卵子透明带保存精子在第二代试管婴儿中的应用研究

目的:探讨利用卵子透明带冷冻保存微量精子在第二代试管婴儿助孕中的应用效果。方法:回顾性分析2019年6月—2023年10月接受睾丸活组织检查取精助孕的40对夫妻,共计65个助孕周期的资料,根据患者助孕周期中精子来源分为A组(40个周期)和B组(25个周期)。A组采用女性取卵当日男方睾丸穿刺活检精子助孕,B组采用女性取卵当日利用卵子透明带冷冻保存的男性精子助孕(B组患者为上述经历了第一次新鲜睾丸精子助孕后,其中25对夫妻又开展了第2次助孕周期,第2次助孕周期时不再进行睾丸活组织检查取精,而是利用冷冻保存复苏后的精子助孕,共25个周期)。比较两组实验室各项指标[成熟卵母细胞百分率(MII卵率)、2原核胚胎受精百分率(2PN受精率)、2原核卵裂胚胎百分率(2PN卵裂率)、卵裂期优质胚胎百分率(D3优胚率)、囊胚形成率、临床妊娠率],25对接受两次助孕史的夫妻依据前后两次助孕的精子来源,分为新鲜睾丸精子和解冻精子两部分,比较其上述实验室各项指标的差异性。结果:两组MII卵率、2PN受精率、2PN卵裂率、D3优胚率、囊胚形成率、临床妊娠率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);另外25对夫妻前后接受两种不同来源精子助孕的指标比较,差异也均无统计学意义(P>0.05)。结论:利用卵子透明带冷冻保存微量精子在无精症患者中能够在保证无新鲜睾丸穿刺精子的情况下得到类似的临床结局,同时可减少男性反复睾丸活组织检查的痛苦及创伤,该方法确保极少量精子在冷冻-复苏过程中不会丢失,此方法容易获取高质量解冻精子。

透明带自发溶解胚胎复苏移植活产1例报道及文献复习

透明带是包裹在哺乳动物卵母细胞和植入前胚胎外的多层糖蛋白结构。结构完整和功能正常的透明带在卵母细胞形成、受精及早期胚胎发育过程中发挥着重要作用,卵母细胞透明带发生异常或缺失影响女性受孕。透明带在胚胎发育过程中自发性溶解是一种较为罕见的现象,目前尚无其流行病学数据及预后结局研究。本文报道了1例体外受精(IVF)后胚胎发育过程中透明带自发溶解的患者,通过囊胚培养及冷冻复苏移植2枚无透明带囊胚,获得临床妊娠后分娩双胎;并对相关文献进行系统回顾和分析。

激光辅助孵化对透明带增厚胚胎囊胚发育潜能的影响

目的探讨新鲜周期中激光辅助孵化(LAH)对透明带增厚胚胎囊胚发育潜能的影响。方法选取2019年8月至2021年12月在中山市博爱医院生殖中心行辅助生殖技术(ART)治疗且胚胎透明带增厚的患者为研究对象。根据患者意愿将患者分为LAH组(85例,胚胎数776个)与对照组(92例,胚胎数772个),每组进一步分为非高龄组(<35岁)和高龄组(≥35岁)。LAH组患者采用LAH技术,全部可用胚胎进行透明带削薄处理后再进行培养;对照组胚胎透明带不进行辅助孵化处理直接进行培养。比较各年龄段患者中LAH组和对照组的囊胚形成情况及临床结局。结果非高龄患者中,LAH组的优质囊胚率和囊胚孵出率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);高龄患者中,LAH组和对照组的优质囊胚率及囊胚孵出率比较,差异无统计学意义(P>0.05);LAH组与对照组在不同年龄段的临床妊娠率、着床率、流产率和活产率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在新鲜周期中,非高龄患者透明带增厚的胚胎行LAH后有利于优质囊胚的形成与囊胚孵出。

