一氧化氮诱导食管癌细胞过表达基因的分离与鉴定

背景与目的:在一氧化氮(nitricoxid,NO)对食管癌细胞的诱导作用中,一些基因可能会出现过表达,但究竟哪些基因过表达至今尚不清楚。本研究拟对NO诱导食管癌细胞中的过表达基因进行分离鉴定。方法:以人食管癌细胞系EC109作为驱赶方(driver),以被NO诱导的EC109作为实验方(tester),应用抑制消减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)等技术手段研究NO诱导的食管癌细胞中基因的过表达情况。在获得6个SSH阳性克隆的基础上,通过反向mRNA斑点印迹阵列实验进行过表达基因的筛选,通过Northernblot对过表达基因进行验证,并对过表达基因的表达标志序列(expressedsequencetag,EST)实施序列测定,然后与GenBank进行BLAST同源性比较和序列突变分析。结果:鉴定出了两个线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)编码的基因,即ND-4L和ND-4,并在ND-4L/ND-4基因片段(10736-11449)上发现了三处点突变(10872T→C,11001A→G,1134A→G)。结论:NO可以诱导线粒体DNA编码的ND-4L和ND-4等基因过表达,这将为深入揭示NO对肿瘤细胞的作用机制提供新的重要线索。

肾母细胞瘤过表达基因(NOV)mRNA含量与骨肉瘤组织中细胞生长、迁移相关基因表达的相关性

目的:探讨肾母细胞瘤过表达基因(NOV)mRNA含量与骨肉瘤组织中细胞生长、迁移相关基因表达的相关性。方法:收集在本院接受手术治疗的骨肉瘤患者78例,取骨肉瘤组织及癌旁组织。经荧光定量PCR法测定其中NOV及促增殖/抗增殖基因、侵袭基因的mRNA表达量,进一步经Pearson检验评估NOV mRNA表达量与骨肉瘤细胞生长、迁移活性的相关关系。结果:骨肉瘤组织中NOV mRNA的表达量显著低于癌旁组织,FoxM1、STIM1、Orai1的mRNA表达量显著高于癌旁组织,抗增殖基因RanBP9、Tap73、Caspase-3、PTEN、P53的mRNA表达量显著低于癌旁组织,侵袭基因EFEMP1、Notch1、Id1、Src的mRNA表达量显著高于癌旁组织(P<0.05)。经Pearson检验发现,骨肉瘤组织中NOV mRNA表达量与促增殖基因FoxM1、STIM1、Orai1的mRNA表达量呈负相关,与抗增殖基因RanBP9、Tap73、Caspase-3、PTEN、P53的mRNA表达量呈正相关,与侵袭基因EFEMP1、Notch1、Id1、Src的mRNA表达量呈负相关(P<0.05)。结论:骨肉瘤组织中NOV呈相对低表达,且NOV mRNA表达量与肿瘤细胞增殖、侵袭活性呈负相关。

过表达BIRC5基因对氧糖剥夺/复氧诱导的脑微血管内皮细胞活性及VEGF表达的影响

目的探讨过表达BIRC5基因对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的小鼠脑微血管内皮细胞损伤的保护作用,并分析其可能的机制。方法将小鼠源性脑微血管内皮细胞,根据不同干预方式分为正常对照组(细胞正常培养)、细胞损伤组(细胞正常培养24 h,随后OGD3h/R3h损伤细胞)、BIRC5干预组(细胞预先转染腺病毒-BIRC5质粒并培养24 h,随后OGD3h/R3h处理)和阴性对照组(细胞预先转染腺病毒空质粒并培养24 h,随后OGD3h/R3h处理)。采用激光共聚焦显微镜观察各组细胞形态学变化;用MTT法和流式细胞仪分别检测各组细胞存活率和凋亡率;用RT-PCR和免疫印迹法分别检测各组细胞BIRC5和VEGF mRNA及蛋白表达。结果正常对照组的细胞骨架微丝彼此连接,分布规则,丝网状有序排列;细胞损伤组和阴性对照组的细胞微丝断裂,收缩变短或移向周边,微丝网状排列紊乱,可见细胞外形皱缩,间隙加大,少部分微丝缺失出现空隙;BIRC5干预组的细胞微丝连接,形态成长梭形,排列较规则,可见细胞间隙缩小,显示过表达BIRC5基因能够减轻损伤细胞的骨架微丝紊乱。与正常对照组相比,细胞损伤组、BIRC5干预组及阴性对照组细胞存活率降低,而细胞凋亡率增高,差异均有统计学意义(P<0.05);与细胞损伤组相比,BIRC5干预组的细胞存活率增高,而细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组相比,细胞损伤组、BIRC5干预组和阴性对照组的BIRC5和VEGF的mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与细胞损伤组相比,BIRC5干预组细胞BIRC5和VEGF的mRNA及蛋白表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达BIRC5基因对OGD/R诱导的脑微血管内皮细胞损伤具有保护作用,机制可能与上调VEGF表达有关,提示BIRC5调控VEGF表达促进血管新生可能是脑侧支循环建立和形成的重要机制之一。

