长链非编码RNA核富集转录体1促进喉鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的机制研究

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)NEAT1对喉鳞状细胞癌(LSCC)细胞迁移和侵袭的影响,并进一步分析miR-429/锌指E-盒结合同源异形盒1(ZEB1)轴在其中发挥的作用。方法慢病毒转染建立稳定敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞,通过RT-qPCR检测细胞lncRNA NEAT1表达以验证转染效率,通过Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,通过Western blot检测细胞上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白N-cadherin、Vimentin、Slug和Snail表达。通过生物信息学分析miR-429与lncRNA NEAT1和ZEB1 mRNA间的潜在结合位点,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-429与lncRNA NEAT1以及miR-429与ZEB1 mRNA结合。将miR-429抑制剂转染敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞,通过Western blot检测细胞ZEB1表达。进一步检查敲减ZEB1对抑制miR-429的敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞迁移、侵袭和EMT的影响。结果敲减lncRNA NEAT1降低LSCC细胞lncRNA NEAT1表达,抑制细胞迁移和侵袭并下调细胞N-cadherin、Vimentin、Slug和Snail表达。miR-429与lncRNA NEAT1和ZEB1 mRNA间存在潜在结合位点,且miR-429与lncRNA NEAT1以及miR-429与ZEB1 mRNA结合。抑制miR-429逆转了敲减lncRNA NEAT1对LSCC细胞ZEB1表达的抑制作用。此外,敲减ZEB1逆转了抑制miR-429对敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞迁移和侵袭的促进作用及EMT相关蛋白N-cadherin、Vimentin、Slug和Snail表达的上调作用。结论lncRNA NEAT1促进LSCC细胞迁移和侵袭,其机制可能与海绵化miR-429上调ZEB1表达促进LSCC细胞EMT有关。

高三尖杉酯碱对人三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨高三尖杉酯碱(HHT)对人三阴性乳腺癌(TNBC)细胞系MDA-MB-231迁移和侵袭的影响,并初步分析潜在机制。方法 采用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞活力。采用EdU结合实验以评估细胞增殖。分别采用细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭。采用流式细胞术分析乳腺癌干细胞(BCSC)含量。采用球体形成试验评估MDAMB-231细胞“肿瘤球”形成能力。采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测Hedgehog(HH)信号通路效应因子Gli1 mRNA和乳腺癌细胞干性指标Oct4、CD44、Sox2和Nanog mRNA的表达。采用蛋白免疫印迹分析上皮间质转化(EMT)标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白以及Gil1蛋白表达。结果 HHT以剂量依赖性的方式降低MDA-MB-231细胞活力(P<0.05)。HHT可抑制BC细胞的增殖、迁移和侵袭。此外,HHT可下调BC细胞中CD44+/CD24-细胞比例、降低MDA-MB-231细胞形成“肿瘤球”的能力并抑制Oct4、CD44、Sox2和Nanog mRNA表达,提示HHT可抑制MDA-MB-231细胞干性。HHT可通过抑制“肿瘤球”中E-cadherin表达并增加N-cadherin和Vimentin蛋白来可抑制BCSC的EMT。此外,HHT可抑制TNBC中HH/Gli1信号通路活化。同时,HHT能够消除Gli1过表达对TNBC干性和EMT的影响。结论 HHT能够抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭,这可能是通过调控HH/Gli1信号通路以抑制TNBC的干性和EMT来实现。

