半抗原直接包被的四环素酶联免疫吸附分析法的建立

为建立更优的四环素(tetracycline,TC)酶联免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),将TC与蛋白质偶联制备人工完全抗原免疫BALB/c小鼠,获得抗TC的单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)。采用酸性高锰酸钾羧化酶标板,将TC直接包被在酶标板上,并对ELISA反应体系条件进行优化,构建一种半抗原直接包被的TC ELISA检测方法。所制备的MAb特异性良好,交叉反应率低。所构建的检测方法最低检测限IC_(10)值为0.306 ng/mL,半数抑制率IC_(50)值为9.26 ng/mL,牛奶和水中加标回收率分别为96.46%~101.89%、96.84%~102.50%。与人工完全抗原包被的检测方法相比(IC_(10)值:0.624 ng/mL,IC_(50)值:28.24 ng/mL,牛奶和水中加标回收率分别为93.86%~105.12%、94.04%~105.56%),检测灵敏度有明显提高,并可用于实际样品中TC含量的检测,具备良好的应用前景。

水产品中氯霉素酶联免疫吸附分析法的构建与应用

以氯霉素(CAP)为研究对象,通过系统优化反应条件,构建CAP的间接竞争酶联免疫分析法,并应用于水产品中CAP残留量的检测。氯霉素间接竞争酶联免疫分析方法的最佳工作条件为:0.05μg/孔包被量(CAP-OVA),4℃包被14 h,0.5%脱脂乳粉封闭液,CAP抗体稀释倍数为1∶16000。结果表明:构建的间接竞争酶联免疫分析方法的灵敏度(IC50)为4.88μg/mL,检测限(IC15)为0.29μg/mL,方法特异性良好,对氯霉素结构类似物和同类抗生素的交叉率低于0.1%。对大黄鱼、缢蛏、牛蛙进行5.0,10.0μg/kg和20.0μg/kg加标回收试验,回收率在83.90%~100.73%范围。本方法的日内和日间变异系数范围为2.28%~6.96%,该检测结果与LC-MS/MS分析结果具有良好的一致。本研究构建的CAP酶联免疫吸附分析法操作简单,灵敏度高,可应用于多种水产品中氯霉素残留量的快速定量检测,同时也为其它小分子危害物的酶联免疫分析方法的构建提供技术借鉴。

酶联免疫吸附分析法测定食品中的苏丹红Ⅰ号

本研究建立了测定食品中苏丹红Ⅰ号含量的间接竞争酶联免疫分析法。首先对苏丹红Ⅰ号分子作了的修饰,再与载体蛋白交联制得免疫原和包被抗原,经动物免疫制得抗苏丹红Ⅰ号的抗体。在包被抗原为100μg/L,抗体为1:100,000倍稀释,标记二抗为1:15000倍稀释的优化条件下,测得检出限为0.12μg/L,IC50值(标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值的50%时所对应的待测物浓度)为0.74μg/L。苏丹红Ⅰ号在番茄酱和辣椒面中的回收率分别为106%和110%。样品仅需甲醇萃取再用缓冲液简单稀释就可以直接进行ELISA测定。

酶联免疫吸附分析法测定水产品及水中孔雀石绿和无色孔雀石绿

本文报道一种同时测定水产品及水样中孔雀石绿（MG）和无色孔雀石绿（LMG）的间接竞争酶联免疫吸附分析法。对无色孔雀石绿分子进行修饰，使其与载体蛋白交联，得到免疫原和包被抗原，经过多次免疫动物制得抗无色孔雀石绿的多克隆抗体。在优化的实验条件下，IC50值（标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值的50％时所对应的待测物浓度）为0．9～2．6μg／L，检出限为0．02—0．10μg／L，无色孔雀石绿在水样及水产品中的回收率为76．2～95．0％，与孔雀石绿的交叉反应率为95．25％。真实样品测定中，两种食用鱼养殖水样及一个鱼样中未检出孔雀石绿和无色孔雀石绿，但在观赏鱼养殖水样及另一鱼样中检出孔雀石绿和无色孔雀石，浓度分别为1．84μg／L和1．38μg/L。

