硫醇乙酰基转移酶mshD对结核分枝杆菌生长和应对压力刺激的研究

目的:探索硫醇乙酰基转移酶MshD对结核分枝杆菌在体外生长、应对压力刺激和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法:利用CRISPR-NHEJ基因编辑技术,构建结核分枝杆菌mshD基因敲除株(ΔmshD株)和回补株(ΔmshD::mshD株)。分别检测H37Rv野生株(WT)、ΔmshD株和ΔmshD::mshD株在液体培养基和固体培养基中的生长情况,以及外源添加L-半胱氨酸和过氧化氢酶对菌株生长的影响;检测3种菌株对不同刺激剂如H 2O 2、二硫苏糖醇(DTT)、十二烷基硫酸钠(SDS)的敏感性,以及外源添加过氧化氢酶对压力条件处理后菌株的恢复情况;采用流式细胞术检测SDS处理3种菌株前后菌株的ROS水平。结果:与WT和ΔmshD::mshD株相比,ΔmshD株在固体平板上的生长较为缓慢,外源添加过氧化氢酶可以恢复其生长趋势;ΔmshD株应对DTT[WT(6.96±2.02)%,ΔmshD(0.02±0.00)%,ΔmshD::mshD(6.64±0.77)%;F=29.700,P<0.001],H 2O 2[WT(0.23±0.06)%,ΔmshD(0.01±0.00)%,ΔmshD::mshD(0.26±0.06)%;F=25.520,P=0.001]和SDS[WT(0.12±0.03)%,ΔmshD(0.01±0.00)%,ΔmshD::mshD(0.18±0.04)%;F=19.540,P=0.002]刺激的存活率更低,差异均有统计学意义;外源添加过氧化氢酶可以恢复其存活率。ΔmshD株自身ROS水平高于WT(WT:95.100±2.553,ΔmshD:106.000±4.000,ΔmshD::mshD:94.667±3.055;F=11.650,P=0.009),SDS处理ΔmshD株的自身ROS水平进一步升高(WT:436.000±8.000,ΔmshD:533.667±4.726,ΔmshD::mshD:441.333±2.517;F=292.900,P<0.001),差异均有统计学意义。结论:mshD基因缺失在固体培养基中生长减慢,mshD基因协助结核分枝杆菌抵抗各种应激压力,ΔmshD菌株内源性ROS水平增加。外源添加过氧化氢酶可一定程度恢复mshD基因敲除株生长和存活缺陷。

大肠埃希菌氨基糖苷酰基转移酶基因型研究

目的:了解大肠埃希菌的耐药谱、氨基糖苷酰基转移酶基因(aac)的分布规律及其与氨基糖苷类抗生素耐药的相关性。方法:琼脂稀释法测定无菌体液分离的44株大肠埃希菌对阿米卡星等12种抗生素的耐药性,聚合酶联反应(PCR)法测定酰基转移酶基因型aac(3)-Ⅰ、Ⅱ和aac(6')-Ⅰ。结果:大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶(ESBL s)的发生率为45.45%(20/44),对亚胺培南(IPM)、美罗培南(M EM)的耐药率为0,对哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶的耐药率较低(<20%),对左氟沙星、环丙沙星的耐药率较高(>60%),对氨基糖苷类阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的耐药率分别为18.18%、56.82%、61.36%。氨基糖苷类耐药模式TG(妥布霉素、庆大霉素)>TGA(妥布霉素、庆大霉素、阿米卡星)>T(妥布霉素)>G(庆大霉素),分别占36.36%、18.18%、6.82%、2.27%。氨基糖苷酰基转移酶基因检出以aac(3)-Ⅱ最高,占52.27%(23/44),aac(6')-Ⅰ次之,占29.55%(13/44),aac(3)-Ⅱ和aac(6')-Ⅰ同时检出者占15.91%(7/44),未检出aac(3)-Ⅰ。ESBL s阳性株的aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ检出率分别为60%、50%,高于ESBL s阴性株的45.81%、12.51%。TG模式与其耐药基因aac(3)-Ⅱ符合率较高为93.75%(15/16)。结论:本地分离大肠埃希菌氨基糖苷类耐药模式以TG为主,酰基转移酶基因以aac(3)-Ⅱ为主,aac(6')-Ⅰ次之,aac(3)-Ⅰ罕见。