LINC00240调节miR-124-3p/UHRF1轴对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨LINC00240调节miR-124-3p/环指域泛素样蛋白1(UHRF1)轴对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测食管鳞状癌(ESCC)组织与癌旁组织,ESCC细胞系(ECA109、TE-13、EC9706和KYSE-150)与正常食管上皮HET-1A细胞中LINC00240、miR-124-3p、UHRF1 mRNA表达水平;以ECA109细胞为研究对象,分组分别为shRNA-NC组(转染shRNA阴性对照)、sh-LINC00240组(转染LINC00240 shRNA)、sh-LINC00240+miR-124-3p-inhibitor组(共转染sh-LINC00240与miR-124-3p-inhibitor)、sh-LINC00240+inhibitor-NC组(共转染sh-LINC00240与inhibitor-NC),并以未经处理的ECA109细胞为对照组,Western Blot检测P21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、UHRF1蛋白表达;CCK-8检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭及迁移;双荧光素酶验证miR-124-3p与LINC00240、UHRF1关系。通过裸鼠注射ECA109细胞建立裸鼠移植瘤实验,单细胞悬液(4×10^(6)细胞/ml)用一次性无菌注射器皮下注射到裸鼠背部,并依次分为模型组、NC组、干扰LINC00240组,分离肿瘤,分析肿瘤质量及成瘤个数。结果ESCC组织及细胞中LINC00240、UHRF1 mRNA表达显著增加,miR-124-3p表达显著降低(P<0.05)。sh-LINC00240组增殖率、侵袭与迁移数、LINC00240、MMP-2、UHRF1 mRNA及蛋白表达较对照组、shRNA-NC组显著降低,P21、miR-124-3p表达显著增加(P<0.05);sh-LINC00240+miR-124-3p-inhibitor组增殖率、侵袭与迁移数、MMP-2、UHRF1 mRNA及蛋白表达较sh-LINC00240+inhibitor-NC组显著增加,P21、miR-124-3p表达显著降低(P<0.05),LINC00240表达差异无统计意义(P>0.05)。miR-124-3p与LINC00240、UHRF1具有靶向关系。干扰LINC00240组较模型组、NC组肿瘤质量、成瘤个数显著减少(P<0.05)。结论干扰LINC00240可抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭,可能与上调miR-124-3p/UHRF1轴有关。

内源性活性氧对胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭性的影响

目的探讨内源性活性氧(Reactive oxygen species,ROS)对胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭性的影响。方法采用不同浓度的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导细胞产生ROS,MTT法检测SGC-7901细胞存活率;荧光化学发光仪检测细胞内ROS水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测SGC-7901细胞迁移及侵袭性的变化;Western blot检测细胞内铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)蛋白的表达。依据有无细胞内NADPH氧化酶抑制剂二苯基氯化碘盐(Diphenyleneiodonium chloride,DPI)作用于细胞,将实验分为4组:对照组、LPS组、DPI组、LPS+DPI组。所有数据采用SPSS 17.0分析。结果LPS可以促进SGC-7901细胞增殖,且LPS浓度在500ng/mL内SGC-7901细胞增殖呈现浓度和时间依耐性,LPS浓度大于500ng/mL时SGC-7901细胞增殖减弱且时间依耐性作用不明显。伴随时间推移SGC-7901细胞内ROS水平也随之增强,LPS组ROS水平、细胞划痕愈合率以及纵向迁移和侵袭穿膜的SGC-7901细胞数均高(快或多)于对照组、DPI组和LPS+DPI组,差异具有统计学意义(P均<0.01)。而LPS组Cu/Zn-SOD蛋白表达水平明显较其他组降低(P<0.01)。结论内源性ROS对胃癌SGC-7901细胞的迁移和侵袭有促进作用,通过抑制内源性ROS水平可以减缓胃癌SGC-7901细胞的迁移和侵袭。

NEDD4L增强IGF2BP2的泛素化对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨NEDD4L对人转移性结直肠癌细胞SW620迁移和侵袭的影响及其可能的作用机制。方法:生物信息学分析筛选IGF2BP2/NEDD4L泛素化作用轴并构建NEDD4L过表达的SW620细胞株,实时荧光定量(RT-qPCR)检测NEDD4L mRNA表达水平;CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡;细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,CHX和MG132处理SW620细胞,Western blot检测IGF2BP2蛋白的表达。同时构建Flag-IGF2BP2、His-NEDD4L、HA-Ub重组质粒并在293T细胞中采用免疫共沉淀检测NEDD4L对IGF2BP2的泛素化水平的影响。结果:SW620细胞中成功实现NEDD4L过表达,并且导致细胞增殖能力显著降低(P<0.05),凋亡能力显著上升(P<0.01);同时抑制细胞周期进程(P<0.05)。细胞迁移率显著降低(P<0.01),细胞侵袭数量显著降低(P<0.01);Western blot结果显示,过表达NEDD4L能够显著降低IGF2BP2、YAP、VEGFA的蛋白表达水平,Co-IP结果显示NEDD4L增强IGF2BP2与Ub的结合能力。结论:NEDD4L在结直肠癌细胞中通过增强IGF2BP2的泛素化,进而降低YAP、VEGFA的蛋白表达来实现抑癌功能。

