HIF-1α和HIF-2α在肾透明细胞癌中的表达及意义

背景与目的:低氧诱导因子是广泛存在于多种细胞的转录因子,在低氧时肿瘤细胞相关基因的表达发挥着重要的调控作用。本研究探讨了低氧诱导因子HIF-1α mRNA和HIF-2α mRNA在肾透明细胞癌中的转录及其临床意义。方法:采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测56例肾透明细胞癌组织、对照组43例远离肿瘤的癌周肾脏组织及9例良性疾病肾脏组织中HIF-1α mRNA和HIF-2α mRNA的阳性率。结果:HIF-1α mRNA在肾透明细胞癌组织中的阳性率为87.5%,较对照组织13.5%高,差异具有显著性(P<0.001);HIF-2α mRNA在肾透明细胞癌标本组织中的表达率为94.6%,较对照组织7.7%高,差异有显著性(P<0.001)。结论:HIF-1α mRNA和HIF-2α mRNA的转录可能对肾透明细胞癌的发生和发展有重要作用。

TGF-β_1诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡过程中Survivin基因的表达及意义

目的探讨转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡过程中Survivin基因的表达及意义。方法用免疫组织化学染色法检测人RPE细胞Survivin蛋白的表达;用AnnexinVFITC标记法测定TGFβ1作用下的人RPE细胞凋亡发生率;用RTPCR方法检测不同质量浓度TGFβ1作用下人RPE细胞Survivin基因的表达。结果免疫化学染色法显示:人RPE细胞表达Survivin基因;AnnexinVFITC标记法检测结果显示:人RPE细胞的凋亡率随着TGFβ1质量浓度的升高而增高;RTPCR结果显示:随着TGFβ1质量浓度的升高,Survivin基因的表达逐渐降低。结论Survivin基因在人RPE细胞的凋亡过程中起着非常重要的作用。

γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和多药耐药相关蛋白基因在膀胱癌中的表达及相关性分析

为探讨 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 (γ- GCS)及多药耐药相关蛋白 (MRPs)与膀胱癌化疗耐药的关系 ,应用逆转录多聚酶链式反应 (Rt- PCR)技术检测了 32例膀胱癌及其癌周正常膀胱粘膜上 γ- GCS亚单位 γ- GCSh、γ- GCSl以及 MRPs家族成员 MRP1 和 MRP2 的 m RNA的表达 ,并以 β- actin m RNA为内对照半定量进行相关分析。结果显示 :γ-GCSh、γ- GCSl、MRP1 和 MRP2 m RNA在癌组织的平均相对表达水平均高于其在正常粘膜的表达 ;γ- GCSh和 MRP1 在化疗复发病例的癌组织的平均表达水平明显高于在未接受过任何化疗的初发病例 ,同时显示两者在癌组织的表达具有较强的相关性 (r=0 .786 ,P<0 .0 1)。提示 :正常细胞的恶性化可上调 γ- GCS和 MRPs的表达 ;膀胱癌临床化疗耐药的形成与 γ- GCSh和 MRP1 的过表达密切相关 。

雌激素受体拮抗剂他莫昔芬和4-羟基他莫昔芬治疗非小细胞肺癌的实验研究

[目的 ]探讨雌激素受体拮抗剂在非小细胞肺癌治疗中的作用。 [方法 ]用逆转录多聚酶链式反应 (RT-PCR)测定肺腺癌细胞株 SPC- A- 1的雌激素受体 m RNA(ER- m RNA)表达 ,分别在去激素培养条件下观察不同浓度的他莫昔芬 (Tam)、4-羟基他莫昔芬 (OHTam)和雌二醇 (E2 )对其生长速度、细胞周期时相、ER- m RNA水平和细胞形态学的影响。 [结果 ] SPC- A- 1肺腺癌细胞株有 ER- m RNA表达 ,低浓度 E2 (1 0 -8mol/ L)可促进其生长 ,Tam(1 0 -6mol/ L )和 OHTam(1 0 -6mol/ L)可抑制 E2 (1 0 -8mol/ L )的生长刺激作用。去激素环境下细胞生长明显减慢 ,在无激素环境中亦能抑制细胞生长 ,抑制发生在 G0 / G1 期 ,并有细胞内质网扩张等结构改变 ,ER- m RNA表达水平下降。 [结论 ]肺腺癌 SPC- A- 1细胞株的生长具有雌激素依赖性 ,应用 ER拮抗剂 Tam和 OHTam能抑制其生长。肺癌细胞中

