重组屋尘螨2类变应原疫苗免疫治疗小鼠过敏性气道炎症的研究

目的观察以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)材料为佐剂制备的重组屋尘螨2类变应原(rDerp2)纳米微粒疫苗(DEPN)对小鼠过敏性气道炎症的影响,并探讨其免疫治疗机制。方法制备PLGA-rDerp2纳米粒子并鉴定其特性。40只BALB/c小鼠随机分为5组,A组(对照组)均给予生理盐水(100μl)。B、C、D和E组腹部皮下注射屋尘螨粗浸液(10μg)免疫小鼠致敏,然后分别用PBS(100μl)、2mg空白PLGA粒子(emptyPLGA,EP)、100μgrDerp2、2mg的DEPN纳米疫苗(载有100μgrDerp2)皮下注射进行免疫治疗,连续免疫治疗3d,1次/d,各组用rDerp2(50μg)滴鼻激发,激发后第2天剖杀,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并对细胞进行总计数和分类计数;HE染色和PAS染色(PeriodicAcid-SchiffStain)观察小鼠肺部组织炎症和支气管黏液分泌;用ELISA检测BALF和脾细胞培养上清的细胞因子(IL-4、IFN-γ)和血清中变应原特异性IgG2a和IgE抗体浓度。结果B、C组肺部呈明显的变态反应性炎症,D、E组变应原诱导的肺部嗜酸粒细胞浸润和黏液分泌比B、C组显著减轻。BALF中的细胞总数B组比A组明显增多,分类细胞以中性和嗜酸粒细胞为主,超过50%。rDerp2特异性IgE抗体水平,D组(0.93±0.04)和E组(0.77±0.10)均低于B组(1.14±0.10)(P<0.01);特异性IgG2a抗体水平,D组(1.02±0.01)和E组(1.17±0.46)均高于B组(0.14±0.01)(P<0.01)。在BALF中,D组[(55.60±3.79)pg/ml]和E组[(48.60±4.50)pg/ml]IL-4水平均低于B组[(78.90±6.07)pg/ml](P<0.01);IFN-γ水平E组[(68.50±2.87)pg/ml]显著高于B组[(27.30±3.51)pg/ml](P<0.01)。脾细胞上清的IL-4水平,D组[(56.3±4.85)pg/ml]和E组[(40.2±4.36)pg/ml]显著低于B组[(81.20±6.84)pg/ml](P<0.01);IFN-γ水平,E组[(70.20±3.85)pg/ml]显著高于B组[(34.60±2.25)pg/ml]。结论DEPN免疫治疗可抑制小鼠肺部过敏炎症,其机制可能与调节Th1/Th2平衡有关。

经多酚氧化酶处理的德国小蠊低致敏变应原疫苗免疫治疗小鼠过敏性气道炎症的研究

目的研究经多酚氧化酶(PPO)处理的德国小蠊低致敏变应原疫苗对小鼠过敏性气道炎症的治疗效果及其治疗机理。方法提取新鲜马铃薯多酚氧化酶,将德国小蠊变应原粗浸液与PPO溶液按1∶2混合制备低致敏变应原疫苗。动物实验取20只BALB/c小鼠随机分为A组(模型组)、B组(低致敏变应原疫苗治疗组)、C组(PPO治疗对照组)和D组(正常对照组)。D组给予生理盐水。各组经腹部皮下注射致敏、治疗和滴鼻激发。激发结束后第2天进行气道高反应检测。第3天剖杀,进行支气管肺泡灌洗(BAL)、细胞总数计数、嗜酸粒细胞计数和肺组织炎症、支气管黏液分泌HE染色观察。结果气道高反应检测中A组Penh值随雾化乙酰甲胆碱(Mch)浓度增加变化明显,B组Penh值曲线增幅相对平坦,两者差异有统计学意义(P<0.05)。D组Penh值随Mch浓度增加变化最小。A组支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞总数比D组明显增多,分类细胞以中性和嗜酸粒细胞为主。B组较A组细胞总数和嗜酸粒细胞均明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。A、C组肺部组织呈明显的变态反应性炎症,B组低致敏变应原疫苗治疗的肺部嗜酸粒细胞浸润和黏液分泌比A、C组明显减少。结论德国小蠊变应原粗浸液与PPO共同作用后变应原性降低。该方法制备的低致敏变应原疫苗治疗可抑制小鼠肺部过敏炎症。

