酶循环法测定血清肉碱浓度及临床意义

目的 :建立酶循环法检测血清肉碱浓度 ,探讨该项目的临床意义。方法 :引入酶循环新技术 ,测定 3 0例健康人及 2 8例血透患者血清游离肉碱浓度 ,并与透析时间及透析并发症发生率作相关分析。结果 :tris-HCl缓冲液为最适缓冲体系 ,最适 p H9.5,最适辅酶浓度0 .2 mmol/L NADH,线性可达 0～ 2 0 0μmol/L ,精密度实验批内 CV3 .3 4% ,批间 CV4.91 % ,平均回收率 1 0 0 .4% ,与 3 0例健康者血清游离肉碱比较 ,血透患者透析前血清肉碱水平显著降低 ( P<0 .0 1 ) ,透析后更低。血清肉碱水平与透析时间、透析低血压、肌痉挛和透析后无力发生率密切相关 ( P<0 .0 1 )。结论 :该方法简捷 ,快速 ,能准确测定肉碱浓度较低之标本 ,既可用于手工操作 ,也可用于自动化分析。

酶循环法定量检测血清同型半胱氨酸的技术性能评价

目的:评价酶循环法(ECM)定量检测血清同型半胱氨酸(Hcy)的技术性能。方法:参考NCCLS评价方案,评价ECM定量检测血清Hcy的准确度、精密度、线性范围和干扰因素。结果:ECM定量检测低、高水平定值质控血清Hcy的相对偏差分别为2.52%和4.28%;正常值和高值血清测定的批内变异系数(CV)和总CV分别为1.63%~1.58%和4.65%~3.88%;3.12~49.98 umol/L范围内测定的线性相关系数(r^(2))达到0.9971;胆红素(20 mg/dL)、乳糜(1000 mg/dL)和维生素C(10 mg/dL)对该检测方法无显著性干扰(P>0.05)。结论:酶循环法不仅实用性高,而且可靠性强,因此在各级医疗机构的检验科均可普及使用。

酶循环法检测血清总胆汁酸的方法学评价

目的通过对方法学评价试验,选择一种检测血清总胆汁酸的方法。方法Thio-NADH黄色发光系统酶循环法检测血清总胆汁酸。结果本法线性达150μmol/L,精密度高,批内CV分别为0.98%和0.85%,批间CV为4.58%和4.13%。本法与普通酶显色法比较,r=0.903x-1.45,r=0.9955,n=50,配对t检验P>0.05,胆红素<830μmol/L,血红蛋白<5g/L,肝素钠<120mmol/L,枸椽酸钠<120mmol/L,乳酸<30mmol/L,抗坏血酸<28mmol/L,对测定结果无显著性干扰。结论本法线性好,精密度高,结果无明显干扰,对仪器管道比色杯基本无色素沉着污染,是测定血清总胆汁酸的一种理想方法,值得扩广应用。

血清同型半胱氨酸酶循环法试剂的临床研究

目的评价伊利康公司研制的酶循环法同型半胱氨酸(Hcy)试剂性能,并探讨Hcy在临床上的诊断价值。方法对伊利康Hcy试剂盒进行性能评价并与已上市的Hcy试剂进行110例样本(健康体检者63例,冠心病11例,高血压24例,脑梗死12例)比对试验。结果 Hcy准确度小于或等于8%、测量精密度小于或等于4%、线性范围达50μmol/L,经配对t检验和相关性分析表明两种试剂差异无统计学意义,r2=0.997 9;47例患者中,冠心病、高血压和脑梗死患者Hcy均明显高于健康对照组(P<0.01)。结论伊利康公司研制的Hcy试剂与已上市的Hcy试剂在临床应用上具有等效性,检测Hcy对冠心病、高血压及脑梗死患者的诊断可提供有价值的实验室数据。