急性肺损伤大鼠肺组织白细胞介素-10表达及糖皮质激素对其影响

目的 :探讨急性肺损伤 (ALI)大鼠肺组织白细胞介素 - 10 (IL - 10 )mRNA表达及糖皮质激素对其的影响。方法 :SD大鼠随机分为正常对照 (C)组、油酸致伤 (O)组、地塞米松治疗 (D)组 ,观察地塞米松对大鼠油酸型ALI动物模型的血氧分压、平均肺动脉压、总肺水量、IL - 10mRNA的RT -PCR产物及肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)含量的影响。结果 :地塞米松能提高ALI时肺组织IL - 10mRNA水平和降低TNF -α含量 ,并提高机体动脉血氧分压、减轻肺水肿、降低肺动脉压。ALI时IL - 10mRNA水平和TNF -α含量变化具有显著性相关 (r =- 0 734,P =0 0 0 12 ) ,结论 :ALI时机体IL -10mRNA水平增加 ,地塞米松能促进这种作用 。

两种试剂检测抗-HCV在丙型肝炎诊断中的意义

目的提高丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)检出率和检测结果的准确率。方法应用两个厂家抗-HCV ELISA试剂(试剂1、2)检测本院2006年1～12月间2516份输血、手术前住院患者血清标本。再将试剂1、2均阳性的血清标本28份、仅试剂1阳性的15份和仅试剂2阳性的17份血清标本进行HCV RNA RT-PCR荧光定量检测。结果试剂1、2抗-HCV均阳性28份标本的RT-PCR结果均阳性,仅试剂1抗-HCV阳性的15份标本中2份阳性,试剂2抗-HCV阳性的17份标本中3份阳性;仅试剂1或2抗-HCV阳性的32份血清标本中,HCV RNA RT-PCR检测阳性率为15.63%。结论采用双试剂检测能提高抗-HCV的检出率和结果的准确率。

种植于硅橡胶膜上的大鼠纤维环细胞的表型特征研究

目的:比较种植于硅橡胶膜或塑料培养板的大鼠纤维环细胞的表型特征.方法:利用倒置相差显微镜及透射电镜观察种植于不同基质的大鼠纤维环细胞形态的变化;利用甲苯胺蓝染色观检测蛋白多糖的表达情况;通过RT-PCR法检测Ⅰ,Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖mRNA的表达情况;采用流式细胞术观察细胞表面整合素β1的表达情况;同时检测了纤维环细胞在硅橡胶膜上的黏附情况.结果:种植于不同基质的纤维环细胞形态学观察无明显差别;在两种基质上的纤维环细胞甲苯胺蓝染色无差异;Ⅰ,Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖mRNA及细胞膜整合素β1的表达亦无明显差异;纤维环细胞可以黏附于硅橡胶膜上生长.结论:种植于硅橡胶膜上的纤维环细胞表型特征无改变,为进一步研究力学刺激对纤维环细胞的影响提供实验基础.