N-乙酰基转移酶基因多态性与老年性痴呆的关系

目的:探讨N-乙酰基转移酶基因的多态性所导致的慢乙酰化基因型与老年性痴呆的关系。方法:实验于2004-11／2005-05在南方医科大学珠江医院中心实验室进行。利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析了135例老年性痴呆患者与138名正常健康成人对照组N-乙酰基转移酶基因3个常见突变的等位基因M1,M2,M3的分布频率,比较慢乙酰化基因型在阿尔茨海默病患者与正常人之间的分布差异。结果:135例老年性痴呆患者和138名正常健康人均进入结果分析。等位基因M1,M2,M3在病例组中的分布频率分别为4．1％,24．8％,10．4％: 在对照组中为5．4％,15.1％,11．9％,M2等位基因在两组之间差异有显著意义(P<0．05)。阿尔茨海默病组慢乙酰化型基因频率为21．5％,对照组为12．3％,两者差异有显著意义(P<0.05)。结论:N-乙酰基转移酶基因多态性与老年性痴呆的遗传易感性相关。

中国人群N-乙酰基转移酶2基因型分布特征及不同基因分型方法的比较

目的:分析中国人群N-乙酰基转移酶2(N-acetyltransferase-2,NAT2)基因型分布特征及不同基因分型方法的效能。方法:对包含中国人群NAT2基因多态性数据的文献进行检索,检索范围包括Medline、PubMed、Embase、维普中文科技期刊数据库、中国知网和万方医学网等数据库,检索时限为数据库建库至2021年12月1日。英文检索词:NAT2、N-acetyltransferase、polymorphism、China或Chinese等;中文检索词:NAT2、基因多态性、中国等。使用Newcastle-Ottawa Scale(NOS)评分表对纳入的文献进行质量评价和风险评估。提取文献中NAT2基因型及等位基因信息,重建单项研究NAT2基因型数据库并利用Phase 2.1软件进行单体型和双体型重建及验证。构建中国人群NAT2基因型分布数据库,分析NAT2等位基因和基因型分布特点。基于构建的NAT2基因型数据库,评估不同NAT2基因型分型推断方法的效能。结果:经过文献检索及筛选,共有10项研究的结果纳入本研究。汇总纳入10项研究中对照组4010例个体的基因型数据,NAT2快代谢基因型、中间代谢基因型、慢代谢基因型总体频率分别为25.79%(1034/4010)、50.87%(2040/4010)、23.34%(936/4010),NAT2非慢代谢基因型总体频率为76.66%(3074/4010);NAT2快、慢代谢等位基因总体携带频率分别为51.19%(4096/8002)及48.81%(3906/8002)。3SNP法推断NAT2慢代谢基因型的敏感度和特异度分别为99.92%(1249/1250)和99.81%(4190/4198);推断NAT2快代谢基因型的敏感度和特异度分别为100.00%(1484/1484)和99.92%(3961/3964)。2SNP法推断NAT2慢代谢基因型的敏感度和特异度分别为99.52%(1194/1250)和98.36%(4129/4198);推断NAT2快代谢基因型的敏感度和特异度分别为93.19%(1383/1484)和96.01%(3806/3964)。3SNP法和2SNP法推断NAT2慢代谢基因型敏感度差异无统计学意义(χ^(2)=0.189,P=0.664),一致性较好(Kappa=0.932)。3SNP法推断NAT2快代谢基因型敏感度优于2SNP法(χ^(2)=10.973,P=0.001)。结论:我国人群NAT2代谢基因型以非慢代谢基因型为主,在中国人群中3SNP法推断NAT2基因型效能优于2SNP法。

