI大于对照组但无统计学意义(t=1.552,P=0.132)。结论:RCG可抑制大鼠膀胱肿瘤生长,可能与抑制肿瘤血管生长有关。

软骨多糖抑制H22肝癌细胞生长的作用及机制研究

探讨软骨多糖(CA)在体内抑制H22肝癌细胞生长的作用及其机制。以H22细胞腹水瘤模型为研究对象,设对照组﹑CA组两组,分别考察CA对各组小鼠的生活状态的影响。并且应用苏木素伊红(HE)染色、原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)、流式细胞术(FCM)及免疫荧光法对肿瘤细胞的生长和凋亡进行研究。CA可以在一定程度上促进H22细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的生长,延长小鼠的生存时间。并且,随着用药时间的延长,CA组的P21表达增强,而CyclinD1表达水平降低。软骨多糖有促进肿瘤细胞凋亡的作用,是一种新型的抗癌药物,具有广泛的应用前景。

软骨多糖对乳腺癌细胞CyclinD_1及p21周期蛋白表达影响的研究

[目的]研究软骨多糖对乳腺癌细胞CyclinD1及p21周期蛋白表达的影响。[方法]选用MCF-7人乳腺癌细胞系进行体外培养,采用MTT法检测细胞增殖作用,流式细胞仪检测细胞周期的变化,免疫荧光染色方法检测细胞周期蛋白CyclinD1及p21蛋白的表达率。[结果]软骨多糖对MCF-7乳腺癌细胞体外生长有明显的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性;软骨多糖使MCF-7乳腺癌细胞出现S期阻滞;软骨多糖促进CyclinD1蛋白失表达及p21蛋白过表达。[结论]软骨多糖通过影响MCF-7乳腺癌细胞周期蛋白的表达而诱导细胞凋亡,为抗乳腺癌活性物质。

三种软骨多糖清除自由基活性研究

通过3个化学模拟体系:DPPH·(1,2-二苯代苦味肼基自由基)、羟自由基(·OH)、超氧阴离子(O2-·),检测并比较3种软骨多糖提取物清除自由基能力的大小。研究结果表明:在3个体系中,3种软骨多糖浓度与其清除自由基能力大小呈现一定量效关系;并且当多糖浓度达到一定值时,鼻骨多糖清除自由基能力最强,肋骨多糖次之,喉管骨多糖最弱。

软骨多糖对荷瘤小鼠体液免疫功能的影响

研究软骨多糖对荷瘤小鼠的作用,并探讨其对免疫功能的影响。采用小鼠肉瘤S180细胞建立动物腹水瘤模型,然后随机将小鼠分为空白组,模型组和软骨多糖给药组,连续腹腔注射生理盐水或软骨多糖,用单向琼脂扩散免疫实验测定小鼠抗体,用酶联免疫吸附剂法(ABC-ELISA)测定小鼠外周血细胞因子IL-2、IL-6和TNF-α。在软骨多糖的作用下,荷瘤小鼠分泌的IgG抗体明显增加,IL-2的含量由(160.1±21.24)pg·mL-1降至(120.84±12.05)pg·mL-1,IL-6的含量由(68.32±10.43)pg·mL-1升至(99.34±30.93)pg·mL-1,TNF-α的含量由从(0.08±0.019)pg·mL-1提高到了(0.16±0.006)pg·mL-1,从而增强了小鼠的免疫力。由此得出结论,软骨多糖能通过增强S180荷瘤小鼠的体液免疫功能而抑制肿瘤的生长。

鲨鱼软骨多糖对血脂的影响

目的:探讨分子量为60kDa的鲨鱼软骨多糖(SCP)对血脂的影响。方法:建立高脂模型,实验分为正常对照组、阳性对照药组、鲨鱼软骨多糖高、中、低剂量组和高脂模型组;给药15天后,眼静脉取血,测大鼠血清总胆固醇(TC)甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)水平。结果:与高脂模型组比较,鲨鱼软骨多糖中剂量组TC、TG、和LDL均有显著性差异,而HDL无明显变化;鲨鱼软骨多糖低、高剂量组TC、LDL均有显著性差异,而TG、HD无明显变化。结论:分子量为60kDa的鲨鱼软骨多糖有一定的降血脂作用,其机制可能是通过降低血浆中的TC、LDL水平等降血脂。

