土茯苓中抑制黄嘌呤氧化酶活性成分提取工艺优化及其酶动力学研究

目的优化土茯苓中抑制黄嘌呤氧化酶活性成分提取工艺,并考察其酶动力学。方法在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、提取时间、提取温度为影响因素,黄嘌呤氧化酶活性抑制率为评价指标,响应面法优化提取工艺。分别通过Lineweaver-Burk图、Dixon图确定其抑制类型、抑制动力学常数K i。结果最佳条件为乙醇体积分数69%,提取时间89 min,提取温度82℃,黄嘌呤氧化酶活性抑制率为62.25%。抑制类型为竞争性可逆抑制,K i为1.92 mg/mL。结论该方法稳定可靠,可用于提取土茯苓中抑制黄嘌呤氧化酶活性成分。

大蒜辣素对肉鸡肝组织中CYP1A2 mRNA表达及其酶动力学的影响

大蒜辣素(allicin)具有较好的抗菌、抗氧化等活性,有望作为一种抗生素替代品用于畜禽养殖业,但其对肝药物代谢酶的影响尚不清楚。本研究旨在探究大蒜辣素对肉鸡CYP1A2酶活性、编码基因的mRNA表达和酶动力学的影响,为其在生产实践中的合理使用提供参考。90只1日龄AA肉鸡适应性饲养4 d后随机分为对照组(基础日粮组)、大蒜辣素低剂量组(40 mg·kg^(-1))和高剂量组(80 mg·kg^(-1)),处理组每天2次、连续42 d于饲料中添加大蒜辣素。给药后第14、28和42天时每组分别随机采集10只鸡肝组织,钙离子沉淀法提取肝微粒体,检测大蒜辣素对CYP1A2酶活性的影响;采用real time RT-PCR方法检测大蒜辣素对CYP1A 2和核受体CXR mRNA表达的影响;进一步采用体外探针药物法测定了大蒜辣素对CYP1A2酶的抑制动力学参数。添加不同浓度大蒜辣素第14和28天,肉鸡肝微粒体中CYP1A2酶活性分别显著增加为对照组的1.2倍和1.4倍(P<0.05);而在第42天时低剂量和高剂量大蒜辣素分别使CYP1A2酶活性极显著减少至对照组的80%和62%(P<0.001)。大蒜辣素处理组对CYP1A 2和CXR mRNA表达量与酶活性的影响趋势基本一致。体外试验结果显示,大蒜辣素对CYP1A2的半数抑制浓度(IC_(50))为18.87μmol·L^(-1),抑制常数(K_(i))为10.89μmol·L^(-1),并对CYP1A2呈现为非竞争性抑制作用,且其对CYP1A2酶活性的抑制作用呈现一定的时间和浓度依赖性。大蒜辣素可对CYP1A2酶活性及其编码基因的mRNA表达均产生影响,且表现为双向作用。该研究结果提示,大蒜辣素长期应用会对肉鸡CYP1A2产生影响,临床应注意其介导的药物间相互作用,避免产生不良反应。

茯苓三萜对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用及酶动力学研究

目的探讨不同浓度茯苓三萜对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制活性,及其酶促反应动力学特性。方法采用体外α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性筛选模型,测定不同浓度的茯苓三萜类对两种酶的抑制作用,采用Lineweaver-Burk双倒数法分析其酶动力学性质。结果体外酶活性抑制试验显示,不同浓度的茯苓三萜类在体外对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶均有抑制作用,其最大半数抑制浓度(IC_(50))分别为1.40μg/mL、10.43μg/mL,茯苓三萜对α-葡萄糖苷酶的抑制作用为可逆非竞争性抑制,对α-淀粉酶的抑制作用为可逆混合抑制类型。结论茯苓三萜类物质有降血糖活性,且浓度越高抑制效果越明显。本研究可为茯苓降血糖药物的研究和开发提供科学依据。

