维甲酸对肝癌细胞HepG2糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D表达及细胞生物学特性的影响

应用MTT、流式细胞仪、免疫印迹法检测全反式维甲酸(ATRA)单独或联合糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D(GPI-PLD)特异性抑制剂1,10-二氮杂菲对肝癌细胞HepG2生物学特性的改变.ATRA使肝癌细胞HepG2 GPI-PLD基因表达及酶活性上调,并呈现剂量和时间依赖性.ATRA可抑制肝癌细胞HepG2增殖,使肝癌细胞Caspase-3表达水平显著增加,Bcl-2表达水平下调,促进肝癌细胞凋亡(P<0.05).ATRA联合1,10-二氮杂菲诱导组细胞,Bcl-2、细胞增殖活性较ATRA单独诱导组显著增强,Caspase-3、凋亡率显著下降.维甲酸可促进肝癌细胞HepG2 GPI-PLD基因表达上调,高活性的GPI-PLD有助于维甲酸抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡.

人体组织酯酶D分型及检出时限研究

本文应用等电聚焦技术对12例(男7例,女5例)尸体组织 EsD 分型及检出时限进行研究。死后24—48小时的14种组织,除皮肤外均能检出 EsD 并能正确分型。组织中 EsD 检出时限37℃为3天;室温为3周;4℃为5周。

甘蓝磷酯酶D HKD2功能区基因片段的克隆与反义表达载体的构建

以甘蓝 (Brassiaca oleracea)为材料 ,取幼叶分离 m RNA,反转录合成 c DNA,以 c DNA第一链为模板 ,通过 PCR扩增 ,获得甘蓝磷酯酶 D (Phosphorate Lipid Dehydrolase,PLD) HKD2功能区的基因片段 .对其进行Blast分析 ,结果表明 ,分离的目的片段核苷酸序列与 Genbank中报道的甘蓝 PLD基因相比同源率为 99.7% ,只有 2个碱基发生改变 .将得到的 PLD基因片段插入植物表达载体 p AT940 ,构建了 PLD基因反义表达载体p ATC-r PLD,为下一步进行抗逆转基因作物选育打下基础 .

内蒙古鄂伦春人红细胞酯酶D和磷酸葡萄糖变位酶Ⅰ表型分布及基因频率的研究

人类红细胞酪酶D(EsD)和磷酸葡萄糖变位酶Ⅰ(PGM_1)的表型及基因定位已有报道。作为重要的基因标志用于法医学亲子鉴定和个体识别;在群体遗传学中分析种族,民族差异;人类学中探讨民族融合、族源、迁移;在临床器官移植方面也有应用价值。不同种族和民族间EsD和PGM_1表型分布和基因频率不同,为了解内蒙古鄂伦春人EsD和PGM_1的分布和基因频率情况,我们进行了调查研究。

上海地区汉族人群酯酶D基因频率调查

本文应用等电聚焦技术调查了上海地区汉族人群(420例)酯酶D(EsteraseD,EsD)多态性分布。EsD基因频率为EsD^1=0.6274; EsD^2=0.3607;EsD^7=0.0119。对不同人群EsD的频率分布进行了比较。

酯酶D活性测定及其在肝豆状核变性中的意义

用荧光分光光度法对28例正常人外周血红细胞的酯酶D(EsD)活性进行了检测,其平均每小时活性为48.61±18.67mol/gHb;男女间无显著性差异;三种不同的EsD表型的酶活性则各不相同,其中1-1型最高,2-2型最低,2-1型则介于两者之间。对3个肝豆状核变性(HLD)家系的研究表明:HLD疾病基因的存在对EsD的活性有明显影响,具体表现为HLD患者和杂合子的酶活性均高于正常对照,而HLD基因的这种影响与EsD的表型类型无关。这一结果将有益于HLD发病机制的更进一步探讨。

贵州省六个民族红细胞酯酶D和乙二醛酶Ⅰ的分布研究

调查了贵州省汉、苗、水、布依、彝和回等6个民族的EsD和GLOⅠ的酶型分布及基因频率。研究结果表明：汉、苗、水、布依、彝和回等民族EsD1基因频率依次为0．6298、0．6220、0．6105、0．6209、0．6509和0．6576。GLO1基因频率依次为0．1509、0．1548、0．1207、0．1452、0．1619和0．1484。根据表型频率分布分别计算了6个民族的EsD和GLOⅠ识别能力（DP值）和累积DP值。

