热处理方式对大豆脂肪氧合酶活力和构象的影响

通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、圆二色谱、表面疏水性、荧光光谱以及分子对接等方法,研究不同热处理方式对大豆脂肪氧合酶(LOX)活力和构象的影响。结果表明:高温短时热处理可以显著降低LOX活力,其中120℃80 s+140℃15 s和100℃10 min热处理后,LOX活力分别降低了67.47%和60.53%。SDS-PAGE电泳结果显示高温热处理后LOX蛋白条带的分子质量并未发生明显变化,而条带强度减弱;热处理迫使LOX蛋白的α-螺旋和β-折叠相对含量降低,表面疏水性和内源性荧光强度增强,说明其二级结构和三级结构发生变化,LOX活力降低;通过分子对接模拟预测LOX活性中心非血红色铁周围的微环境,其在热处理过程中发生改变。推断高温热处理是通过破坏维持酶蛋白结构稳定的非共价相互作用力,促使LOX活性丧失,其中高温短时升温钝化LOX活性是较为合适的热处理方式。试验结果为大豆产品加工中LOX活性控制提供了数据参考。

酱香型白酒酒醅堆积过程酵母菌、酶活力及代谢产物变化规律

以智能、传统车间不同轮次堆积发酵酒醅为研究对象,测定其理化指标、酶活力、酵母菌总数以及挥发性风味物质,并且结合堆积温度系统解析堆积发酵机理。结果表明,随着堆积轮次的增加,酒醅的水分、酸度、乙醇、L-乳酸含量显著上升(P<0.05),葡萄糖含量先增加后减小,淀粉含量降低;堆积温度是由内到外发散,腰部表层顶温可达50℃;关键酶系糖化酶、液化酶活力显著性降低(P<0.05);酵母菌总数及发酵力在3轮次达到峰值后降低;智能、传统车间堆积酒醅共检测出95种共有香气成分,包括乙酸、乳酸乙酯、苯甲醇等;智能和传统车间进行风味物质差异分析表明,正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)能较好地区分不同类型车间风味物质差异,利用变量重要性投影值(VIP)确定出关键差异挥发性风味物质(VIP>1)14种。此项研究阐明了智能、传统车间不同轮次堆积酒醅理化因子、酶活力、风味物质、酵母菌总数、活菌率变化规律,为解析堆积发酵机理和两种生产模式下酒醅各项指标差异提供理论参考。

1株野生高效纤维素降解菌筛选、鉴定其酶活力测定

为从腐熟的土壤中分离出产纤维素酶的细菌,并进一步研究该菌株的纤维素降解能力。采用羧甲基纤维素(CMC)-刚果红染色法,筛选出1株野生纤维素降解菌ZG2-3,采用16S rRNA分子鉴定其种类,同时从促腐剂中筛选出4株商品纤维素降解菌,比较野生纤维素降解菌与商品纤维素降解菌的酶活差异。结果表明:从娄底市珠山公园桂花树林下腐熟的土壤中采集分离,通过羧甲基纤维素(CMC)-刚果红染色法,筛选得到了纤维素降解能力较高的1株细菌ZG2-3。经鉴定ZG2-3为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。ZG2-3的羧甲基纤维素酶(CMCase)活力和滤纸酶(FPA)活力分别为0.054 IU·mL^(-1)和0.02 IU·mL^(-1),其中ZG2-3的CMCase活力显著高于商品纤维素降解菌。

