酶标仪法测定离心泵泵头表面肝素涂层生物活性的研究

目的 建立酶标仪法测定离心泵泵头表面肝素的生物活性。方法 由抗凝血酶(AT)饱和的肝素化表面失活的凝血酶量来量化肝素生物活性:肝素表面与过量的血浆蛋白AT结合,形成AT饱和的肝素化表面(过量的AT通过清洗程序去除),上述肝素化表面又与过量凝血酶Ⅱa结合,残留的凝血酶Ⅱa与显色底物反应,凝血酶肽键H-D-Phe-Pip-Arg-pNa被裂解,释放出生色团,其可以在405 nm下进行测试并定量。结果 应用酶标仪上波长405 nm时的动力学吸光度评估生物活性,生物活性测定表明:对照品(无涂层的离心泵泵头)的结果为-0.01 IU/cm^(2)(≤0.05 IU/cm^(2)),所有3种供试品的结果为0.29 IU/cm^(2)、0.40 IU/cm^(2)和0.32 IU/cm^(2)(均≥0.1 IU/cm^(2)),符合生物活性试验的有效性标准,对照品和供试品的生物活性均被视为通过。结论 通过酶标仪定量测试凝血酶肽键裂解释放生色团的含量,可得到与肝素涂层反应的Ⅱa的量,进一步反推AT的量,最终计算出肝素涂层的生物活性。该方法操作简便,一次可以测定多份样本,检测速度快;具有需要的样本量少、重复性好的特点,适用于对离心泵泵头表面肝素涂层的生物活性定量检测。

酶标仪法测定发酵液中谷胱甘肽的含量

在菌种选育阶段,为满足谷胱甘肽测定效率高、速度快的需求,本研究以酶标仪法测定了发酵液中谷胱甘肽的含量,并以标准曲线的线性回归方程计算谷胱甘肽含量,并对其进行统计,最终利用origin8.0软件将酶标仪与高效液相色谱的测定值进行拟合。结果显示,酶标仪法与高效液相色谱法在测定效果上具有较强的相似性,较高效液相色谱而言,酶标仪具有高效、快速及简单的测量优势。

酶标仪在艾滋病血液检验中的应用价值体会

目的分析在艾滋病(AIDS)血液检验中酶标仪的应用价值。方法60例已经确诊为AIDS的患者,均进行酶标仪检验、血液分析仪检验。对比两种检验方法精密度,分析线性范围;对比两种检验方法标本回收率,分析稳定性。结果对3份血清进行批间、批内20次的重复检测,酶标仪检验的批内精密度、批间精密度均明显高于血液分析仪,差异具有统计学意义(P<0.05)。AIDS血清的线性范围临界值是160 KU,在AIDS活性达到上述标准后,可利用等渗盐水对其进行稀释,同时将检测工作完成。酶标仪检验的标本平均回收率是98.2%,高于血液分析仪的94.4%,差异具有统计学意义(P<0.05)。在一份AIDS血液标本添加氢氧化钠(NaOH),浓度为0.4 mmol/L,在显色后的不同时间实施比色,结果指出,10~90 min显色比较稳定,显色10 min后比色情况良好。结论通过酶标仪测定AIDS患者的血液存在快速、简便等优势,效果理想,成本低,时间短。

酶标仪法快速评价香兰素的抑菌活性

采用96孔板在酶标仪上测定了大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、李斯特菌(L.mono)、沙门氏菌(S.enteritidis)和宋内氏菌(Sh.Sonnei)在不同浓度香兰素存在下的光学密度(optical density,OD)值,并绘制其OD-t生长曲线。受试菌生长曲线显示香兰素对E.coli,S.aureus,L.mono,S.enteritidis和Sh.Sonnei的最低抑菌浓度分别为1.6mg/mL,2.2mg/mL,1.0mg/mL,1.2mg/mL和1.6mg/mL。

应用酶标仪快速测定丙氨酸氨基转移酶的活性浓度

应用酶标仪快速测定丙氨酸氨基转移酶的活性浓度１１０００３中国医科大学第二临床学院郭兑山潘莉莉王富伟金东岩血清丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）活性测定是《血站基本标准》规定的供血者初筛和血液复检项目。目前应用的ＡＬＴ活性测定赖氏法，手工加样次数多，费时费事，...