结核病患者N-乙酰基转移酶2编码基因多态性检测与异烟肼合理用药专家共识

异烟肼是抗结核化疗方案中的核心药物,其在人体内的代谢速度取决于N-乙酰基转移酶2(N-acetyltransferase-2,NAT2)活性,而依据其编码基因NAT2的多态性可将人群分为快乙酰化型、中间乙酰化型和慢乙酰化型。不同乙酰化类型患者服用相同剂量异烟肼后的血药浓度差异明显,影响治疗效果和药物不良反应的发生。为了更加科学、规范的检测,判定患者乙酰化类型,并依据乙酰化类型对患者异烟肼用药剂量实施精准指导,针对不同乙酰化类型的判定方法、药物代谢特点、对临床疗效和药物不良反应发生的影响、相应患者异烟肼用药剂量调整原则,以及开展NAT2基因多态性检测的注意事项等重要问题,首都医科大学附属北京胸科医院和《中国防痨杂志》编辑委员会共同组织结核病治疗领域和药理学领域的知名专家,结合现有指南及公开发表的专业文献,经充分讨论,形成本共识。

siRNA抑制饥饿素-O-乙酰基转移酶对肝细胞脂肪变性的影响及作用机制

目的探讨siRNA抑制饥饿素-O-乙酰基转移酶(GOAT)对肝脂肪变性影响及作用机制。方法游离脂肪酸(FFA)作用于人肝细胞系LO2细胞以诱导肝细胞脂肪变性。FFA与siRNA-GOAT单独或联合处理LO2细胞,分为4组,即空白对照(NC)组:仅用PBS处理;siRNA-GOAT组:仅以终浓度为10 nmol/L的siRNA-GOAT处理;FFA组:仅以终浓度为1 mmol/L的FFA处理;FFA+siRNA-GOAT组:采用上述浓度FFA和siRNA-GOAT混合处理。肝细胞油红O染色检测脂肪滴形成情况;TG检测试剂盒检测LO2细胞脂质水平;免疫印迹法(Western Blot)、实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫荧光染色、电子显微镜检测自噬活性;酶联免疫吸附测定法、RT-PCR检测TNFα、IL-6水平。Western Blot检测雷帕霉素(m TOR)、磷酸化m TOR(pm TOR)、AMP-活化蛋白激酶(AMPK)以及磷酸化AMPK(p-AMPK)的蛋白水平变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 FFA+siRNA-GOAT组脂肪滴形成较FFA组明显减轻,TG水平明显低于FFA组,差异有统计学意义(P<0.001)。FFA+siRNA-GOAT组TNFα和IL-6蛋白、mRNA表达水平较FFA组均明显下降,差异均有统计学意义(P值均<0.005)。siRNA-GOTA组LC3-Ⅱ、Beclin-1 mRNA表达水平明显高于NC组,差异均有统计学意义(P值均<0.001)。FFA+siRNA-GOAT组LC3-Ⅱ、Beclin-1 mRNA表达水平明显高于FFA组,差异均有统计学意义(P值均<0.001)。siRNA-GOAT组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白水平明显高于NC组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。FFA+siRNA-GOAT组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白水平明显高于FFA组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。免疫荧光染色示FFA+siRNA-GOAT组LO2细胞中内源性LC3-Ⅱ表达水平较FFA组、siRNA-GOAT组升高。电子显微镜观察结果示FFA+siRNA-GOAT组自噬体表达较FFA组增加。自噬抑制剂siRNA-ATG5、3-MA或刺激剂雷帕霉素处理LO2细胞后,FFA+siRNA-ATG5组、FFA+3-MA组TG水平分别与FFA+siRNA-GOAT组、FFA+雷帕霉素组比较,差异均有统计学意义(P值均<0.001)。FFA+siRNA-GOAT组、FFA+雷帕霉素组LC3-Ⅰ/Ⅱ水平明显高于FFA+siRNA-ATG5组、FFA+3-MA组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。FFA+siRNA-GOAT组p-AMPK蛋白表达水平明显高于于FFA组、p-m TOR蛋白表达水平明显低于FFA组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论 siRNA抑制GOAT可通过调节AMPK/m TOR通路,上调自噬活性,进而减轻肝细胞内脂肪变性。