构建过表达TRPV1基因的Caco-2细胞株

采用慢病毒载体系统构建辣椒素受体基因TRPV1过表达的人结直肠腺癌细胞Caco-2稳定重组株.将双酶切后的慢病毒空载体pCDH和TRPV1全基因PCR产物通过T4 DNA Ligase连接,构建包含TRPV1基因的过表达载体pCDH-TRPV1.将过表达载体pCDH-TRPV1转化DH 5α感受态细菌,大量扩繁后提取过表达载体pCDH-TRPV1的质粒,与psPAX2和pMD两种含有慢病毒包装所必需元件的质粒混合,再与脂质体混合制备脂质体-载体混合液.将脂质体-载体混合液转染至单层的293T细胞中,培养48h进行病毒包装.收集富含慢病毒颗粒的293T细胞上清液,超离心纯化成浓缩病毒,然后再与polybrene一起感染单层Caco-2细胞,通过GFP绿荧光信号来筛选获得TRPV1基因过表达的稳定细胞株.通过Realtime PCR方法和Western-blot检测TRPV1的mRNA表达量及蛋白表达量,结果表明,Caco-2-TRPV1重组细胞株的TRPV1的mRNA表达量及蛋白表达量均显著高于Caco-2-GFP对照细胞(P<0.05).成功构建了TRPV1基因过表达的稳定细胞株,为后续辣椒素降脂机理的研究提供了正向调控细胞模型.

C3基因过表达模型小鼠的鉴定及饲养繁育

目的构建并繁育C57BL/6J-ROSA26^(em(C3+))基因过表达小鼠,鉴定并分析其基因型和目的蛋白的表达情况,并验证检测方法的可适用性。方法将构建的C57BL/6J-ROSA26^(em(C3+))基因过表达阳性founder鼠与野生型小鼠配繁,获得的杂合子小鼠采取同胞交配方式(雌雄比1∶1),得到纯合子小鼠。使用鼠尾组织DNA PCR法鉴定杂合子及纯合子基因型,通过Western blot法检测小鼠间脑组织C3蛋白的表达差异。分析C57BL/6J-ROSA26^(em(C3+))基因过表达小鼠杂合子及纯合子的体质量变化和繁殖性能。结果C57BL/6J-ROSA26^(em(C3+))基因过表达杂合子小鼠通过同胞交配可获得纯合子小鼠。蛋白印迹法检测发现,与野生型小鼠相比,C3蛋白在基因修饰小鼠组织内高表达。C3基因的过表达不影响小鼠繁殖,纯合子间可以稳定配繁。但是,C3基因的过表达显著降低了5周龄后转基因雌鼠的体质量。结论采用全同胞交配方式,并通过PCR法进行基因型鉴定,可稳定获得C57BL/6J-ROSA26^(em(C3+))基因过表达小鼠。

过表达Beclin1基因对横纹肌肉瘤RD细胞生物学行为的影响

目的 本研究旨在探究Beclin1基因调控横纹肌肉瘤RD细胞的机制。方法 通过转染技术使Beclin1基因在RD细胞中过表达,将其分为实验组和阴性对照组。运用RT-qPCR及Western Blot分别从mRNA水平和蛋白水平检测Beclin1基因在RD细胞中的表达情况。采用CCK-8实验、细胞划痕愈合实验、Transwell实验以及TUNEL实验分别检测转染前后细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡情况。结果 实验组Beclin1基因的mRNA表达量为(4.06±0.46),显著高于阴性对照组(P=0.008,P<0.01),蛋白表达量为(1.84±0.30),显著高于阴性对照组(P=0.032,P<0.05);根据吸光度值绘制出实验组和阴性对照组的生长曲线,实验组细胞生长水平显著低于阴性对照组(P<0.05);实验组细胞迁移能力明显弱于阴性对照组(P<0.01),侵袭能力显著弱于阴性对照组(P<0.01),细胞凋亡率显著高于阴性对照组(P<0.01)。结论 自噬调节基因Beclin1过表达可显著促进RD细胞凋亡,抑制RD细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