无透明带卵母细胞在辅助生殖领域中的研究进展

在辅助生殖技术的操作过程中,实验室在取卵后往往会观察到无透明带卵母细胞,本文就其产生原因、利用价值、辅助生殖过程中处理方式以及相关研究进展等方面进行综述。

重组人卵透明带蛋白及其多克隆抗体对精子-透明带结合的影响

为了探讨毕赤酵母表达的重组人卵透明带ZP3蛋白(recombinant human zona pellucida-3 protein,rhZP3)及其多克隆抗体对小鼠和人精卵结合的影响,采用不同浓度的rhZP3以及空白培养液分别处理小鼠精子,然后再与小鼠卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子对透明带黏附及体外受精率的影响;用rhZP3以及空白培养液分别处理人精子,然后再与人卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子对透明带黏附的影响;用抗rhZP3抗体与阴性血清分别处理小鼠和人卵子,再与精子进行结合实验,观察多克隆抗体对精子粘附以及小鼠体外受精率的影响。实验结果表明,rhZP3和抗rhZP3多克隆抗体既能抑制人的体外精卵结合,也能抑制小鼠体外精卵结合,提示rhZP3具有天然透明带的特性,有发展成避孕疫苗和作为检测透明带抗体检测试剂的可能。

蜡样透明带卵母细胞患者ICSI助孕活产1例病例报道并文献复习

蜡样透明带的卵母细胞发育潜力低于正常形态卵母细胞,蜡样透明带影响精卵正常结合、从而影响受精率和胚胎发育。采用卵胞浆内单精子注射(ICSI)是最佳治疗策略,使得具有蜡样透明带的卵母细胞能够正常发育并最终分娩健康的后代,获得理想的临床妊娠结局。本文报道病例体外受精助孕共4个周期所获卵母细胞均见蜡样透明带,行ICSI后获可利用胚胎,冻融胚胎移植后获临床妊娠,并分娩活婴。另外,本文就蜡样透明带卵母细胞不孕患者的临床资料进行总结分析,并对相关文献进行系统性回顾。

人胚胎透明带厚度及其变量与体外受精-胚胎移植妊娠结局的关系

目的 探讨透明带厚度 (ZPT)及透明带厚度变量 (ZPTV)与体外受精 胚胎移植 (IVF ET)妊娠结局的关系。 方法 选择 2 0 0 2年 4～ 8月间连续进行的培养 3d新鲜的用于移植、形态摄像清楚的 81个周期 2 4 6个胚胎进行分析 ,用激光系统附带软件测量移植胚胎ZPT ,计算ZPTV。 结果 (1)ZPT、ZPTV随患者年龄的增加而减小 ,尤其≥ 35岁组ZPTV(16 .2 3± 4 .78) %显著小于 <30～ 34岁组 (2 0 .14± 5 .91) % (P <0 .0 0 1) ;(2 )妊娠组 (87个胚胎 )ZPT(16 .71± 2 .10 ) μm小于未妊娠组 (15 9个胚胎 ) (17.0 6± 1.75 ) μm ,但无显著差异 ;妊娠组ZPTV(2 1.73± 5 .6 1) %显著大于未妊娠组 (18.6 1± 4 .90 ) %(P <0 .0 0 5 )。移植胚胎平均ZPTV值≥ 2 0 %组的妊娠率 (5 0 .0 % )高于 <2 0 %组 (17.1% ) ,P <0 .0 5 ;(3)优质胚胎组 (2 4 6个胚胎 )ZPT(16 .84± 1.99) μm与劣质胚胎组 (12 7个胚胎 )ZPT(17.11± 2 .0 4 ) μm相比无显著差异 ;但优质胚胎组ZPTV(19.71± 5 .39) %大于劣质胚胎组 (16 .6 0± 5 .4 2 ) % ,P <0 .0 0 1。 结论 ZPTV是评价胚胎质量的一个有效指标 ,优质胚胎的ZPTV高于劣质胚胎 ,年龄≥ 35岁者ZPTV显著减小 ;移植胚胎平均ZPTV值≥ 2 0 %者妊娠率明显提高。在临床挑选移植胚胎时应?