储藏过程中稻谷挥发性风味物质和酶活力变化的研究进展

风味劣变是影响稻谷品质和商品价值的关键问题。稻谷中的挥发性风味物质变化与酶活力变化密切相关,文章综述了稻谷储藏过程中挥发性风味物质和酶活力变化的研究概况,重点讨论了挥发性风味物质种类、香气贡献及前体物质。稻谷中的挥发性风味物质包括烃、醇、酚、醛、酯、酮、杂环类7类化合物,醛类化合物对稻谷整体风味影响最大,杂环类化合物相对含量最多、种类最丰富。除酚类化合物含量下降和酮类化合物含量呈无规律变化外,其余几类化合物的含量、种类均随储藏时间的延长而上升。稻谷储藏过程中风味劣变主要是脂质经脂肪酶(LPS)水解、脂肪氧化酶和脂氧合酶(LOX)氧化成己醛、丙二醛、异戊醇、糠醇等化合物造成的。稻谷储藏过程中,脂肪水解酶、脂肪氧化酶和LOX活性增加后下降,蛋白酶、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)的活性呈降低趋势。储藏过程中采用科学的方法来控制酶活力的变化是减缓稻谷陈化的有效措施。

小站稻秸秆降解菌的筛选与酶活力测定

为了寻找一种能够科学高效地将小站稻秸秆用于秸秆还田的方法,并将其作为一种储备技术,本研究在全国4个地区的土壤中进行取样,通过富集培养、刚果红水解圈比较、羧甲基纤维素酶活力与滤纸酶活力的测定,筛选具有高纤维素酶活力的菌株,为关于小站稻秸秆高效处理的研究提供理论基础和技术支持。研究结果表明,共筛选出了39株具有较强纤维素酶活力的菌株,菌株F1的羧甲基纤维素酶活力和滤纸酶活力均高于其他菌株,其最高值分别为5.228、4.183 U/mL。

不同位置窖泥酶活力及其细菌群落结构相关性分析

窖泥微生物对酒质的影响是通过多种酶促反应实现,目前对窖泥酶活的研究较少,缺乏关于窖泥中氮代谢功能酶的空间分布特征分析。该研究分析不同位置的窖泥理化因子和酶活力,采用高通量测序技术对窖泥细菌群落进行分析,通过聚类分析研究细菌群落的空间分布特点,并标记窖泥微生物的基因序列预测参与氮代谢功能酶的相对丰度。结果表明,铵态氮含量(1478.37 mg/kg)、过氧化氢酶活力[1.731 mg/(g·d)]、蛋白酶活力[1.107 mg/(g·d)]在窖底窖泥中最大,在窖池内自上而下呈增高趋势,而脱氢酶呈减小趋势。Firmicutes是窖泥的绝对优势菌门,Caproiciproduces、Lactobacillus、Fastidiosipila分别是窖底、窖壁中层和窖壁上层窖泥的第一优势菌属。铵态氮、蛋白酶与Aminobacterium呈显著的正相关(P<0.05);酸性磷酸酶与Lactobacillus呈显著负相关(P<0.05),脲酶与Syntrophaceticus呈显著的正相关(P<0.05)。PICRUSt2功能预测中,参与氮代谢的功能酶在不同位置窖泥中的相对丰度差异显著(P<0.05)。酶活性影响窖泥物质循环,物质交换是微生物相互作用的重要驱动力,功能酶活力可以衡量氮代谢的强度,由此可见,窖泥位置对氮代谢酶的分布产生重要影响,并影响着氮代谢,该研究为解析微生物参与窖泥中的物质循环过程提供理论基础。

茯苓菌固态发酵香菇柄基质的酶活力、营养成分及抗氧化活性变化

为了探究茯苓菌丝体能否发酵利用香菇柄基质并提高其营养价值和生物活性,以香菇柄基质为培养基,对茯苓菌固态发酵过程中的关键酶活力、主要营养成分及其发酵基质水提物的抗氧化活性进行测定。结果显示,随着发酵过程的进行,纤维素外切酶活力在发酵6 d时达46.14 U/g,随后快速降低至17.15 U/g,到发酵18 d时基本保持不变;羧甲基纤维素酶和木聚糖酶活力在发酵12 d时分别达77.70 U/g和74.23 U/g,随后逐渐降低;β-葡萄糖苷酶活力在发酵18 d时达75.06 U/g,随后逐渐降低。与未发酵的香菇柄基质相比,发酵基质中总糖、可溶性蛋白和不溶性膳食纤维的含量明显下降,但还原糖、多糖、总酚、总黄酮、氨基态氮和可溶性膳食纤维含量显著提升。发酵基质水提物的抗氧化活性显著提高,DPPH自由基清除率和羟自由基清除率分别较发酵0 d时提高了97.75%和38.15%。研究结果表明茯苓菌可以发酵香菇柄,改变香菇柄的营养成分构成且发酵基质具有较好的自由基清除能力。

