NLRP3炎症小体在大鼠单侧输尿管梗阻引起肾间质纤维化中的作用及其机制

目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体在大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化中的作用,并阐明其可能的作用机制。方法:健康雄性Wistar大鼠30只随机分为假手术组(n=6)和UUO组(n=24),假手术组大鼠仅分离输尿管不结扎,UUO组分别于术后3、7和14 d处死大鼠,并按照处理时间分为UUO 3 d组(n=8)、UUO 7 d组(n=8)和UUO 14 d组(n=8)。HE染色和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理形态表现,试剂盒检测各组大鼠肾组织中丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性和羟脯氨酸(HYP)水平,免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达水平,Western blotting法检测各组大鼠肾组织中NLRP3蛋白表达水平。结果:HE染色,UUO组大鼠出现明显肾小管扩张,肾间质水肿和增宽,可见较多炎症细胞浸润,部分肾小管腔内可见脱落的上皮细胞。与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠HE染色肾间质纤维化评分均明显升高(P<0.05);与UUO 3 d组和UUO 7 d组比较,UUO 14 d组大鼠HE染色肾间质纤维化评分明显升高(P<0.05)。Masson染色,UUO组大鼠肾间质炎症细胞浸润明显,可见明显纤维组织增生;随UUO作用时间增加,大鼠部分肾小管消失,肾间质明显增宽,胶原沉积逐渐增多,皮髓交界处胶原沉积程度更加明显。与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠Masson染色肾间质纤维化评分均明显升高(P<0.05);与UUO 3 d组和UUO 7 d组比较,UUO 14 d组大鼠Masson染色肾间质纤维化评分明显升高(P<0.05)。与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠梗阻侧肾组织中MDA水平均明显升高(P<0.05),SOD活性明显降低(P<0.05)。与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠梗阻侧肾组织中HYP水平均明显升高(P<0.05);与UUO 3 d组比较,UUO 14 d组大鼠梗阻侧肾组织中HYP水平明显升高(P<0.05)。免疫组织化学法,与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠肾组织中α-SMA蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与UUO 3 d组和UUO 7 d组比较,UUO 14 d组大鼠肾组织中α-SMA蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠肾小管上皮细胞和肾小管间质组织中TGF-β1蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与UUO 3 d组比较,UUO 14 d组大鼠肾小管上皮细胞和肾小管间质组织中TGF-β1蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。Western blotting法,与假手术组比较,UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠肾组织中NLRP3蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:NLRP3炎症小体在UUO大鼠肾纤维化过程中发挥重要作用,其作用机制与氧化应激增加和TGF-β1蛋白表达水平升高有关。

基于JAK/STAT3通路探讨补肾活血方改善单侧输尿管梗阻大鼠炎症和肾纤维化

目的:观察补肾活血方(BSHXF)对单侧输尿管梗阻大鼠(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾纤维化和炎症的治疗效果,揭示其抗炎及延缓肾纤维化的机制。方法:32只8周龄雌性SD大鼠根据随机数字表分为假手术组(Sham组)、单侧输尿管梗阻组(UUO组)、补肾活血方低剂量组(BSHXF-L组)和补肾活血方高剂量组(BSHXF-H组)。造模后第2天开始,连续灌胃干预21 d,BSHXF-L组和BSHXF-H组给予相应剂量补肾活血方汤剂,Sham组和UUO组给予与BSHXF组等体积的生理盐水。干预结束后,记录24 h尿量,全自动生化分析仪检测血肌酐、尿素氮、尿蛋白、尿肌酐和肾功能指数;采用HE和Masson染色检测肾脏病理损伤和纤维化程度;通过免疫组化染色分析各组TGF-β和TNF-α;Western blotting检测各组TGF-β_(1)、α-SMA、JAK、STAT3、p-STAT3、TNF-α、Caspase-3和Bax的蛋白表达情况。结果:与UUO模型组相比,BSHXF-L组和BSHXF-H组能明显明显改善UUO大鼠的肾功能,降低大鼠肾组织中TGF-β_(1)和α-SMA蛋白表达水平,抑制JAK、STAT3和p-STAT3表达,减少炎症细胞浸润和纤维组织以及胶原的增生,显著降低大鼠的肾脏指数和TNF-α等炎症指标。结论:补肾活血方可通过抑制JAK/STAT3通路激活,改善UUO大鼠肾功能,减轻其肾脏炎症水平、肾脏指数,延缓肾纤维化进程。

