艾灸对溃疡性结肠炎大鼠结肠及下丘脑辣椒素受体1表达的影响

目的探讨麦粒灸对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠结肠及下丘脑辣椒素受体1(VR1)的影响。方法采用免疫学方法加局部刺激制备实验性UC大鼠模型,随机分为模型组和治疗组,并与正常组作对照,治疗组施以麦粒灸治疗,采用免疫组化染色法观察结肠及下丘脑VR1的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠结肠及下丘脑VR1的表达明显增强(P<0.05);与模型组比较,治疗组大鼠结肠及下丘脑VR1的表达明显降低(P<0.05)。结论实验性UC模型大鼠结肠及下丘脑VR1增加,麦粒灸可以降低UC大鼠结肠及下丘脑VR1的表达。

慢性胃食管反流大鼠背根神经节中辣椒素受体1和大麻素受体的表达

背景:食管痛觉高敏参与胃食管反流病(GERD)的发病,而辣椒素受体1(TRPV1)和大麻素系统的激活在疼痛调控中发挥双向作用。目的:检测慢性胃食管反流大鼠相应节段背根神经节(DRG)中TRPV1和大麻素受体(CB1、CB2)的表达情况,探讨两者在GERD中的作用。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为反流组(R组)、对照组(S组)。采用胃底结扎联合幽门限制法构建慢性胃食管反流模型。采用免疫荧光法和蛋白质印迹法检测大鼠DRG中TRPV1和CB1、CB2的表达,并分析TRPV1蛋白表达与CB1、CB2蛋白表达的相关性。结果:免疫荧光法示R组DRG中TRPV1表达较S组显著上调(905.24±134.82对648.43±135.13,P=0.000);而CB1(677.06±123.75对836.89±101.00,P=0.013)、CB2(513.99±79.80对709.63±43.25,P=0.000)表达显著下调。蛋白质印迹法亦显示,R组TRPV1蛋白表达显著高于S组(0.98±0.01对0.64±0.09,P=0.001),CB1(0.86±0.05对0.96±0.06,P=0.013)、CB2(0.75±0.03对0.81±0.05,P=0.019)蛋白表达显著低于S组。TRPV1蛋白表达与CB1蛋白表达呈负相关(r=-0.836,P=0.001),而与CB2蛋白表达无关(r=-0.351,P=0.263)。结论:慢性胃食管反流大鼠中TRPV1蛋白表达上调与CB1蛋白表达下调密切相关,酸在调节受体分子中起关键作用。

背根神经节内代谢型谷氨酸受体2与酸敏感性离子通道3和辣椒素受体1的共存研究(英文)

代谢型谷氨酸受体(mGluR)2/3在伤害性信息从外周向脊髓传递的过程中发挥着重要作用。以往研究证明在大鼠中mGluR2参与了机械性超敏和热超敏的形成,因此本研究拟采用免疫荧光组织化学染色技术揭示背根节(DRG)中mGluR2和酸敏感性离子通道3(ASIC3),一个多觉机械性感受器,或者和热伤害性感受器辣椒素受体(TRPV1)的共存情况。结果显示:mGluR2主要存在于DRG神经元的胞浆中。计数结果显示DRG中35.85%的神经元呈mGluR2免疫阳性。在这些阳性神经元中,82.61%为小细胞(直径小于30μm);5.79%为中等细胞(直径为30～50μm);11.59%为大细胞(直径大于50μm)。进一步在免疫荧光双重标记切片上可观察到分别有42.45%和79.78%的小型mGluR2阳性神经元同时表达ASIC3或TRPV1免疫阳性。以上结果提示mGluR2主要存在于DRG中的小神经元中,这些神经元通常被认为是外周Aδ-或C-纤维传入的伤害性感觉神经元,在这类神经元中mGluR2与ASIC3或TRPV1均有大量共存,提示这些共存可能与机械性或热超敏的产生或者维持有着重要的联系。

脊髓辣椒素受体1(VR1)参与热敏感性的证据:老龄大鼠行为学和形态学相结合观察结果(英文)