NCCLS评价酶循环法测定β-羟丁酸及临床意义

目的建立β-羟丁酸酶循环法的测定方法,采用NCCLS对本方法进行初步评价。方法在东芝TBA120FR全自动生化分析仪上对酶循环法的准确性、精密度及线性范围进行了分析,测定了3组临床标本的β-羟丁酸含量。结果本方法的平均样品回收率为103.8%,精密度批内、批间及总变异度均小于5%,在0～4.0mmol/L内呈线性,糖尿病酮症酸中毒组临床标本结果与对照组和糖尿病无酮症组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论酶循环法测定β-羟丁酸快速准确,可用于糖尿病酮症酸中毒患者的诊断。

酶循环法测定血清总胆汁酸

采用氧化型β－硫烟酰胺腺苷二核苷酸（Thio－NAD）底物酶循环法测定血清总胆汁酸（TBA），对其方法学进行初步研究。该法灵敏度：试剂空白△A_(405nm（1cm）)0.004／min；50μmol／L△A_(405nm（1cm）)0.050／min；平均回收率99．2％；线性0～150μmol／L；精密度：批内CV＜1．0％：批间CV＜4．5％；该法（Y）和偶联黄递酶比色法（X）比较：Y＝0．88X－1．50，r＝0．9968；常用量抗凝剂、胆红素684μmol／L、血红蛋白5g／L、抗坏血酸0．5g／L、LDH14000U／L对测定无影响。该法生成物无色素污染、准确度及精密度好、干扰物少，是一种理想的TBA测定方法。

酶循环法测定血清同型半胱氨酸的方法学评价

目的对酶循环法(ECA)定量测定血清同型半胱氨酸(Hcy)的试剂盒进行方法学评价。方法参考CSLI发布的方法学评价系列文件,对该方法学的精密度、分析灵敏度、功能灵敏度、线性范围、抗干扰能力和准确性进行评价,并与ABBOTT i2000化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)的测定结果进行统计学分析,同时对厂商声明的生物参考区间进行验证。结果 ECA定量测定血清Hcy的批内变异系数(CV)和总CV分别为1.39%~2.53%和2.15%~4.82%;分析灵敏度和功能灵敏度分别为0.06和2.08μmol/L;6.20~50.50μmol/L范围内测定的线性相关系数(R^2)达0.998 4;低、高浓度定值质控血清测定的相对偏差分别为-2.85%和2.24%;57例临床标本AU5800(ECA法)测定结果与i2000(CMIA法)测定结果相关性良好(R^2=0.994 4),血红蛋白(3.75 g/dl)、胆红素F(37.5 mg/dl)和乳糜(7 000浊度)对该测定方法无明显干扰;40名健康体检者Hcy测定结果均处于厂家推荐的参考区间内。结论酶循环法测定Hcy的主要分析性能达到了厂商声明的性能和有关质量要求,可作为一种准确可靠、快捷价廉的临床常规检测方法。

酶双循环法测定一氧化氮合酶活性实验条件探讨

目的运用Wang法与酶双循环法联合测定血清中一氧化氮合酶（NOS）活性。方法先改良Wang法测定NOS活性的实验条件，再探讨Wang法与酶双循环法偶联的实验条件，比较酶双循环前后检测物性质。结果总NOS（tNOS）测定试剂由20mmol／L L-精氨酸、25μmol／L还原型辅酶Ⅱ（NADPH＋H^＋）、50．0μmol／LCaCl2、45．0μmol／L二硫苏糖醇（DTT）、36．0μmol／L乙二胺四乙酸（EDTA）、1．8μmol／L苯甲磺酰氯（PMSF）、80μmol／L尼克酰胺、1μg／ml钙调蛋白（CalM）和10μg/ml蛋白酶抑制剂Antipain组成。以上试剂添加诱导性NOS（iNOS）抑制剂N^W-硝基-D-精氨酸用于测定结构型NOS（cNOS）。对NOS生成的氧化型辅酶Ⅱ（NADP^＋）采用酶双循环产物6-磷酸葡萄糖酸（6PG）脱氢生成的大量NADPH＋H^＋，其放大倍数约为70～80倍。结论酶双循环法提高了测定NOS的灵敏度。