槲皮素对肝癌细胞迁移和侵袭的影响

肝细胞肝癌是常见的消化系统的恶性肿瘤,有很高的发生率及病死率。槲皮素是一种自然界中广泛存在的黄酮类化合物,已被证实具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生理作用。研究槲皮素对人肝癌SNU-449和Hep-3B细胞生长的影响,提示其作为抗肿瘤药物应用的潜在价值。方法 采用槲皮素处理肝癌SNU-449和Hep-3B细胞,CCK8实验检测槲皮素对细胞增殖抑制作用,Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 槲皮素能够显著抑制细胞增殖能力,并随着药物浓度的增加,细胞增殖能力显著降低;同时槲皮素明显抑制人肝癌SNU-449和Hep-3B细胞迁移和侵袭能力,并呈现槲皮素浓度依赖性。结论 槲皮素能够明显抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并随着药物浓度增加其抑制作用逐渐增强。

牛蒡子苷元通过调节Hippo-YAP信号通路对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究牛蒡子苷元调节Hippo-YAP信号通路对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法将人子宫颈鳞癌细胞SiHa分为对照组、低浓度牛蒡子苷元组(5.0μmol/L)、中浓度牛蒡子苷元组(10.0μmol/L)、高浓度牛蒡子苷元组(20.0μmol/L)和高浓度牛蒡子苷元(20.0μmol/L)+TDI-011536组(3μmol/LHippo信号通路抑制剂)。分组处理后,集落形成实验检测细胞活性;Transwell实验检测细胞侵袭;划痕实验检测细胞迁移;免疫荧光技术检测细胞中Vimentin和E-Cadherin;蛋白质免疫印迹技术检测p-YAP、YAP、PCNA、MMP-2蛋白表达。结果与对照组比较,低浓度牛蒡子苷元组、中浓度牛蒡子苷元组、高浓度牛蒡子苷元组SiHa的细胞存活率、细胞侵袭数、细胞迁移愈合率、细胞中Vimentin荧光强度、YAP、PCNA、MMP-2蛋白表达均降低,而E-Cadherin荧光强度和p-YAP蛋白表达升高(P<0.05);与高浓度牛蒡子苷元组比较,高浓度牛蒡子苷元+TDI-011536组SiHa细胞存活率、细胞侵袭数、细胞迁移愈合率、细胞中Vimentin荧光强度、YAP、PCNA、MMP-2蛋白表达升高,而E-Cadherin荧光强度和p-YAP蛋白表达降低(P<0.05)。结论牛蒡子苷元可能通过激活Hippo/YAP信号通路抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭。

miR-497-5p通过HMGA2调控食管鳞癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-497-5p通过高迁移率族蛋白A2(HMGA2)对食管鳞癌细胞(ESCC)迁移和侵袭能力的影响。方法:利用UALCAN、GEPIA数据库分析miR-497-5p和HMGA2 mRNA在食管癌中的表达。通过生物信息学网站starBase分析miR-497-5p和HMGA2在食管癌样本中表达的相关性。通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-497-5p对HMGA2基因的调控。采用细胞划痕实验和Transwell实验分析miR-497-5p通过HMGA2对ESCC细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:miR-497-5p在食管癌中的表达明显低于其对照样本(P<0.05),HMGA2 mRNA在食管癌中的表达明显高于其对照样本(P<0.05)。miR-497-5p和HMGA2的表达成负相关,miR-497-5p对靶基因HMGA2具有直接调控作用。miR-497-5p mimic组细胞的迁移和侵袭能力明显低于阴性对照(NC)组(P<0.001);而miR-497-5p mimic+HMGA2组细胞的迁移和侵袭能力与miR-497-5p mimic组相比明显上升(P<0.01)。结论:miR-497-5p通过HMGA2调控食管鳞癌细胞的迁移和侵袭。