以往的研究表明外周热伤害性感受器辣椒素受体 1(VR1,也称为 TRPV1)在热伤害性感觉中发挥着重要作用 ,但是脊髓 VR1在其中扮演的角色尚不清楚。因此本实验利用老龄大鼠蜜蜂毒 (BV)模型热痛敏 (仅持续 2 4h)和机械性痛敏 (持续 1月以上 )时程分离的行为学特点研究了在老龄大鼠中脊髓 VR1在外周组织损伤和炎性痛状态下的热敏感性中扮演的角色。在 BV注射后 4h(即热痛敏和机械性痛敏均存在时 )、2周 (即热痛敏消失而机械性痛敏存在时 )和 2月 (即两种痛敏均消失时 ) ,验证了热敏感性 (辐射热刺激 )和机械敏感性 (von-Frey纤维刺激 ) ,随后进行脊髓背角的 VR1免疫组织化学染色。结果如下 :(1)在未处理老龄大鼠组 ,VR1样免疫反应产物 (L I)在脊髓背角主要分布于 I、II层 ;(2 )在经 BV处理老龄大鼠组 ,外周损伤后 4h脊髓背角 VR1-L I有轻微增加 ,但在 2周后 VR1-LI表达水平明显低于对照水平 ,而且在 BV注射 2月后 ,即两种痛敏均消失时 ,VR1-L I表达水平下调仍非常明显。本结果表明脊髓背角的 VR1在空间分布上不随年龄改变而改变 ,但在周围化学组织损伤或炎症状态下 ,VR1-LI的表达水平可能与热敏感性的变化有动态相关性。由此我们提出除了外周位点 ,脊髓背角的

老龄化对辣椒素受体1(TVRV1)在大鼠脊髓背角表达的影响

已有报道提出老龄化进程可能对伤害性行为表现有一定的影响 ,但是相关的机制仍不很明确。辣椒素受体 VR1(现命名为 TRPV1)已被证实为热伤害性感受器 ,老龄化进程中 TRPV1在痛传导路中的表达水平是否随年龄改变尚不清楚。本研究中应用免疫组织化学方法对三个年龄段 (青龄 :2～ 3月 ;中龄 :17～ 19月 ;老龄 2 4～ 2 6月 )大鼠脊髓背角的 TRPV1的表达进行了观察 ,结果显示 :(1) TRPV1在正常大鼠脊髓背角浅层的分布密度及其分布面积随年龄增长而逐渐减小 ;(2 )在外周致炎状态下 ,脊髓背角 TRPV1免疫反应产物密度在同年龄组内比较 ,青龄组减少 ,中龄和老龄组增加 ,而三年龄组内比较其分布面积时都明显增大 ,并且在非致炎组存在的组间差异消失。在青龄组大鼠 ,TRPV1免疫反应产物密度结果和分布面积结果并不一致 ,其原因未知。综上所述 ,本结果提示正常大鼠脊髓含 TRPV1的纤维终末随年龄增长而减少 ,但是在致炎情况下 ,TRPV1支配面积减少的现象消失。这可能是由于外周炎症刺激重新募集了背根节神经元 ,而老龄大鼠这种能力更强。本实验还提示 ,用免疫组织化学技术检测脊髓化学物质有无变化 。

辣椒素受体1在功能性消化不良上消化道中的表达及其意义

背景:功能性消化不良(FD)是临床上最常见的胃肠疾病之一,严重影响患者的生活质量。目的:探讨辣椒素受体1(TRPV1)在FD患者食管、胃窦、十二指肠黏膜组织中的表达及其意义。方法:选取2012年6月—2014年2月西南医科大学附属医院符合罗马Ⅲ诊断标准的FD患者30例和30例正常对照者,采用免疫组化染色检测食管下段、胃窦部、十二指肠球部黏膜TRPV1、降钙素基因相关肽(CGRP)的表达。结果:FD组食管下段、胃窦部、十二指肠球部黏膜TRPV1、CGRP表达显著高于对照组(P<0.05)。对照组十二指肠球部TRPV1表达显著高于食管下段(P<0.05),FD组各部位间TRPV1表达差异无统计学意义(P>0.05)。FD组胃窦部CGRP表达显著高于十二指肠球部(P<0.05),对照组各部位间CGRP表达差异无统计学意义(P>0.05)。对照组TRPV1表达与CGRP表达呈正相关(r=0.443,P<0.05),FD组TRPV1表达与CGRP表达无关(r=0.277,P>0.05)。结论:FD患者TRPV1在食管下段、胃窦部、十二指肠球部黏膜的表达均较正常人显著增加,可能与其内脏高敏感有关。