人卵透明带蛋白ZP3a和ZP3b肽段的免疫原性及其抗血清体外抑制人精子-半透明带结合

分析大肠杆菌表达的重组人卵透明带-3(r-huZP3)蛋白两个肽段(r-huZP3a22-176及r-huZP3b177-348)的免疫原性,比较两者抗血清体外抑制人精子-半透明带结合的能力。以制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)纯化的大肠杆菌表达蛋白为抗原, 主动免疫新西兰兔产生抗huZP3a22-176及huZP3b177-348抗血清;通过ELISA测定比较两者的抗体应答水平:以蛋白印迹和免疫组化方法测定两者抗血清同重组表达蛋白、天然人卵ZP以及卵巢组织的反应性;通过竞争性半透明带结合试验 (hemizona assay,HZA)观察两者抗血清体外抑制人精子-ZP结合能力。结果显示:未与大分子蛋白载体耦联的r-huZP3a22-176 和r-huZP3b177-348抗原都在免疫兔中产生了较高的抗体滴度,而且它们的抗血清可识别大肠杆菌表达的各自重组ZP3肽以及人卵细胞表面天然ZP,两者抗血清也都能在体外抑制人精子-ZP结合。由此可见,r-huZP3a22-176及r-huZP3b177-348蛋白具有良好免疫原性,所产生抗血清也都显示出细胞和组织特异性。因此,单一或合并两个huZP3肽段均可作为抗原研制检测不明原因性不孕妇女中是否存在抗自身ZP抗体的诊断试剂盒,另外它们的抗血清也能用于鉴定已知huZP3表位肽段的最小B-细胞表位基序。

胚胎透明带厚度及厚度变量与IVF-ET治疗结局关系探讨

目的:观察体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中移植胚胎透明带厚度(ZPT)及透明带厚度变量(ZPTV)与IVF-ET治疗结局的关系。方法:利用图像采集系统测量51对夫妇51个IVF-ET周期119个新鲜胚胎ZPT并计算ZPTV。分别根据受精方式、治疗结局、ZPTV值、患者年龄、基础FSH值、种植率进行分组,分析胚胎ZPT和ZPTV对IVF-ET结局的影响。结果:①不同受精方式(IVF/ICSI)胚胎间ZPT、ZPTV值差异无统计学意义;②妊娠组与非妊娠组ZPT差异无统计学意义;妊娠组ZPTV(19.13±7.16%)大于非妊娠组(14.08±6.45%,P<0.001);移植胚胎ZPTV≥20%组的妊娠率(60%)高于ZPTV<20%组(38.89%,P<0.005);③患者年龄<30岁组、30～35岁组、≥35岁组ZPT值和ZPTV值差异均无统计学意义(P>0.05);④基础FSH≥8U/L组ZPTV为14.51±4.90%,低于FSH<8U/L组(17.16±7.69%,P<0.05),ZPT在两组间差异无统计学意义;⑤种植率分别为0、33.33%～66.67%、100%,3组间ZPT值差异无统计学意义;种植率为0组与其他两组比较ZPTV差异有统计学意义(P<0.001)。结论:ZPTV是评价胚胎质量和预测妊娠结局的有效指标。

激光透明带打孔和激光透明带薄化辅助孵化方法在冻融胚胎移植中的应用

目的探讨激光透明带打孔和激光透明带薄化辅助孵化方法在冻融胚胎移植中的应用效果。方法选取2011年10月-2013年10月于佛山市妇幼保健院行体外受精胚胎移植周期中剩余可利用冷冻保存胚胎的病例280例作为研究对象,采用数字随机法将其分为两组,140例行激光透明带打孔辅助孵化为对照组,140例行激光透明带薄化辅助孵化为观察组。比较两组患者冻融胚胎的移植情况和妊娠情况,分析不同年龄及胚胎评分患者的临床妊娠率。结果观察组复苏率（98.6%）、完整胚胎率（97.1%）、移植胚胎的形态学评分[（5.84±0.96）分]、移植胚胎数[（2.20±0.18）个]均高于对照组[97.9%、96.4%、（5.73±0.82）分、（2.19±0.17）个],但差异无统计学意义（P〉0.05）。不同年龄及胚胎评分比较时,两组临床妊娠率比较差异无统计学意义（P〉0.05）。观察组胚胎种植率（60.0%）、妊娠率（49.3%）、多胎率（43.5%）均明显高于对照组（44.3%、36.4%、21.6%）,观察组流产率（7.2%）明显低于对照组（19.6%）,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论激光透明带打孔和激光透明带薄化辅助孵化方法均是冻融胚胎移植的有效方法 ,其中激光透明带薄化辅助孵化方法可进一步提高冻融胚胎的种植率和妊娠率,值得临床推广使用。