类风湿关节炎合并宫颈放线菌病及输尿管梗阻1例并文献复习

放线菌病是一种少见的慢性肉芽肿性疾病,以肉芽肿及组织纤维化窦道的形成为特点,其症状与许多传染性和非传染性疾病相似,临床上经常被误诊。现报告1例长期使用免疫抑制剂及生物制剂治疗的类风湿关节炎合并放线菌感染的患者。该患者为60岁女性,类风湿关节炎病程10余年,既往使用氨甲蝶呤、艾拉莫德、英夫利昔单抗等多种免疫抑制剂及生物制剂治疗,关节肿痛反复发作,对类风湿关节炎疾病活动度的控制不佳,白细胞计数持续升高。全腹部CT示盆腔占位,右侧输尿管扩张。对宫颈管刮出组织进行病理检查,可见大量中性粒细胞浸润和硫磺样颗粒,考虑放线菌感染。予多西环素抗感染治疗18个月,以及艾拉莫德、硫酸羟氯喹及托法替布抗风湿治疗后,患者关节肿痛好转,白细胞计数正常。随访2年,患者病情稳定,无复发。类风湿关节炎患者使用较强免疫抑制剂、生物制剂时,应警惕合并发生感染,一些慢性、隐匿部位及少见病原体的感染也应当引起临床医生的重视,并尽早进行相关筛查以明确诊断。

基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响。方法大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、依那普利(10 mg/kg)组和柴胡皂苷B2低、中、高剂量组(5、10、20 mg/kg),每组12只。除假手术组外,其余5组建立单侧输尿管梗阻(UUO)模型,各组灌胃给予相应药物,每天1次,连续给药2周。全自动生化分析仪检测大鼠血清中血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β水平,Masson染色观察大鼠肾组织病理学变化,试剂盒检测大鼠肾组织中肾上腺髓质素(ADM)水平,免疫组化法检测大鼠肾组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子-β1(TGF-β1)阳性表达,Western blot法检测大鼠肾组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB、NLRP3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾组织可见肾小管扩张,上皮细胞出现部分空泡化,肾间质内大量炎性细胞浸润、纤维细胞生成及胶原纤维沉积,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平、肾组织TGF-β1阳性表达、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达升高(P<0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达降低(P<0.05);与模型组比较,柴胡皂苷B2各剂量组大鼠肾脏病变逐渐减轻,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平,肾组织TGF-β1阳性表达,TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达均降低(P<0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达均升高(P<0.05);与柴胡皂苷B2高剂量组比较,依那普利组上述指标无明显变化(P>0.05)。结论柴胡皂苷B2能够缓解UUO大鼠肾间质纤维化,改善肾功能和炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的表达有关。

萆薢分清颗粒对单侧输尿管梗阻肾纤维化大鼠mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ蛋白表达影响研究

目的 观察萆薢分清颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化相关蛋白雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的影响,探讨萆薢分清颗粒的肾脏保护作用。方法 取60只SPF级雄性SD大鼠,从中随机取10只作为空白组,其余50只大鼠采用单侧输尿管梗阻术构建肾纤维化模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、氯沙坦组及萆薢分清高、中、低剂量组,每组10只,萆薢分清高、中、低剂量组分别给予13.12 mL/(kg·d)、6.56 mL/(kg·d)、3.28 mL/(kg·d)萆薢分清颗粒溶液灌胃,氯沙坦组给予氯沙坦2.62 mL/(kg·d)灌胃,空白组和模型组给予等量生理盐水灌胃,均1次/d,连续灌胃4周。末次灌胃结束后检测尿白蛋白与尿肌酐的比值(ACR)、24 h尿蛋白量及血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平,HE染色、Masson染色观察肾脏病理形态,免疫组化法及Western blot法分别检测大鼠肾脏组织中mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ表达情况。结果 与空白组比较,模型组大鼠ACR、24 h尿蛋白量及SCr、BUN水平均明显升高(P均<0.05);肾脏发生明显纤维化病变;肾组织中mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ阳性表达平均光密度值和蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与模型组比较,氯沙坦组与萆薢分清高、中剂量组大鼠ACR、24 h尿蛋白量及SCr、BUN水平均明显降低(P均<0.05);肾纤维化病变较轻;肾组织中mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ阳性表达平均光密度值和蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论 萆薢分清颗粒可减轻单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化,保护残存肾功能,机制可能与下调mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ表达有关。