比较电针“大肠俞”“天枢”穴对肠易激综合征模型大鼠内脏敏感性、Cajal间质细胞和辣椒素受体1的影响

目的:比较电针"大肠俞"和"天枢"穴对肠易激综合征(IBS)模型大鼠内脏敏感性、结肠Cajal间质细胞(ICC)基因表达产物c-kit和辣椒素受体1(TRPV1)的影响,探讨电针大肠俞募穴对肠易激综合征疗效和相关作用机制是否存在差异。方法:将42只Wistar新生大鼠随机分为空白组(9只)、造模组(33只),采用母子分离、幼鼠醋酸灌肠和直结肠扩张法制备IBS大鼠模型,将造模组存活的27只幼鼠随机分为模型组、大肠俞组、天枢组,每组9只。大肠俞组和天枢组分别取"大肠俞""天枢"穴电针干预20min,疏密波,频率2Hz/100Hz,强度0.1~0.3mA,隔日1次,共治疗5次。模型组用软布套固定20min,不针刺。空白组不予以任何操作。观察干预后各组大鼠大便性状Bristol分级评分;采用腹部回撤反射对大鼠进行内脏敏感性评估,观察出现第1次收缩波的潜伏期和90s内收缩波个数;并采用免疫组织化学法检测结肠ICC特异性标志物c-kit和TRPV1的阳性表达。结果:与空白组相比,模型组大鼠Bristol评分升高,潜伏期缩短,收缩波个数增多,c-kit和TRPV1阳性表达水平增强(均P<0.01);与模型组比较,大肠俞组和天枢组大鼠干预后大便Bristol评分下降,潜伏期延长,收缩波个数减少,c-kit和TRPV1阳性表达水平均明显减弱(P<0.05,P<0.01);与大肠俞组比较,天枢组TRPV1阳性表达水平减弱(P<0.05)。结论:电针"大肠俞"和"天枢"穴均可改善IBS模型大鼠的腹泻情况,降低大鼠的内脏敏感性,其作用机制可能与其调节结肠c-kit和TRPV1表达有关,电针"天枢"穴对结肠TRPV1表达的调节作用较"大肠俞"穴更为明显。

辣椒素受体-1、一氧化氮和降钙素基因相关肽在大鼠上颈段脊髓刺激诱导脑血流增加中的作用

目的:探讨辣椒素受体-1(TRPV1)、一氧化氮(NO)和降钙素基因相关肽(CGRP)在上颈段脊髓刺激(cSCS)诱导脑血流(CBF)增加中的作用和相互关系。方法:将雄性SD大鼠在全麻下行C1-2椎板切除暴露颈段脊髓,刺激电极放置在左侧C2脊髓背柱上。切开颅骨暴露左侧大脑皮质,CBF变化由激光多普勒血流仪测量。分析90%运动阈值(MT)cSCS在静脉注射辣椒素类似物树胶脂毒素(RTX)2μg/kg(n=9)、CGRP8-37(CGRP受体拮抗剂)2.5mg/kg(n=8)、L-NAME(一氧化氮合酶抑制剂)5.0mg/kg(n=7)前和20min后同侧脑血流变化(%△CBF)及脑血管阻力变化(%△CVR)。结果:60%和90%MT的cSCS使同侧大脑皮质血流增加(P<0.05,n=9)。静脉注射含有TRPV1纤维脱敏化的RTX(2μg/kg)后,90%MT的cSCS引起%△CBF由65.0%±9.5%减少到27.4%±7.2%(P<0.05,n=9),%△CVR由-28%±7.6%增加到-14.8%±4.2%(P<0.05,n=9);静脉注射CGRP8-37(2.5mg/kg)使90%MT的cSCS引起增加的CBF降低(%△CBF:63.4%±10.4%vs.22.7%±5.3%,P<0.05,n=8;%△CVR:-27.9%±5.9%vs.-14.8%±3.2%,P<0.05,n=8);静脉注射L-NAME(5.0mg/kg)使90%MT的cSCS引起增加的CBF显著下降(%△CBF:58.1%±9.5%vs.14.0%±2.5%,P<0.01,n=7;%△CVR:-20.4%±4.3%vs.-7.6%±0.6%,P<0.01,n=7)。结论:TRPV1、NO和CGRP参与cSCS引起显著的脑血流增加或脑血管扩张,它可能为cSCS治疗缺血性脑血管病提供新的理论依据。