激光透明带薄化技术在冻融胚胎和高龄妇女新鲜胚胎移植中的应用研究

目的探讨激光透明带薄化技术对冻融胚胎和高龄妇女新鲜胚胎临床结局的影响。方法选取冻融胚胎179周期共406枚胚胎,其中117周期共263枚胚胎行激光透明带薄化技术(薄化组),其余62周期共143枚胚胎未行激光透明带薄化技术(对照组);高龄妇女(≥37岁)新鲜胚胎84周期共217枚胚胎,其中52周期共135枚新鲜胚胎行激光透明带薄化技术,32周期共82枚胚胎未行削薄化技术,对比分析两组的一般资料和临床结局。结果冻融胚胎薄化组种植率、妊娠率均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),但两组流产率、平均子宫内膜厚度等比较,差异均无统计学意义(P>0.05);高龄妇女新鲜胚胎组种植率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),结论激光透明带薄化技术能有效提高冻融胚胎和高龄妇女新鲜胚胎的种植率和妊娠率。

6例透明带基因突变患者IVF-ET临床特征及助孕结局分析

目的探讨透明带(ZP)基因突变患者行IVF-ET的临床特征及助孕结局。方法选取2015年1月至2020年3月于本院生殖医学中心行IVF-ET助孕治疗的6例空卵泡综合征(EFS)或ZP异常患者为研究对象。采用全外显子组测序并筛选致病性突变位点,并利用Sanger测序进行验证;分析ZP基因突变患者行IVF-ET的临床特征及助孕结局。结果在这6例患者中我们发现了5种ZP基因突变,包括ZP1复合杂合突变(c.507delC,p.His170fs和c.239G>A,p.Cys80Tyr)、ZP2的复合杂合突变(c.860_861delTG,p.Val287fs和c.1924C>T,p.Arg642Ter;c.1695-2A>G和c.2407C>T,p.Arg642Ter)、ZP3的杂合突变(c.518C>G,p.Ser173Cys;c.400 G>T,p.Ala134 Ser)。6例患者均接受了1~4个周期的IVF/ICSI助孕治疗均未成功妊娠。结论ZP基因突变引起的EFS或ZP的异常会严重影响患者的助孕结局,建议相关病例筛查ZP基因突变。

偏振光显微镜分析人卵透明带与胚胎发育潜能的关系

目的:探讨IVF胚胎的发育潜能。方法:共对49个周期的267个卵子在ICSI前用偏振光显微镜下摄像进行透明带厚度(ZPT)和密度(ZPD)分析。结果:①年龄<37岁组与≥37岁组卵子比较,组间各层ZPD、ZPT及全层ZPT均无显著差异;②优质胚胎组卵子全层ZPT(15.96±2.21μm)显著低于劣质胚胎组(16.89±2.34μm),P<0.05;③妊娠组卵子内层ZPD(2.02±0.47nm)和全层ZPT(15.97±2.45μm)均低于未妊娠组(2.24±0.57nm)和未妊娠组(17.09±2.46μm),差异有统计学意义,P<0.05。结论:偏振光显微镜能够检测透明带厚度和密度,卵子透明带结构与胚胎质量及妊娠率有相关性,与年龄无关,偏振光显微镜测定卵子透明带结构可预测卵子及胚胎的发育潜能。

重组人卵透明带ZP3蛋白在毕赤酵母中的表达

利用P .pastoris表达人卵透明带ZP3蛋白。设计特定引物从全长hZP3cDNA上扩增含跨膜区序列的人卵透明带ZP3基因片段 ,并在N末端接上串联组氨酸编码序列的重组基因序列 ;扩增片段插入表达载体pPIC9K中 ;线性化后的重组质粒转入P .pastoris中 ,用高浓度G4 18筛选高拷贝菌株 ,然后甲醇诱导目的蛋白表达。用SDS PAGE和Westernblot分析表达产物。结果发现P .pastoris表达的人ZP3蛋白可以分泌到培养液中 ,并且可溶性好。纯化前后的重组人ZP3蛋白均能与兔抗猪ZP3蛋白抗体发生交叉反应 ,证实表达的目的蛋白具有反应原性。

