兔抗仓鼠IgG酶结合物的制备

兔抗仓鼠ＩｇＧ酶结合物的制备赵雅静魏天文宁磊吴晓梅（卫生部兰州生物制品研究所７３００４６）张永兴景志忠（中国农业科学院兰州兽医研究所）仓鼠作为一种实验动物，已大量用于狂犬病疫苗、乙型脑炎疫苗的生产和其他科学实验，为提高生物制品的品质，在生产中必须定期...

抗鸡IgG单克隆抗体酶结合物的制备

抗鸡ＩｇＧ单克隆抗体酶结合物的制备张春红，杜伟贤，伍惠卿等（广东省农科院兽医研究所广州５１０６４０）近年来，核酸探针等一系列新技术不断问世并逐步投入了生产应用，但在兽医临床体液免疫效果及疫病情况监测量方面，血清抗体（主要是ＩｇＧ）水平的测定仍以其准确...

丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂中酶结合物稀释液对酶结合物稳定性影响的研究

目的通过对不同酶结合物稀释液的丙型肝炎病毒(HCV)抗体酶联免疫诊断试剂的稳定性对比试验,优选出最佳的酶结合物稀释液用于HCV抗体诊断试剂的生产。方法用不同酶结合物稀释液的HCV抗体酶联免疫诊断试剂,对丙型肝炎质控血清进行检测,检测出4℃试剂盒实验结果各样品S/CO值和37℃3d试剂盒实验结果各样品S/CO值,将实验结果进行对比。结果以中性PBST(加有Tween-20的磷酸盐缓冲液)为缓冲液,以BSA(牛血清白蛋白)和Casein(酪蛋白)无关蛋白作稳定剂的酶结合物稀释液的试剂的实验结果明显优于其余试剂。结论以PBST为缓冲液,以BSA和Casein无关蛋白作稳定剂组成酶结合物稀释液适用于HCV抗体酶联免疫诊断试剂的生产。

包被稳定剂和酶结合物稳定剂稳定效果的初步观察

包被稳定剂和酶结合物稳定剂稳定效果的初步观察薛茵，王金龙在ＥＬＩＳＡ检测中，为了能使予包被的抗原在较长时间内保持活性，常将予包被的酶标板真空干燥后密封保存。这样做的缺点是耗时。另一种常用的试剂是酶标记抗体，以ＨＲＰ标记的抗体为多。这种标记抗体极易失活...

酶结合物对乳糜泻患儿有帮助

美国斯坦福大学的Chaitan Khosla博士及其同事在8月的《胃肠病学》（Gastroenterology，2007；133：472—480．）杂志上报道，初步动物和体外研究提示，一种酶的结合物能够引起乳糜泻患者达到膳食麸质的胃消化。这种酶产品由从大麦发芽的种子提取的谷氨酰胺特异性内切蛋白酶和从鞘氨醇荚膜提取的脯氨酰基内肽酶构成。

模拟酶蛋白结合物替代HEMIN测定大气过氧化物

在选择最佳测定条件的基础上,对比了模拟酶蛋白结合物和HEMIN对过氧化物的测定效果.结果表明,HEMIN-BSA效果最好,其对过氧化物的荧光响应信号约是HEMIN的2倍.该物质在不改变激发和发射光谱的前提下可增强反应活性,提高反应灵敏度,使方法检测限降低至使用HEMIN时的1/3左右,最低线性值降至原来的1/5左右,同时。

应用薄膜载体大豆脲酶结合物的酶联免疫吸附试验诊断血吸虫病

酶联免疫吸附试验(ELISA)已作为一种敏感性和特异性较高的免疫诊断方法.作者等曾用聚氯乙烯(Polyvinyl Chloride,简称PVC)塑料薄膜作为固相载体代替聚苯乙烯微量反应板,建立了PF-ELISA(Plastic,Film-ELISA),Chandler[1]、裘丽姝[2]介绍了用脲酶结合物,尿素底物新系统取代通常使用的辣根过氧化物酶(HRP)及硷性磷酸酶,提高了试验的敏感性.