骨肉瘤组织中NOV基因表达量检测及与细胞增殖、迁移的相关性研究

目的:探讨骨肉瘤组织中肾母细胞瘤过表达基因(NOV)表达量检测及与细胞增殖、迁移的相关性。方法:2014年5月~2017年8月在孝感市中心医院接受手术治疗的骨肉瘤患者的病灶组织及瘤旁正常组织各97例,分别作为骨肉瘤组、正常对照组。采用荧光定量PCR检测不同组织标本中NOV基因、增殖相关基因、侵袭相关基因的表达量,采用Pearson检验评估骨肉瘤组织中NOV基因表达量及其与细胞增殖、迁移的相关性。结果:骨肉瘤组中NOV mRNA的表达量显著低于正常对照组(P<0.05);骨肉瘤组中KISS-1、TAp73 mRNA的表达量低于正常对照组(P<0.05),VCP、FoxM1、RIPK4、STIM1mRNA的表达量高于正常对照组(P<0.05);骨肉瘤组中DLX1、Sema6A mRNA的表达量低于正常对照组(P<0.05),EFEMP1、GPR56、SOX5、CRYAB mRNA的表达量高于正常对照组(P<0.05)。Pearson检验发现,骨肉瘤组织中NOV基因表达量与细胞增殖基因、侵袭基因的表达量直接相关。结论:骨肉瘤组织中NOV基因表达量低于瘤旁正常组织,且具体表达量与肿瘤细胞增殖、侵袭活性直接相关,可作为骨肉瘤恶性程度判断的可靠指标。

红梨PybHLH基因过表达提高烟草NaCl抗性的研究

为探究过表达云南红梨bHLH转录因子对烟草抗盐性的影响,从红梨红色果皮中分离了bHLH转录因子基因PybHLH.亚细胞定位表明PybHLH蛋白定位于细胞核.以转基因PybHLH烟草和野生型烟草为材料,进行了NaCl胁迫对转基因PybHLH烟草生理生化影响研究及其相关酶基因的表达分析.表明PybHLH转基因烟草具有一定的耐盐性,一方面表现为随着盐胁迫时间延长,PybHLH转基因烟草中总可溶性糖、可溶性总蛋白和游离脯氨酸含量的增加,H2O2含量降低;另一方面表现为脯氨酸生物合成关键酶基因P5CS、抗氧化相关基因MnSOD、CuZn-SOD和POD、胁迫相关基因HSP和HSP cherpron和ABA抗盐信号途径基因NAC等均呈上调表达趋势.PybHLH的过表达提高了烟草的耐盐性,这将为进一步研究植物的耐盐机制及耐盐植物新品种的开发奠定基础.

mok E基因过表达对红曲霉Monacolin K产量、菌丝及孢子形态的影响

红曲霉中mok E基因是红曲霉次级代谢产物Monacolin K生物合成的一个相关基因,mok E基因表达量与Monacolin K产量呈正相关。以mok E基因为目的基因,构建红曲霉mok E基因过表达工程菌株,通过逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(reverse transcription-quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-q PCR)确定mok E基因过表达转化子,对转化子Monacolin K产量进行测定,同时利用扫描电镜,对野生型红曲霉M1及转化子菌丝、孢子进行观察。结果表明:以潮霉素抗性基因为筛选标记,成功得到240个转化子,对其中9个转化子进行mok E基因表达量测定,有3株转化子mok E基因表达量增加,分别为T2、T8、T9转化子,确定其为mok E基因过表达转化子;T2、T8、T9转化子内酯型Monacolin K产量分别为2 159.7、4 177.6、3 365.7μg/g,与野生型红曲霉Monacolin K产量(1 447.8μg/g)相比,分别提高了49.2%、188.5%及132.5%。扫描电镜结果显示,mok E基因过表达,对红曲霉的菌丝体、孢子形态及生殖方式均有影响。