黄芩汤对单侧输尿管梗阻小鼠肾功能的保护作用及机制研究

目的:探讨黄芩汤对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾功能的保护作用及机制。方法:将48只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芩汤低剂量组及黄芩汤高剂量组。造模后第1天开始灌胃给药,连续14 d,假手术组和模型组小鼠通过相同的方式给予等量的生理盐水。给药结束后采集小鼠血清,测定肾功能指标和炎症因子表达量。采集小鼠肾脏组织,进行组织病理学观察和Western blotting检测。结果:模型组小鼠血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)含量高于假手术组(P<0.01);黄芩汤低、高剂量组小鼠血清SCr、BUN含量均低于模型组(P<0.05或P<0.01)。模型组小鼠血清白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平高于假手术组(P<0.01);黄芩汤低、高剂量组小鼠血清IL-1β、IL-6、MCP-Ⅰ水平均低于模型组(P<0.01)。模型组小鼠肾脏组织中细胞外基质(ECM)相关蛋白α-SMA、CollagenⅠ和VIM相对表达量高于假手术组(P<0.01);黄芩汤低、高剂量组小鼠肾脏组织中α-SMA、CollagenⅠ和VIM蛋白相对表达量均低于模型组(P<0.05或P<0.01)。模型组小鼠肾脏组织中TGF-β1、Smad4蛋白相对表达量及p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-STAT3/STAT3高于假手术组(P<0.01),Smad7蛋白相对表达量低于假手术组(P<0.01);黄芩汤低、高剂量组小鼠肾脏组织中TGF-β1、Smad4蛋白相对表达量及p-Smad3/Smad3、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-STAT3/STAT3均低于模型组(P<0.05或P<0.01),Smad7蛋白相对表达量均高于模型组(P<0.01);黄芩汤高剂量组小鼠肾脏组织中p-Smad2/Smad2低于模型组(P<0.01)。结论:黄芩汤可能通过调节TGF-β1/Smad、NF-κB和STAT3途径减轻UUO小鼠的炎症和纤维化反应,从而逆转肾损伤。

粪菌移植对单侧输尿管梗阻小鼠肾脏的保护作用

目的:探讨粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾纤维化的影响。方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、UUO组、UUO+FMT组、过继回输髓源抑制性细胞(myeloid-derivedsuppressorcells,MDSCs)组。后3组通过单侧输尿管结扎构建肾纤维化模型,UUO+FMT组在建立UUO模型后接受来自对照组小鼠的粪菌移植,MDSCs组同时接受脾切除术并静脉注射UUO+FMT组外周血中的MDSCs。术后14 d采集肾组织进行HE、Masson染色;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Westernblot法和免疫荧光染色法检测肾组织中TNF-α和IL-10表达水平。结果:HE染色结果显示,对照组小鼠肾组织结构正常;UUO组肾小管显著扩张,伴有明显的炎性细胞浸润;UUO+FMT组和MDSCs组肾脏病变较UUO组明显改善。Masson染色结果显示,与对照组比较,UUO组胶原沉积阳性面积明显增加,而UUO+FMT组和MDSCs组胶原沉积阳性面积较UUO组减少;qRT-PCR、Western blot和免疫荧光结果均显示,与对照组比较,UUO组肾组织中TNF-α、IL-10的表达水平均升高;与UUO组比较,UUO+FMT组和MDSCs组TNF-α表达水平下降而IL-10表达水平升高,差异均有统计学意义。结论:FMT治疗使UUO小鼠肾脏的TNF-α表达减少而IL-10表达增加,并且缓解了肾纤维化,FMT可能通过调控MDSCs发挥肾保护作用。

他达拉非肠溶缓释新剂型对输尿管梗阻引起的肾纤维化小鼠治疗作用的研究

目的:探讨他达拉非肠溶缓释新剂型对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)引起的肾脏纤维化模型小鼠的治疗作用。方法:C57BL/6J雄性小鼠(8周龄)随机分为假手术(sham)组、UUO模型组、他达拉非新剂型治疗(1 mg/kg)组和他达拉非原研药治疗(5 mg/kg)组,每组6只。采用手术构建UUO模型,造模后连续7 d灌胃治疗。应用全自动生化分析仪检测各组小鼠血清中肌酐(serum creatinine,SCr)水平,通过肾脏组织病理学染色和Western blot实验观察他达拉非肠溶缓释新剂型对肾脏纤维化小鼠的治疗作用。结果:与sham组相比,肾脏纤维化小鼠SCr水平显著升高,肾小管可见空泡变性、扩张,伴明显炎症细胞浸润和胶原纤维沉积,纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达显著增加(P<0.05);他达拉非新剂型和原研药治疗均可显著降低肾纤维化小鼠SCr水平,改善患侧肾组织结构的损伤,减少胶原纤维的沉积,抑制FN及α-SMA的表达和分布(P<0.05)。结论:他达拉非肠溶缓释新剂型可显著减少肾组织间质中细胞外基质的沉积,减轻输尿管梗阻引起的纤维化和肾功能损伤,且与他达拉非原研药相比,具有低剂量、高疗效的显著优势。