基于水-甲醇体系的ONPG法测定调制乳粉中乳糖酶活力研究

建立了基于水-甲醇体系的ONPG法测定调制乳粉中乳糖酶活力的测定方法。调制乳粉中的乳糖酶经水溶解提取,在特定温度、pH条件下将ONPG水解生成ONP和半乳糖,以碳酸钠作为反应终止剂,使ONP显色,加入甲醇去除杂质,分光光度法定量,计算酶活力。首次提出的基于水-甲醇体系的ONPG分光光度法,较好地去除杂质,并提高了响应,在0.005~0.15 mmol/L范围内线性相关系数0.9997,加标回收率95.0%~98.8%,相对标准偏差0.78%~0.98%,定量限1.0 U/g。该方法线性良好,结果可靠,可以作为常规实验室测定调制乳粉中乳糖酶活力的经济、可靠的测定方法。

基于酶反应动力学理论优化脂肪酶活力测定体系

为了提高棕榈酸对硝基苯酯(p-NPP)法测定脂肪酶活力的灵敏度和准确度,以来源于Rhizopus oryzae的脂肪酶Lipase F-AP 15为研究对象,首先对其最适反应pH和反应温度进行优化,然后将表面活性剂作为激活因子引入酶活力测定体系,探究影响机制,并依据酶反应动力学理论优化测定条件(底物浓度、酶质量浓度、反应时间),对优化的p-NPP法的重复性和准确性进行了检验,最后以另一个来源的脂肪酶Lipase-PPL为模型,以同样思路与方法改进与优化其酶活力测定体系,以考察优化方法和思路的适用性。结果表明:表面活性剂PEG 8000的引入使得覆盖在脂肪酶活性位点的α-螺旋结构被重排而打开,脂肪酶由封闭构象转为并保持在活化构象,脂肪酶活性增强;优化测定体系的最适条件为pH 8.0、反应温度30℃、酶质量浓度1.00 mg/mL、底物浓度6 mmol/L、反应时间5 min,在此条件下测得的酶活力是常用p-NPP法(pH 8.0、反应温度30℃、酶质量浓度2.50 mg/mL、底物浓度10 mmol/L、反应时间8 min)测得酶活力的1.4倍;重复性和准确性试验显示,优化p-NPP法重复测定结果的相对标准偏差为1.21%,加标回收率为95.60%,均优于常用p-NPP法;优化方法和思路适用于其他来源的脂肪酶活力测定体系的优化。综上,通过将表面活性剂引入p-NPP法的脂肪酶活力测定体系,以酶反应动力学理论为指导优化测定条件,明显提高了方法的灵敏度,并有效保证了测定结果的重复性和准确性,缩短了检测时间,节省了检测成本。