酶标仪法测定γ-氨基丁酸

通过诱变所获得的乳酸菌突变株较多,经96孔板发酵后用传统的分光光度计法测定γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的含量效率低、成本高。为快速、高效地测定GABA的含量,基于Berthelot反应,该实验采用酶标仪法测定GABA含量并对影响该方法的主要因素进行优化。确定了在测定GABA的适宜反应体系中0.2 mol/L pH10.0硼酸盐缓冲液为0.75 mL,6%的重蒸苯酚为2.5 mL,有效氯5.2%的NaClO溶液为2 mL时,酶标仪测定可获得较高的GABA含量,同时进行了精密度试验。最后,通过对诱变后的75株突变株经96孔板发酵后,分别使用分光光度计与酶标仪测定发酵液中GABA的含量并进行拟合,以验证该方法的可行性。得出2种方法的相关系数R=0.949 3,显示2种测定方法具有很好的一致性。该实验结果表明酶标仪法能简便、快速、准确地测定发酵液中GABA的含量,为后续高通量选育GABA乳酸菌奠定了基础。

超声萃取-酶标仪-微量法测定污染土壤中的总石油烃（英文）

石油的开采、运输、泄漏及石油产品使用量的不断增加,导致了严重的土壤石油污染,改变了土壤的理化性质,引起土壤中的微生物大量死亡,影响植物的正常生长,并能通过皮肤、呼吸、饮食等方式进入人体,危害健康。因此,土壤石油污染的修复刻不容缓,但修复效果的评价离不开土壤中残留石油的提取和检测,建立快速高效的石油提取和分析测定方法是非常重要的。该研究讨论了检测波长、提取剂种类、提取剂用量以及超声萃取次数、萃取时间、超声萃取功率等影响污染土壤中总石油烃提取的参数和变量,最终建立了一种超声萃取-酶标仪-微量法提取检测污染土壤中总石油烃的方法。确定优化的提取和检测条件为:紫外检测波长为304nm,用石油醚作提取剂,土液比为1∶4,超声萃取2次,每次萃取时间为20min,超声萃取功率为100W。该优化条件下,土壤石油添加回收率是88.4%~101.6%,相对标准偏差均小于4.7%,提取测定结果符合环境分析化学检测要求。利用酶标仪代替紫外分光光度计进行检测,能更方便快速的得出结果,且测定溶液用量少,可以更好地推广应用于微量石油污染环境样品的定量检测。此外,该方法用石油醚和乙醇作为提取和定容试剂,克服了采用二氯甲烷、四氯化碳等有机试剂提取而造成溶剂消耗量大、易产生二次污染、不利于环境友好发展等缺点,是一种快速、高效、绿色的提取和测定污染土壤中总石油烃的方法。

紫外分光光度计与酶标仪测定盐酸川芎嗪含量的比较

目的比较紫外分光光度计与酶标仪测定盐酸川芎嗪含量的优缺点。方法分别用两种方法测定盐酸川芎嗪的含量。结果两种方法对盐酸川芎嗪含量的测定结果没有显著差异。酶标仪测定速度快,试剂用量少,但300nm以下96孔板的紫外吸收和加样量差异会增加测量误差。紫外标准曲线的斜率明显高于酶标仪,说明紫外的吸光度值对浓度的敏感程度高于酶标仪。结论两种方法在盐酸川芎嗪含量测定中各有优缺点,应根据实验对象选用合适的方法 ,有利于实验顺利开展。

酶标仪法测定麦苗中γ-氨基丁酸的探讨

为了提高植物中γ-氨基丁酸的检测效率和准确性,对用酶标仪测定麦苗中γ-氨基丁酸含量的方法进行了提取方式、反应试剂用量、波长选取和测定时间等参数的优化研究,并对检测结果进行了分析。结果表明,酶标仪测量γ-氨基丁酸的最佳条件为：55℃超声波提取30 min,当待测液为1 m L时,需2 mol·L-1氯化铝0.4 m L,1 mol·L-1氢氧化钾1.0 m L,0.2 mol·L-1p H值10.0的缓冲液1.0 m L,6%重蒸酚1.5 m L,5%次氯酸钠1 m L,最适测量波长为635μm,测定时间为反应后100~160 min。该检测方法稳定性高,重现性好。

应用酶标仪动力学方法监测棉蚜的抗药性

用酶标仪动力学测定法对3个抗性水平不同的棉蚜品系（R1、R2和R3）和1个敏感品系（S）的羧酸酯酶进行了研究，S、R1、R2和R3品系对α-乙酸萘酯（α-NA）的平均比活力分别为57．10、1171．69、1236．14和3293．00μmol·mgpro－1·min-1（分光光度计终点测定法）和38．24、85．27、198．14和762．25mOD·min－1·aphid-1（酶标仪动力学法）。终点测定法结果显示出不同品系间最大相差达60倍；酶标仪动力学测定法研究表明，4个棉蚜品系羧酸酶活性与其抗药性程度显著相关。通过对这两种方法的比较，酶动力学方法的测定结果更可靠。