龙胆苦苷腹腔注射对单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化的改善作用及其机制

目的 探讨龙胆苦苷(GPS)对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化的改善作用及其机制。方法将25只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组、模型对照组、GPS低剂量组、GPS高剂量组、厄贝沙坦组,每组各5只。假手术组正常饲养,其余四组采用结扎单侧输尿管的方式建立UUO模型。造模成功后,GPS低、高剂量组分别给予0.1、0.2 g/kg GPS腹腔注射,厄贝沙坦组给予0.02 g/kg厄贝沙坦腹腔注射,模型组和假手术组给予等体积生理盐水腹腔注射,连续7 d。处死小鼠,取肾脏组织,采用HE染色法观察肾组织形态学变化,Masson染色法观察肾组织纤维化情况,采用Western blotting法、RT-qPCR法检测肾组织纤连蛋白(Fn)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白及mRNA表达。另取6只小鼠,随机分为模型组和干预组各3只,建立UUO模型后,干预组给予0.2 g/kg GPS腹腔注射,模型组给予等体积生理盐水腹腔注射,连续7 d。处死小鼠,取肾脏组织进行转录组测序,分析两组差异表达基因,并进行GO和KEGG通路富集,最后采用RT-qPCR法进行验证。结果 与假手术组比较,模型对照组肾小管明显扩张,肾组织大量炎性细胞浸润,肾间质大量胶原纤维沉积;与模型对照组比较,GPS低、高剂量组肾脏组织肾小管扩张、炎性细胞浸润有一定程度减轻,肾间质纤维化改善,其中GPS高剂量组改善效果更明显。与假手术组比较,模型对照组肾脏组织Fn、α-SMA蛋白及mRNA表达水平均升高;与模型对照组比较,GPS低、高剂量组肾脏组织Fn、α-SMA蛋白及mRNA表达水平均降低,且GPS高剂量组低于低剂量组(P均<0.05)。测序分析结果显示,模型组与干预组存在710个差异表达基因。GO富集分析显示,差异表达基因主要集中在细胞进程、生物调节、生物进程调控等方面;KEGG通路富集分析发现,差异表达基因涉及Ras、Rap1、PI3K/AKT、MAPK信号通路等。筛选出2个有效基因HGF、CCDC3进行验证,干预组肾组织HGF、CCDC3表达水平较模型组升高(P均<0.05),与测序结果一致。结论 GPS能够有效改善UUO小鼠肾脏纤维化,且高剂量GPS改善作用更明显;其作用机制可能与上调HGF及CCDC3表达作用于Rap1、Ras、PI3K/AKT、MAPK信号通路等生物学途径有关。

银杏叶提取物对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响及机制

目的探究银杏叶提取物(GBE)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化(RIF)的影响及机制。方法随机选取20只SD大鼠作为Sham组,54只SD大鼠UUO建模成功后随机均分为模型组、GBE组和厄贝沙坦组。观察各组大鼠肾组织病理变化,比较各组大鼠血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)水平及肾组织纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原蛋白(Col-I)、肝细胞生长因子(HGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果与Sham组比较,其他组SCr、BUN、24 h尿蛋白、MDA、ROS水平及FN、α-SMA、Col-I、TGF-β1表达显著升高,SOD水平及HGF表达显著下降(P<0.05)。与模型组比较,GBE组和厄贝沙坦组SCr、BUN、24 h尿蛋白、MDA、ROS水平及FN、α-SMA、Col-I、TGF-β1表达显著下降,SOD水平及HGF表达显著升高(P<0.05)。GBE组SCr、BUN、24 h尿蛋白、MDA、ROS水平低于厄贝沙坦组,SOD高于厄贝沙坦组(P<0.05)。结论GBE可抑制UUO大鼠RIF发生及进展,保护肾功能,其机制可能与纠正HGF/TGF-β1平衡失调有关。