激活辣椒素受体是调控下颌下腺分泌的新途径

唾液对于维持摄食、消化、味觉、语言和保护口腔黏膜等口腔及消化道正常功能具有非常重要的作用。在静息状态下,下颌下腺的分泌量占全唾液量的60%~65%。全身性疾病如舍格伦综合征（Sjgren’s syndrome）或局部疾病,如慢性下颌下腺炎症和下颌下腺失神经损伤,以及某些治疗后的并发症如头颈部肿瘤行放射治疗等,可导致腺体的分泌功能受损,唾液的分泌量降低,影响进食和吞咽等功能，严重者继发猖獗龋和念珠菌感染等并发症，严重影响患者的生活质量，因此，寻找有效的干预下颌下腺分泌的靶点，对防治下颌下腺功能低下具有重要的理论意义和临床应用价值。

辣椒素对大鼠胃动力的影响及作用机制

目的探讨辣椒素对大鼠胃动力的影响及其作用机制。方法选择SD大鼠160只,随机分为对照组及辣椒素低、中、高剂量组,每组40只。辣椒素低、中、高剂量组分别给予0.01、0.1、0.5 mg/mL的辣椒素溶液灌胃,对照组给予等量辣椒素溶剂灌胃。各组分别于灌胃3天及灌胃1、2、4周,随机取10只,采用核素显像法检测胃半排空时间(t50%)、65 min时胃排空率(GE65 min);处死后剖腹取胃,采用免疫组化二步法检测胃组织辣椒素受体1(TRPV1)、降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)表达。结果辣椒素低、中、高剂量组各时间点较对照组同期t50%有升高趋势,GE65 min有降低趋势,均表现出抑制胃排空作用;辣椒素高、中剂量组各时间点抑制胃排空效果强于辣椒素低剂量组(P均<0.05),辣椒素中、高剂量组抑制胃排空的效果相当(P均>0.05)。辣椒素低、中、高剂量组各时间点胃黏膜TRPV1表达均较对照组同期明显增加(P均<0.05),但辣椒素低、中、高剂量组之间比较差异无统计学意义(P均>0.05)。辣椒素低、中、高剂量组各时间点胃黏膜CGRP表达较对照组有升高趋势;灌胃3天及1周,辣椒素高、中剂量组CGRP表达升高较辣椒素低剂量组更明显(P均<0.05)。灌胃2、4周,辣椒素高、中剂量组胃黏膜CGRP表达显著降低(P均<0.05)。辣椒素低、中、高剂量组各时间胃黏膜SP表达与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论辣椒素具有抑制大鼠胃排空作用,且剂量越大,抑制效果越强;随着作用时间延长,辣椒素剂量越大抑制胃排空效果减弱越明显,其原因可能与胃黏膜CGRP大量消耗有关。

TRPV1在消化系统疾病中的研究进展

瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)属于瞬时受体电位(TRP)离子通道家族,是一种非选择性阳离子配体门控通道。大量研究显示TRPV1在消化道广泛分布,且在多种消化系统疾病中发挥重要作用。近年来,TRPV1成为消化领域研究的热点。本文就TRPV1在消化系统疾病中的研究进展作一综述。