磷酯酶D结构与其活性的关系

磷酯酶D（PLD）作为一种磷酯酶，不仅能催化甘油磷酯末端的磷酸二酯键水解，而且在合适醇类受体存在的情况下，PLD还可以催化转磷酯酰基反应，将磷酯酰基转移到醇类上，生成相应的磷酯衍生物。但不同来源的PLD其转酰基活性的潜能不同，这主要与PLD的HKD模序及环形区域结构相关。本文就PLD的结构与其活性的关系予以简要综述。

磷酸酯酶D在肿瘤发生发展中的作用研究进展

磷酸酯酶D(PLD)作为一种调控机体磷脂代谢的水解酶,其水解产物磷脂酸和二酰基甘油均为细胞内重要的第二信使,参与多种细胞生理功能。PLD在胃癌、结直肠癌、食管癌、肺癌、甲状腺癌和乳腺癌等多种恶性肿瘤中均高表达,通过肿瘤相关信号通路促进细胞癌变和增殖、促进肿瘤细胞浸润和迁移、加速上皮间充质转化和微血管生成及增强免疫逃逸等进程,而靶向诱导PLD蛋白功能缺失可逆转上述进程。PLD在肿瘤发生发展中的作用机制以及PLD抑制剂的研究目前已成为国内外的研究热点。本文从原位肿瘤发生发展、肿瘤侵袭过程、血管生成和肿瘤细胞微环境等方面综述PLD对肿瘤进展的作用,为靶向PLD治疗肿瘤提供临床依据。

宁夏回汉族人群红细胞酯酶D多态性及其在血痕中的稳定性研究

红细胞酯酶Ｄ在人类群体遗传学、法医学和临床医学研究中的应用。方法试验按公安部第二研究所建立的ＧＬＯＩ－ＥＳＤ－ＰＧＭ同时检验法进行，对宁夏５００例样本进行调查研究。结果ＥｓＤ酶型分布顺位在回汉人群中平均为ＥｓＤ２－１＞ＥｓＤ１－１＞ＥｓＤ２－２，在不同民族、不同性别的人群分布，在统计学上无显著意义。然而在不同地区（银川市与西吉县）人群中分布，在统计学上有非常显著意义（χ２＝２２．２９２４Ｐ＜０．０１），且频率差异很大。ＥｓＤ酶型的检出与载体血红蛋白浓度含量和不同季节的关系最为密切。结论ＥｓＤ酶型的多态性在宁夏地区有良好的分布，具有较高的识别能力和应用价值。

滩羊及其杂种一代血清乳酸脱氢酶、红细胞酯酶D同工酶谱与基因频率的研究

用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法和琼脂糖——淀粉凝胶电泳法,分别对七种羊血清乳酸脱氢酶(LDH)和红细胞酯酶D(ESD)同工酶的正常值与基频率进行了研究,共调查了253头绵羊。研究结果表明:滩母羊(M)、小尾寒羊公羊(F_(寒))、东德美利奴公羊(F_(美))、M×F_(寒)、M×F_(美)、M×F_(道)、M×F_(萨)羊血清LDH基因频率依次为0.7407、0.7829、0.7604、0.7499、0.7597、0.7483、0.7621;ESD基因频率依次为0.6530、0.5454、0.0835、0.7105、0.5000、0.5870、0.5400。杂种一代羊LDH和ESD基因频率受亲代的影响而向双亲靠近。LDHI_1和LDH_3是各种绵羊的特征性酶带,具有品种的特异性。滩羊血清LDH_4和LDH_5间出现一条变异型区带LDH_Y,出现机率为11.3％。

红细胞酯酶D(EsD)的遗传多态性在南京地区汉族人群中的分布

人红细胞酯酶D型是遗传标记之一.本文报告了用琼脂糖凝胶对南京地区328名无关个体红细胞酯酶D的分型结果.表现型频率是EsD_(1-1) 0.4482, EsD_(2-2) 0.1311, EsD_(2-1) 0.4207.基因频率是EsD^1 0.6585, EsD^2 0.3415.在方法学上用浸有基质的滤纸代替混有基质的凝胶板较为方便.