白藜芦醇抑制肾纤维化减轻单侧输尿管梗阻诱导的肾损伤

目的研究白藜芦醇抑制肾纤维化对单侧输尿管梗阻诱导的肾损伤的减轻作用及相关机制。方法以Sprague-Dawley(SD)大鼠和成纤维细胞NRK-49F为实验对象,分别进行体内研究和体外验证,体内:SD大鼠行单侧输尿管梗阻诱导建立TIF大鼠模型,将大鼠随机分为4组(假手术+空白组、假手术+白藜芦醇组、模型+空白组和模型+白藜芦醇组),每组12只大鼠。体外:将NRK-49F细胞用重组TGF-β1(5 ng/mL)或白藜芦醇(10和100μmol/L)处理后随机分为4组(对照组、TGF-β1组、TGF-β1+白藜芦醇低剂量组和TGF-β1+白藜芦醇高剂量组)。Masson’s染色检测肾脏中总胶原蛋白沉积;免疫组织化学染色检测组织中E-cadherin、GFAP和Ki67阳性细胞的表达;免疫荧光染色检测细胞中Ki67阳性细胞的表达;蛋白质印迹检测组织中E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Rac1、c-Myc、Bcl-2、Cyclin D1、α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达。结果与对照组比较,白藜芦醇可以抑制大鼠体内单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾脏中总胶原蛋白的过度沉积,下调α-SMA阳性成肌纤维细胞减少波形蛋白、Ⅰ型和Ⅲ型胶原,抑制Rac1、GFAP和N-cadherin的上调以及E-cadherin的下调;与假手术组比较,白藜芦醇可显著降低UUO大鼠中Ki67阳性细胞比率,并抑制c-Myc,Bcl-2和cyclin D1的表达;白藜芦醇抑制体内增殖相关途径Wnt/β-catenin的激活;体外实验表明白藜芦醇治疗可减少成纤维细胞和TECs的增殖,从而抑制TGF-β1介导的表型转化和ECM积累。结论白藜芦醇通过抑制Wnt/β-catenin通路的活性,抑制成肌纤维细胞的积累,并减轻了肾小管间质纤维化。

白藜芦醇通过调控AREG/EGFR通路治疗输尿管梗阻后继发肾损害的作用

目的探讨白藜芦醇(Resveratrol,RSV)通过双调蛋白(Amphiregulin,AREG)/表皮生长因子受体(Epider-mal Growth Factor Receptor,EGFR)通路减轻输尿管梗阻后继发肾损伤的保护机制。方法选取2023年2—9月牡丹江医学院实验动物中心饲养30只SD大鼠为研究对象,依据随机数字表法分为对照组、单侧输尿管梗阻(Unilateral Ureteral Obstruction,UUO)组和UUO+白藜芦醇组,每组10只。对比3组小鼠的氧化应激指标[丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)]、AREG及EGFR的mRNA表达水平,分析AREG/EGFR通路标志物和肾纤维化(Renal Interstitial Fibrosis,RIF)相关指标[纤连蛋白(Fibronectin,FNO)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth Muscle Actin,α-SMA)、E-黏连蛋白(E-cadherin)]。结果与对照组比较,UUO组的α-SMA和FNO蛋白表达水平升高,E-cadherin蛋白表达降低,MDA表达水平增高,SOD表达水平降低,AREG、EGFR蛋白表达增高,差异有统计学意义(P均<0.05)。与UUO组比较,UUO+RSV组的α-SMA和FNO蛋白表达下降,E-cadherin蛋白表达升高,MDA表达水平降低,SOD表达水平增高,AREG、EGFR蛋白表达下降,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论白藜芦醇通过调控AREG/EGFR通路改善UUO大鼠RIF及氧化应激。

多层螺旋CT尿路造影在诊断输尿管梗阻性疾病中的准确性和应用价值研究

探究多层螺旋CT尿路造影(CTU)在诊断输尿管梗阻性疾病中的准确性和应用价值。方法 选择2021年4月到2023年8月我院收治的47例疑似输尿管梗阻性疾病患者,采用多层螺旋CT尿路造影检查,并与手术及其他检查结果对比分析,统计其准确率、敏感度、特异度等指标。结果 在47例患者中,CTU对输尿管炎症、结石、肿瘤、结核以及其他的诊断准确率分别为80.00%、100.00%、83.33%、83.33%、66.67%,总计为87.23%。和病理检查对比,多层螺旋CT在诊断输尿管梗阻中的准确度、敏感度和特异度依次为93.62%(44/47)、95.35%(41/43)、75.00%(3/4)。结论 多层螺旋CT尿路造影在诊断输尿管梗阻性疾病中的准确性较高,可以提供高质量的三维图像,具有更高的准确性和敏感性。不仅可以帮助医生明确诊断输尿管梗阻性疾病,还可以帮助确定梗阻的程度和位置,指导治疗方案的选择和监测治疗效果。