基于单细胞转录组测序数据分析PECAM1对胃肠道间质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨血小板和内皮细胞黏附分子1(platelet and endothelial cell adhesion molecule 1,PECAM1)表达对胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:基于GIST单细胞转录组测序数据,利用R语言筛选目标基因;细胞转染siRNA建立低表达实验组;伤口愈合实验、Transwell实验验证细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:根据免疫细胞标志物PTPRC是否表达,将18个GIST细胞分群中的6个分群定义为非免疫细胞群;根据肿瘤干细胞标志物CD44、CD34和ABCB1的差异表达水平,将非免疫细胞群进一步划分成4个肿瘤干细胞亚群;对4个肿瘤干细胞亚群的差异表达基因作KEGG分析筛选出PECAM1基因;进一步基因集富集分析结果显示PECAM1与细胞迁移信号通路相关;细胞实验结果表明,相较于对照组,PECAM1表达降低后,细胞迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。结论:PECAM1正向调控GIST细胞迁移和侵袭过程。

circHIPK3促进鼻咽癌细胞5-8F迁移和侵袭的机制

目的探讨环状RNA HIPK3(circHIPK3)在鼻咽癌(NPC)细胞迁移和侵袭中的作用及其分子机制。方法检索公共数据库,运用高通量基因表达数据库(GEO)分析NPC组织及非癌组织中circHIPK3表达水平;合成circHIPK3-siRNA转染NPC 5-8F细胞;采用RT-qPCR、Western blot、细胞划痕、CCK-8和Transwell等实验方法,研究确定circHIPK3-siRNA干扰效果后,检测它对细胞增殖、迁移和侵袭及潜在下游基因CDH1、CDH2、MMP2、MMP9、IL-6/STAT3表达的影响。运用转录组测序技术分析5-8F细胞circHIPK3-siRNA干扰后显著差异表达的基因,以期找到介导circHIPK3促癌作用的关键基因。结果与非癌组织相比,NPC组织中circHIPK3表达明显增加(P<0.05)。使用siRNA特异性敲低5-8F细胞中circHIPK3的表达后,与对照组相比,si-circHIPK3组细胞增殖速率降低(P<0.05),si-circHIPK3组细胞划痕闭合率降低(P<0.01),同时si-circHIPK3组细胞迁移和侵袭的细胞数目减少(P<0.05)。此外,与对照组相比,si-circHIPK3组下游基因CDH1 mRNA和蛋白的表达量升高(P<0.001),CDH2、MMP2、MMP9、IL-6/STAT3 mRNA和蛋白的表达量减少(P<0.05)。进一步测序分析显示,circHIPK3-siRNA转染的5-8F细胞中AL645922.1、SCO_(2)、AL136295.1和ISY1-RAB43表达上调(P<0.05),BIVM-ERCC5、FAM47E-STBD1、INO80B-WBP1、NAIP、C15orf38-AP3S2、BCL2L2-PABPN1和SMIM11B表达下调(P<0.05)。结论NPC组织中circHIPK3表达显著升高。circHIPK3通过调节E-Cadherin、N-Cadherin、MMP2、MMP9和IL-6/STAT3的表达,促进NPC细胞5-8F的增殖、迁移和侵袭。AL645922.1和BIVM-ERCC5等基因可能在circHIPK3介导的促进NPC 5-8F细胞迁移和侵袭中发挥关键作用。