加酶时间对竞争ELISA法检测HBcAb的影响

目的观察加酶时间对竞争ELISA法检测乙肝核心抗体(HBcAb)结果的影响。方法将梯度稀释后含不同浓度的HBcAg加到包被着HBcAb的酶标反应孔内,在不同时间后,分别加入酶结合物(酶标HBcAb),并按说明书操作,检测结果并判读。结果酶结合物加的越迟,吸光度越低,即阳性“程度”越高。结论在竞争ELISA法检测HBcAb中,酶结合物的加样时间对HBcAb的检测有很明显的影响。加样越迟,越易导致假阳性。

肾靶向黄芩苷-溶菌酶的制备及对糖尿病肾病大鼠的药效学初步研究

目的:探讨肾靶向黄芩苷-溶菌酶的制备方法及其对糖尿病肾病(DN)大鼠的药效学作用。方法:运用低温搅拌的化学合成方法制备黄芩苷-溶菌酶结合物,通过紫外-可见吸收光谱与红外光谱对黄芩苷-溶菌酶结合物进行结构的表征。构建DN大鼠模型,黄芩苷-溶菌酶结合物处理大鼠后检测空腹血糖(FBG)、体重、血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平。结果:黄芩苷-溶菌酶结合物通过紫外-可见吸收光谱与红外光谱法进行定性分析,发现此结合物在结构上具备黄芩苷、溶菌酶的主要官能团,初步确定黄芩苷-溶菌酶结合物已合成;与正常对照组相比,DN模型组大鼠FBG显著升高,第8周BUN和Scr水平明显升高(P<0.05);黄芩苷和黄芩苷-溶菌酶处理后DN大鼠的FBG略有下降,但无统计学意义(P>0.05),且两个处理组之间也无统计学意义(P>0.05)。另外,黄芩苷和黄芩苷-溶菌酶处理后明显降低了BUN和Scr的水平,黄芩苷-溶菌酶组效果更佳(P<0.05)。结论:此化学方法可有效地合成黄芩苷-溶菌酶结合物,且与黄芩苷单独作用相比,此结合物具有更佳的治疗糖尿病肾病疗效。

精浆中性粒细胞弹性蛋白酶检测的临床应用

弹性蛋白酶是炎症过程中由分叶核中性粒细胞分泌的一种蛋白酶,其抑制剂结合物Ela/α1-PI被认为是男性隐匿性生殖道炎症标记物。应用酶联免疫分析技术检测精浆中的Ela/α1-PI,发现不育症组男性精液中的Ela/α1-PI水平明显高于有生育组。高水平的Ela/α1-PI与女性配偶输卵管损伤相关,抗生素治疗后,可以观察到Ela/α1-PI水平降低。但女性配偶输卵管损伤对抗生素治疗不敏感。除了诊断男性不育症之外,检测Ela/α1-PI还能帮助诊断前列腺及其他附性腺器官细菌性炎症。精浆Ela/α1-PI检测是一种易操作、可靠、定量的试验,可以用来诊断夫妇双方生殖道炎症及判断预后,而且,连续检测可以动态监测疗效。

电鳐乙酰胆碱酯酶标记第二抗体酶联免疫吸附测定法

目的:以电鳐乙酰胆碱酯酶标记二抗,建立该酶的酶联免疫吸附方法。方法:采用改良高碘酸钠氧化法。结果:标记过程中对AChE的酶活性影响较大的因素有pH值,温度以及NaIO4浓度。AChE酶标记的羊抗小鼠IgG的效价至少高于HRP,酶标记的羊抗小鼠IgG一个数量级。结论:制备的乙酰胆碱酯酶标记第二抗体在酶联免疫吸附测定法中高效地取代辣根过氧化物酶及碱性磷酸酶标记第二抗体。

有机相温敏性脂肪酶催化剂的结构和催化特性

采用不同链长PEO嵌段的Pluronic分子P123、P105、F127及F108，将其端羟基氧化为醛基，使其与脂肪酶CALB的氨基反应形成纳米结合物。TEM分析结果显示CALB-Pluronic结合物在甲苯中呈现直径为20～40 nm的纳米颗粒。所形成的CALB-Pluronic结合物在4-甲基-2-戊酮中呈现温度响应性，降低温度可使酶催化剂沉淀出来，结合物中的Pluronic高分子PEO嵌段越长，其最低临界共溶温度（LCST）越高。采用甲苯为溶剂、正丁醇及正己酸为底物，37℃下的催化实验结果显示 CALB-Pluronic 纳米结合物比天然 CALB 的表观活性提高4～6倍，而反应结束后可通过降温回收酶催化剂，显示出脂肪酶-Pluronic纳米结合物在有机相酶催化中的良好应用前景。

