圈养非洲白犀牛初乳蛋白组分及5种酶活性测定

为了积累圈养非洲白犀牛初乳蛋白组分和酶活性的基础数据,本研究对非洲圈养白犀牛分娩后1-5天的初乳成分进行分析。用考马斯亮蓝法对白犀牛初乳蛋白质含量进行测定,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳不连续垂直板状电泳分离乳蛋白各组分,并用分光光度法测定淀粉酶(AMS)、乳过氧化物酶(LP)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)、碱性磷酸酶(ALP)和γ-谷氨酰胺转移酶(γ-GT)等5种酶活性。结果显示:白犀牛初乳中蛋白质浓度第1天最高为150.33±4.2 mg/mL,后呈下降趋势,约为荷斯坦牛乳蛋白质浓度的5倍。白犀牛初乳中Igs含量最为丰富,第1天最高为38.59%,后呈下降趋势;荷斯坦牛乳以CN为含量最丰富的蛋白质,为49.41%。AMS、LP和ALP的活性第2天最高为46.27±0.42 U/100 mL、299.33±15.5 U/mL和193.22±1.63 U/100 mL,后逐渐下降,其中各天LP活性均高于荷斯坦牛乳;NAGase活性第1天最高为48.22±1.15 U/L后逐渐下降,各天活性均高于荷斯坦牛乳;γ-GT活性呈上升趋势,第5天最高为1053.85±6.78 U/100 mL,高于荷斯坦牛乳。

结核分枝杆菌和卡介苗菌株中喹啉酸磷酸核糖转移酶(QPRT)的原核表达及酶活性测定

为了在原核表达系统E.coli中表达并纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tuberculosis)H37Ra和卡介苗菌株(Mycobacterium bovis bacilli-Calmette-Guerin,BCG)str.Pasteur 1173P2的喹啉酸磷酸核糖转移酶(quinolinic acid phosphoribosyl transferase,QPRT),探索不同来源QPRT蛋白结构,并测定其酶活性,试验采用PCR方法分别对M.tuberculosis和BCG中QPRT的编码基因nadC进行扩增,与pET-28a载体连接构建重组载体并在E.coli中完成原核蛋白的表达,在体外进行目的蛋白的纯化,利用高效液相色谱法检测不同来源的QPRT蛋白酶活性,使用PyMOL v2.3.2软件分析其氨基酸残基结构。结果表明:在体外成功克隆了M.tuberculosis和BCG中的大小为858 bp的编码基因nadC,并成功构建出重组载体pET-28a-nadC-MTB和pET-28a-nadC-BCG,在E.coli中进行QPRT蛋白的表达与体外纯化后获得分子量为34 ku的QPRT蛋白;两种不同菌株来源的QPRT蛋白以喹啉酸(quinolinic acid,QA)为底物时酶活性无差异;不同来源的QPRT蛋白中存在1个差异氨基酸残基位点,但酶活性并无明显差异。说明QA的结构类似物吡嗪酸(pyrazinoic acid,POA)不是QPRT的底物,为抗结核药物靶点的探索提供了潜在价值。

棉蚜吡虫啉、啶虫脒不同品系解毒酶活性测定和增效剂作用的研究

通过棉蚜Aphis gossypii吡虫啉和啶虫脒抗性、敏感品系解毒酶活性测定和增效剂试验,明确与抗药性产生密切相关的解毒酶。采用室内生物测定和生化分析方法,研究棉蚜吡虫啉和啶虫脒品系解毒酶活性变化和增效剂的增效作用。解毒酶活性测定表明,棉蚜吡虫啉和啶虫脒抗性品系羧酸酯酶、谷胱甘肽-S-转移酶、细胞色素P450s O-脱乙基比活力都高于敏感品系,其中抗感品系中羧酸酯酶、细胞色素P450-O-脱乙基比活力差异都达到了显著水平(P<0.05)。吡虫啉抗性品系三种解毒酶活性分别为敏感品系的3.26倍、1.08倍、1.60倍和1.58倍;啶虫脒抗性品系三种解毒酶活性分别为敏感品系的2.91倍、1.04倍、1.69倍和1.46倍。增效剂磷酸三苯酯(TPP)、增效醚(PBO)、顺丁烯二酸二乙酯(DEM),在吡虫啉敏感品系中的增效比分别为1.12、1.09、0.97,在吡虫啉抗性品系中的增效比分别为2.02、1.75、1.05;在啶虫脒敏感棉蚜品系中的增效比为1.02、1.03、1.02,在啶虫脒抗性棉蚜品系中的增效比为1.77、1.61、1.04。增效剂试验和解毒酶试验表明,酯酶和多功能氧化酶在棉蚜对吡虫啉、啶虫脒的抗性产生中起到了重要的作用。

木聚糖酶酶活性测定方法及酶活性单位定义

为统一木聚糖酶酶活性的单位定义及测定方法进行了实验。通过对现有酶活性的单位定义及测定方法的比较分析,得出木聚糖酶的酶活性单位定义为:在特定条件下,每分钟水解木聚糖形成1μmol木糖(还原糖)所需酶量为1个酶活力单位(U),并且采用还原糖法中的DNS法作为测定木聚糖酶酶活性的方法,该法具有合理性和科学性,建议以此作为木聚糖酶酶活性测定及酶活性单位定义的统一方法。