含笑内酯通过抑制NF-κB/NLRP3轴改善单侧输尿管梗阻模型小鼠的肾脏病变

目的探究含笑内酯(MCL)对单侧输尿管梗阻(UUO)模型小鼠肾脏病变的干预作用及机制。方法将雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术(Sham)组、UUO组、UUO+MCL组,UUO+MCL组建立UUO模型前1 d以25 mg/kg MCL灌胃。术后8 d采集肾组织标本进行HE、Masson、TUNEL染色;蛋白免疫印迹(Western blot)和免疫组化检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、核因子(NF)-κB p65蛋白表达情况。结果HE染色结果显示,Sham组小鼠肾组织无明显病变;UUO组肾小管进行性扩张,间质水肿伴有少量的炎性细胞浸润;UUO+MCL组肾脏病变较UUO组明显改善。Masson染色结果显示,与Sham组相比,UUO组胶原容积分数明显增加,而UUO+MCL组胶原容积分数较UUO组明显减少。TUNEL染色结果显示,与Sham组相比,UUO组细胞凋亡率升高,UUO+MCL组较UUO组细胞凋亡率明显下降。Western blot和免疫组化结果显示,与Sham组相比,UUO组肾组织中NLRP3、caspase-1、IL-1β、TNF-α、p-NF-κB p65的表达水平均升高;与UUO组相比,UUO+MCL组上述因子均显著下降。结论UUO小鼠肾组织NLRP3炎症小体及相关炎性因子表达增加,MCL通过抑制NF-κB通路及NLRP3炎症小体的活化,减轻肾小管间质的炎症反应,从而改善肾纤维化。

益肾活血方对单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化的改善作用及机制研究

目的 探讨益肾活血方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)小鼠肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)及能量代谢因子腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)、沉默信息调节因子3(silent information regulator 3,SIRT3)、肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(carnitine palmitoyltransferase 1A,CPT1A)、过氧化物酶增殖激活受体-γ共激活子-1(peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator-1α,PGC-1α)水平的影响。方法 90只C57BL/6雄性小鼠随机分为6组:假手术组,模型组,白藜芦醇组,益肾活血方低、中、高剂量组,每组15只。造模术后第1天(d1)开始,益肾活血方高、中、低剂量组分别按(34.4、17.2、8.6 g·kg^(-1))进行灌胃,白藜芦醇组予50 mg/(kg·d)灌胃,假手术组及模型组予等体积生理盐水灌胃,每日1次。造模成功后第7、14、21天(d7、d14、d21),每组随机处死小鼠5只,检测尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)的含量,HE及Masson染色观察肾组织病理结构变化,Western blot及qPCR法检测肾组织AMPK、SIRT3、CPT1A、PGC-1α蛋白表达及mRNA表达。结果 与假手术组相比,同时间段的模型组BUN、Scr水平显著升高(P<0.001)。与模型组相比,同时间段白藜芦醇组和益肾活血方(低、中、高剂量)组BUN、Scr浓度均明显下降(P<0.01或P<0.001);与白藜芦醇组相比,d21益肾活血方高剂量组对肾损伤治疗效果更明显(P<0.001)。模型组中AMPK、SIRT3、PGC-1α、CPT1A蛋白表达量及mRNA表达与假手术组相比明显下降(P<0.01或P<0.001),与模型组相比,白藜芦醇组、益肾活血方(中、高)剂量组d14与d21AMPK、SIRT3、CPT1A、PGC-1α蛋白表达及mRNA表达显著上调(P<0.001)。结论 益肾活血方能改善肾功能,延缓肾纤维化,这可能与激活线粒体上能量因子SIRT3及AMPK表达,促使PGC-1α、CPT1A活化有关。