TBL1XR1通过上调Wnt/β-catenin信号通路促进卵巢癌细胞迁移和侵袭

目的探讨转导蛋白(β)样1 X连锁受体1(TBL1XR1)通过上调Wnt/β-catenin信号通路促进卵巢癌细胞迁移和侵袭的机制。方法使用基因表达谱交互分析工具(GEPIA 2.0)、免疫组化和Western blotting评估TBL1XR1在卵巢癌和正常卵巢组织中的差异表达;评估TCGA数据库中TBL1XR1与卵巢癌患者总生存期的相关性,对TBL1XR1高、低表达组之间的差异表达基因进行GO和KEGG富集分析;分别采用伤口愈合实验、Transwell基质胶侵袭实验检测TBL1XR1对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测敲低或过表达TBL1XR1后Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达水平的变化;TOP/FOP荧光素酶报告基因检测TBL1XR1对Wnt/β-catenin信号通路活性变化的影响。结果卵巢癌组织中TBL1XR1表达水平高于正常卵巢组织,低表达组卵巢癌患者总生存期长于高表达组;GO和KEGG分析结果提示,TBL1XR1的生物学功能与激素转运、激素分泌、激素分泌的调节及肽转运、神经活性配体-受体相互作用相关;敲低TBL1XR1可显著抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭,且Wnt3a能逆转这一效应,过表达TBL1XR1可显著提高卵巢癌细胞迁移和侵袭能力;下调TBL1XR1表达可显著降低Wnt/β-catenin信号通路的活性及蛋白表达水平。结论TBL1XR1在卵巢癌中高表达且与卵巢癌患者不良预后相关,TBL1XR1能够通过上调Wnt/β-catenin信号通路促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭,可能作为促癌因子在卵巢癌的发生发展中发挥重要作用。

癌相关成纤维细胞通过IL-6诱导的“上皮-间质”转换促进宫颈癌细胞的迁移和侵袭

背景与目的：癌相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts，CAFs）能促进上皮肿瘤的侵袭和转移，细胞因子IL-6在肿瘤间质微环境中可能介导间质和上皮的相互作用，促进肿瘤的侵袭和转移，但其具体机制尚不十分清楚。方法：以宫颈癌细胞HeLa为研究模型，用ELISA测定宫颈癌CAFs和正常宫颈组织成纤维细胞（normal fibroblasts，NFs）条件培养基中IL-6的表达；用条件培养基或IL-6分别处理宫颈癌细胞系HeLa；用Western blot测定样品处理前后上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）标志物（如N-Cadherin和Vimentin等）的变化，同时用划痕和transwell小室测定细胞迁移和侵袭能力的变化。结果：CAF中IL-6表达比NF高4～5倍；与对照组相比，用CAF条件培养基或IL-6处理的HeLa细胞间充质细胞标志物Vimentin和N-Cadherin升高，而上皮细胞标志物E-Cadherin和Cytokeratin下降，表明IL-6可以促进细胞的EMT发生；进一步研究发现过量IL-6处理的HeLa细胞中干细胞转录因子Snail 1随STAT3的激活而上升；同时发现过量IL-6处理的HeLa细胞的迁移和侵袭能力大幅增加。结论：CAF在肿瘤微环境中可能通过IL-6/STAT3/Snail通路诱导宫颈癌上皮细胞的EMT转化，从而促进宫颈癌的侵袭和转移能力。

Twist对胃癌细胞系MKN28迁移和侵袭能力的影响

目的:研究Twist基因对人胃癌细胞株MKN28迁移和侵袭能力的影响。方法:利用脂质体介导转染技术和遗传霉素筛选得到稳定高表达的Twist蛋白的细胞克隆Twist+-MKN28;采用Western免疫印迹检测细胞中Twist,上皮细胞钙黏蛋白(ecadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达;用基质胶侵袭小室检测细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:阳性质粒组Twist+-MKN28细胞的Twist蛋白表达强于空白质粒组PcDNA3.1-MKN28和未转染组MKN28;Twist+-MKN28组细胞中ecadherin蛋白减少,而vimentin蛋白表达上调;Twist+-MKN28组细胞迁移、侵袭能力明显增强。结论:Twist基因可能通过上皮-间质转型促进胃癌细胞的迁移和侵袭。