氟甲喹单克隆抗体制备、鉴定及间接竞争酶联免疫吸附分析法

以氟甲喹(FLU)为原料,合成4个碳原子手臂的半抗原(FLUABA),采用活泼酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫抗原,通过免疫Balb/c小鼠及细胞融合,获得1株稳定分泌抗氟甲喹单克隆抗体的杂交瘤细胞株DB6-E7,其抗体亚类为IgG1,亲和力常数(KA)为8.19×108L/mol。将氟甲喹、FLUABA及6个碳原子手臂的半抗原FLUACA分别与卵清白蛋白(OVA)偶联作为包被抗原,研究异源包被对间接竞争ELISA灵敏度的影响。结果表明,异源包被可显著提高ELISA方法的灵敏度。基于最佳异源包被(FLU-OVA)的酶联免疫吸附分析法的IC50为26.33μg/L,检出限为4μg/L,定量检测范围为8.0～114μg/L(IC20～IC80)。与喹诺酮类药物及结构类似物几乎不存在交叉反应,特异性高。此方法可满足畜禽产品中氟甲喹残留的快速筛查。

用于测定多环芳烃的酶联免疫吸附分析法的研究

将芘丁酸(1-pyrenebutyricacid,PBA)通过活性酯法与牛血清白蛋白(BSA)共价结合,以PBA-BSA结合物为免疫原制备抗血清,利用该抗血清建立了测定多环芳烃类物质的间接竞争酶联免疫吸附分析法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA),并研究了10种多环芳烃与该抗血清的交叉反应。结果表明,该方法用于测定芘和芘丁酸的IC50值分别为0.132mg·L-1和0.253mg·L-1,检出限分别为0.1mg·L-1和0.01mg·L-1,该方法不受溶剂甲醇的影响,因此可以用于经过预富集的环境样品中多环芳烃类物质的测定。

酶联免疫吸附分析法测定黄瓜中的甲基对硫磷

采用自制多克隆抗体,考察了不同离子强度和不同甲醇含量对竞争反应的影响,并对反应体系进行了优化,最终建立了黄瓜中甲基对硫磷的残留检测ELISA方法。实验表明,甲基对硫磷对抗体竞争性结合的I50为0.13mg/L,方法检出限I20为6.7μg/L。除倍硫磷与杀螟硫磷表现了一定的交叉反应外,其它结构相类似的有机磷农药均无交叉反应。黄瓜样品经简单前与处理后分别采用ELISA和GC测定,用ELISA方法测得黄瓜中甲基对硫磷的添加回收率为83.10%￣93.46%,C.V为6.61%￣10.36%,最低检出限为0.003mg/kg,与GC测定数据基本相符,符合农药残留分析的要求。

酶联免疫吸附分析法在食品分析中的应用

本文简单介绍酶联免疫吸附分析法(ELISA),并就其在食品分析中的应用作了较详细的描述,ELISA可应用于食品微生物、食品毒素、残留农药、食品中其它成分以及转基因食品的检测中,并具有很广阔的应用前景。

酶联免疫吸附分析法测定环境水样中痕量药物吲哚美辛

将吲哚美辛与蛋白质载体结合,制成完全免疫抗原,经过多次动物免疫得到了性能优良的兔抗吲哚美辛抗体,在优化实验条件的基础上,建立了灵敏度高、特异性强、简便、稳定的测定水样中吲哚美辛的酶联免疫吸附分析方法(ELISA)。IC50值(标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值的50%时所对应的待测物浓度)为0.09μg/L^0.17μg/L,最低检出限为0.005μg/L^0.01μg/L。真实水样中,均发现含有吲哚美辛,浓度在0.016μg/L^0.083μg/L之间,水样的加标回收率在84.4%~127.0%之间。

酶联免疫吸附分析法测定苯并(a)芘和多氯联苯

对苯并(a)芘作了五种不同的化学修饰,并与载体蛋白交联,制备出十四种单克隆抗体.经单克隆抗体的筛选和实验条件的优化,建立了测定苯并(a)芘的酶联免疫吸附分析法.以4,4’-二氯联苯为测定多氯联苯的酶联免疫吸附分析法的起始物,作了二种化学修饰,制备出九种多克隆抗体,建立了以羊抗多氯联苯抗体为基础的酶联免疫吸附分析法,并用于土壤中多氯联苯的测定.