乳腺癌X线征象与Her-2、EGFR、CK5/6基因过表达的相关性研究

目的探讨乳腺癌X线征象与Her-2、EGFR、CK5/6基因过表达的相关性。方法对60例乳腺癌患者术前行乳腺X线形态学分析,术后进行标本的免疫组化染色分析测定癌细胞Her-2、EGFR、CK5/6基因的表达水平,与乳腺X线的直接征象相结合,分析两者之间的相关性。结果 60例患者均为女性,其中表现为肿块55例(92%),钙化28例(46.7%)。Her-2呈阳性表达40例(61.5%),EGFR呈阳性表达18例(30%),CK5/6呈阳性表达9例(15%)。乳腺癌X线征象与Her-2,EGFR基因过表达有相关性(P<0.05),与CK5/6表达无相关性(P>0.05)。结论乳腺癌X线征象在一定程度上反映了Her-2、EGFR、CK5/6基因的过表达水平,为乳腺癌的术前辅助内分泌治疗和预后评估提供了一定的信息。

一氧化氮诱导食管癌细胞线粒体DNA编码基因过表达

以人食管癌细胞系EC10 9作为驱赶方 (driver) ,以被一氧化氮 (nitricoxid ,NO)诱导的EC10 9作为实验方 (tester) ,应用抑制消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)、反向mRNA斑点印迹和RNA印迹等技术手段研究了NO诱导的食管癌细胞中基因的过表达情况 .然后对过表达基因的表达序列标签 (expressedsequencetag ,EST)实施序列测定 ,并与GenBank进行BLAST同源性比较和序列突变分析 .结果先后两次从 6 9个SSH阳性克隆中共鉴定出 6个线粒体DNA (mitochondrialDNA ,mtDNA)编码的基因 ,即ND 4L、ND 4、COX 2、Lys tRNA、ATP 8和ATP 6 .表明NO可以诱导食管癌细胞mtDNA编码的基因过表达 .另外 ,在ND 4L/ND 4基因的片段 (10 736～ 114 4 9)上发现了三处同型单核苷酸置换 (10 872T→C ,110 0 1A→G ,11346A→G) ,在COX 2 /Lys tRNA/ATP 8/ATP 6基因片段 (80 11～ 85 89)上发现了一处单核苷酸缺失(8380A) .氨基酸序列分析表明 ,在NO诱导的EC10 9中可能存在着一种结构异常的ATP 8肽链 (一条在N端被截短的只有 11个氨基酸残基的肽链 ,而正常的ATP 8肽链为 6 8个氨基酸残基 ) .

细胞周期蛋白E2基因的过度表达与胃腺癌细胞迁徙的关系

从基因芯片筛选出差异表达的基因中一个细胞周期蛋白 (cyclin)E2基因 ,深入研究周期蛋白E2在高转移性胃腺癌细胞系RF 4 8细胞中的生物学作用 .首先通过合成硫代磷酸化修饰的反义、正义和错配寡核苷酸片段 ,使用半定量RT PCR和Western印迹方法分别检测被 3种寡核苷酸转染的RF 4 8细胞在 1～ 5d内周期蛋白E2基因及它可能调控下游靶基因之一FGFR基因和蛋白质的表达 ,检测寡核苷酸转染的RF 4 8细胞周期和凋亡细胞 ,观察寡核苷酸转染RF 4 8细胞的软琼脂集落形成、运动能力和体外侵袭能力 .结果表明 ,修饰的反义寡核苷酸在有效地抑制RF 4 8细胞中周期蛋白E2表达上调后 ,RF 4 8细胞的迁徙能力被显著降低 ,其增殖、运动能力没有变化 .周期蛋白E2基因的主要作用并不是促细胞分裂 ,也与细胞的增殖、运动能力无关 ,周期蛋白E2基因的过度表达与胃腺癌的迁徙性存在相关性 ,其触发肿瘤的侵袭性可能通过某种机制调控其下游靶基因之一成纤维细胞生长因子受体 (FGFR)