YB-1表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:观察Y-盒结合蛋白-1(YB-1)对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:通过脂质体介导的方法将YB-1 shRNA重组载体转染入人类乳腺癌MCF-7细胞,经G418筛选及克隆化培养后获得稳定转染株。运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测MCF-7细胞中YB-1 mRNA和YB-1蛋白的表达水平,运用划痕实验和Transwell小室法检测细胞运动、迁移和侵袭能力的变化,同时运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测细胞中MMP-2的表达水平,并用明胶酶谱法检测MMP-2蛋白的活性。结果:稳定转染YB-1 shRNA的细胞中YB-1的表达明显低于转染随机片段的细胞和未转染组细胞,且细胞的运动、迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性也较后两组细胞明显下降。转染随机片段的细胞和未转染组细胞间无明显差异。结论:YB-1 shRNA可以沉默乳腺癌MCF-7细胞中YB-1的表达,并降低细胞的迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性。

山慈菇提取物通过下调AEG-1表达抑制人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭

目的本研究旨在观察山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法取人结直肠癌SW480细胞作为研究对象,采用划痕实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,采用短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默SW480细胞中星形细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)基因的表达,利用Western blot法检测基质金属蛋白酶-2,9(matrix metalloproteinase-2,9,MMP-2,9)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和AEG-1等蛋白的表达变化。结果山慈菇提取物可使人结直肠癌SW480细胞愈合率、迁移率和侵袭率均显著下降(P<0.05),下调MMP2、MMP9和AEG-1蛋白表达水平(P<0.05)以及上调E-cadherin蛋白表达水平(P<0.05),上述作用均具有浓度依赖性。经shRNA干扰AEG-1基因表达后,SW480细胞中AEG-1蛋白表达水平显著下降(P<0.05);同时AEG-1干扰SW480细胞中E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),MMP2和MMP9蛋白表达水平均显著下降,同时单独或者联合山慈菇提取物组的细胞迁移率、侵袭率也降低(P<0.05)。结论山慈菇提取物能浓度依赖性地抑制人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭,这可能与山慈菇提取物抑制AEG-1蛋白表达,继而下调MMP2、MMP9蛋白表达和上调E-cadherin蛋白表达有关。

IGF-1通过激活EGR1诱导肝细胞癌的迁移和侵袭

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)诱导肝细胞癌(HCC)迁移和侵袭的机制。方法选用两株转移潜能不同的HCC细胞株HepG2和HCCLM3,分别加入25、50和100 ng/ml的IGF-1,用transwell的方法检测细胞的迁移和侵袭;Western blot、RT-PCR和实时定量PCR法检测胞内信号通路的活化和早期生长反应蛋白1(EGR1)的表达;转染EGR1的siRNA抑制其表达,观察IGF-1对HCC细胞株的迁移和侵袭的影响。结果IGF-1可浓度依赖地促进HCC细胞株的迁移和侵袭,IGF-1增加HCC细胞株中IGF1R、Akt及ERK的磷酸化水平,而对总表达无明显改变,同时EGR1的蛋白和mRNA表达也随着IGF-1的浓度增高而增加,转染EGR1的siRNA降低其表达后,IGF-1对细胞的迁移侵袭能力明显减弱。结论IGF-1诱导HCC细胞株的迁移和侵袭作用是由EGR1所介导的。

白花蛇舌草上调miR-485-5p抑制人膀胱癌细胞系KU-19-19增殖、迁移和侵袭

目的探讨白花蛇舌草对膀胱癌细胞系KU-19-19增殖、迁移和侵袭的影响和可能的分子机制。方法将KU-19-19细胞分为对照组、白花蛇舌草组、miR-NC组、miR-485-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-485-5p组、白花蛇舌草+anti-miR-NC组、白花蛇舌草+anti-miR-485-5p组、白花蛇舌草+anti-miR-485-5p+LY294002组。细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell实验、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测细胞增殖、迁移侵袭以及miR-485-5p的表达。蛋白质印迹(Western blot)检测磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。结果白花蛇舌草干预后KU-19-19细胞增殖率、迁移侵袭细胞数显著降低,miR-485-5p表达显著升高(P<0.05);过表达miR-485-5p后,KU-19-19细胞增殖率、迁移侵袭细胞数显著降低(P<0.05);抑制miR-485-5p表达后,KU-19-19细胞增殖率、迁移侵袭细胞数显著升高(P<0.05)。抑制miR-485-5p可以逆转降低白花蛇舌草对KU-19-19细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05);LY294002可以逆转降低抑制miR-485-5p对白花蛇舌草处理的KU-19-19细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用(P<0.05)。结论白花蛇舌草通过上调miR-485-5p可抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