人酯酶D的三维结构研究

人酯酶D(EC3.1.1.1)是非特异性酯酶家族的一员,在人体脑、肝脏、肾等器官大量表达,它的功能主要是催化水解乙酰基团。

不同品系鸡血浆转铁蛋白、血红蛋白和红细胞酯酶D多态性研究

采用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法测定了6个品系鸡的血浆转铁蛋白(Tf)、血红蛋白(Hb)和红细胞酯酶D(EsD)的遗传多态性.转铁蛋白出现5种表型,受Tf^A、Tf^B、TP^C3个共显性等位基因控制;血红蛋白出现5种表型,受Hb^F、Hb^(M1)、Hb^(M2)3个共显性等位基因控制;红细胞酯酶D出现5种表型,受EsD^1、EsD^2、EsD^3、EsD^4、EsD^55个共显性等位基因控制.各品系鸡之间的Tf、Hb、EsD的基因频率是不同的.根据基因频率计算遗传距离并用类平均法进行聚类分析.3种肉用鸡中艾维茵和塔特姆亲缘关系最近,罗斯褐鸡与3种肉用鸡亲缘关系较近,而与其它蛋用型鸡亲缘关系较远.

GPI-PLD通过下调PI3K-Akt信号通路活性抑制肝癌细胞的生长

目的:明确糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D(glycosylphosphatidylinositol-specific phospholipase D,GPIPLD)对肝癌细胞HepG2的影响以及可能的调控分子机制。方法:通过转染构建高表达GPI-PLD模型,利用M、荧光染色以及Western印迹检测高表达GPI-PLD对肝癌细胞的影响,同时接种于裸鼠模型中,进一步明确GPI-PLD在体内对肝癌细胞的影响。结果:与空白组和对照组相比,GPI-PLD组PI3K-Akt信号通路活性明显受到抑制,肝癌细胞增殖活性明显受到抑制并呈现典型的凋亡形态。肝癌裸鼠模型结果显示GPI-PLD组肿瘤的生长速度、肿瘤质量[(1.87±0.09)g]小于空白组[(2.20±0.17)g]和对照组[(2.15±0.09)g],GPI-PLD组AST,ALT,AFP血清浓度显著低于空白组和对照组(P<0.05)。结论:GPI-PLD可通过下调PI3K-Akt信号通路活性,抑制肝癌细胞的增殖及体内生长,促进肝癌细胞的凋亡。

GPI-PLD过表达对肝癌细胞株HepG2生物学特征的影响

目的:研究GPI-PLD基因转染并过度表达对HepG2细胞的影响。方法:用脂质体转染法将本室已经构建的GPI-PLD真核表达载体pcDNA3.1(+)/GPI-PLD转入HepG2细胞,以未转染的HepG2细胞及转染空载体pcDNA3.1(+)的细胞为对照,G418筛选出阳性细胞克隆。用自制具完整GPI结构的胎盘碱性磷酸酶为底物,定量检测GPI-PLD活性,RT-PCR法确定GPI-PLD mRNA表达水平。细胞计数绘制生长曲线,荧光染色观察HepG2细胞形态学改变,流式细胞术检测凋亡,台盼蓝排斥法观察补体介导的细胞毒(CDC)杀伤率,ELISA检测癌胚抗原(CEA)的表达情况。结果:阳性细胞克隆GPI-PLD酶活性水平比对照组升高约2倍,GPI-PLD mRNA表达水平约增加5倍;GPI-PLD基因过度表达可促进GPI锚定的蛋白质如CEA和PLAP等被大量水解释放入培养基,导致细胞增殖能力减弱,对补体杀伤的敏感性增强,细胞呈现典型的凋亡形态特征,流式细胞术检测到凋亡峰,细胞凋亡率明显增加。结论:成功将GPI-PLD基因转染入HepG2细胞,并在细胞中稳定表达。GPI-PLD过表达能抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞的凋亡,增强肿瘤细胞对补体杀伤的敏感性。

红细胞同工酶EsD-PGM_1-GLOI同步电泳分型方法的建立

综合、改良了分别分型的方法,建立了红细胞同工酶EsD-PGM_1-GLOI同步电泳分型方法,为EsD、PGM_1和GLOI三种红细胞同工酶在法医学鉴定中更广泛的应用提供了一种可靠、经济、实用的方法。