不同谷物对断奶马驹肠道内容物酶活力、淀粉含量及VFA浓度的影响

【目的】探究不同谷物对断奶马驹肠道内容物中酶活力、淀粉含量及VFA浓度的影响,为断奶马驹肠道发育健康、养分消化、饲粮搭配等提供参考依据。【方法】选择出生日期、体重(112.39 kg±7.50 kg)相近,5月龄断奶的哈萨克公马驹18匹,随机分为3组,每组6匹,分别补喂玉米、燕麦和大麦。在相同的粗饲料条件下,以等淀粉原则确定各组精料的补喂量,进行为期60 d的补饲试验。马驹屠宰后,采集各肠段内容物,测定淀粉酶活力、淀粉含量及挥发性脂肪酸(VFA)浓度。【结果】①燕麦组马驹小肠淀粉酶活力极显著高于玉米组(P<0.01),显著高于大麦组(P<0.05);玉米组马驹小肠β-淀粉酶活力极显著高于燕麦组和大麦组(P<0.01)。②燕麦组马驹回肠支链淀粉含量极显著低于玉米组和大麦组(P<0.01),直链淀粉含量显著低于玉米组(P<0.05),粪便中支链淀粉含量显著高于大麦组(P<0.05);玉米组马驹盲肠直链淀粉含量显著低于燕麦组(P<0.05),极显著低于大麦组(P<0.01),结肠直链淀粉含量也显著低于燕麦组和大麦组(P<0.05)。③燕麦组与大麦组回肠总VFA含量极显著高于玉米组(P<0.01);玉米组马驹盲肠戊酸含量显著高于燕麦组和大麦组(P<0.05),异戊酸含量极显著高于燕麦组和大麦组(P<0.01),结肠中戊酸含量极显著高于大麦组(P<0.01)。【结论】玉米和燕麦淀粉对马驹小肠酶活力具有较好的改善作用;在马驹回肠中燕麦淀粉的消化利用效果较好;在马驹盲肠和结肠中玉米淀粉的消化利用效果较好。

不同牧草种子萌发酶活力研究

试验旨在研究不同牧草种子萌发的酶活力。试验使用不同温度浸种黑麦草、紫花苜蓿、苦荞麦和甜荞麦种子,培养萌发,测定不同浸种处理和不同萌发天数种子酶活力变化。结果显示,甜荞麦和苦荞麦在不同萌发天数,淀粉酶总活力呈先上升后下降的趋势(P<0.05)。不同温度浸种对黑麦草、紫花苜蓿和苦荞麦种子淀粉酶活力具有明显影响(P<0.05),对甜荞麦淀粉酶活力影响不显著(P>0.05)。研究表明,黑麦草、紫花苜蓿和苦荞麦种子分别在36、33、30℃温度处理后,种子酶活力较高,适合种子萌发;不同温度处理对甜荞麦种子萌发的影响不明显。

DNS法与菲林试剂法测定酿酒大曲糖化酶活力的比较分析

试验采用菲林试剂法和DNS法分别对20个大曲糖化酶活力进行测定,并比较两种方法测得结果的相关性、精密度和准确性。结果表明,DNS法的检测值大于菲林试剂法,两种方法测得大曲糖化酶活力的结果高度相关(相关系数r=0.9918);同时两种方法测得糖化酶活力的精密度和准确度也均较好,相对于菲林试剂法,DNS法测定糖化酶活力的精密度较高,准确度稍好。两种方法均能满足大曲日常检测需求,从精密性和准确性来说,DNS法相对更优。

基于蛋白酶活力的地龙酒制工艺优选

目的优化地龙酒制工艺。方法采用纤维蛋白平板法检测酶活力;以炮制温度、炮制时间、加酒量和焖润时间为考察因素,以蚯蚓纤溶酶活力为考察指标,采用L_(9)(3^(4))正交试验法优选地龙酒制工艺参数。结果每100kg地龙,加黄酒12.5kg拌匀,焖润30min,70℃翻炒2min时,其酶活力最高(每克31.8万单位)。结论该炮制工艺稳定、可行,可用于地龙的酒制。

过氧化物酶活力连续记录测定法

过氧化物酶是生物体内一类含血红素的氧化酶,在生物分类、分子遗传、作物育种和植物病理等方面的研究中均涉及该酶的活力测定。本文主要介绍一种用记录仪与分光光度计相联接来测定过氧化物酶的新方法。1.试验材料 校试验地内苏麦三号孕穗期麦穗。

苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶活力的抑制作用

酪氨酸酶(EC 1.14.18.1)是生物黑色素形成的关键酶,该酶抑制剂在果蔬防褐变保鲜中具有重要的应用前景.在筛选酪氨酸酶活力抑制剂过程中,发现苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶活力有明显的抑制作用,对蘑菇防止褐变具有较好的保鲜效果.报道了苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶单酚酶活力和二酚酶活力的影响和抑制作用.结果表明,苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶的效应不仅降低了酶促反应的稳定态活性,也延长了酶促反应的迟滞时间,并具有浓度依赖关系.当苯丙酸浓度达10.0mmol/L时,稳定态活力下降2/3,迟滞时间从100s延长到140s;苯丙酸对二酚酶活力的抑制也显示浓度效应,抑制效果更为显著,引起酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)为2.05mmol/L,苯丙酸对二酚酶活力的抑制显示可逆的效应,抑制类型为混合型,抑制常数(KI和KIS)分别为1.570和3.070mmol/L.

纤维素降解菌的筛选及酶活力测定

从延安市宝塔区杨家湾长期堆积牛粪和秸秆的腐殖土中筛选到17株纤维素降解菌,经刚果红培养基、赫奇逊培养基复筛,得到TC-2、TC-4、TC-5、TC-6、TC-8、TC-11、TC-12、TC-13共8株可分解纤维素的菌株,对其进行纤维素酶活力(CMCA)和滤纸酶活力(FPA)的测定。结果表明,菌株TC-11产生的两种酶的酶活力均较高,可作为进一步研究的试验菌株。

盐度骤变对花鲈血清及肝脏代谢酶、抗氧化酶活力及皮质醇含量的影响

为探讨花鲈(Lateolabrax maculatus)血清和肝脏中代谢酶和抗氧化酶活力以及血清皮质醇含量对盐度骤变的响应,设置两种盐度变化处理方式:1)盐度18骤降至0并持续7 d,然后再骤升至盐度33并持续7 d;2)盐度18骤升至33并持续7 d,然后再骤降至盐度0并持续7 d。分别在盐度骤升和骤降处理后0、0.5、1、3、7 d时取样,测定花鲈血清和肝脏中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力以及血清皮质醇含量。结果显示,在盐度大幅度骤变条件下,花鲈代谢酶、抗氧化酶活力以及皮质醇含量都发生变化。在大部分骤变条件下,酶活力和皮质醇含量均随时间推移呈现先升高后降低的变化趋势,表明花鲈在盐度骤变时产生了应激反应;但在处理后3~7 d,酶活力和皮质醇含量可恢复至处理前水平,表明花鲈对盐度骤变具有良好的耐受性和适应性。研究结果表明,本实验条件下,花鲈在遭遇养殖环境中盐度骤降变化时,可以较快地恢复,说明该品种对低盐环境有较强的适应能力。

纤维素酶活力测定方法的比较研究

对 18种酶制剂的滤纸酶活力、组分酶活力及辅助酶活力分别进行了测定。结果发现测定Cx酶活力、C1酶活力均与滤纸酶活力有相关性 ,其相关系数分别为 92 %和 85 %。其相关方程为 :滤纸酶活力 =0 .0 97×Cx酶活力 - 986 ,这一结果可使我们利用Cx酶活力的测定结果来推算出滤纸酶活力 。

菠萝天然酶活力测定方法及活力变化

以菠萝 (AnanascomosusMerr)为原料 ,应用改良的方法对菠萝天然酶活力进行测定 ,对菠萝酶活力变化进行了初步探讨。结果表明 :测定未成熟、成熟菠萝酶活力分别为 10 6 .10和 6 5 .85u/mL ;菠萝肉、皮、整果汁酶活力分别为 86 .98、5 0 .72、5 5 .2 1u/mL ;室温贮藏 ,酶活力取样时为 5 4.97u/mL ,第 4天达最高值 72 .78u/mL ,第 8天降至 4 3.6 6u/mL ;4℃贮藏 ,酶活力取样时为 5 4.97u/mL ,第 2天达最高值71.6 8u/mL ,第 4天降至 5 0 .12u/mL 。