‘赤霞珠’葡萄果实中儿茶素没食子酰基化转移酶蛋白的纯化与鉴定

【目的】对参与‘赤霞珠’葡萄果实中催化1-O-β-D-没食子酰葡萄糖(1-O-β-D-glucogallin,βG)和表棓儿茶素(Epigallocatechin,EGC)生成表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)相关儿茶素没食子酰基化转移酶(epicatechin:1-O-galloyl-β-D-glucose O-galloyltransferase,ECGT)蛋白进行纯化与鉴定。【方法】以安徽萧县葡萄园种植的‘赤霞珠’葡萄果实为材料,采用丙酮沉淀、硫酸铵分段盐析、亲和柱层析、羟基磷灰石柱层析及Superdex200凝胶过滤色谱方法对ECGT酶蛋白进行分离与纯化,基于高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)技术测定以上各步纯化后获得的ECGT酶蛋白的比活力,并采用SDS-PAGE(SDS-Polyacrylamide Gelelectrophoresis,SDS-PAGE)电泳对Superdex200凝胶过滤色谱纯化后获得酶蛋白进一步分离与纯化,然后基于高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-electrospray ionization mass spectrometry,HPLC-ESI-MS/MS)对目的条带(55 ku,28ku)进行鉴定;另外,进一步采用定量反转录-聚合酶链式反应(quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术对预测的ECGT酶蛋白相关基因及其上游3个糖苷转移酶基因(glucosyltransferase GT_(1-3))在果实不同发育时期的表达水平进行研究。【结果】以上蛋白纯化技术均能有效纯化ECGT酶蛋白,获得的ECGT酶蛋白比活力分别为0.32、3.14、11.78、31.80和88.82 U·mg^(-1),纯化倍数分别为9.81、36.81、99.38和277.56倍,酶活总回收率分别为83.33%、4.64%、0.96%和0.13%。对酶蛋白2条目的条带鉴定结果表明,丝氨酸羧肽酶-类酰基转移酶(serine carboxypeptidase-like acyltransferases,SCPL acyltransferases)家族中一条酶蛋白(XP_002272116.1)比对的分值均最高。此酶蛋白的相关基因SCPL及其上游相关3个基因GT_(1-3)表达均与‘赤霞珠’葡萄果实发育呈显著负相关。【结论】‘赤霞珠’葡萄果实存在ECGT酶蛋白,属于SCPL类酰基转移酶家族,且可能以基因簇的方式行使其功能。

大黄素调控组蛋白乙酰化促进HpG2肝癌细胞焦亡及凋亡的发生

目的 研究天然产物大黄素是否能够影响HpG2肝癌细胞中组蛋白乙酰化水平,进而加速肝癌细胞焦亡和凋亡,为肝癌的治疗提供新的靶点。方法 CCK-8法检测不同浓度大黄素对Hp G2细胞活力的影响;生物信息学分析TCGA数据库中肝癌患者组蛋白乙酰化相关基因表达情况,验证候选基因赖氨酸乙酰基转移酶2A(KAT2A)与细胞凋亡通路的相关性;实时荧光定量PCR(q PCR)检测Hep G2细胞与L02细胞KAT2A m RNA水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大黄素对Hp G2细胞中组蛋白乙酰转移酶(HAT)、组蛋白去乙酰转移酶(HDAC)、白细胞介素(IL)-1β、IL-18的影响;流式细胞术检测大黄素对肝癌细胞凋亡的影响;Western blot检测细胞凋亡、细胞焦亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2-相关X蛋白质(Bax)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、Gasdermin家族成员D N端(GSDMD-N)及KAT2A的表达情况。结果 大黄素能降低Hp G2细胞活性,半抑制浓度(IC_(50))95%置信区间为58.12~66.52μmol/L。与正常肝组织相比,组蛋白乙酰化相关基因m RNA水平在肝癌组织中表达增高,且KAT2A变化倍数最大[log_2(Fold Change)=2.010,P<0.01];在肝癌组织中,KAT2A m RNA的表达与细胞凋亡通路呈负相关(r_s=-0.230,P<0.01)。与L02细胞相比,KAT2A m RNA在Hep G2中表达升高(P<0.05);与对照组相比,大黄素干预组HAT和HDAC的表达水平下降,IL-18、IL-1β表达水平水平增高,细胞凋亡率升高,KAT2A、BAX的表达降低,Bcl-2、NLRP3、GSDMD-N及Caspase-1表达水平升高(P<0.05)。结论 大黄素可抑制肝癌细胞活力,加速细胞凋亡和焦亡,其机制可能与调控KAT2A表达相关。