几种药物对大鼠过敏性气道炎症的抑制作用

在Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠过敏性气道炎症模型上观察不同药物的抗炎作用。ｉｐ地塞米松（０．５ｍｇ·ｋｇ－１），粉防己碱（３０ｍｇ·ｋｇ－１）以及非肽类神经速激肽受体拮抗剂ＣＰ－９６３４５和ＳＲ－４８９６８（各１ｍｇ·ｋｇ－１），每日２次，连续３ｄ，可抑制卵白蛋白１ｍｇ致敏大鼠吸入抗原后６ｈ或２４ｈ肺灌洗液中的白细胞数量增多，明显减轻细支气管和小血管周围嗜酸性细胞浸润及管壁水肿等炎症状况。结果证明大鼠模型可以作为评价平喘药作用的工具，并提示速激肽参与气道过敏性炎症。

卡介苗基因组DNA对哮喘小鼠模型过敏性气道炎症的影响

目的探讨腹腔注射卡介苗基因组DNA(BCGDNA)对哮喘小鼠模型的影响。方法BALB/c小鼠经鸡卵蛋白(OVA)免疫建立哮喘模型,分别于致敏前、激发时腹腔注射100μgBCGDNA,观察哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和嗜酸性粒细胞数(EOS),ELISA检测脾单核细胞(SMNC)培养上清和BALF中白细胞介素4(IL4)、IL5、IL12及γ干扰素(IFNγ)的含量变化,常规病理切片观察肺内炎症情况,ABPAS染色观察杯状细胞增生和黏液分泌情况。结果哮喘小鼠OVA致敏前及激发时腹腔注射BCGDNA后可明显增加BALF和脾单核细胞培养上清中IL12和IFNγ的产生,使IL4和IL5的产生减少,BALF中嗜酸性粒细胞减少,黏液过度分泌明显减轻。结论哮喘小鼠腹腔注射BCGDNA可诱导IL12和IFNγ产生,抑制Th2型细胞反应,减轻哮喘气道炎症。

静脉注射T-bet重组腺病毒对小鼠过敏性气道炎症的抑制作用研究

目的探讨静脉应用T-bet重组腺病毒(AdT-bet)对哮喘小鼠过敏性气道炎症的作用。方法48只C57BL/6小鼠随机均分为AdT-bet处理组(A组)、AdLacZ处理组(B组)、PBS处理组(C组)和正常对照组(D组),每组12只。A、B、C组采用卵蛋白(OVA)和氢氧化铝建立哮喘模型,于第19天激发前分别静脉注射50μlAdT-bet(108pfu)、AdLacZ、PBS。第26天测定肺泡灌洗液(BALF)中的细胞组分和IL-4、IL-5、IFNγ浓度,测定血浆IgE水平,观察肺组织病理学变化及GATA-3表达。结果A组BALF中的嗜酸性细胞(EOS)、IL-4、IL-5分别为0.6%±0.2%、6.8±3.7pg/ml、12.5±4.8pg/ml,明显低于B组(分别为20.9%±6.8%、92.4±23.0pg/ml、56.5±11.8pg/ml)和C组(分别为20.8%±6.7%、90.4±22.8pg/ml、57.3±12.2pg/ml)(P<0.01),而A组的IFNγ水平(720.0±50.0pg/ml)则明显高于B组(13.3±3.6pg/ml)和C组(12.3±5.0pg/ml)。A组血浆中总IgE(38.8±9.5μg/ml)及OVA特异性IgE(19.2±4.8U/ml)水平显著低于B组(分别为66.9±10.2μg/ml、35.2±7.8U/ml)和C组(分别为68.6±9.6μg/ml、36.1±8.5U/ml)(P<0.01)。肺组织病理学观察提示B组和C组GATA-3表达明显增加,支气管平滑肌肥厚,黏膜充血、水肿,炎性细胞浸润,管腔内可见黏液栓,而A组GATA-3的表达明显减少,炎症性反应明显减轻。结论静脉应用AdT-bet可抑制哮喘鼠IL-4、IL-5的合成,增强IFNγ的表达,抑制EOS在气道内的炎性浸润及血浆中IgE水平,其机制可能与AdT-bet增强Th1型反应,抑制GATA-3表达,从而抑制Th2型免疫反应有关。