腺病毒介导的Apelin基因过表达对心力衰竭大鼠的保护作用

目的:应用腺病毒为载体在体内过表达Apelin基因,研究Apelin对于心力衰竭的保护作用。方法:SD大鼠随机分为4组,其中3组行冠状动脉结扎术:空白对照组control(心衰大鼠尾静脉注射生理盐水500μL);病毒对照组Ad-GFP(心衰大鼠尾静脉注射Ad-GFP500μL);治疗组Ad-Apelin(心衰大鼠尾静脉注射Ad-Apelin500μL);另外一组为假手术组sham。各组大鼠均于术后24h单次尾静脉注射给药,并于术后14d进行第二次尾静脉注射。于首次注射后第3天随机取出心、肾及主动脉组织,荧光显微镜下观察Ad-Apelin被组织吸收的情况。用Westernblot方法检测心肌组织Apelin的表达。用多普勒超声心动图、血流动力学测定和心肌梗死面积测定来评价心脏功能的变化。结果:心脏、主动脉、肾脏组织都可见大量绿色荧光表达,治疗组(Ad-Apelin)心肌、主动脉组织内Apelin蛋白表达显著增加,超声、血流动力学及心肌梗死面积测定结果均显示过表达Apelin的心衰大鼠心脏收缩功能明显改善,心肌形态得到一定的改善。结论:Apelin基因过表达对于心力衰竭大鼠有明显的心脏保护作用。

Cyr61基因过表达对人肾小管上皮细胞凋亡的影响

摘 要 目的:观察Cyr61基因过表达对人肾小管上皮细胞 (HKC)凋亡的影响,探讨Cyr61在常染色体显性多囊肾病(ADPKD)发病中的作用及机制。 方法:RT PCR扩增Cyr61基因全长,构建pcDNA3. 1 +Cyr61重组质粒,转染并筛选获得稳定转染pcDNA3. 1+Cyr61的HKC细胞。经RT PCR、Northern、Westernblot鉴定转染细胞系基因的整合及表达。对空白HKC、空质粒pcDNA3. 1转染的HKC、Cyr61转染的HKC和囊肿衬里上皮细胞去血清培养 72h后,流式细胞仪检测细胞凋亡指数,Westernblot检测磷酸化Akt和Bad含量。 结果:构建了pcDNA3. 1+Cyr61重组质粒并获得稳定转染该质粒的HKC细胞。空白HKC与质粒pcDNA3. 1转染组之间上述指标无显著差异(P>0 05),Cyr61基因转染组与空白组、pcDNA3. 1转染组相比,凋亡指数显著降低 (P<0. 01),磷酸化Akt和磷酸化Bad含量显著增高 (P<0 .01 ),Cyr61基因转染组与囊肿衬里上皮细胞之间上述指标无显著差异 (P>0. 05);在Cyr61抗体存在下,Cyr61基因转染组的上述指标与空白组无显著差异 (P>0 .05 )。 结论:过表达Cyr61的HKC对去血清诱导的凋亡特性与囊肿衬里上皮细胞相似,过表达的Cyr61可能通过自分泌途径,促进Akt和Bad磷酸化,抑制细胞凋亡,参与ADPKD囊肿形成和发展。

大鼠β-arrestin2基因过表达慢病毒载体的构建与鉴定

目的:构建大鼠β-抑制蛋白2(β-arrestin 2)基因过表达慢病毒载体并鉴定。方法:取Pubmed数据库中大鼠β-arrestin 2的cDNA序列合成引物,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增获取大鼠β-arrestin 2基因;采用琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收PCR产物并对其进行纯化;取限制性内切酶BamHI/AgeI酶切载体质粒和纯化后的PCR产物,将二者实施连接后转化感受态细胞,挑取菌落进行PCR鉴定,并对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对抽提质粒;将β-arrestin2重组质粒与慢病毒辅助包装质粒共转染至293T细胞,获取病毒粗提液并进行扩增、纯化,稀释法测定病毒滴度、荧光显微镜下观察慢病毒感染效率。结果:PCR扩增所得产物大小为1274 bp,与Pubmed数据库中该基因片段大小一致;阳性转化子的PCR产物大小为728 bp,对比Pubmed数据库中大鼠Arrb 2基因序列,上下游引物基因序列大小与转化子PCR产物结果一致;慢病毒包装完成后病毒滴度为5×1011 TU/L,病毒感染效率较高。结论:成功构建了携带大鼠β-arrestin2基因的慢病毒载体,目的基因在转染细胞内能稳定高表达。

Ask1基因过表达对卵巢癌细胞凋亡及其对紫杉醇顺铂化疗敏感性研究

细胞凋亡受阻在肿瘤的发生、发展中起着重要作用。细胞凋亡信号调节激酶1（ASK1）是高度保守的MAP3Ks家族成员之一,ASK1被激活后能够将MKK3/MKK6-p38和MKK4/MKK7-JNK两大激酶通路激活,最终诱导细胞发生凋亡^（[1]）。研究发现很多调控因子与Ask1直接结合调控其活性,Ask1去磷酸化则活化,从而导致细胞凋亡发生^（[2,3]）。有文献报道肿瘤细胞在接受某些外来刺激后（比如细胞毒性化疗药物顺铂）.