两种术式在缓解恶性输尿管梗阻疗效中的对比研究

目的:探讨恶性输尿管梗阻(malignant ureteral obstruction,MUO)现有的临床治疗方案和经验,讨论恶性输尿管梗阻时使用经皮肾脏穿刺引流(percutaneous nephrostomy,PN)或输尿管支架置入术(ureteral stenting,US)的临床适用范围,明确2种术式在缓解恶性输尿管梗阻时肾功能损伤的有效性。方法:回顾性纳入重庆医科大学附属第一医院泌尿外科2021年1月至2023年5月诊断为恶性输尿管梗阻的患者,严格筛选纳入及排除标准后共有76例患者入组并随机分为PN组(n=22)与US组(n=54),对患者基本特征及围术期、术后半年随访数据进行病例对照研究以反映肾功能在2组中的差异,采用SPSS 21.0版本对数据进行处理分析。结果:2组患者在性别(P=0.017)、手术侧肾积水程度(P=0.000)的比较,差异有统计学意义。2组患者术前3 d比较尿素氮(P=0.002)、血肌酐(P=0.003),术后1 d尿素氮(P=0.017)、血肌酐(P=0.005),差异有统计学意义。术后3 d与术后6个月2组患者在肾功能比较中差异均无统计学意义。结论:恶性输尿管梗阻以宫颈癌多发,其次为位膀胱癌、结直肠癌等。US可选择梗阻或积水较轻、慢性输尿管梗阻、肾功能损伤较轻的患者,可作为缓解输尿管梗阻的首选治疗方案。PN临床常对中至重度肾积水、肾功能损伤较重或者急性肾功能不全的恶性输尿管梗阻患者进行治疗,可作为US失败的替代方案。

益气活血通络方对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏线粒体动力学的影响

目的 探讨益气活血通络方通过调节线粒体动力学改善肾脏损伤的作用机制。方法 将健康雄性Wistar大鼠48只随机分为假手术组、模型组、氯沙坦组、益气活血通络方组,每组12只。采用单侧输尿管结扎手术复制肾纤维化模型,灌胃给药,连续干预14 d。采用HE和Masson染色法观察肾组织的病理形态变化;免疫组化法检测单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾组织中线粒体融合蛋白(mitofusin,Mfn)2及动力相关蛋白(dynamin-relatedprotein,Drp)1的表达;Western blot检测Mfn2、Drp1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)-3及B细胞淋巴瘤(B-cell lymphoma,Bcl)-2的表达;免疫荧光检测Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)的表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠肾小管管腔扩张明显,小管萎缩,上皮细胞坏死、脱落,Collagen Ⅰ、Caspase-3及Drp1表达均明显升高(P<0.05),Mfn2及Bcl-2表达均明显降低(P<0.05);与模型组比较,益气活血通络方和氯沙坦组大鼠肾小管上皮细胞萎缩变性及肾间质纤维化程度显著改善,Collagen Ⅰ、Caspase-3及Drp1表达均明显降低(P<0.05),Mfn2及Bcl-2表达均明显升高(P<0.05)。结论 益气活血通络方可调节UUO大鼠肾脏线粒体动力学,改善肾脏病理损伤。

七叶皂苷钠对单侧输尿管梗阻后小鼠肾积水损伤的保护作用

目的:探讨七叶皂苷钠对小鼠单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)后肾积水损伤的改善及保护作用。方法:随机挑选24只健康雄性8周龄WTC57BL/6小鼠,将其分为假手术组(Sham组)、模型组(单侧输尿管梗阻组,UUO组)和七叶皂苷钠用药组(UUO+七叶皂苷钠组),每组8只。UUO模型为肾积水研究最常用模型,采取腰部切口并丝线结扎一侧输尿管(结扎单侧输尿管,并切除对侧肾脏,以确保单侧出现肾积水,并排除对侧肾脏正常代偿的影响),构建单侧输尿管梗阻小鼠肾积水模型,对各组进行相应处理后,全自动生化分析仪检测血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;制备组织病理切片并行HE染色,光镜下观察肾组织病理学改变并做出对应的病理损伤评分;TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果:与Sham组比较,UUO组Scr(21.49±2.87 vs.11.21±1.79)、BUN(19.80±2.55 vs.9.40±1.78)、TNF-α(20.06±1.32 vs.10.18±0.56),IL-1β(9.65±0.79 vs.3.46±0.59),MDA(26.01±1.02 vs.15.12±1.15),细胞凋亡水平(150.02±14.78 vs.86.82±5.66),肾病理损伤评分(3.00±0.46 vs.0.00±0.00)水平显著升高(P=0.000),以及显著降低的SOD水平(95.63±3.13 vs.143.66±5.44,P=0.000)。与UUO组相比,UUO+七叶皂苷钠组Scr(15.94±0.74 vs.21.49±2.87)、BUN(13.08±0.85 vs.19.80±2.55),TNF-α(15.01±0.90 vs.20.06±1.32),IL-1β(5.62±0.65vs.9.65±0.79),MDA(19.12±1.08 vs.26.01±1.02)、细胞凋亡水平(103.97±10.33 vs.150.02±14.78)、肾病理损伤评分(1.57±0.36 vs.3.00±0.46)水平显著降低(P=0.000),以及显著增加SOD水平(121.04±3.61 vs.95.63±3.13,P=0.000)。结论:七叶皂苷钠通过发挥其抗炎、抑制氧化应激反应以及抗渗出以扩张血管张力作用,从而对UUO后肾积水损伤产生保护作用,成为一种潜在的治疗选择。