Bla g 7多肽疫苗免疫治疗小鼠过敏性气道炎症的研究

目的观察以壳聚糖(CS)材料为佐剂制备的德国小蠊变应原Bla g 7多肽纳米疫苗对小鼠过敏性气道炎症的疗效,探讨其免疫机制。方法用CS包裹Bla g 7多肽制成纳米疫苗;25只BALB/c小鼠用蟑螂粗提液致敏、激发,随机分为阴性对照组(A组)、模型组(B组)、Bla g 7多肽治疗组(C组)、Bla g 7多肽+CS治疗组(D组)、CS对照(E组)。通过HE染色观察小鼠肺部炎症;观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞分类;气道高反应仪监测治疗前后小鼠气道高反应性的变化。结果成功制备Bla g 7多肽纳米疫苗;D组与A组相比肺部病理改变不明显,BALF中的细胞总数、EOS计数均显著低于模型组(P<0.01),而C组和E组对致敏小鼠无明显疗效。气道高反应数值治疗前后变化差别有统计学意义(P<0.05)。结论Bla g 7多肽壳聚糖纳米疫苗对致敏小鼠具有免疫治疗作用,是一种新型的治疗蟑螂过敏性气道炎症的缓释制剂,为脱敏疫苗的研究提供了理论基础。

不伴有气道高反应性的过敏性气道炎症

目的 探讨在SD大鼠过敏性气道炎症情况下气道阻力及气道对乙酰胆碱的反应性变化情况。方法 用卵清蛋白(OA)免疫和激发SD大鼠。以气道阻力较基线值升高 2 0 0 %时所需乙酰胆碱的负对数浓度 (-LogPC2 0 0 )为标准检测气道反应性。结果 ①哮喘组气道阻力基线值较对照组明显升高 (从 2 2 82± 0 12 8到 3 193± 0 2 39,P <0 0 1)。②反复OA激发后气道对乙酰胆碱的反应性明显降低 (-LogPC2 0 0 从 4 0 0 6± 0 5 5 4到 2 0 5 9± 0 2 6 2 ,P <0 0 1)。支气管肺泡灌洗液 (BALF)和肺组织病理切片均证实过敏性气道炎症存在。结论 本研究证实反复过敏原激发后支气管收缩反应和气道高反应性不存在相关性 ,同时提示反复OA激发后虽然出现过敏性气道炎症 ,但气道反应性降低伴持续支气管收缩反应。

伊洛前列素对ILC2s介导的小鼠急性过敏性气道炎症的作用研究

目的:探讨伊洛前列素(Iloprost)对IL-33诱导的小鼠急性过敏性气道炎症中2型固有淋巴细胞(ILC2s)的作用。方法:C57BL/6小鼠随机分为DMSO对照组、IL-33刺激组、IL-33+iloprost干预组和单独iloprost组。HE染色观察肺组织中炎性细胞浸润情况,PAS染色观察黏液分泌情况,流式细胞术检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)以及肺组织中嗜酸性粒细胞(EOS)和ILC2s的数量,real-time PCR检测IL-5、IL-13、GATA3和ST2 mRNA的表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF和肺匀浆上清中IL-5和IL-13的含量。结果:(1)IL-33刺激组小鼠肺组织切片可见大量炎性细胞浸润且黏液分泌增加;同时,小鼠BALF和肺组织EOS和ILC2s的数量、细胞因子分泌量和mRNA相对表达量均显著高于DMSO对照组和单独iloprost组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)IL-33+iloprost干预组小鼠肺组织切片中炎性细胞浸润程度明显减轻且黏液分泌减少;同时,小鼠BALF和肺组织中EOS和ILC2s的数量、细胞因子分泌量和mRNA相对表达量均显著低于IL-33刺激组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Iloprost可能是ILC2s的负调节因子,在一定程度上可减轻小鼠肺部急性过敏性炎症反应。