慢病毒载体介导CC趋化因子受体7基因过表达可促进大鼠骨髓间充质干细胞归巢

背景:研究发现,骨髓间充质干细胞特异性地表达CC趋化因子受体7(CC chemokine receptor,CCR7),与其配体次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid-tissue chemokine,SLC)相互作用,有助于骨髓间充质干细胞归巢到损伤部位。目的:探讨CCR7基因过表达对大鼠骨髓间充质干细胞体内外归巢特性的影响。方法:利用慢病毒载体介导大鼠骨髓间充质干细胞过表达CCR7基因,建立过表达CCR7的骨髓间充质干细胞。通过Transwell实验体外检测趋化因子SLC对过表达CCR7的骨髓间充质干细胞体外定向迁移的影响。将SD大鼠分为4组,每组动物10只:①对照组:未接受全身照射大鼠作为对照组;②照射组:大鼠接受全身照射(60Co单次全身照射,总剂量为7.5 Gy,照射量率为0.75 Gy/min),输注生理盐水1 mL;③BMSCs-GFP组:大鼠经全身照射后,输注GFP标记的骨髓间充质干细胞悬液1 mL (含细胞5×105个);④CCR7-BMSCs-GFP组:大鼠经全身照射后,输注携带GFP和CCR7基因的骨髓间充质干细胞1 mL (含细胞5×105个)。移植24 h后取大鼠脾脏做冰冻切片,荧光显微镜下观察骨髓间充质干细胞归巢情况,流式细胞技术检测骨髓间充质干细胞在脾脏的归巢率。ELISA方法检测照射后大鼠外周血中SLC水平。结果与结论:①Transwell实验结果表明,过表达CCR7可促进骨髓间充质干细胞向趋化因子SLC迁移募集;②冰冻切片结果显示,过表达CCR7可明显提高骨髓间充质干细胞归巢至损伤脾脏的效率;③流式细胞术测定过表达CCR7的骨髓间充质干细胞归巢至脾脏数量明显高于BMSCs-GFP组(P <0.05);④ELISA结果显示,照射24 h后大鼠外周血中SLC水平明显升高;⑤结果表明,CCR7及其配体SLC对骨髓间充质干细胞的归巢有促进作用。

hPOT1基因过表达对HeLa细胞细胞周期和凋亡的影响

目的观察人POT1(protectionoftelomeres1)基因过表达对HeLa细胞细胞周期和细胞凋亡的影响。方法利用本课题组构建的hPOT1基因真核表达重组质粒pcDNA3-hPOT1,经脂质体介导瞬时转染HeLa细胞;通过RT-PCR和EMSA法(电泳迁移率改变分析)检测外源基因的表达效果,流式细胞术分析细胞周期,Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡。结果pcDNA3-hPOT1重组质粒转染HeLa细胞48h后,mRNA和蛋白质分析表明,外源性hPOT1基因能在HeLa细胞中有效表达,HeLa细胞阻滞于细胞周期S期,而对凋亡无明显影响。结论hPOT1基因可能参与了高等真核细胞细胞周期调控过程,但与细胞凋亡无密切关系。

大鼠糖原合成酶激酶-3β过表达基因慢病毒载体的构建与鉴定

糖原合成酶激酶-3β（Gsk-3β）是哺乳动物中广泛表达的丝氨酸／苏氨酸激酶，它不似能磷酸化糖原合成酶，促进糖代谢，还可磷酸化-系列底物，包括代谢相关蛋白、信号转导蛋白、结构蛋白和一些转录因子，并参与PI-3K、Wnt及Hedgehog等信号通路，影响细胞的生存与凋亡、运动与迁移及肿瘤的生成等。我们通过构建大鼠Gsk-3β基因过表达慢病毒载体并实现该基因在WBF-3β细胞中的稳定高表达。