AMP脱氨酶活性测定的一种改进方法

改进了测定腺苷酸脱氨酶活力的紫外分光光度法 ,探讨了影响酶活测定的因素 ,得到最佳的酶活测定条件 :酶反应温度 30℃ ,pH范围 6 .1± 0 2 ,反应 15min加 10 %过氯酸溶液终止。此外 。

棉蚜啶虫脒不同品系解毒酶活性测定和增效剂作用的研究

【目的】通过棉蚜啶虫脒抗性、敏感品系解毒酶活性测定和增效剂试验,明确与抗药性产生密切相关的解毒酶。【方法】采用室内生物测定和生化分析方法,研究棉蚜啶虫脒品系解毒酶活性变化和增效剂的增效作用。【结果】棉蚜啶虫脒抗性品系羧酸酯酶、谷胱甘肽-S-转移酶、细胞色素P450s O-脱乙基比活力都高于敏感品系,其中抗感品系中羧酸酯酶、细胞色素P450s O-脱乙基比活力差异都达到了显著水平(P<0.05)。啶虫脒抗性品系三种解毒酶活性分别为敏感品系的2.91、1.04和1.69倍。增效剂磷酸三苯酯(TPP)、增效醚(PBO)、顺丁烯二酸二乙酯(DEM),在啶虫脒敏感棉蚜品系中的增效比为1.02、1.03、1.02,在啶虫脒抗性棉蚜品系中的增效比为1.77、1.61、1.04。【结论】酯酶和多功能氧化酶在棉蚜对啶虫脒的抗性产生中起到了重要的作用。

生物膜活性测定中TTC-脱氢酶活性测定法的改进

对生物膜活性测定中氯化三苯基四氮唑(TTC)-脱氢酶活性测定法进行了改进,解决了标准曲线制作稳定性差的问题,对测定中的诸多影响因素进行比较分析,确定了改进后的脱氢酶活性测定的最佳条件.结果表明,以甲苯作为萃取剂的液-液分层明显,提取效果好,操作简便.以硫化钠代替连二亚硫酸钠作还原剂,效果较好,显色稳定不褪色.反应的适宜pH值为8.6,适宜温度为38℃.同时确定了生物膜的最佳培养反应时间为6h.

植物多酚氧化酶活性测定方法的改进

文章介绍了多酚氧化酶反应产物邻醌的吸收光谱和酶测定反应的动力学分析,确定了邻醌的最高吸收光谱和酶测定的适宜参数。这一测定方法与原方法[1]相比,提高了多酚氧化酶测定的准确性、重复性和可比性,使灵敏度提高了5倍。

重症肌无力患者血乙酰胆碱酯酶活性测定及其临床意义

目的:探讨乙酰胆碱酯酶活性改变在重症肌无力(MG)发病中的作用。方法:采用三氯化铁显色分光光度比色分析法分别检测50例不同型MG患者与正常人血浆乙酰胆碱酯酶(P-AchE)、红细胞乙酰胆碱酯酶(E-AchE)活性。结果:患者组的P-AchE平均活性和E-AchE活性显著高于对照组,而且与重症肌无力临床类型和病情轻重有关,病情越重,其活性越高。结论:重症肌无力的发病机制除自身免疫因素外,乙酰胆碱酯酶活性改变也是一个重要因素,P-AchE和E-AchE活性测定可作为MG的一项辅助诊断方法,也可作为抗胆碱酯酶药物疗效观察指标。

TTC—脱氢酶活性测定仪的研制

我们研制的脱氢酶活性测定仪是一种在国内外首次开发研制的测定污水处理中污泥活性的专用仪器 ,它利用光电原理结合微处理系统 ,将模拟量直接转化为数字量 ,实现了浓度直读 ,解决了脱氢酶活性在实际应用中的困难 ,大大简化了测定程序 ,其灵敏度高 ,稳定性和重现性都很理想 .采用该测定仪进行检测 。

β-D-半乳糖苷酶活性测定方法的研究

应用分光光度计建立一种简便检测β D 半乳糖苷酶(GAL)活性的方法。酶反应条件研究表明,在总体积为1mL的0.1mol/L柠檬酸反应缓冲体系(pH值为4.5)中含0.8μmol的底物邻硝基苯β D 吡喃半乳糖(ONPG),含相当于2mg左右蛋白质的酶提取液,37℃孵育30min后用0.5mol/L碳酸钠1mL终止反应,用紫外分光光度计于405nm波长测定的吸光度值最能反映该酶活性。结果显示,该方法的批内变异系数在3.92%～4.89%之间,批间变异系数为3.8%,均小于5%;在所检测该酶质量浓度范围(1～2.5mg/mL)内线性关系良好,当反应体系的蛋白含量低于0.5mg/mL时,酶活性不能被检出;每组的平均回收率均在95%～105%之间,说明在所检测浓度范围内回收良好。因此,该方法具有稳定性好、灵敏度高、简便易行等特点,适合一般实验室应用。

红平菇纤维素酶活性测定条件的优化

为了更好的测定红平菇纤维素酶活性,对其纤维素酶活性测定条件进行了优化。在单因素试验的基础上,选择了pH值、温度、酶量为自变量,红平菇纤维素酶活性为响应值;利用响应面分析方法,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型。结果表明,红平菇纤维素酶活性测定最佳条件为温度40.3℃,酶量1.36 m L,pH 7.0。在此条件下,测得纤维素酶活性为4.5638 U。