姜黄素通过抑制p38 MAPK和AKT活化改善幼鼠过敏性气道炎症

【目的】选择幼龄小鼠模拟3~12岁儿童的过敏性气道炎症,探索膳食补充姜黄素对幼龄小鼠过敏性气道炎症的防治作用。【方法】4周幼龄雌性BALB/c小鼠随机分为3组(每组n=8),分别是空白对照组,过敏性气道炎症模型组,姜黄素干预组。在末次卵清白蛋白激发24 h后,观察各组小鼠的症状,测定肺泡灌洗液(BALF)中的炎症细胞数,全血细胞分析白细胞亚型的数量,用HE染色观察肺部支气管周围炎症细胞浸润情况,用过碘酸-雪夫染色观察杯状细胞增生情况,酶联免疫吸附法测定BALF中的细胞因子IL-4、IL-5、IL-13以及血浆中的总Ig E水平,western blot技术检测肺组织磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)/p38 MAPK,,p-AKT/AKT蛋白表达情况。【结果】与过敏性气道炎症模型组相比,饲料添加姜黄素的干预组可以明显改善幼鼠的反复抓挠鼻子、点头呼吸、体质量减轻等症状,外周血中嗜酸性粒细胞降低具有统计学差异(P<0.05),肺泡灌洗液和肺支气管周围的炎症细胞以及肺泡灌洗液中IL-4,IL-5,IL-13的水平降低(P<0.05),支气管上皮杯状细胞增生减轻,此外,肺组织的磷酸化p38 MAPK和磷酸化AKT水平降低,组间差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】膳食添加姜黄素可以抑制幼龄小鼠过敏性气道炎症,其机制可能与抑制肺组织的p-38 MAPK和AKT信号传导有关。

两种致敏途径诱导的过敏性气道炎症小鼠模型的免疫应答比较

目的比较两种致敏途径诱导的过敏性气道炎症小鼠模型的免疫炎症差异,为使用过敏性气道炎症小鼠模型的研究提供参考。方法建立卵清蛋白经腹腔致敏和经皮肤致敏诱导的过敏性气道炎症小鼠模型,通过ELISA分析小鼠血清中的总IgE和OVA特异性IgE。支气管肺泡灌洗液细胞行瑞士-吉姆萨染色以评估嗜酸性气道炎症。对肺组织进行苏木素伊红染色和高碘酸希夫染色以评估其组织病理学变化,肺免疫细胞进行mRNA测序和数据分析。结果经腹腔致敏和经皮致敏诱导的过敏性气道炎症小鼠模型均表现出肺组织嗜酸性粒细胞浸润、支气管上皮杯状细胞增生、Th2型细胞因子表达上调的炎症反应。但腹腔致敏模型系统免疫更强,经皮致敏模型局部免疫更强。哮喘相关通路如JAK-STAT信号通路在两个模型中均上调而Hippo通路仅在经皮致敏模型中下调。经皮致敏模型与金属蛋白酶、肥大细胞和嗜碱性粒细胞的关系更密切。结论过敏原经腹腔和经皮肤致敏途径不同,诱导产生的过敏性气道炎症小鼠模型的免疫学表型和分子机制存在差异。