异鼠李素抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的机制研究

目的研究异鼠李素(ISO)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化(RIF)的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法将48只SD雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组8只和造模组40只。造模组结扎左侧输尿管制备UUO大鼠模型,假手术组仅游离左侧输尿管,但不做结扎和剪断处理。造模后将造模组大鼠按随机数字表法分为模型组,低、中、高剂量组,氯沙坦组,每组8只。术后第1天低、中、高剂量组分别以2.5、5.0、10.0 mg/mL ISO混悬液,氯沙坦组以5.0 mg/mL氯沙坦混悬液,假手术组和模型组以0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液,均按1 mL/100 g体质量灌胃,1次/d,连续14 d。于末次给药后2 h取大鼠腹主动脉血约3 mL,采用肌氨酸氧化酶法检测血清肌酐(Scr),脲酶法检测血清尿素氮(BUN);取大鼠左侧肾脏组织,采用HE染色法观察其病理改变,Masson染色法观察其纤维化程度并测定胶原容积分数(CVF),免疫组化法和Western blot分别测定E-钙黏蛋白(E-cadherin)和锌指转录因子Snail1(下称Snail1)蛋白相对表达量。结果与假手术组比较,模型组左侧肾脏组织体积明显肿胀,肾实质明显变薄,Scr和BUN显著升高(P均<0.01),形态结构损伤严重,CVF显著上升,E-cadherin蛋白表达水平明显减少,Snail1蛋白相对表达量明显增多(P均<0.01);与模型组比较,各剂量组和氯沙坦组左侧肾脏组织体积明显变小,肾实质均有不同程度增厚,中、高剂量组和氯沙坦组Scr、BUN明显降低(P均<0.05或0.01),低剂量组Scr明显降低(P<0.05),BUN无明显变化(P>0.05),各剂量组和氯沙坦组病理改变均有不同程度减轻,CVF明显降低,E-cadherin蛋白表达水平明显增多,Snail1蛋白相对表达量明显减少(P均<0.05或0.01)。结论ISO可通过抑制Snail1蛋白的表达,干预肾小管上皮细胞-间充质转分化的发生进程,从而延缓肾间质纤维化,发挥肾保护作用。

黄柏酮对单侧输尿管梗阻模型小鼠肾间质纤维化及铁死亡的影响

目的研究黄柏酮对单侧输尿管梗阻(UUO)模型小鼠肾间质纤维化的改善作用,并基于核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)信号通路介导的铁死亡探讨其作用机制。方法将30只小鼠随机分为假手术组、模型组、厄贝沙坦组(阳性对照,20 mg/kg)和黄柏酮低、高剂量组(10、40 mg/kg),每组6只。除假手术组外,其余各组小鼠均通过结扎单侧输尿管建立UUO模型。术后,给药组小鼠腹腔注射相应药物,假手术组、模型组小鼠腹腔注射等体积生理盐水,每天1次,连续7 d。检测小鼠血清中肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)水平,丙二醛(MDA)含量,总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和肾脏组织中Fe^(2+)浓度;苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观察小鼠肾脏组织形态和纤维化情况;免疫组化法检测小鼠肾脏组织中纤连蛋白(Fn)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、GPx4、Nrf2的表达,Western blot法和实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测小鼠肾脏组织中Fn、α-SMA、Nrf2、GPx4、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白及mRNA的表达水平。结果与假手术组比较,模型组小鼠血清中Cr、BUN水平,MDA含量,肾脏组织中Fe^(2+)浓度以及Fn、α-SMA蛋白和mRNA的表达水平均显著升高(P<0.05);血清中T-SOD活力,肾脏组织中Nrf2、GPx4、SLC7A11蛋白和mRNA的表达水平均显著降低(P<0.05);肾脏组织中肾小管扩张,胶原沉积明显,纤维条索较粗且着色较深,肾间质炎症细胞浸润明显。经黄柏酮干预后,小鼠血清或肾脏组织中上述指标(黄柏酮低剂量组SLC7A11 mRNA除外)水平均显著逆转(P<0.05),肾脏组织病理损伤、胶原沉积均有所减轻。结论黄柏酮可改善UUO模型小鼠的肾间质纤维化,具体作用机制可能与激活Nrf2/GPx4信号通路、抑制铁死亡有关。