酶联免疫吸附分析法测定血清中醋酸亮丙瑞林含量

目的:建立一种检测微量醋酸亮丙瑞林的方法。方法:使用酶联免疫吸附分析法(ELISA),测定样品中醋酸亮丙瑞林含量。结果:自制的兔抗亮丙瑞林抗血清具有良好的特异性。使用 ELISA 测定醋酸亮内瑞林的最低检出限为0.025ng·mL^(-1),精密度(日内 RSD<23.5%,日间 RSD<22.4%)良好。不同浓度醋酸亮丙瑞林的平均回收率为97.3%。含样品血清冷冻(-20℃)保存30d 内,醋酸亮丙瑞林的检测结果稳定,重复性好。结论:本实验研究建立了一种操作简单、快速,特异性好、灵密度高的醋酸亮丙瑞林检测方法。

多溴联苯醚的酶联免疫吸附分析法

为实现对多溴联苯醚(PBDEs)的快速检测,选取C_(15)H_9Br_3O_3和C11H13O3NBr2作为2,2′,4,4′-四溴联苯醚(BDE-47)的半抗原进行合成,并通过1H核磁共振波谱(1HNMR)对其进行结构鉴定,采用活性酯法使C_(15)H_9Br_3O_3与锁孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联合成免疫原,免疫动物后制备2种特异性抗血清,建立了关于多溴联苯醚类物质的间接竞争抑制酶联免疫吸附分析(ELISA)法。研究表明,C_(15)H_9Br_3O_3-KLH抗血清测定BDE-47的IC50值为0.60 mg/L,检出限为0.08 mg/L,C_(15)H_9Br_3O_3-BSA抗血清测定BDE-47的IC50值为0.11 mg/L,检出限为0.01 mg/L。建立的间接竞争抑制ELISA法可以满足对经过预处理后的环境样品中多溴联苯醚进行快速筛查的要求。

酶联免疫吸附分析法应用于战场水环境TNT检测的可行性研究

为了快速检测战场水环境中TNT含量以判断水源可用性,提出了建立关于TNT的酶联免疫吸附分析法(ELISA)。分析ELISA的建立要点:根据TNT分子结构官能团的可改造性提出了合成半抗原的3种方法;对应3类半抗原采用不同蛋白偶联方法合成3种人工抗原;分析动物体对TNT人工抗原可产生有效免疫应答并可获得满足ELISA要求的抗血清;样品前处理方法可满足快速检测要求。从理论证明建立TNT的ELISA并满足检测要求的可行性;同时,提出了利用此法检测待解决和优化的问题。

化学发光法与酶联免疫吸附分析法联合测定甲胎蛋白的应用

目的:通过酶联免疫吸附分析法(ELISA)与磁粒子捕获免疫发光法(ICA)联合测定血甲胎蛋白(AFP)进行分析和探讨。方法:预先用ELISA对检测AFP的血清标品进行分组。然后根据浓度级别分组再进行检测血清AFP的浓度。结果:ELISA法可快速进行检测。发出检验报告。结论:可大大节约非常昂贵的ICA试剂,又能快速发出检验报告,无论是医院或者病患者都带来了非常可观的经济效益。

酶联免疫吸附分析法测定猪、鸡粪便中11种β_2-受体激动剂残留

以市售β2-受体激动剂酶联免疫检测试剂盒为基础,建立了可同时测定猪、鸡粪便中克仑特罗、溴布特罗、沙丁胺醇、特布他林、马布特罗、卡布特罗、马喷特罗、吡布特罗、西马特罗、西布特罗、克仑潘特11种β2-受体激动剂的酶联免疫吸附（ELISA）分析法。该方法对猪、鸡粪便样品的检出限为5 ng/g,猪粪便样品的添加回收率为57.3%-247.4%,鸡粪便样品的添加回收率为89.3%-177.3%,猪粪便样品重复测定结果的相对标准偏差为0.3%-14.3%,鸡粪便样品重复测定结果的相对标准偏差为0.2%-23.5%。