胰高血糖素样肽-1调节Th细胞分化对屋尘螨诱导小鼠过敏性气道炎症的影响

目的探讨胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)对屋尘螨(house dust mite,HDM)诱导小鼠过敏性气道炎症的作用,并探讨其作用机制。方法将24只SPF级C57 BL6小鼠随机分为对照(Con)组、GLP-1组、屋尘螨(HDM)组、屋尘螨+GLP-1(HDM+GLP-1)组。用HDM建立小鼠过敏性哮喘模型,选用临床常用的GLP-1类似物利拉鲁肽干预小鼠。HDM组,给予鼻腔滴注HDM诱导小鼠气道过敏性炎症,并给予等体积生理盐水皮下注射;HDM+GLP-1组,给予HDM鼻腔滴注,同时给予利拉鲁肽皮下注射;GLP-1组,给予利拉鲁肽皮下注射,并给予等体积生理盐水鼻腔滴注;Con组给予等体积生理盐水鼻腔滴注及皮下注射。通过HE染色观察肺组织病理学变化,流式细胞仪检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中不同Th细胞的比例,ELISA检测IL-4、IL-5、IL-13炎性因子的浓度。结果HDM组小鼠肺组织病理损伤明显,GLP-1抑制屋尘螨诱导的小鼠气道过敏性炎症,降低Th2细胞比例(Th2,CD4+IL-4+:HDM 20.2±2.06%vs.HDM+GLP-19.57±3.66%,P<0.05),促进Th1 Th2细胞平衡。结论GLP-1负向调节Th2细胞形成,促进T细胞向Th1细胞方向分化,从而抑制屋尘螨诱导的小鼠气道过敏性炎症。

A20免疫治疗过敏性气道炎症小鼠的作用机制研究

目的通过应用A20治疗OVA诱导幼年小鼠过敏性气道炎症模型,探究A20对过敏性气道炎症小鼠治疗作用及机制。方法将24只BALB/c幼鼠随机分为正常组、模型组、A20蛋白20μg+2 mg Al(OH)3治疗组、A20蛋白50μg+2 mgAl(OH)3治疗组,每组6只。除正常组小鼠外,其余组小鼠用OVA致敏、滴鼻激发。治疗组用不同剂量A20蛋白腹腔注射治疗。对各组小鼠血清中OVA特异性IgE、IgG2a和IgG1水平,脾细胞培养上清中细胞因子IL-4、TNF-α、IFN-γ、IL-10、TGF-β的含量,小鼠脾细胞中表达IL-10和TGF-β的Treg比例进行检测,对BALF中炎性细胞进行计数、分类,对肺组织病理切片进行观察。结果模型组与正常组相比,特异性IgE、IL-4水平显著增加(P<0.05),肺组织切片中炎症反应较重。治疗组与模型组相比,IgG1、IL-4水平显著降低(P<0.05),IL-10和TGF-β产生显著增加(P<0.05),CD4^(+)IL-10+Treg和CD4^(+)TGF-β+Treg产生显著增加(P<0.05),高剂量A20治疗组增加更加明显(P<0.01)。BALF中嗜酸性粒细胞及中性粒细胞数量降低比较明显(P<0.05)。肺组织切片中炎症反应减轻。结论A20通过促使免疫耐受因子IL-10和TGF-β的产生来抑制Th2反应,从而降低过敏性气道炎症小鼠肺部炎症,而非促进Th1反应。

肺泡巨噬细胞对屋尘螨诱导的过敏性气道炎症的影响

目的:研究屋尘螨(HDM)诱导的过敏性气道炎症小鼠模型中免疫细胞的变化,并对肺泡巨噬细胞(AM)在其中的效应功能进行初步探索。方法:气管注射HDM诱导过敏性气道炎症,并在建模前通过气管注射氯膦酸盐脂质体(CL)特异性地对AM进行清除;心脏灌注分离小鼠全肺免疫细胞;气管灌洗分离小鼠肺泡灌洗液免疫细胞;ELISA检测肺泡灌洗液Ⅱ型细胞因子的水平;流式细胞术检测肺脏或肺泡灌洗液免疫细胞的变化;HE染色、PAS染色评价HDM建模后肺脏炎症粒细胞浸润、杯状细胞增生以及黏液分泌情况。结果:在HDM诱导的过敏性气道炎症中,Ⅱ型免疫反应的效应细胞如Ⅱ型先天性淋巴细胞(ILC2)、嗜酸性粒细胞显著增加,组织学分析表明肺组织有大量炎症细胞浸润,杯状细胞增生,黏液分泌增加。而清除AM减缓了HDM诱导的Ⅱ型免疫反应,但促进了中性粒细胞的浸润,加重了肺脏的病理损伤。结论:AM在HDM诱导过敏性气道炎症中发挥重要作用。