枇杷抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性部位的筛选及其酶动力学

比较研究枇杷不同药用部位(根、茎、叶、花、果肉、种子)醇提取物对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性,并探究最强活性部位及其总黄酮的酶促反应动力学特征。采用95%乙醇超声提取制备枇杷不同药用部位醇提取物,超声辅助浸提并经AB-8大孔树脂制备总黄酮,利用紫外光谱法测定α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性,通过酶促动力学方法与Lineweaver-Burk曲线推断酶抑制类型。结果表明,枇杷不同药用部位醇提取物均具有一定的α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性,α-葡萄糖苷酶抑制活性强弱依次为花>茎>根>叶>果肉>种子,α-淀粉酶抑制活性强弱依次为根>茎>花>叶>果肉>种子。枇杷花醇提取物、枇杷花总黄酮对α-葡萄糖苷酶抑制活性半抑制浓度(half inhibitory concentration,IC_(50))值分别为(4.65±0.35)、(0.0174±0.0035)g/L,均为可逆非竞争性抑制类型;对α-淀粉酶抑制活性IC_(50)值分别为(14.41±0.59)、(1.57±0.03)g/L,均为可逆非竞争性抑制类型。枇杷根对α-淀粉酶抑制活性最强,IC_(50)值为(1.51±0.24)g/L,为可逆竞争性抑制类型。该研究结果为枇杷作为降血糖食品药品的开发利用提供了科学依据。

二酶系统非竞争性抑制的稳态酶动力学布尔函数图论研究

用稳态酶动力学的布尔函数图形方法[1] ,对一类二酶系统非竞争性抑制的稳态酶动力学进行了研 究 ,推导出此类反应的稳态酶动力学方程 ,并对该方程进行了讨论 。

染料木黄酮在大鼠肝微粒体代谢的酶动力学

目的:体外研究大鼠肝微粒体中染料木黄酮代谢的酶动力学,及选择性细胞色素(CYP)酶抑制剂对其代谢的影响。方法:用大鼠肝微粒体研究染料木黄酮代谢的酶动力学,探讨CYP酶的选择性抑制剂对其代谢的影响及参与其代谢的CYP酶。结果:CYP1A2抑制剂呋喃茶碱可以显著地抑制染料木黄酮代谢,使染料木黄酮的代谢速率下降。而其它CYP特异性抑制剂对染料木黄酮代谢没有明显的影响。结论:CYP1A2参与了染料木黄酮的代谢,CYP1A2的抑制剂可能会与染料木黄酮发生代谢相互作用,从而降低染料木黄酮的代谢速率。

镉对土壤脲酶动力学特征的影响

采用室内模拟培养的方法,对镉污染土壤脲酶动力学特征进行了研究。结果表明：脲酶活性随着培养时间的增加而降低,并在第6天达到最大抑制率;同一培养时间内,随着镉浓度的增加,土壤脲酶活性呈现降低的趋势;两种模型拟合结果表明,模型y=c（1＋ax）/（1＋bx）拟合效果较好,说明镉对土壤脲酶活性的抑制为部分抑制;随着镉浓度的增加,Km值不变,Vmax和Vmax/Km呈降低趋势,说明镉对土壤脲酶的作用为非竞争型抑制,即抑制作用为部分非竞争型抑制。

草鱼肝细胞中恩诺沙星脱乙基代谢的酶动力学

用RP-HPLC法检测了草鱼肝细胞系（GCL）细胞中恩诺沙星（ENR）的代谢情况,结果显示,药物利福平（RIF）和苯巴比妥（PB）在浓度分别为（12.6±0.9）μM和（34.8±3.6）μM时对ENR脱乙基酶具有最大的诱导倍数,分别为6.0±0.4和2.3±0.3;而红霉素（ERM）对ENR脱乙基酶具有抑制作用,其抑制剂浓度EC50为（20.3±1.8）μM。RIF诱导组和对照组的GCL细胞中ENR代谢的药时曲线方程分别为Ct/Co=-0.0654Ln（t）＋0.7342和Ct/Co=-0.0280Ln（t）＋0.9300,酶动力学方程分别为1/V=72.5530×1/[S]＋1.4922和1/V=530.9800×1/[S]＋3.5274。ENR消除率和环丙沙星（CIP）转化率的研究结果表明,RIF对ENR的脱乙基代谢具有显著的促进作用,而酶动力学参数表明,RIF诱导的酶与底物的亲合力较高,酶促反应的强度较大。

肺炎克雷伯氏菌AmpC β-内酰胺酶动力学及抑酶效应的研究

对肺炎克雷伯氏菌 99- 799株产生的 Amp C型β-内酰胺酶利用分光光度法进行了酶动力学及酶抑制剂抑酶效应的研究。分别以 L - B作图法求取米氏常数 (Km)和最大反应速度 (Vmax) ,以 Dixon作图法求取抑制常数 Ki,以半对数作图法求取酶活性被抑制 5 0 %时的抑制剂浓度 IC50 。结果表明 ,Amp C酶对头孢噻啶、头孢噻吩和头孢哌酮的 Km 及 Vmax/ Km 值较苯唑西林、头孢噻肟、头孢他啶、头孢西丁和氨曲南的值大 ,说明Amp C酶对头孢噻啶、头孢噻吩和头孢哌酮具有较低的亲和力和较高的水解效率。此外 ,克拉维酸、舒巴坦和三唑巴坦 3种β-内酰胺酶抑制剂对 Amp C酶的抑制效力均很差 ,尤其是克拉维酸作用很弱。