TRPV1参与针和灸不同刺激方式对小鼠ghrelin和GHSR-1α的影响

目的通过观察针刺或热灸不同刺激方式干预足三里穴区对C57BL/6野生型小鼠和TRPV1^(-/-)基因敲除小鼠血浆中脑肠肽(ghrelin)和大脑前额叶皮质中生长激素促分泌素受体-1α(GHSR-1α)含量的改变,探讨辣椒素受体1(TRPV1)参与针、灸不同刺激方式对胃肠功能调控通路ghrelin-GHSR-1α调节的差异性。方法24只C57BL/6野生型小鼠随机分为C57BL/6空白组、C57BL/6针刺组和C57BL/6热灸组,每组8只;24只TRPV1^(-/-)基因敲除小鼠随机分为TRPV1^(-/-)空白组、TRPV1^(-/-)针刺组和TRPV1^(-/-)热灸组,每组8只。C57BL/6空白组和TRPV1^(-/-)空白组不予以处理;C57BL/6针刺组和TRPV1^(-/-)针刺给予手针干预;C57BL/6热灸组和TRPV1^(-/-)热灸组给予热灸干预。采用ELISA检测小鼠血浆中ghrelin含量和Western Blot法检测小鼠大脑前额叶皮质中TRPV1和GHSR-1α表达水平的变化。结果C57BL/6野生型小鼠中,与C57BL/6空白组相比,C57BL/6针刺组与热灸组血浆ghrelin表达水平均显著降低(P<0.05),前额叶皮层TRPV1含量表达增加(P<0.05)、GHSR-1α降低(P<0.05),但三者在针刺组和热灸组间差异无统计学意义(P>0.05)。TRPV1^(-/-)基因敲除小鼠中,与TRPV1^(-/-)空白组对比,TRPV1^(-/-)针刺组和热灸组血浆ghrelin水平和前额叶皮质GHSR-1α表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论针刺、热灸均可通过激活TRPV1的生物活性,影响胃肠功能调控通路ghrelin-GHSR-1α的调节作用。

TRPV1在FCDⅠ型和Ⅱa型难治性癫痫中的表达

目的研究儿童局灶性皮质发育不良I型(focal cortical dysplasia type I,FCDI)和IIa型(FCDIIa)所致的难治性癫痫病灶中瞬时感受器电位辣椒素受体1型(transient receptor potential vanilloid receptor 1,TRPV1)的表达,探讨其在FCD所致难治性癫痫发生机制中的作用。方法选取20例儿童FCDI型、FCDIIa型难治性癫痫患者临床手术切除的皮层致痫灶标本,进行FCD病理分型后与对照组(8例尸检来源的正常皮层标本)作比较,利用RT-PCR、Western Blot等技术检测FCDⅠ型和FCDⅡa型致痫灶中TRPV1的mRNA、蛋白水平的表达情况,并进一步利用免疫组织化学(IHC)研究TRPV1的细胞定位。结果在FCDI型、FCDIIa型致痫灶皮层中,RT-PCR与Western blot结果显示,TRPV1在mRNA、蛋白水平均较对照组明显升高(P<0.05)。IHC结果显示,在正常皮层中TRPV1在神经元和胶质样细胞上都有表达,而在FCD致痫灶中与癫痫发作程度密切相关的"柱形结构"和异型神经元上免疫染色强度明显高于正常皮层。结论 FCDI型、FCDIIa型难治性癫痫患者致痫灶皮层中TRPV1的表达增高,提示其可能与FCD所致难治性癫痫密切相关。

按法刺激肌筋膜激痛点模型大鼠局部对TRPV1的影响

目的研究按法刺激激痛点是否通过激活辣椒素受体1(transient receptor potential vanillic acid subtype 1,TRPV1)进而产生效应,初步探讨按法止痛的作用机制。方法60只SD大鼠随机分为空白组10只和造模组50只,空白组不进行造模和干预操作,仅正常饲养;造模组以局部击打配合离心跑台法建立大鼠慢性激痛点模型。造模成功后,将40只成模大鼠再随机分为模型组、按法组、按法+抑制剂组、按法+溶剂组,每组10只。模型组不进行干预;按法组给予局部按法治疗;按法+抑制剂组给予腹腔注射辣椒平溶液(TRPV1抑制剂)和局部按法治疗;按法+溶剂组给予腹腔注射溶剂和局部按法治疗。按法操作由自制按法仪器进行。取材后以免疫组化法检测TRPV1;以酶联免疫吸附法测定内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide sgnthase,eNOS)、一氧化氮(nitric oxide,NO)和五羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)含量。结果(1)与空白组相比,模型组TRPV1平均光密度值增高(P<0.05);与模型组相比,按法组和按法+溶剂组TRPV1平均光密度值增高(P<0.05),按法+抑制剂组平均光密度值仅有数值降低但差异无统计学意义(P>0.05);与按法组和按法+溶剂组相比,按法+抑制剂组TRPV1平均光密度值降低(P<0.05)。(2)与空白组相比,模型组NO和eNOS含量增高(P<0.05);与模型组相比,按法组、按法+抑制剂组和按法+溶剂组的NO和eNOS含量增高(P<0.05);与按法组和按法+溶剂组相比,按法+抑制剂组的NO和eNOS含量降低(P<0.05)。(3)与空白组相比,模型组5-HT含量增高(P<0.05);与模型组相比,按法组、按法+抑制剂组和按法+溶剂组的5-HT含量降低(P<0.05);与按法组和按法+溶剂组相比,按法+抑制剂组的5-HT含量升高(P<0.05)。结论按法刺激激痛点产生去活化效应,其机制可能与激活TRPV1受体、上调eNOS和NO含量、降低5-HT含量有关。