建立超敏ELISA-双酶底物循环法检测tau蛋白

利用酶联免疫吸附法 (ELISA)的高特异性和双酶底物循环的高灵敏度 ,建立了ELISA 双酶底物循环扩增检测法 .用传统ELISA测定纯化tau蛋白和阿尔茨海默病异常磷酸化tau蛋白的范围值分别为 1～ 32ng和 0 2～ 10ng ,而此法的测定范围值分别为 0 75～ 2 0 0pg和 0 5～ 5 0 pg ,比传统ELISA的灵敏度分别提高 130 0倍和4 0 0倍 ,可测定范围值亦分别扩大了 8 5倍和 2倍 .可准确测定阿尔茨海默病患者脑脊液样品中的微量tau蛋白和异常磷酸化tau蛋白 ,为阿尔茨海默病的早期诊断和鉴别诊断提供了新技术 .

同型半胱氨酸测定试剂盒(酶循环法)的检测评价

目的:根据YY/T 1258-2015《同型半胱氨酸测定试剂(盒)(酶循环法)》和企业产品技术要求,检测评价同型半胱氨酸测定试剂盒(酶循环法)。方法:应用日立7100全自动生化分析仪对该试剂盒的外观、净含量、试剂空白吸光度、分析灵敏度、线性范围、测量精密度、准确度、稳定性等进行检测评价。结果:外观、净含量均符合要求;试剂空白吸光度为1.8;分析灵敏度为0.03/min;线性相关系数(r)为0.9999,[3.0,10.0]μmol/L范围内,线性偏差为-0.2μmol/L;(10.0,45.0]μmol/L范围内,线性偏差最大值为0.7%。重复测试(10.0±2.0)μmol/L和(20.0±4.0)μmol/L的样品,所得结果的重复性(变异系数CV)分别为2.2%和2.3%;3个不同批号试剂盒的批间相对极差为2.8%。不同浓度纯品溶液的回收率分别为92.1%和98.5%。取到效期后3个月内的试剂检测,稳定性符合要求。结论:同型半胱氨酸测定试剂盒(酶循环法)性能指标符合标准要求。

循环酶法测定血清同型半胱氨酸试剂盒的评价

目的建立直接简便测定血清同型半胱氨酸（Hcy）的酶循环法。方法在日立7170A全自动生化分析仪上,采用两点速率法,通过两点线性校准,直接测定血清同型半胱氨酸。结果批内不精密度为2.21%~4.98%,批间不精密度为2.61%~6.73%;回收率为97.3%~104.9%;线性范围为1.5~50μmol/L;干扰实验说明加入的干扰物无明显干扰。结论在全自动生化分析仪上以酶循环法测定血清同型半胱氨酸操作简便、灵敏度高、能快速得到检测结果,适用于常规生化分析。

急性胰腺炎对肝酶活性的影响

目的:了解急性胰腺炎对肝脏的影响。方法:采用酶速率法及酶循环法、比色法检测急性胰腺炎患者和正常人血清肝酶活性及总胆汁酸、胆红素、白蛋白水平变化。结果:急性胰腺炎(轻症组)患者血清肝酶活性及总胆汁酸水平升高,较对照组有显著性差异,P<0.001;重症胰腺炎组各指标均显著高于轻症组和对照组,P<0.001。结论:急性胰腺炎对肝脏有不同程度的损害。

乙醇发酵中酿酒酵母辅酶NAD^+及NADH测定方法

乙醇发酵过程中酿酒酵母细胞辅酶NAD+和NADH质量分数及其比例反映了胞内的氧化还原状态和细胞代谢活性,具有重要的生理意义。作者主要研究了加热萃取、珠磨破碎、反复冻融破碎3种方法对乙醇发酵过程酿酒酵母细胞辅酶NAD+和NADH提取和测定的影响,提出基于珠磨破碎、辅以加酸或碱并加热的萃取模式,以及合适的酶循环反应体系,从而建立了高效的胞内NAD+和NADH检测方法。