组蛋白去乙酰化酶及其抑制剂在多发性骨髓瘤溶骨性病变中的研究进展

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是浆细胞来源的恶性克隆增殖性疾病,发病率居血液系统肿瘤第2位。骨髓瘤溶骨性病变是骨髓瘤主要临床特征之一,主要是由骨髓瘤疾病状态下破骨细胞异常激活,成骨细胞功能抑制所致。组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)广泛表达于机体多种细胞组织,可以调节细胞的增殖分化,参与肿瘤的发生和发展。HDACs不仅可以促进骨髓瘤细胞的增殖与耐药,也可以正向调节破骨细胞的分化成熟,同时抑制成骨细胞的功能。部分HDACs小分子抑制剂体现出抗骨髓瘤和骨保护的双重作用。因此,进一步深入研究HDACs在骨髓瘤及其溶骨性损害中的作用机制可能为骨髓瘤的治疗提供更新、更精准的靶点和理论依据。

N-乙酰基转移酶基因多态性与早发性帕金森病关系的研究

目的 探讨N 乙酰基转移酶基因 (NAT2 )的多态性所导致的慢乙酰化基因型与早发性帕金森病 (PD)的关系。方法 利用聚合酶链式反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术分析了12 6例早发性帕金森病患者 (发病年龄≤ 5 0岁 )与 12 2名正常健康成人对照组NAT2基因 3个常见突变的等位基因M1、M2、M3的分布频率 ,比较慢乙酰化基因型在早发性PD病人与正常人之间的分布差异。结果 等位基因M1、M2、M3在病例组中的分布频率分别为 8 7%、2 6 6 %、13 1% ;在对照组中为 2 9%、19 3%、14 8% ,等位基因M1在两组中之间差异有显著意义 (P =0 0 0 5 )。病例组慢乙酰化型基因频率为 2 3 0 % ,对照组为 10 7% ,两者差异有显著意义 (P =0 0 0 9)。OR值为 2 5 0 7。结论 N

整合子中氨基糖苷-3′′-腺苷酰基转移酶多克隆抗体的制备与初步应用

目的制备氨基糖苷-3′′-腺苷酰基转移酶[AAD（3）]特异性抗血清，并探讨其在检测第1类整合子8种不同可变区启动子（PcS、PcH2、PcHl、PcW、PcS。P2、PcH2．P2、Pertl．P2和PcW—P2）下游基因盒中aadA2基因表达水平的应用价值。方法用聚合酶链反应（PCR）扩增aadA2基因，并克隆至表达载体pETl9b中，诱导表达并纯化带组氨酸标签的重组AAD（3′′）蛋白，免疫大耳白兔制备抗AAD（3′′）特异性抗血清。以制备的抗AAD（3）抗血清为一抗，用免疫印迹法（WB）检测不同可变区启动子下游基因盒中aadA2基因的翻译水平，用微量肉汤稀释法检测链霉素对含不同可变区启动子及其下游aadA2基因盒的大肠埃希菌JMl09的最低抑菌浓度（MIC）。结果成功构建重组的AAD（3′′）蛋白表达质粒pETl9b—aadA2，经测序确认转化大肠埃希菌BL21（DE3）获得1株高表达可溶性重组AAD（3′′）蛋白的工程菌株，发酵后用镍柱纯化获得纯度〉90％的重组AAD（3′′）蛋白，免疫大耳白兔获得效价〉l：100000的抗AAD（3′′）特异性抗血清。WB检测8种不同可变区启动子下游aadA2基因翻译产物AAD（3′′）蛋白的表达水平，设定启动子Pcw下游AAD（3”）蛋白的相对表达水平为1，重复3次测得启动子PcS、PcH2、PcHl、PcS—P2、PcH2一P2、PcHl一P2及PcW—P2下游AAD（3′′）蛋白相对表达水平依次为12．9±2．3、9．1±1．0、2．0-t-O．4、16．0±1．3、14．1±1．3、10．5±0．7、8．9±1．7，且不同可变区启动子下游AAD（3′′）蛋白的相对表达水平差异具有统计学意义（F=32．421，P〈0．01）。微量肉汤稀释法重复3次测得链霉素对含启动子PcS、PcH2、PcHl、PcS—P2、PcH2一P2、PcHl-P2、PcW、PcW．P2及其下游aadA2基因重组质粒的大肠杆菌JMl09的MIC平均值依次为256、256、64、128、32、128、4、64mg／L，表明不同可变区启动子下游aadA2基因的表达水平不同可赋予宿主细菌对链霉素产生不同水平的耐药。结论成功纯化出可溶性重组AAD（3′′）蛋白，免疫大耳白兔获得高效价的抗AAD（3′′）特异性抗血清，为进一步研究整合子中整合酶基因与可变区基因盒表达之间的相互关系奠定基础。不同可变区启动子下游耐药基因盒的表达水平明显不同，赋予宿主细菌对相应抗菌药物的耐药水平明显不同，因此在对临床菌株进行第1类整合子分子流行病学调查时，应重视可变区启动子分类方面的研究。（中华检验医学杂志，2012，35：227-232）