魟鱼软骨多糖的分离纯化及生物活性的研究

目的研究魟鱼软骨多糖(raycartila geglycosam inoglycans,RCG)的提取、分离与纯化方法,并初步探讨其生物活性。方法采用盐酸胍提取、丙酮分级沉淀、膜超滤、Sephadex凝胶柱色谱分离、纯化获得魟鱼软骨多糖,由HPLC确定其相对分子质量和质量分数;建立Lewis肺癌小鼠模型,将实验分为生理盐水(Saline)组、不同剂量(500、250、125mg/kg)鱼软骨多糖组、环磷酰胺(CTX,60mg/kg)组,观察小鼠肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算原发瘤与肺转移灶数抑瘤率,免疫组织化学染色计数肿瘤组织微血管密度(MVD),采用RT-PCR检测瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)基因表达。结果经HPLC检测,该组分为单一多糖,其质量分数达99%以上。生物活性检测结果表明,与生理盐水组比较,该多糖各剂量组小鼠的肿瘤生长曲线平缓,原发瘤抑瘤率、肺转移灶数与生理盐水组比较差异显著(P<0.05、0.01);与生理盐水组比较,鱼软骨多糖各剂量组MVD显著减少、VEGFmRNA表达水平显著降低(P<0.01)。结论鱼软骨多糖明显抑制小鼠Lewis肺癌原发瘤的生长和转移,并可抑制肿瘤的血管形成。

鲨鱼软骨多糖的理化性质及其与DNA分子相互作用的研究

以鲨鱼软骨为原料 ,用改进的提取工艺 ,制得纯度较高的鲨鱼软骨多糖(SCAMP)。对其进行理化性质分析 ,表明SCAMP含有29.90%N 乙酰半乳糖胺、27.00 %葡萄糖醛酸、13.50%硫酸根及0.20 %蛋白质。红外光谱测试表明SCAMP的糖残基可能是α -糖苷键 ,推测其主要成分是硫酸软骨素类多糖。用荧光探针法证实SCAMP与DNA分子能相互作用 ,并呈量效关系 ,为进一步探索SCAMP抗癌作用机理提供了一项实验依据。

应用魟鱼软骨多糖滴眼液抗大鼠角膜新生血管形成的实验研究

目的:探讨魟鱼软骨多糖(Ray Cartilage Glycosaminoglycans,RCG)滴眼液对大鼠角膜新生血管(Corneal neo-vascularization,CNV)的作用。方法:制备魟鱼软骨多糖滴眼液,缝线诱导大鼠角膜新生血管,将实验分为生理盐水(Sa-line)组、不同剂量魟鱼软骨多糖(RCG)组、肝素+可的松(Heparin+corlin)组,通过计算新生血管面积、病理组织学观察、免疫组化检测评价应用魟鱼软骨多糖滴眼液对大鼠角膜新生血管的作用。结果:与生理盐水组比较,应用魟鱼软骨多糖滴眼液各组新生血管面积明显减少,有显著性差异(P<0.01),同时角膜组织炎性细胞数和VEGF表达也明显减少。结论:应用魟鱼软骨多糖滴眼液抑制了大鼠角膜新生血管形成,可能与魟鱼软骨多糖能够缓解缝线刺激炎症,减少VEGF表达有关。

火焰原子吸收光谱法测定魟鱼软骨多糖中铜 镉 铅的含量

目的:用火焰原子吸收光谱法检测经亚硫酸氢钠处理过的魟鱼软骨多糖中铜、镉、铅的含量。方法:用亚硫酸氢钠浸泡魟鱼软骨并提取魟鱼软骨多糖;干法消化魟鱼软骨多糖并配制待测溶液;制备标准加入液,在火焰原子化器上用标准加入法测定魟鱼软骨多糖中铜、镉、铅的含量。结果:经处理过的魟鱼软骨多糖中含有微量的铜和铅,但其含量远远低于国家对食品和中药材中两种重金属元素的限量要求;镉的含量低于仪器的检测范围;方法的各项分析技术指标均达到较高水平。结论:亚硫酸氢钠浸泡魟鱼软骨是很理想的清除其中重金属的方法。