TEM型β-内酰胺酶动力学研究

利用分光光度法研究 3种由革兰氏阴性菌产生的 TEM型 β-内酰胺酶的动力学。以 L- B作图法求取 Km 和 Vmax。TEM- 1、TEM- 2对青霉素类有较强水解作用 ,对第一代头孢菌素和第三代头孢菌素头孢哌酮也有一定程度水解 ,而对第二代头孢菌素头孢呋新及其它第三代头孢菌素均无水解作用 ;而 TEM- 5对青霉素类及第一、二、三代头孢菌素均有不同程度的水解 ;TEM型酶的最适 p H值为 6 .6～ 7.4,最适反应温度为35℃～ 40℃。不同 TEM型酶其水解底物轮廓有较大差异 ,温度、p

白屈菜碱在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学及CYP450酶特异性抑制剂对其代谢的影响

目的研究白屈菜碱在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学及CYP450酶特异性抑制剂对其代谢的影响。方法将系列浓度的白屈菜碱与大鼠肝微粒体进行体外共孵育,采用HPLC法测定孵育液中剩余白屈菜碱的浓度,利用Graph Pad Prism 6.0软件进行数据拟合并计算酶动力学参数;分别将5种CYP450酶的特异性抑制剂与白屈菜碱进行共孵育,考察抑制剂对白屈菜碱代谢的影响,探讨参与其代谢的酶亚型。结果在大鼠肝微粒体中,白屈菜碱的Vmax为(3.52±0.18)mmol·min-1·kg-1;Km为(12.02±2.92)μmol·L-1;CLint为292.4 L·min-1·kg-1;CYP450酶特异性抑制剂酮康唑、α-萘黄酮、氟康唑和奎尼丁可以显著地抑制白屈菜碱的代谢,而噻氯匹定对白屈菜碱的代谢没有明显影响。结论白屈菜碱在大鼠肝微粒体中广泛代谢,CYP3A4、CYP1A2、CYP2D6、CYP2C9是参与其代谢的主要代谢酶。

β-内酰胺酶抑制剂——他佐巴坦与舒巴坦酶动力学的比较研究

目的 :比较他佐巴坦与舒巴坦的抑酶强弱。方法 :测定Ki 值及IC50 。结果 :他佐巴坦的Ki 值大于舒巴坦的Ki 值 ;他佐巴坦的IC50 小于舒巴坦的IC50 。结论 :他佐巴坦的抑酶作用强于舒巴坦。

β-内酰胺酶抑制剂抑酶动力学研究

目的:研究舒巴坦、克拉维酸和他唑巴坦3种抑制剂对临床上产酶菌株的抑制作用,来比较3种抑制剂的抑酶方式和抑酶效果。方法:分光光度法研究3种抑制剂对8株产酶菌所产β-内酰胺酶的抑酶效力,Dixon作图法求取抑制常数Ki,并计算相关抑制动力学参数。结果:3种抑制剂对8株细菌所产β-内酰胺酶均为竞争性抑制方式,3种抑制剂里舒巴坦抑制效果相对最弱,他唑巴坦最强。结论:3种抑制剂对不同产酶菌株所产β-内酰胺酶抑制效果有较大差异。

硒对华贵栉孔扇贝碱性磷酸酶的酶动力学及理化性质研究

探讨了微量硒(Se^(4+))对华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis(Reeve))碱性磷酸酶(AKP)的作用。以催化动力学原理研究了不同缓冲系统中微量硒时AKP的影响。结果表明,Se^(4+)对谈酶的作用与酶所处的环境有关。在0.05 mol/L Na_2CO_3-NaHCO_3(pH 9.0)缓冲溶液中Se^(4+)浓度小于12.5 mmol/L时呈现出激活作用;Se^(4+)浓度大于12.5 mmol/L时呈现出非竞争性的抑制作用,其抑制常数为6.81×10^(-2)mol/L。在0.05 mol/L Tris-HCl缓冲系统(pH 9.0)中,微量Se^(4+)对AKP具有强烈竞争性抑制作用,其抑制常数为3.79×10^(-1)mol/L。经紫外吸收光谱、荧光发射光谱和圆二色谱的实验表明,微量Se^(4+)与AKP作用后,该酶的构象已发生了变化。研究发现海水环境中若含有微量Se^(4+)(SeO_3^(2-)),可以促进扇贝AKP的水解。利于贝类的生长发育和外壳的形成,并有益于贝类的繁殖。

抗营养阻遏高产木素酶白腐菌的选育及其产酶动力学

通过诱变育种方法筛选抗营养阻遏高产木素酶白腐菌,得到1株编号为pc5305的突变菌株,该菌株具有在营养富氮条件下高产木素过氧化物酶(LiP)、锰过氧化物酶(MnP)且菌体生长与酶合成同步的特性.