大鼠急性肺栓塞后hnRNP-E1的表达及胶原代谢的变化

目的研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中异源性核糖核蛋白E1(heterogeneous nuclear ribonucleoprote E1,hnRNP-E1)的表达变化及其对胶原代谢的影响。方法建立大鼠急性肺栓塞模型,分别在急性肺栓塞后1、2、7和21d开胸取出肺组织,然后提取肺组织的总RNA和总蛋白,以正常大鼠为对照组,采取半定量RT-PCR的方法研究hnRNP-E1在mRNA水平表达的变化;采用Western blot方法进一步验证hnRNP-E1在蛋白水平表达的变化。采用Northern blot法分析大鼠肺组织中Collagen α1(Ⅰ)(COL1A1)和Collagen α1(Ⅲ)(COL3A1)在肺栓塞后mRNA水平的表达变化;采用羟脯氨酸(HYP)和Masson染色观察急性肺栓塞3周后肺组织内的胶原沉积状况。结果在大鼠急性肺栓塞后的不同时间点,hnRNP-E1的mRNA水平和蛋白水平的表达均有显著升高。大鼠急性肺栓塞后肺组织中COL1A1的mRNA表达水平有明显升高,但是COL3A1的mRNA表达水平无显著变化。HYP分析和Masson染色均显示急性肺栓塞3周后肺组织内的胶原沉积明显增加。结论大鼠急性肺栓塞后肺组织内hnRNP-E1的表达升高,可能促进了COL1A1的蛋白表达和胶原在肺部的沉积。

成人隐匿性自身免疫糖尿病与调节性T细胞及相关基因Foxp3表达关系

目的探讨成人隐匿性自身免疫糖尿病与调节性T细胞(Treg)及相关基因Foxp3表达关系。方法采集LADA组、T1DM组、T2DM组和正常对照组新鲜外周血,密度梯度分离单个核细胞,流式细胞术检测4组CD3、CD4、CD25 T淋巴细胞亚群数量,计算Treg数量,RT-PCR检测转录因子Foxp3 mRNA的表达水平。结果 LADA组和T1DM组外周血CD4+T细胞明显高于T2DM组和正常对照组(P<0.05)。LADA组外周血Treg细胞高于T1DM组(P>0.05),明显低于T2DM组和正常对照组(P<0.05)。T1DM组外周血Treg细胞明显低于T2DM组和正常对照组(P<0.01),T2DM组和正常对照组之间无统计学差异(P>0.05)。LADA组Foxp3 mRNA明显高于T1DM组(P<0.05),明显低于T2DM组和正常对照组(P<0.05)。T1DM组Foxp3 mRNA明显低于T2DM组和正常对照组(P<0.01),T2DM组和正常对照组之间无明显统计学差异(P<0.05)。结论 LADA患者Treg细胞数量和活性降低,可能是其发病机制之一。

卵巢照射及卵巢切除对大鼠骨组织COLI与TGF-β_1 mRNA表达的影响

探讨卵巢辐射损伤与卵巢切除对大鼠骨组织转移生长因子β1(TGF-β1)与主要的基质蛋白I型胶原(COLI)基因表达的影响。50Gγ剂量γ射线局部照射大鼠卵巢和双侧卵巢切除后应用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)法检测大鼠骨组织中TGF-β1与COLI的mRNA表达水平。结果表明,骨组织COLI的mRNA表达水平上升,而TGF-β1mRNA表达减少,卵巢辐射损伤大鼠与卵巢切除大鼠两者结果相似。

丹参改善小鼠慢性酒精性肝损伤机制的研究

目的探讨丹参改善小鼠慢性酒精性肝损伤的机制。方法建立小鼠慢性酒精性肝损伤模型,采用苏木素伊红(Hematoxylin eosin ,HE)染色,观察丹参干预后肝组织形态学改变,逆转录多聚酶链式反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction ,RT -PCR)检测肝组织toll样受体4(tolllikereceptor 4,TLR4)mRNA及血红素氧合酶1(hemeoxygenase -1,HO -1)mRNA的水平,以免疫组织化学方法检测TLR4蛋白表达水平。结果丹参能减轻酒精所引起的肝细胞脂肪变性、坏死,下调TLR4mRNA表达及HO 1mRNA表达,并能使TLR4阳性细胞数明显减少。结论丹参可通过对TLR4信号传导途径的影响来减少酒精所引起的肝损伤。