CpG-ODN气道内应用抑制哮喘小鼠过敏性气道炎症及GATA-3的表达

目的 研究气道内应用CpG寡脱氧核苷酸 (CpG ODN)对小鼠哮喘模型气道过敏性炎症的治疗作用及对肺内GATA 3表达的影响。方法 鸡卵蛋白 (OVA)免疫BALB c小鼠建立哮喘模型 ,激发后 1h气道内滴入 10 0 μgCpG ODN ,处死动物后观察支气管肺泡灌洗液 (BALF)中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比 (EOS % )的变化及IL 4、IL 5、IL 12、IFN γ的含量变化。取肺组织行病理切片HE染色、AB PAS染色检查 ,观察小鼠气道炎症情况 ,免疫组化染色观察CpG ODN对小鼠哮喘模型肺部GATA 3表达的影响。结果 CpG ODN治疗组BALF中IL 12和IFN γ的产生增加 ,IL 4、IL 5的产生减少 ,BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞比例降低 ,肺部炎症情况明显减轻 ,肺血管周围及支气管周围表达GATA 3的细胞数较哮喘模型组及对照寡核苷酸治疗组明显减少。结论 哮喘小鼠激发阶段气道内滴入CpG可能通过诱导IL 12、IFN γ产生 ,抑制GATA 3的表达 ,导致TH2型细胞因子的产生减少 ,从而减轻哮喘气道过敏性炎症。

红霉素抗过敏性气道炎症机制的探讨

目的 探讨红霉素是否对大鼠过敏性气道炎症具有保护作用以及是否通过抑制转录因子NF-κB的活性来达到抗炎效果。方法 用鸡卵清白蛋白 (OVA)腹腔注射一次致敏SD雄性大鼠,同时佐以氢氧化铝和百日咳杆菌, 2周后雾化吸入 1%的OVA进行激发,连续激发 7天,成功制作大鼠过敏性气道炎症模型。治疗干预组动物OVA激发的同时口服红霉素 [180mg/(kg·d) ]。最后一次激发后 24h处死大鼠,留取标本进行检测。用支气管肺泡灌洗液 (BALF)和肺组织病理分析的方法检测肺组织炎症;用免疫组织化学的方法检测核因子 kappaB(nuclearfactorkappaB, NF-κB)亚单位p65在细胞核内的表达;用凝胶电泳迁移改变分析的方法检测肺组织NF κB的结合活性。结果 肺组织病理切片显示红霉素治疗干预组肺组织炎症细胞浸润的范围较模型组明显减小。红霉素干预组BALF中白细胞总数为 (31±22)×108 /L,模型组为 (66±28)×108 /L(P<0.01 )。红霉素干预组主支气管黏膜下层单位面积内细胞核表达NF κB阳性的细胞数为 (1.4±0.4)×103 个 /mm2,模型组为(2.6±0.6)×103 个 /mm2 (P<0.01)。红霉素干预组动物肺组织转录因子NF-κB结合活性(32±14)低于模型组(46±17 ) (P<0.05 )。结论 红霉素干预组BALF中白细胞总数较模型组降低,主支气管黏膜下层单?