白藜芦醇在人肝微粒体中代谢的酶动力学

目的研究白藜芦醇在体外人肝微粒体酶中的代谢以及葡糖醛酸转移酶(UGT)抑制剂对其代谢的影响。方法采用高效液相-质谱联用方法测定白藜芦醇在体外代谢系统中的代谢产物,并用Origin7.5软件分析数据,得到白藜芦醇的酶促反应动力学参数最大反应速率(Vm),米氏常数(Km),并计算UGT对白藜芦醇的内源性清除率(CLint)。通过抑制试验,观察不同浓度抑制剂对不同浓度白藜芦醇Ⅱ相代谢的影响。结果在体外代谢系统中,白藜芦醇生成两种单葡糖醛酸代谢产物M-1,M-2,初步推断其为白藜芦醇-4',和3-葡萄糖醛酸化物。在肝微粒体中生成两种代谢产物的酶促反应的Vm和Km分别为M-1:(1.08±0.06)nmol.min-1.mg-1和(192.05±30.46)μmol.L-1;M-2:(2.20±0.10)nmol.min-1.mg-1和(34.82±6.95)μmol.L-1,白藜芦醇代谢为M-2的代谢速率明显高于M-1。UGT抑制剂姜黄素和槲皮素都能显著抑制白藜芦醇的代谢。结论代谢产物M-2的生成是白藜芦醇在肝微粒体中的主要消除途径。姜黄素、槲皮素在体外对白藜芦醇的Ⅱ相代谢有显著的抑制作用,对临床研究药物的相互作用有很大指导意义。

耐热乳糖酶的酶动力学研究

对从栖热菌中分离纯化的耐热乳糖酶进行酶动力学研究。方法：采用单因素试验方法，分别研究了温度、ｐＨ值、底物浓度对酶活性的影响。结果：该酶的最适温度为６０℃，最适ｐＨ为７．０，ｋｍ值为６３．９ ｍｍｏｌ／Ｌ。结论：该酶在工业生产低乳糖乳制品中具有一定意义。

茶多酚对淀粉消化酶动力学的影响

研究茶多酚对淀粉酶动力学以及对淀粉体外消化的影响,结果表明,茶多酚对猪胰α-淀粉酶的抑制作用属于非竞争性抑制,对淀粉葡萄糖苷酶具有明显的促进作用;在茶多酚浓度低于20%(茶多酚/淀粉)时,对Englyst法混酶体系起抑制作用,最大抑制率可达30%,浓度超过20%时,对混酶反而起促进作用,最大促进率为20%;选取两个浓度研究茶多酚对普通玉米淀粉体外消化的影响,添加10%茶多酚(茶多酚/淀粉)抑制普通玉米淀粉的消化,25%茶多酚(茶多酚/淀粉)促进普通玉米淀粉的消化,证明茶多酚对淀粉消化性体外测定方法的准确性存在影响。

漂白前后塔拉纤维剩余物的酶动力学分析

对塔拉纤维剩余物和漂白塔拉纤维剩余物的酶动力学进行了研究,采用Lineweaver-Burk双倒数法对底物样品浓度倒数和酶促反应速度倒数作图构建米氏方程,通过计算两种底物的Km值,即塔拉纤维剩余物Km为12.73 mg·m L-1,漂白塔拉纤维剩余物Km为192 mg·m L-1,表明塔拉纤维剩余物比漂白后的塔拉纤维剩余物更适合做纤维素酶的酶解底物;红外光谱图分析表明漂白塔拉纤维剩余物中木质素成分含量明显降低。

《生物化学》中酶动力学知识专题微课教学设计

专题微课是基于一门课程的某个重要的专题(单元、主题等)而设计开发的一种微型在线视频网络课程。由于高校课程的特殊性,单一的微课不能解决一个比较复杂的知识点(因为微课时间必须要微),因此专题微课在高校方兴未艾。教学团队选择《生物化学》中的一个重要内容-酶动力学知识,按照专题微课的模式进行了教学设计,制作相关微课,并对实施后进行了反思,期与同行探讨。