N－乙酰基转移酶2基因多态性与抗结核药所致肝损害的关系

目的 研究N-乙酰基转移酶2（NAT2）的多态性与抗结核药物所致肝损害发病的关联.方法 应用病例对照研究方法.采用PCR-测序技术检测119例抗结核药物性肝损害和198例抗结核药物治疗无肝损害的对照组NAT2基因的基因型.用SAS9.13软件分析该基因变异与抗结核药物性肝损害发病的关联.结果 根据基因表型的代谢速度将NAT2分为快型（4/4）、中间型（4/5A、4/5B、4/5C、4/6、4/7）、慢型（5B/6、5B/7、6/6、6/7、7/7）3类.肝损害组和对照组间基因表型频率差异有统计学意义（P＜0.05）.logistics回归分析表明,慢型患者出现肝损害的危险性是快型＋中间型的1.91倍（95％CI,1.10～3.33）.分层分析发现,年龄≤40岁和痰涂片阴性的慢型基因型患者更容易出现肝损害（P＜0.05）.结论 抗结核药物所致肝损害发生与可能NAT2基因的多态性有关,慢型患者较快型＋中间型患者更易出现肝损害.

环境暴露、N-乙酰基转移酶-2基因多态性与大肠癌的关系

目的探讨N-乙酰基转移酶-2（NAT2）基因多态性及环境暴露与大肠癌易感性的关系。方法以病例对照研究方法，采用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）基因分型技术，对86对大肠癌患者和非肿瘤患者（对照组）NAT2基因型进行测定。结果NAT2慢速基因型在病例组的频率为19．58％（56例），对照组为10．14％（29例），差异具有统计学意义（χ2=10．07，P=0．00）。携带NAT2慢速基因型的个体患大肠癌的风险（OR）是携带快速基因型个体的2．16倍（95％ CI：1．31～3．54）。结论NAT2基因多态性与大肠癌的易感性有关，携带慢速基因型的人群患大肠癌的风险增加。

N-乙酰基转移酶10在透明细胞性肾细胞癌中的表达及意义

目的检测N-乙酰基转移酶10(NAT10)在透明细胞性肾细胞癌(CCRCC)中的表达情况,并探讨其意义。方法对100例CCRCC临床病理标本进行NAT10抗体的免疫组织化学染色,并对染色结果进行观察。结果100例CCRCC患者中,NAT10的表达率为100%,染色强度高于肿瘤旁正常组织,其着色部位为细胞核及胞浆,并在核仁区有特异着色。结论NAT10在CCRCC中高表达,并在核仁区有特异着色,NAT10有望成为临床辅助CCRCC诊断及核仁的新标记物。