DSB修复基因hKu70反义RNA真核表达载体构建

目的 构建人DNA双链断裂 (DSB)修复基因hKu70反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,为以后的hKu70基因功能和毒理学研究提供实验材料。方法 提取人胚肺成纤维细胞 (HLF)总RNA ,逆转录酶 多聚酶链式反应 (RT PCR)扩增hKu70基因cDNA保守序列 ,经与pGEM T载体连接、筛选、克隆、抽提质粒和双酶切后 ,将纯化的hKu70基因cDNA保守序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP C1中 ,筛选、克隆、抽提质粒 ,从而构建hKu70基因反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K。结果 经RT PCR获得 467bp含限制性内切酶位点的DNA片段 ,T载体克隆后经双酶切、测序 ,确定该片段为hKu70基因cDNA ,进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,并双酶切 ,测序确证。结论 成功构建hKu70基因反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,为建立该基因低表达细胞株。

不同方法测定对丙型肝炎诊断的影响分析

目的通过对两种丙型肝炎检测方法的比较,选择适合临床体检筛查快速检测的丙型肝炎的实验室诊断技术。方法对抗HCV特异性抗体进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测;同时,对HCV RNA采用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)检测,对比两种方法的检出率。结果 600份标本中,50份检出抗丙型肝炎病毒(HCV)抗体阳性,其中有47份标本HCV RNA检测呈阳性,两种方法的符合率为94.0%。结论第3代抗HCV抗体检测试剂盒,有较高的灵敏度和特异性,可作为临床筛查HCV感染的主要检测方法。

大鼠急性肺栓塞模型中CA3和NHE_1表达的变化

目的研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中与酸碱平衡相关的碳酸酐酶3(CA3)和Na+/H+交换器(NHE1)的表达变化。方法建立大鼠急性肺栓塞模型,分别在急性肺栓塞后1、8、24和48 h开胸取出肺组织,然后提取肺组织的总RNA和总蛋白,以正常组为对照,采取半定量RT-PCR的方法研究CA3和NHE1在mRNA水平表达的变化;采用western-b lot方法进一步验证CA3和NHE1在蛋白水平表达的变化;同时采用免疫组织化学的方法检测大鼠肺组织中NHE1在肺栓塞前后表达的变化。结果在大鼠急性肺栓塞后的不同时间点,CA3的mRNA水平和蛋白水平均逐渐降低,而NHE1在mRNA水平和蛋白水平的表达都出现逐渐升高现象。免疫组化研究表明NHE1主要分布在支气管黏膜上皮和细支气管黏膜上皮的胞浆内,急性肺栓塞后NHE1在上皮细胞内的表达明显升高。结论大鼠急性肺栓塞后肺组织内CA3的表达降低,NHE1的表达升高,这一现象可能与机体的酸碱平衡调节相关。

大肠癌耐药基因的表达及临床意义

目的：为研究大肠癌多药耐药基因（MDR-1）表达与临床耐药的关系。方法：应用逆转录-多聚酶链式反应技术（RT-PCR）和免疫细胞化学染色法检测了31例大肠癌患者（初治原发癌19例；复治转移癌12例）的MDR-1mRNA水平和多药耐药蛋白（P-170）的表达，并对两种方法进行了比较。结果：初治原发性大肠癌19例中MDR-1mRNA基因阳性表达15.79%,P-170阳性为15.7%；而复发转移癌12例中，MDR-1mRNA基因阳性表达66.67%。而P-170阳性为58.33%。结论：复发性转移癌比初治原发癌具有更普遍的抗药性，且主要是获得性抗药，MDR-1的基因和蛋白质两种检测方法具有一定的一致性。以RT-PCR方法具有更强的敏感性 ，MDR-1基因表达可以作为预测化疗效果的一个重要参考指标。