ERK通路激动剂EGF及抑制剂U0126对HepG2肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)亚族细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路在HepG2肝癌细胞迁移和侵袭中的作用。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,采用ERK通路激动剂和抑制剂:表皮生长因子(EGF)及U0126刺激48h,分别应用MTS法、划痕实验法及Transwell小室法检测EGF和U0126对HepG2细胞增殖能力、迁移能力和侵袭能力的影响,qPCR和Western blot法分别检测ERK mRNA和磷酸化ERK蛋白的表达变化。结果细胞增殖、迁移和侵袭实验结果均显示,激动剂EGF可显著提高HepG2肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力(P<0.01),而U0126均对以上指标有抑制效应(P<0.05)。qPCR和Western blot结果显示,EGF可上调ERK mRNA和磷酸化蛋白的表达(P<0.01),而U0126对ERK mRNA无明显影响(P>0.05),但可显著下调ERK磷酸化蛋白的表达(P<0.01)。结论 ERK通路参与HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭过程,EGF和U0126对以上指标的影响可能与ERK mRNA的表达及蛋白磷酸化过程相关。

MALAT1通过miR-30调控骨巨细胞瘤基质细胞生长、迁移和侵袭

目的阐明MALAT1通过miR-30对骨巨细胞瘤基质细胞生长、迁移和侵袭进行调控。方法收集临床骨巨细胞瘤及对照样本进行荧光定量PCR,检测MALAT1及miR-30表达水平;对骨巨细胞瘤进行原代细胞培养,获得纯化的骨巨细胞瘤基质细胞原代细胞系;构建MALAT1过表达质粒,合成miR-30mimic类似物及inhibitor抑制剂;在细胞系中过表达MALAT1质粒和/或miR-30相关片段,通过MTT实验观察细胞生长情况,通过Transwell实验观察细胞迁移和侵袭情况。结果与正常组织对比,MALAT1表达水平在骨巨细胞瘤组织中显著降低,而miR-30水平升高;生物信息学分析发现MALAT1存在于miR-30相互作用的序列,且荧光素酶报道基因结果显示,过表达miR-30可显著抑制MALAT1 WT质粒的报道基因信号,而对MUT突变质粒无效;单独过表达MALAT1或者miR-30 inhibitor抑制剂均可抑制基质细胞生长、迁移和侵袭;而且上下游拮抗实验表明,过表达MALAT1可抵消miR-30 mimic类似物引起的促进作用。结论 MALAT1、miR-30均参与骨巨细胞瘤基质细胞发展调控;MALAT1可通过调控miR-30抑制骨巨细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭。

二甲双胍通过调节组蛋白乙酰化抑制肾癌细胞786-O迁移和侵袭

目的研究二甲双胍抑制肾癌细胞迁移和侵袭的机制。方法采用transwell迁移和matrigel侵袭实验检测10 mM和20 mM二甲双胍对786-O细胞迁移和侵袭的影响;Western blot实验检测二甲双胍对E-cadherin、vimentin、MMP-2、MMP-9以及组蛋白H3K9、H4K12和H4K16乙酰化水平的改变;组蛋白乙酰转移酶抑制剂C646与二甲双胍联用,通过transwell实验观察二甲双胍调控组蛋白乙酰化对786-O细胞迁移的影响。结果 10 mM和20 mM二甲双胍均能显著抑制786-O细胞迁移和侵袭(P<0.05);二甲双胍上调E-cadherin,下调vimentin、MMP-2、MMP-9的表达(P<0.05),同时显著增加组蛋白H3K9、H4K12和H4K16的乙酰化水平(P<0.05);C646和二甲双胍联用能显著阻止二甲双胍引起的迁移抑制作用(P<0.05)。结论二甲双胍通过上调组蛋白乙酰化水平抑制肾癌细胞786-O的迁移和侵袭。