N-乙酰基转移酶-2基因多态性与2型糖尿病的关系

目的探讨N-乙酰基转移酶-2（NAT2）基因多态性与2型糖尿病的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）技术及测序技术对174例2型糖尿病患者（糖尿病组）及174例健康体检者（对照组）进行NAT2基因分析。结果NAT2突变型等位基因频率分布糖尿病组和对照组比较差异无统计学意义（r=7．38，P〉0．05）。NAT2基因型Wt／Wt、Wt／M1、Wt／M2、WffM3、M1／M1、M1／M2、M1／M3、MCM2、M2/M3、M3/M3分布频率对照组分别为39．08％（68／174）、3．45％（6／174）、22．99％（40／174）、14．94％（26／174）、0．57％（1／174）、2．30％（4／174）、1．15％（2／174）、4．60％（8／174）、9．20％（16／174）、1．72％（3／174）；糖尿病组分别为44．83％（78／174）、2．60％（8／174）、27．59％（48／174）、17．24％（30／174）、0．57％（1／174）、0．57％（1／174）、0．57％（1／174）、1．15％（2／174）、2．30％（4／174）、0．57％（1／174），两组比较差异有统计学意义（r=13．92，P〈0．01）。糖尿病组NAT2快乙酰化代谢表型频率[94．25％（164／174）]显著高于对照组[80．46％（140／174）]，而NAT2慢乙酰化代谢表型频率[5．75％（10／174）]则显著低于对照组[19．54％（34／174）]（P〈0．05）。携带NAT2快乙酰化基因型者患2型糖尿病的风险是携带NAT2慢乙酰化基因型者的3．98倍（95％CI：1．90～8．35）。结论NAT2快乙酰化代谢表型可能是糖尿病的一个遗传易感因素，而NAT2慢乙酰化代谢表型可能对糖尿病的发生具有一定保护作用。

SLC25A20基因c.199-10T〉G纯合变异致肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症四例分析

摘要目的探讨肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症临床、生化以及基因变异特点。方法对2014-2017年在广西壮族自治区妇幼保健院遗传代谢中心实验室确诊的4例肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症患儿的临床表现、生化检查、基因检测结果进行回顾性分析。4例患儿均通过干血滤纸片提取基因组DNA进行基因分析，其中1例患儿进行SLC25A20基因分析，3例患儿进行全外显子组测序分析。结果4例无亲缘关系的患儿发病年龄1-28 d，死亡年龄1.5-30 d，临床表现为新生儿低血糖（4例）、心律失常（2例）、猝死（2例），生化检查：血糖1.2-2.0 mmol/L、肌酸激酶955-8 361 U/L，肌酸激酶同工酶199-360 U/L，游离肉碱3.70-27.07 μmol/L，棕榈酰肉碱1.85-14.84 μmol/L。4例患儿均携带SLC25A20基因c.199-10T〉G纯合变异，父母为杂合变异携带者。通过构建单体型发现，c.199-10T〉G变异位点均处于同一单体型。结论肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症临床表现急重，预后不佳。表现有低血糖、心肌酶升高，长链酰基肉碱升高。c.199-10T〉G变异是肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症的重要分子病因，单体型分析提示该变异与奠基者效应有关。

N-乙酰化转移酶2基因多态性与抗结核药物所致肝损伤的相关性

目的探讨N-乙酰化转移酶2（NAT2）基因多态性与抗结核药致肝损伤（ADIH）的相关性。方法以抗结核治疗3个月内出现肝损伤的106例结核患者为病例组，未出现肝损伤的106例结核患者为配对对照。采用1：1匹配的病例对照研究和聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析（PCRRFI，P）技术，检测106对结核患者的NAT2基因481C／T、590G／A、857G／A位点多态性情况，并对主要环境影响因素和基因型进行单因素和多因素条件Logistic回归分析。结果病例组NAT2基因的481C／T、590G／A、8576／A位点的T、A、A等位基因频率分别为7．5％、28．8％、17．9％，对照组分别为6．6％、18．9％、17．5％。病例组NAT2慢速乙酰化型的频率明显高于对照组，粗OR值为2．250（95％CI为1．140～4．441）。对文化程度、职业、体质指数（BMI）、吸烟、饮酒和结核类型6个可疑危险因素进行了单因素分析，仅低BMI和饮酒为ADIH发生的危险因素。在多因素分析中调整BMI、饮酒两个因素后，NAT2乙酰化程度仍与ADIH的发生显著相关，调整OR值为2．246（95％CI为1．086～4．644）。结论NAT2基因慢速乙酰化型可能与ADIH的发生有关。