兰州地区健康成年人血清超氧化物歧化酶及同型半胱氨酸水平调查

目的探讨兰州地区健康成年人血清超氧化物歧化酶(SOD)和血清同型半胱氨酸(Hcy)与性别、年龄的相关性。方法选择2011年5月至2013年5月该院体检中心健康体检者,使用AV5400全自动生化分析仪检测血清SOD活性及Hcy水平,并对数据进行统计分析。结果男性血清SOD为(162.23±24.22)U/mL,女性为(157.97±21.72)U/mL;男性血清Hcy为(14.98±3.97)μmol/L,女性为(14.33±4.01)μmol/L,男性SOD及Hcy略高于女性,但差异无统计学意义(P>0.05)。健康成年人血清SOD水平随年龄上升逐步下降;但各年龄段之间差异无统计学意义(P>0.05);60岁年龄组血清Hcy水平明显上升,与其他年龄组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论健康成年人血清SOD水平与年龄、性别无明显相关性,60岁以上者Hcy水平显著增高。

酶比色法检测血同型半胱氨酸应用评价

目的建立简便的酶比色法测定血中同型半胱氨酸的方法,并与传统的酶循环法相比较,评价同型半胱氨酸酶比色法临床检测的可行性。方法通过精密度试验、线性、干扰实验,考察方法的可靠性,最后采用加样回收的方法比较两种方法的准确性,并对临床30份血液样品进行了酶比色法检测。结果酶比色法具有很高的精密度,较宽的线性范围,抗干扰能力较强,更高的回收率。结论同型半胱氨酸酶比色法原理检测试剂与目前常用的酶循环法检测试剂相比,酶比色法具有更高的准确性,可用于临床同型半胱氨酸的检测。

试剂携带污染对血清总胆汁酸测定结果的影响及消除措施

目的消除循环酶法测定血清总胆汁酸(TBA)时试剂携带污染对结果的干扰。方法循环酶法测定20份血清标本中的TBA含量,然后分别测定总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等9个项目后再测定TBA含量。结果在测定TC、TG、HDL-C后测定TBA导致20份血清标本结果存在系统误差,分别为14.95、15.36、22.20μmol/L。3种干扰试剂组分中的TBA含量分别为1 016.9、1 061.2、1 216.8μmol/L。结论合理安排TBA与其他检测项目的分析顺序,或设置避免试剂携带污染功能程序,用碱性清洗液冲洗试剂针,可以有效地消除TC、TG、HDL-C试剂对血清TBA测定结果的干扰。

谷胱甘肽的生理意义及其各种测定方法比较、评价

谷胱甘肽是一种非常特殊的氨基酸衍生物,广泛存在于动、植物细胞,在生物体内有许多重要的生理作用。人类组织中GSH的浓度的研究还不广泛。谷胱甘肽的测定有许多方法,目前还没有一种既快速、稳定、特异,又十分灵敏、经济的测定方法。本文对谷胱甘肽的生理意义及其各种测定方法作一综述。

健康成人与肝脏疾病患者血浆肉毒碱的检测

目的建立成人总肉毒碱(TC)和游离肉毒碱(FC)的参考范围;检测肝病患者血浆TC和FC水平,并探讨其临床意义。方法采用循环酶法测定35例慢性病毒性肝炎、30例急性病毒性肝炎和30例肝硬化患者血浆TC和FC水平,同时测定200名健康成年人血浆TC和FC水平作为对照。结果健康成人TC为(56.5±9.6)μmol/L、FC为(46.6±8.2)μmol/L,其中男性TC为(57.5±8.5)μmol/L,女性TC为(55.6±10.5)μmol/L,两者之间差异无统计学意义(P>0.05),FC男性为(48.4±7.2)μmol/L,水平略高于女性(44.7±8.9)μmol/L。慢性病毒性肝炎患者的TC为(46.9±14.8)μmol/L、FC为(36.3±9.8)μmol/L,急性病毒性肝炎患者的TC为(44.4±14.2)μmol/L、FC为(35.4±13.0)μmol/L,均低于健康成年人(P<0.01);肝硬化患者TC和FC水平与健康组差异无统计学意义(P>0.05)。结论TC水平男女之间差异无统计学意义,FC男性水平略高于女性;女性肉毒碱有随年龄增加的趋势。肝病患者可发生肉毒碱代谢异常。