α半乳糖神经酰胺活化iNKT细胞对哮喘小鼠过敏性气道炎症的影响

目的:观察α半乳糖神经酰胺(α-GalCer)活化iNKT细胞对卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠过敏性气道炎症的影响。方法:将24只BALB/c小鼠随机分为:正常小鼠组(A组)、哮喘小鼠组(B组)和哮喘小鼠α-GalCer干预组(C组)。建立哮喘模型,以α-GalCer或PBS干预。分别以苏木素伊红(HE)染色和过碘酸雪夫(PAS)染色观察肺组织炎症和气道杯状细胞增生;检测肺泡灌洗液(BALF)细胞计数。流式细胞术检测肺组织iNKT细胞的数量、表面分子CD69及分泌细胞因子水平。结果:与B组比较,C组小鼠肺组织炎性细胞浸润增多,杯状细胞增生增加,BALF中细胞总数及分类数增加。同时α-GalCer干预后哮喘小鼠肺iNKT细胞被激活,表现为iNKT细胞的数量及表面分子CD69和分泌细胞因子水平增加。结论:α-GalCer可能通过活化的iNKT细胞促进哮喘小鼠过敏性气道炎症。

菠萝蛋白酶诱导小鼠急性过敏性气道炎症的作用研究

探讨菠萝蛋白酶诱导小鼠急性过敏性气道炎症中2型固有淋巴细胞(group 2innate lymphoid cell,ILC2)及相关细胞因子的变化及意义。对未致敏BALB/c雌性小鼠在第1天和第3天给予菠萝蛋白酶滴鼻,ELISA检测12h内小鼠肺组织匀浆上清中IL-33变化,5d后处死小鼠,肺组织切片病理观察,瑞氏染色计数BALF中嗜酸性粒细胞含量,流式检测肺组织中ILC2数量变化,ELISA检测BALF中IL-5、IL-13水平。结果显示,菠萝蛋白酶诱导气道上皮细胞产生IL-33,3h时开始,6h时达高峰;菠萝蛋白酶滴鼻小鼠肺组织切片显示大量炎性细胞浸润和杯状细胞黏液分泌增加,BALF中嗜酸性粒细胞比例增加,IL-5和IL-13含量增加,流式检测肺组织中ILC2数量增多。研究表明,菠萝蛋白酶刺激小鼠气道上皮细胞释放IL-33,引起小鼠肺ILC2活化增殖并分泌大量Th2型细胞因子,引起嗜酸性粒细胞浸润等急性过敏性气道炎症表现,提示ILC2促进早期急性过敏性气道炎症的发生。

IFN-γ对小鼠急性过敏性气道炎症的抑制作用

目的 探究IFN-γ对IL-33诱导的小鼠急性过敏性气道炎症中2型固有淋巴细胞（ILC2s）的抑制作用.方法 将24只6～8周的雌性C57BL/6小鼠随机分为4组：IL-33模型组、单独IFN-γ组、IL-33＋IFN-γ联合刺激组、PBS对照组.用IL-33成功构建小鼠支气管过敏性炎症模型,收集支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织,使用流式细胞术对ILC2s和嗜酸性粒细胞进行分析.酶联免疫吸附法（ELISA）测定肺匀浆和BALF上清中IL-5和IL-13的含量.Real-time PCR检测IL-5、IL-13和ST2 mRNA表达量的变化.肺组织切片进行HE和PAS染色观察病理变化.结果 与PBS对照组相比,IFN-γ组未见炎细胞浸润、杯状细胞增生及黏液分泌;ILC2s和嗜酸性粒细胞含量无差异（P〉0.05）;IL-5、IL-13水平差异无统计学意义（P〉0.05）;IL-5、IL-13、ST2 mRNA表达量差异无统计学意义（P〉0.05）.与PBS对照组相比,IL-33模型组有大量炎性细胞浸润,杯状细胞增生并分泌大量黏液;ILC2s和嗜酸性粒细胞含量明显增多,差异有统计学意义（P〈0.05）;IL-5、IL-13水平升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;IL-5、IL-13、ST2 mRNA表达量增高,差异有统计学意义（P〈0.05）.与IL-33组相比,IFN-γ＋IL-33组炎细胞浸润减弱,杯状细胞增生受到抑制且黏液分泌量减少;IL-5、IL-13水平降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;IL-5、IL-13、ST2 mRNA表达量降低,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 实验证实IFN-γ可抑制IL-33引起的嗜酸性粒细胞和ILC2s的增殖,减弱IL-5、IL-13的分泌,提示：IFN-γ对IL-33诱导的小鼠急性过敏性气道炎症有抑制作用.