小胶质细胞介导的TRPV1在小鼠缺血性脑卒中后抑郁样行为中的作用和机制

目的:探讨TRPV1对缺血性脑卒中后抑郁样行为的作用和机制。方法:45只雄性小鼠随机分为3组:假手术组(sham),脑缺血再灌注组(I/R),脑缺血再灌注+TRPV1抑制剂Capsazepine组(I/R+CPZ)。建立小鼠大脑中动脉阻塞模型(MCAO),HE染色观察病理性损伤;免疫荧光染色观察小胶质细胞的激活;免疫印迹检测IL-1β的表达;7 d后进行强迫游泳和悬尾实验。结果:行为学检测显示与I/R组相比,TRPV1抑制剂可显著改善小鼠的抑郁样行为(P<0.001)。HE染色结果表明,I/R+CPZ组杏仁核区病理损伤明显减轻。免疫荧光染色观察结果显示,杏仁核小胶质细胞有TRPV1的表达,且I/R+CPZ组与I/R组相比,小胶质细胞的激活明显减少(P<0.001)。免疫印迹检测结果显示,给药后IL-1β的表达量明显少于IR组(P<0.05)。结论:抑制TRPV1可减轻炎症反应,改善缺血性脑卒中后小鼠的抑郁样行为。

功能性消化不良TRPV1表达和HP感染的关系及意义

目的探讨辣椒素受体1（TRPV1）分别在幽门螺杆菌（HP）阳性和HP阴性功能性消化不良（FD）患者的变化及临床意义。方法168例FD患者根据HP感染与否分为FD-（HP-）组和FD-（HP＋）组，并选择50例健康者为对照组，比较三组中TRPV1基因的mRNA水平、胃动素、胃泌素和生长抑素水平，分析TRPV1基因的mRNA水平与胃动素、胃泌素和生长抑素的相关性。结果TRPV1基因mRNA水平、胃动素、胃泌素和生长抑素在FD-（HP-）组与对照组之间、FD-（HP-）组与FD-（HP＋）组之间差异均具有统计学意义（P〈0．05），且FD-（HP-）组和对照组TRPVl基因mRNA水平和生长抑素水平均低于FD-（HP＋）组（P〈0．05），胃动素和胃泌素水平高于FD-（HP＋）组（P〈005）。TRPV1基因mRNA水平与胃动素及胃泌素均呈明显负相关，与生长抑素水平呈明显正相关。结论TRPV1在FD患者中呈高水平表达，且HP感染可诱发其TRPV1基因表达的增加，提示抗HP治疗对HP阳性的FD患者有益。

TRPV1介导的桑白皮预处理阻断Ca^(2+)-Ras-p38MAPK通路对高血糖小鼠背根神经元的保护效应

目的 探讨桑白皮预处理对高血糖小鼠背根神经元的保护机制。方法 将C57BL/6小鼠(20±2) g 100只随机分为正常组(A)、高血糖组(B)、桑白皮预处理组(C)、桑白皮+辣椒素受体(transient receptor potential vanilloid,TRPV1)拮抗剂组(D)、单纯桑白皮组(E)5组,每组20只;B、C、D 3组通过腹腔注射50mg/kg链脲佐菌素(STZ)连续5 d建立高血糖模型;其中,B组以随机血糖>11.1 mmol/L为标准选取样本。检测各组小鼠血糖并观察小鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元损伤程度;Western blot检测背根神经节TRPV1、Ras-GTP、p38MAPK表达水平;钙影像检测急性分离原代DRG神经元相对钙离子浓度。结果 与A组比较,B组血糖明显升高(P<0.01),DRG内出现尼氏体减少等神经损伤,TRPV1、Ras-GTP、p38磷酸化水平增加,神经元胞内钙离子浓度明显升高;与B组比较,C和D血糖升高不明显(P<0.01),未见明显神经元损伤,TRPV1、Ras-GTP、p38磷酸化以及胞内钙离子浓度明显降低。结论 桑白皮有显著的降糖效果和保护神经元效应,可能机制是桑白皮抑制背根神经节TRPV1介导的钙离子内流,从而抑制Ras-p38MAPK信号通路活化。