酶标仪三波长比色法定量测定大豆总皂甙

本研究采用豆粕的乙醇提取物以水饱和正丁醇萃取纯化得到大豆总皂甙,用香草醛-高氯酸体系显色,再采用酶标仪结合三波长法测定和校正吸光值,以期建立大豆总皂甙酶标仪三波长比色定量测定法。结果表明:本方法大豆总皂甙一次提取效率为95.985%,两次合并提取效率为99.510%;萃取纯化效率为90%;皂甙浓度与吸光度之间存在极显著的线性关系,最低检出限浓度为19.667μg/ml;精密度实验的变异系数为2.7%;平均加标样回收率为95.519%,其变异系数为5.719%;可有效克服皂甙显色反应不稳定、吸光值会随时间延长而下降的问题,并在一定程度上消除干扰物质和本底漂移对定量分析造成的影响,使测定的精度进一步提高。本方法具有操作简便、重现性好、精密度高,适于大批量样品测定以及产品生产的质量控制及监测等特点。

紫外分光光度计法与酶标仪微量法测定酚氧化酶蛋白含量及活力的比较

分别采用紫外分光光度计比色法与酶标仪微量法测定菜青虫Pieris rapae(L.)体内酚氧化酶蛋白含量和活力,以水杨醛缩对硝基苯胺为抑制剂,对2种方法的结果进行比较。结果表明,微量法和比色法在检测酚氧化酶(PO)蛋白含量、酶活力和抑制剂对PO抑制作用时结果无显著性差异。因此,微量法可以替代比色法,使用试剂量大大降低,重复性好,操作简单、快捷。

酶标仪测定不同产地、不同组织部位紫花地丁总糖和还原糖

目的比较不同产地、不同组织部位紫花地丁中多糖和还原糖量,为指导采收和进一步利用提供依据。方法采用L9(34)正交试验,以料液比、提取温度和盐酸浓度为影响因素,通过蒽酮硫酸法结合全功能酶标仪,在628 nm处测定,计算其总糖和还原糖的量。结果最佳水解条件为15%(W/V)的盐酸,1∶50的料液比,100℃水解。紫花地丁根部位的总糖和还原糖量最高,叶中量最低。泸州产紫花地丁中含有具生物活性的糖类物质高于自贡产地。结论以紫花地丁中的具生物活性的糖类物质为指标,果期采收质量较佳。

利用酶标仪快速批量测定橡胶草中菊糖的含量

以橡胶草根为研究对象,采用3,5-二硝基水杨酸法(DNS法),利用酶标仪为检测仪器,建立了橡胶草中菊糖的快速测定方法。结果表明,酶标仪检测橡胶草根中总糖和还原糖含量的最佳实验条件:波长为550 nm、DNS显色剂用量为0.8 m L、沸水浴显色时间为8 min。同时,获得此条件下回归方程为A=0.6872C-0.0215(R^2=0.9982),线性范围为0~2.2 mg/m L,加样回收率为96.67%~102.33%。该方法灵敏、稳定、重现性好,可在短时间内完成多个样品同时测定,该方法所得结果略高于分光光度计法。

全自动荧光酶标仪测定金黄色葡萄球菌肠毒素的研究

目的了解荧光酶联免疫分析仪检测金黄色葡萄球菌肠毒素的效果。方法采用酶联荧光免疫分析仪和常规方法同时对从45份样品中检出的金黄色葡萄球菌进行肠毒素的检测,比较两种方法的检出率。结果酶联荧光免疫法金黄色葡萄球菌肠毒素检出率为69.0%,常规法的检出率为44.8%,根据统计学分析,两种方法的检测结果差异有统计学意义(t=3.04,P<0.01)。结论酶联荧光免疫法检出率明显高于常规法,并显示出及时、快速、简单、准确的效果。

酶标仪干试剂氰化高铁法测定血红蛋白的探讨

目的建立一种在酶标仪上用干试剂测定血液血红蛋白的检测方法。方法将氰化高铁血红蛋白法的试剂干燥在酶标板的微孔内,封存备用。测定时将水溶血后的样品加入微孔,混匀,10min后测定OD值。结果血红蛋白在25~175g/L内有良好的线性关系（r=0.9983）,结果与全自动血液分析仪SE-9000具有较好的一致性,显色后的吸光度值2h内无明显变化。结论酶标仪干试剂法测定血红蛋白结果准确可靠,测定过程简便,是一种快速测定血红蛋白的好方法。

酶标仪检测处理系统的开发研究

为解决医院检验工作中劳动强度大、工作效率低、错误率高等问题,开发研制了酶标仪检测处理系统,经临床9000余例样品的检验应用,证实结果正确,操作简便,杜绝了人为错误,工作效率和准确率大大提高,效果令人满意。在使用酶标仪进行各项检验工作中具有广泛的应用前景和推广价值。

酶标仪室内质量控制

目的 建立一种简单的酶标仪室内质量控制方法。方法 使用 0 .0 1 2 5 g/L的甲基橙溶液作为质控物 ,用 x- s质控图法对酶标仪进行质控。结果 通过质控图和通道间差比较可及时发现仪器的测定误差 ,不受免疫检验过程中其它试验步骤的影响。结论 该方法操作简单、试剂容易获得 。