间接竞争酶联免疫吸附分析法测定土壤和面粉中的异丙隆

采用自制的抗异丙隆多克隆抗体建立了测定异丙隆残留的间接竞争酶联免疫分析方法,优化的包被抗原和抗体的浓度分别为0.1和0.016mg·L-1。结果表明,6种常用的与异丙隆结构相似的脲类除草剂的交叉反应都小于0.6%,标准曲线的线性范围为3.42～121.33ng·mL-1,线性相关系数r2=0.9410,方法的检测限为3.42ng·mL-1。利用建立的间接竞争ELISA方法检测土壤和面粉样品中的异丙隆,测得土壤中异丙隆的加标回收率为100%～108%,变异系数为3%～6%;面粉中异丙隆的加标回收率为81%～84%,变异系数为5%～7%。

酶联免疫吸附分析法测定猪、鸡粪便中11种β_2–受体激动剂残留的不确定度评定

以市售β_2–受体激动剂酶联免疫检测试剂盒为基础,对采用酶联免疫吸附分析法测定猪、鸡粪便中11种β_2–受体激动剂残留的不确定度进行评估,找到影响不确定度的主要因素,为控制实验过程和评价检测结果可靠性提供依据。本研究对标准溶液配制、样品称量、样品前处理过程、样品添加回收率、酶联免疫吸附分析测试程序、酶标仪吸光度示值误差等测量不确定度来源进行了分析,通过评定各不确定度分量与不确定度大小,得到猪、鸡粪便中11种β_2–受体激动剂扩展不确定度的范围分别在0.25~2.4 ng/g和0.42~1.7 ng/g范围内。由各因素对合成不确定度贡献比的分析可知,标准溶液配制、样品前处理过程、样品添加回收率、酶联免疫吸附分析测试程序、酶标仪吸光度示值误差是主要的影响因素。通过合理地控制各影响因素有利于提高检测结果的准确性与可靠性。

酶联免疫吸附分析法测定水中双氯芬酸钠

本研究报道一种高灵敏度的测定自来水和表面水中药物残留双氯芬酸钠含量的间接酶联吸附分析法(ELISA)。在包被抗原为20μg/L,抗体为1∶20000倍稀释,辣根过氧化物酶-羊抗兔IgG为1∶20000倍稀释的优化条件下,双氯芬酸钠的检出限(LOD)为0.004μg/L^0.008μg/L,IC50值(标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值的50%时所对应的待测物浓度)为0.03μg/L^0.12μg/L。双氯芬酸钠在自来水中和表面水中的回收率分别为96%和113%。表面水存在一定的基体效应,但仅需要简单过滤稀释就可以消除。

间接酶联免疫吸附分析法对环境水样中左旋18-甲基炔诺酮含量的测定

本文报道测定环境水样中的左旋18-甲基炔诺酮(NG)的间接酶联免疫吸附分析法(ELISA)。通过对左旋18-甲基炔诺酮的化学修饰,将左旋18-甲基炔诺酮与蛋白质载体结合,制成完全免疫抗原,经过多次动物免疫得到了兔抗左旋18-甲基炔诺酮抗体,在优化实验条件的基础上,建立了灵敏度高、特异性强、简便、稳定的测定水样中左旋18-甲基炔诺酮的酶联免疫吸附分析方法。IC50值(标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值的50%时所对应的待测物浓度)在1μg/L^5μg/L,最低检出限为0.05μg/L^0.1μg/L。水样的加标回收率在88%~140%之间。真实环境水样中,均发现含有左旋18-甲基炔诺酮,浓度在0.3μg/L-0.6μg/L之间。

心肌肌钙蛋白Ⅰ自身抗体间接酶联免疫吸附分析法的建立

目的建立以重组心肌肌钙蛋白I-C(cTnI-C)融合蛋白为包被抗原的间接酶联免疫吸附分析法(ELISA),检测人血循环中的抗cTnI自身抗体,为判断心肌损伤的预后提供依据。方法采用自行构建表达的cTnI-C融合蛋白作为包被抗原,以棋盘法优化实验条件,建立检测人血清cTnI自身抗体的间接ELISA方法。采用建立的间接ELISA法在121例急性心肌梗死(AMI)中筛查抗cTnI自身抗体,并用蛋白印迹法(WB)进行确证。结果 121例AMI血清抗cTnI抗体的阳性率为10.74%,ELISA试验的灵敏度100%,特异性95.37%,Kappa值为0.815。结论以cTnI-C融合蛋白作为包被蛋白建立的间接ELISA法具有良好的敏感度、特异性,可用于人血清抗cTnI自身抗体的筛查。