哺乳动物卵透明带蛋白结构与功能的研究进展

大多数哺乳动物卵透明带（zP）蛋白的主要结构是由3～4种糖蛋白（ZP1、ZP2、ZP3、zP4）组成。卵透明带蛋白在受精过程中有非常重要作用。精子穿透透明带后，透明带硬化阻止多精入卵，此过程会发生透明带蛋白结构的变化。文章主要对哺乳动物卵透明带蛋白结构与功能的研究进展作一综述。

卵巢早衰抗卵巢抗体和抗透明带抗体及其分类

目的 探讨卵巢早衰 (POF)患者血清中抗卵巢抗体 (AoAb)、抗透明带抗体 (AZpAb)水平及其分类情况 ,研究免疫性卵巢早衰的发病机理。方法 用酶联免疫法测定卵巢早衰、抗精子抗体 (ASAb)阳性不孕妇女和不明原因不孕症妇女血清中AoAb ,AZpAb并对其进行分类。结果 POF患者、ASAb阳性不孕妇女组及不育患者组血清中AoAb、AZpAb均比正常妇女组高 (P <0 0 1)。在抗体的分类证明 ,各组抗体以IgG为主 ,IgA ,IgM也有一定的比例。结论 POF与自身免疫异常密切相关 。

透明带3多肽诱导的免疫性卵巢早衰小鼠模型子宫组织中Ki-67、ER的表达

目的：以透明带3多肽（pZP3）诱导的免疫性卵巢早衰（POF）小鼠为研究对象，观察其子宫Ki-67、雌激素受体（ER）的表达，以进一步探讨免疫性卵巢早衰患者辅助生殖相关的子宫预处理方案。方法取7~8周龄的健康雌性BALB/c小鼠40只，随机分为对照组和模型组。通过阴道脱落细胞涂片、血清性激素、卵巢组织形态及抗卵巢ZP3抗体鉴定建模成功。检测两组小鼠子宫组织形态变化及子宫Ki-67、雌激素受体α亚型（ERα）及雌激素受体β亚型（ERβ）的表达。结果8周后80%小鼠建模成功。与对照组相比，模型组子宫萎缩，内膜变薄，单位面积内腺体数量减少。模型组子宫内膜上皮细胞、腺上皮细胞及间质细胞中Ki-67的表达较对照组减弱，且有胞核转位至胞浆现象。对照组小鼠子宫内膜上皮细胞、腺上皮细胞及间质细胞的胞浆强表达ERα，而模型组呈阴性表达。两组小鼠子宫内膜ERβ均呈阴性表达。结论 pZP3可以诱导小鼠成功构建免疫性卵巢早衰疾病模型，同时引起子宫内膜上皮细胞及间质细胞的增殖降低和ERα表达减弱。

慢速程序冷冻对透明带显微操作后人类胚胎冻存率及发育的影响

【目的】探讨慢速程序冷冻对透明带显微操作后胚胎冻存率及继续发育的影响。【方法】将 96个Ⅱ级以上人类多精受精胚胎随机分为单纯透明带打孔组 (n =2 4) ,胚胎活检组 (n =40 )及对照组 (n =32 )。为模拟临床种植前诊断活检后胚胎冷冻过程 ,将透明带显微操作后胚胎继续培养 6～ 10h再进行慢速程序冷冻 ,观察各组胚胎冷冻解冻后的冻存率及胚胎继续发育能力。【结果】活检及透明带打孔后冻融胚胎中发生裂解的卵裂球多位于透明带破口附近。活检组胚胎完整率、胚胎存活率及卵裂球存活率分别为 10 % ,2 5 0 %和 2 9 0 % ,较对照组 (4 3 7% ,6 6 0 %和 6 2 4% )明显降低 (P <0 0 1)。虽然单纯透明带打孔组冷冻后胚胎完整率及胚胎存活率与活检组无明显差异 ,但卵裂球存活率较胚胎活检组高 (分别为 40 9%和 2 9 0 % ) (P<0 0 1) ,以上各组存活胚胎继续发育率差异无显著性 (P>0 0 5 )。【结论】以丙二醇和蔗糖为冷冻保护剂的人类分裂期胚胎慢速冷冻程序并不适用于化学法透明带打孔活检胚胎的冷冻保存 。