协同刺激分子在实验性变态反应性神经炎发病中的作用及雷公藤多甙的影响

目的 探讨协同刺激分子在实验性变态反应性神经炎 (EAN)发病中的作用及雷公藤多甙的影响。方法 用兔坐骨神经匀浆免疫小鼠建立EAN模型 ,雷公藤多甙 (TWP)灌胃治疗 ,观察小鼠发病情况和病理改变 ;通过流式细胞计检测小鼠外周血淋巴细胞CD2 8、CTLA 4、B7 1、B7 2蛋白的表达 ;用RT PCR检测外周血淋巴细胞B7 1和B7 2mRNA的表达。结果 EAN小鼠外周血淋巴细胞上协同刺激分子CD2 8、CTLA 4、B7 1、B7 2蛋白的表达水平明显增高 ,B7 1和B7 2mRNA表达与蛋白的增加相平行。雷公藤多甙治疗组的发病率及病变程度均明显降低 ,同时伴随CD2 8、B7 1、B7 2蛋白的表达及B7 1、B7 2、mRNA表达的水平降低。结论 协同刺激分子的表达对T细胞活化起重要作用 ;雷公藤多甙能减轻ENA的病变程度 ,可能与抑制了B7 1及B7 2的基因转录或转录以上环节和抑制了CD2 8翻译或翻译以上环节有关。

淋巴瘤相关抗原肽刺激所获细胞毒性T细胞克隆的特征

目的研究抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞(CTL)克隆识别靶细胞的肽特异性和人类白细胞抗原(HLA)限制性,以及其赖以识别抗原肽的T细胞受体(TCR)基因表达序列的分子特征。方法利用体外CTL刺激扩增体系,应用免疫球蛋白重链可变区(IgHV)框架区上的B淋巴瘤相关抗原九肽(IgHV1QLVQSGAEV和IgHV3SLYLQMNSL)负荷的抗原递呈细胞(APC),刺激正常HLAA0201供者的外周血单个核细胞(PBMC),每周1次共4次,用流式细胞仪检测体外培养细胞的免疫表型的变化,并用肽/主要组织相容性基因复合体(MHC)四聚体方法检测肽特异性的CTL增殖情况。应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CTL与不同的靶细胞共同孵育时释放干扰素γ(IFNγ)的能力。应用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)和T细胞受体(TCR)基因指纹谱型图方法检测培养前后的淋巴细胞的克隆变化,并用直接测序的方法得到CTL克隆的TCR基因序列。结果B淋巴瘤相关抗原肽4次刺激体外培养的PBMC后CD8+CTL大量增殖,CD4/CD8明显下降(0.10vs1.43,P<0.05)。IgHV1QLVQSGAEV/HLAA0201四聚体和CD8双阳性的肽特异性CTL数量(49.38%)比刺激前(0.04%)明显上升。ELISA检测IFNγ的分泌表明其识别靶细胞是肽特异性和HLA限制性的。TCR基因指纹谱型图显示抗原肽反复刺激获得的CTL的TCR表达集中于个别基因家族,呈克隆性增殖。结论应用IgHV基因框架区来源的B淋巴瘤相关抗原九肽可以使特异性CTL克隆增殖,这些克隆以肽特异性和HLA限制性的方式识别靶细胞。了解这些CTL的作用和TCR识别相关抗原肽的分子结构,将有助于确定体内T细胞和B细胞相互调节的机制。

Tektin 2在弱精症患者精子中的表达特征及其临床意义

目的:探讨Tektin 2在弱精症患者精子的表达特征及其临床意义。方法:将活动力正常和活动力降低的人精子cDNA分别与人类全基因组芯片杂交,筛选出差异表达的基因;采用RT-PCR比较Tektin 2在活动力正常和活动力降低的人精子中的表达差异。结果:通过分析基因芯片结果筛选出差异表达基因Tektin 2;Tektin 2在精子活动力降低组的相对表达量(0.308±0.028)明显低于精子活动力正常组(0.613±0.041),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Tektin 2在弱精症患者精子中表达水平明显降低,表明其在精子运动中可能发挥重要作用。

2种丙型肝炎检测方法的比较试验

[目的] 通过对2种丙型肝炎检测方法的比较,选择适合检验检疫系统工作特点的丙型肝炎的实验室诊断技术。[方法] 以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗HCV特异性抗体;以逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)检测HCV RNA,并将2种方法的检出率进行比较。[结果] 在检出的49份抗HCV抗体阳性的血清标本中,有46份标本的HCV RNA同时呈阳性,2种方法的符合率为93.9％。[结论] 第3代抗HCV抗体检测试剂盒,有较高的灵敏度和特异性,可作为目前口岸出入境检验检疫部门筛查HCV感染的主要检测方法。