袁氏扶脾清化方通过调节miR-199a/TLR4/NF-κB信号通路治疗腹泻型肠易激综合征的机制研究

目的:观察袁氏扶脾清化法对肝郁脾虚证腹泻型肠易激综合征(IBS-D)的治疗作用,并基于miR-199a/TLR4/NF-κB信号通路探讨其作用机制。方法:60只雄性SD大鼠,随机选取10只作为正常对照组,其余采用慢性束缚应激加番泻叶水煎剂灌胃法构造IBS-D“肝郁脾虚证”大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、培菲康(175 mg/kg)阳性对照组及袁氏扶脾清化方低(17.5 g/kg)、中(35 g/kg)、高(70 g/kg)剂量组,每组10只。正常对照组和模型组予等体积生理盐水灌胃,连续2 w。观察治疗后各组大鼠的饮食情况、大便性状及体质量变化;HE染色观察各组大鼠结肠黏膜组织病理学;ELISA法检测血清及结肠组织炎性细胞因子IFN-γ、IL-1β水平;免疫组化法观察结肠黏膜中TRPV1表达;Western Blot检测各组大鼠结肠黏膜TLR4、NF-κBp65、Claudin-1、AQP3、TRPV1蛋白表达;实时荧光定量PCR检测结肠黏膜组织中miR-199a的表达。结果:模型组大鼠粪便稀溏、饮食及活动减少、毛发光泽变暗,性情躁动,体质量降低;治疗后粪便逐渐好转,饮食增加,毛发光泽转亮,体质量增加;HE染色显示各组大鼠结肠黏膜完整,未见黏膜糜烂及溃疡。与正常对照组比较,模型组血清及结肠黏膜IFN-γ、IL-1β水平显著升高,结肠黏膜TRPV1、TLR4、NF-κBp65蛋白表达显著升高,Claudin-1、AQP3蛋白及miR-199a表达显著降低。与模型组比较,袁氏扶脾清化方各剂量组大鼠血清及结肠组织IFN-γ、IL-1β水平及结肠黏膜TLR4、TRPV1、NF-κBp65蛋白表达显著降低,Claudin-1、AQP3蛋白及miR-199a表达显著升高。结论:袁氏扶脾清化方可通过调节IBS-D结肠黏膜的miR-199a/TLR4/NF-κB通路,降低血清及肠黏膜炎性因子IFN-γ、IL-1β水平,保护肠黏膜Claudin-1及AQP3,降低TRPV1的表达,从而具有治疗IBS-D的作用。

应用RNAi技术调节VR1基因表达

目的: 通过调节辣椒素受体1(VR1)基因表达,对VR1 基因的功能及疼痛的基因治疗进行基础研究。方法: 应用RNA干扰(RNAi)技术干扰VR1基因在猴肾Cos-7细胞系中的表达。结果:应用RNAi技术特异性抑制了VR1基因在Cos -7细胞中的表达。随着小片段干扰性RNA(siRNA)浓度的增加,VR1 蛋白的表达量逐渐减少。结论:应用RNAi技术可抑制VR1基因的表达,为开发更有效、安全、合理的镇痛药提供实验依据。

止痛消结散对小鼠肿瘤细胞与DRG神经元共培养模型TRPV1表达的影响

目的探讨止痛消结散治疗癌性疼痛的作用机制。方法从小鼠体内成功分离出背根神经节(Dorsal root ganglion,DRG)神经元细胞,在此基础上构建肿瘤细胞与DRG神经元共培养模型及药物干预模型,选取10倍稀释的止痛消结散浸提液进行ELISA、RT-PCR和Western Blot实验,利用ELISA技术检测模型中IL-6的表达水平,利用Western Blot检测模型中DRG神经元的TRPV1蛋白表达水平,利用RT-PCR检测模型中DRG细胞的IL-6R、Trpv1 mRNA表达水平。结果止痛消结散药物干预模型组中IL-6、IL-6R、Trpv1 mRNA表达水平显著下降,目的蛋白TRPV1表达水平显著降低。结论止痛消结散能有效缓解癌性疼痛,其作用机制可能与下调DRG神经元中TRPV1表达水平有关。