日本血吸虫感染对鸡卵清蛋白诱导的小鼠过敏性气道炎症的影响

目的研究日本血吸虫感染(感染后21 d)对鸡卵清蛋白(OVA)诱导的小鼠过敏性气道炎症的影响。方法20只雌性BALB/c小鼠随机分为健康对照组、感染组、OVA组、感染+OVA组,每组5只。感染组和感染+OVA组每鼠经腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴(15±2)条。感染后第21、35天,感染+OVA组和OVA组接受腹腔注射10μg OVA+2 mg铝佐剂致敏,感染后第42~46天接受1%OVA(PBS溶液)雾化激发,30 min/次,每天1次;健康对照组和感染组小鼠给予PBS雾化激发。采集感染后第35天(致敏期)、42天(致敏期)、49天(激发期)各组小鼠尾静脉血,ELISA检测血清IgE抗体和OVA特异性IgE抗体水平。感染后第49天剖杀全部小鼠,取肺和脾组织,取部分肺组织制作病理切片,苏木精伊红(HE)和过碘酸希夫氏(PAS)染色后观察肺组织血管、支气管周围炎症(炎症指数)和上皮细胞增生(增生指数)的病理学变化;另取一部分肺组织和脾组织制备单细胞悬液,流式细胞术检测CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T(Treg)细胞的比例。结果ELISA检测结果显示,感染后第35、42和49天,感染组小鼠血清IgE抗体的吸光度(A450值)分别为0.291±0.037、0.388±0.038和0.472±0.053,均高于健康对照组[(0.032±0.018、0.050±0.016和0.043±0.026)](P<0.01);OVA组分别为0.097±0.065、0.164±0.083和0.274±0.073,第42天和49天IgE抗体水平较健康对照组升高(P<0.01);感染+OVA组分别为0.305±0.054、0.359±0.037和0.454±0.017,均高于OVA组(P<0.01)。感染后第35、42和49天,OVA组OVA特异性IgE抗体的A450值分别为0.115±0.021、0.078±0.014和0.245±0.040,均高于健康对照组[(0.081±0.007、0.054±0.008和0.079±0.008)](P<0.01、0.05、0.05);感染+OVA组分别为0.034±0.009、0.038±0.016和0.203±0.017,均低于OVA组(P<0.01、0.01、0.05)。感染后第49天的病理学检测结果显示,健康对照组、感染组、OVA组和感染+OVA组小鼠肺组织支气管和血管周围炎细胞浸润的炎症指数分别为1.33±0.47、2.33±0.27、3.50±0.19和2.87±0.45。感染组和OVA组较健康对照组均升高(P<0.05、0.01),感染+OVA组较OVA组则降低(P<0.05)。此外,健康对照组、感染组、OVA组和感染+OVA组支气管上皮细胞的增生指数分别为0、0、2.12±0.80和1.72±0.55。OVA组高于健康对照组(P<0.05),感染+OVA组与OVA组差异无统计学意义(P>0.05)。感染后第49天流式细胞术检测结果显示,健康对照组脾和肺组织Treg细胞的比例分别为(16.24±3.06)%和(10.19±0.01)%,感染组分别为(27.23±5.62)%和(13.05±1.10)%,OVA组分别为(17.22±1.43)%和(12.34±2.25)%,感染+OVA组分别为(27.96±1.80)%和(15.04±1.41)%。感染组脾和肺组织Treg细胞的比例均高于健康对照组(P<0.05),OVA组与健康对照组的差异无统计学意义(P>0.05);感染+OVA组较OVA组脾组织Treg细胞比例升高(P<0.01),而肺组织的差异无统计学意义(P>0.05)。结论日本血吸虫感染(感染后21 d)对OVA诱导的过敏性气道炎症有明显的调节作用,可降低过敏性炎症致敏期和激发期OVA特异性IgE抗体水平,抑制OVA诱导的支气管和血管周围的炎细胞浸润,诱导脾组织Treg细胞比例的升高。