异菝葜皂甙元及多奈哌齐对大鼠脑神经营养因子和胆碱乙酰转移酶的影响

目的平行对比观察知母皂甙元25位异构体异菝葜皂甙元（SMI）与胆碱酯酶抑制剂多奈哌齐（DN）对自然衰老大鼠行为学及脑毒蕈碱样胆碱受体（M受体）、脑源性神经营养因子（BDNF）水平和胆碱乙酰转移酶（ChAT）阳性神经元的影响，探讨SMI的作用机制。方法20月龄SD大鼠随机分为老年对照组、SMI组、DN组及SMI＋DN合并用药组，另设SD青年对照组。30d、60d及90d后用Y型电迷路评价大鼠学习记忆能力，放射配给结合法测乙酰胆碱M受体密度，酶联免疫吸附方法测BDNF含量，Fonnun法测ChAT活性，免疫组化法测大鼠不同脑区ChAT阳性神经元密度。结果老年鼠和青年鼠比较，学习记忆能力、脑内乙酰胆碱M受体密度[（1144±124）fmol／mg蛋白和（907±109）fmol／mg蛋白]、BDNF水平[（2．17±0．15）pg／mg蛋白和（1．36±0．14）pg／mg蛋白]和ChAT活性[（16．38±3．06）nmol·h^-1·mg^-1和（6．29±1．94）nmol·h^-1·mg^-1]显著降低（P〈0．05，P〈0．01）。老年鼠喂服SMI后，上述各指标均有显著改善[（1029±107）fmol／mg蛋白、（1．69±0．15）pg／mg蛋白和（10．18±1．47）nmol·h^-1·mg^-1，P〈0．05，P〈0．01]。老年鼠喂服DN后，学习能力改善，但长期记忆能力改善不显著，脑乙酰胆碱M受体密度和BDNF含量无增加，ChAT活性增加[（10．18±1．47）nmol·h^-1·mg-1]。海马、基底前脑斜角带核和Meynert基底核的ChAT阳性神经元密度检测结果，老年鼠显著低于青年鼠，SMI使该3个脑区都显著增加，DN仅使海马增加。结论SMI与胆碱酯酶抑制剂的药理作用机制不相同。SMI长期疗效明显好于胆碱酯酶抑制剂，SMI能延缓神经退行性变化的进程，可能是它改善学习记忆功能的重要机制之一。

子宫内膜癌组织中hMOF蛋白和mRNA表达及其临床意义

目的：探讨子宫内膜癌组织中hMOF蛋白和mRNA的表达,阐明其参与调控子宫内膜癌发生发展的可能机制。方法：采用RT-PCR和免疫组织化学染色方法检测38例子宫内膜腺癌组织及20例正常子宫内膜组织中hMOF蛋白和mRNA的表达,分析hMOF蛋白和mRNA表达水平与子宫内膜腺癌患者的临床病理特征和预后的关系。结果：免疫组织化学染色,子宫内膜腺癌组织中hMOF蛋白阳性表达率低于正常子宫内膜组织（P=0.037）;临床病理分期为Ⅰ期的患者hMOF蛋白阳性表达率高于Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期患者（χ^2=6.591,P=0.037）;子宫内膜癌低分化患者hMOF蛋白阳性表达率低于中分化和高分化患者（χ^2=7.351,P=0.025）。RT-PCR检测,子宫内膜癌组织中hMOF mRNA表达上调者所占比率明显低于正常子宫内膜组织（P=0.003）。结论：hMOF蛋白可能参与了子宫内膜癌的发生发展过程,有望成为判断子宫内膜癌预后的生物学指标。