中缝背核内远位触液神经元超微结构及其与周围组织的联系

目的观察中缝背核内远位触液神经元的超微结构及其与周围组织的联系,为探讨该类神经元的功能奠定形态学基础。方法使用霍乱毒素亚单位B与HRP结合物(CB-HRP)-电镜法。结果1.中缝背核内远位触液神经元具有一般神经元的形态及各种细胞器结构;2.CB-HRP沉淀物主要分布在触液神经元高尔基复合体的trans面以及溶酶体内;3.触液神经元与其他中枢神经元之间存在着方向相反的两种突触联系。结论1.中缝背核内远位触液神经元在形态及细胞器构成上与其他中枢神经元未见明显不同;2.其高尔基复合体和溶酶体在摄取外来物质的代谢和转运过程中可能存在特殊功能;3.该类神经元可以在中缝背核与脑脊液之间起到双向传递的作用。

ELISA检测小鼠肉汁中旋毛虫抗体实验条件的研究

目的建立检测小鼠肉汁中旋毛虫抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。方法应用棋盘滴定方法,选择适宜的旋毛虫肌幼虫排泄-分泌(ES)抗原的包被浓度、酶结合物的种类及肉汁稀释液的种类。结果旋毛虫肌幼虫ES抗原的包被浓度为5.0μg/ml。辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗小鼠IgG对感染旋毛虫小鼠血清及肉汁的抗体检出率均为100%(10/10),HRP标记的葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)的检出率均为0(0/10),两者相比其差异有显著性(P<0.05)。对感染旋毛虫的小鼠肉汁分别用磷酸盐缓冲液(PBS)、磷酸盐缓冲液-Tween20(PBS-T)、生理盐水及含3%脱脂奶粉的PBS-T稀释后进行检测,发现含3%脱脂奶粉的PBS-T在各稀释度的P/N值均明显高于其他3种稀释液(P<0.05)。结论建立了检测小鼠肉汁中旋毛虫抗体的ELISA方法,合适的酶结合物为HRP标记的羊抗小鼠IgG,肉样的最佳稀释液为含3%脱脂奶粉的PBS-T,而HRP-SPA不适合于ELISA检测小鼠抗体IgG。

一步竞争ELISA法检测HBcAb影响因素的探讨

目的:研究操作因素对一步竞争ELISA法检测HBcAb的影响。方法:改变加入酶结合物的量,提供不同的孵育方式和孵育时间,延迟不同的加入酶结合物的时间,研究加样因素﹑孵育因素和延迟加入酶结合物时间因素对一步竞争ELISA法检测HBcAb的影响。结果:随加酶结合物量的增加样本S/cutoff值升高;实验中严格做到阴、阳性及空白对照和样本同时处理,则孵育方式和时间对样本S/cutoff值影响不大;延长加入酶结合物的时间,导致样本S/cutoff值下降。结论:操作因素严重影响一步竞争ELISA法检测HBcAb,规范操作规程可以减少操作因素对结果的影响。

一种检测弓形虫IgM类抗体的改良ELISA法

随着“宠物热”的升温,国内弓形虫病的发病率有增长趋势。本病缺乏典型症状,故诊断有赖于实验室检查。测定血清中IgM类抗体,有助于早期诊断,但常规采用的酶结合物或为酶标记抗弓形虫抗体或为酶标记抗人IgM的F(ab)片段,成本较高。我们采用酶标记弓形虫膜抗原,简化了操作步骤,降低了试剂成本,检测结果准确可靠,特报告如下:

平顶山市猪旋毛虫感染情况的血清学调查

1材料 抗原包被板、标准阴性、阳性血清,酶结合物（下称1号液）,洗涤液（下称2号液）,底物液（下称3号、4号液）,由河南省农业科学院畜牧兽医研究所提供。血清、全血稀释液自配。被检血采自全市17个屠宰厂、77个养猪场2564头猪。