软骨多糖预防小鼠类风湿性关节炎的研究

本文研究了软骨多糖对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的预防作用。口服软骨多糖两周后,再注射弗氏完全佐剂(Freund’scomplete adjuvant,FCA)诱发小鼠RA模型,通过对小鼠组织病理学变化的观察和对小鼠免疫功能的影响来评价口服软骨多糖对类风湿性关节炎的预防作用。组织病理学显示给药组关节的变形破坏得到减轻,而且在一定程度上提高了小鼠的免疫力。因此,软骨多糖能有效地起到预防佐剂性关节炎的作用,是预防类风湿性关节炎的新物质。

软骨多糖对小鼠Ca761乳腺癌血管生成的影响

目的是研究软骨多糖对小鼠Ca761乳腺癌肺转移的抑制作用及其对血管生成的影响。方法是建立615近交系小鼠乳腺癌肺转移模型,设模型组和治疗组。检测软骨多糖肺转移抑制率、肺部石蜡切片HE染色观察肿瘤侵袭情况、免疫组化CD34观察瘤组织微血管密度(MVD)以及VEGF蛋白表达。结果表明,软骨多糖肺转移抑制率达44.4%;通过肺部HE染色发现治疗组转移情况明显低于模型组;免疫组化检测结果显示治疗组CD34蛋白标记的MVD、VEGF蛋白表达水平均低于模型组。可见软骨多糖能明显抑制小鼠Ca761乳腺癌的血管生成,从而抑制肿瘤转移,与软骨多糖能够下调瘤组织VEGF蛋白表达有关。

软骨多糖诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡的实验研究

研究软骨多糖诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡及其作用机理。方法:选用MCF-7人类乳腺癌细胞系体外培养,应用MTT法检测细胞生长抑制率,TUNEL法检测细胞凋亡率,HE染色法观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞周期的变化,免疫荧光方法检测BCL-2BAD及波形蛋白Vimentin的表达率。结果:软骨多糖对MCF-7细胞体外生长具有明显的抑制作用,且呈时间和浓度依赖性;软骨多糖可诱导MCF-7细胞发生凋亡并伴随有凋亡小体出现等形态学变化;软骨多糖促进BCL-2蛋白的表达水平下降,BAD表达水平上升,及Vimentin的降解。结论:软骨多糖能够在体外诱导MCF-7细胞凋亡,是一种新型的抗乳腺癌活性物质。

软骨多糖与灭活S180对荷瘤小鼠的免疫保护作用研究

研究软骨多糖与灭活的S180对荷瘤小鼠的免疫保护作用。以S180荷瘤小鼠为模型,分空白组、模型组和免疫组,其中免疫组又分为细胞单独免疫组、多糖单独免疫组和多糖和细胞共免疫组(CP-S180组),共计五组。免疫组经腹腔注射免疫两次后种入活S180细胞,期间观察小鼠生长及长瘤情况,并进行脾淋巴细胞增殖试验。实验结果表明,CP-S180组小鼠的生命延长率较细胞单独免疫组和多糖单独免疫组明显提高。CP-S180组小鼠的T淋巴细胞和B淋巴细胞的刺激指数也显著上升。软骨多糖与灭活的S180在一定程度上对荷瘤小鼠有免疫保护作用,软骨多糖可能起到了免疫佐剂的作用。

魟鱼软骨多糖对人脐静脉内皮细胞形成新生血管的影响

目的：探讨缸鱼软骨多糖（RCG）对人脐静脉内皮细胞形成新生血管的作用。方法：原代培养人脐静脉内皮细胞，实验分为生理氯化钠溶液（NS）对照组、RCG100，50，25，10，2g·L^-1组和阳性对照鲨鱼软骨多糖（SCG，50g·L^-1）组。采用MTT法检测RCG对HUVEC增殖的影响，流式细胞仪检测RCG对HUVEC细胞周期的影响；并观察RCG对HUVEC迁移及小管形成的作用。结果：10～100g·L^-1RCG可明显抑制HUVEC的体外增殖，IC50为62．93g·L^-1。流式细胞仪检测表明，RCG阻止HUVEC在G2／M期。10—100g·L^-1RCG明显抑制HUVEC迁移和小管形成。结论：RCG具有良好的体外抗血管生成活性。