纳米抗体多聚化测略提升间接竞争性酶联免疫吸附实验检测黄曲霉毒素M_(1)的灵敏度

酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容易变性,贮存期短,易受到检测环境中其他物质干扰而造成假阳性或假阴性等。该实验使用实验室前期获得的抗黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))纳米抗体(nanobody-M4,Nb-M4)与C4结合蛋白(recombinant C4 binding protein alpha,C4BPa)C端片段融合形成自组装七聚体融合蛋白(Nb-M4-C4 bpα),并基于该七聚体开发应用于乳制品中AFM_(1)的间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。在最佳实验参数下,AFM_(1)的IC_(50)为0.038 ng/mL,检测限为0.009 ng/mL,较单体Nb-M4的提高了8.63倍和5.56倍。与AFM_(1)类似物和其他常见真菌毒素的交叉反应可忽略不计,且在加标乳样中获得了良好的回收率和可重复性。此外,将所开发的方法应用于实际样品中AFM_(1)的分析,结果与HPLC的结果具有很好的相关性(R^(2)=0.995)。该研究表明,自组装的七聚化纳米抗体是改善亲和力和信号放大的有效策略,今后可用于灵敏、选择性和快速检测食品中的霉菌毒素和其他小分子污染物。

促凝血与抗凝血对酶联免疫吸附实验中HBsAg检测结果的影响研究

目的 分析促凝血和抗凝血样本对于酶联免疫吸附实验(ELISA)中乙肝病毒表面抗原(HBsAg)检测结果的影响。方法 选取2022年1月至2022年6月驻马店市中心血站共3 680例无偿献血者的血液样本进行研究,均留取血液样本两份,其中一份采取促凝血处理,另外一份采取抗凝血处理,所有血液样本使用的检测仪器及试剂均相同,并于相同条件下采取ELISA检测HBsAg;并依据HBsAg弱阳性参考品的比例加入抗凝剂开展测定;比较促凝血样本和抗凝血样本ELISA检测HBsAg的样本吸光度与标准吸光度比值(S/CO值)情况。结果 促凝血样本采取ELISA法检测HBsAg显示阳性48例,阳性率是1.30%;抗凝血样本采取ELISA法检测HBsAg显示阳性30例,阳性率是0.82%。促凝血样本用于ELISA法检测HBsAg的阳性率高于抗凝血样本,差异有统计学意义(P <0.05)。3 680例无偿献血者促凝血样本和抗凝血样本内共有18名的HBsAg检测结果存在不一致,促凝血样本HBsAg检测的S/CO值普遍高于抗凝血样本。经重复实验后,上述18例样本复试结果一致,均为阳性,重复实验结果和促凝血样本的检测结果相同。HBsAg质控血清依据比例加进抗凝剂后,伴随抗凝剂量不断升高,HBsAg含量以及S/CO值逐渐降低。促凝血样本用于ELISA法检测HBsAg的S/CO值高于抗凝血样本,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 和促凝血样本相比,酶联免疫吸附实验中采取抗凝血样本检测HBsAg可能产生漏检的情况,建议留取促凝血样本开展检测,以确保检测结果的准确度。

应用快速孵育法优化酶联免疫吸附实验过程探讨——以乙型肝炎病毒表面抗原检测为例

目的利用快速孵育法优化酶联免疫吸附实验操作流程,通过缩短孵育时间,以提高工作效率。方法收集化学发光法定量检测乙肝表面抗原阳性高值样本30例、阳性中值样本30例、阳性临界值样本30例、阴性样本30例,使用ELISA试剂盒说明书推荐方法和快速孵育法同时进行检测,比较检测结果相关性。结果使用酶标板孵育器将孵育时间缩短至原来的1/2、1/3时,ELISA试剂盒说明书推荐方法、快速孵育法与化学发光法检测结果符合率100%;当孵育时间缩短至原来时间的1/4时,两种方法与化学发光法阴性、高值和中值样本检测结果符合率100%;临界值样本检测时,ELISA试剂盒说明书推荐方法与化学发光法检测结果符合率100%,快速孵育法与化学发光法结果 6例不一致,检测结果符合率80%。结论通过实验证实,酶联免疫吸附实验时,快速孵育法可满足临床检测,可将孵育时间缩短至原试剂盒推荐时间的1/3或1/2,可提高工作效率。

酶联免疫吸附实验中全自动立式洗板法应用效果评价

目的 与传统手工洗板法、水平注液式洗板法相比较,评价酶联免疫吸附实验中全自动立式洗板法的应用效果.方法 评价全自动立式洗板法洗板机的性能,包括微孔中液体残留量测定、针头堵孔可能性检测、交叉污染可能性检测.收集乙型肝炎病毒表面抗原化学发光法定量检测结果分别为阴性、弱阳性、阳性、强阳性的四组样本各30例,使用酶联免疫吸附实验原理乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒检测,其中洗板步骤分别使用手工洗板法、水平注液式洗板法、全自动立式洗板法三种方法,由酶标仪读取结果,记录洗板时间,数据利用r检验进行统计学分析.结果 本研究中全自动立式洗板法酶标板微孔中液体残留量均值为0.0087±0.0002μL,＜0.01μL;全自动立式洗板机使用6个月（每周至少使用2次）,96个针头未出现堵孔现象,洗板机6个月前后的直线水柱长度分别为6.53±0.27cm、6.58 ±0.31cm,两组数据差异无统计学意义;阳性质控品和阴性质控品交叉检测,及阳性混合血清和阴性混合血清交叉检测未出现交叉污染现象.120例临床样本利用三种洗板法的定性检测结果一致,其中30例弱阳性样本,均有1例假阴性且来源于同一样本;三种洗板法检测阴性、弱阳性、阳性、强阳性样本的测定结果差异无统计学意义（P＞0.05）.手工洗板法、水平注液式洗板法、全自动立式洗板法的洗板时间分别为8min、5min、20s.结论 全自动立式洗板法可满足酶联免疫吸附实验临床检测中洗板要求.

胶体层析法、酶联免疫吸附实验法应用于艾滋病病毒抗体初次筛查中的研究价值

目的 探讨胶体层析法、酶联免疫吸附实验法在艾滋病病毒(HIV)抗体初次筛查中的应用,并分析其研究价值,为临床诊断与合理治疗提供指导。方法 回顾性分析于贵阳市疾病预防控制中心利用全国艾滋病实验室检测管理系统收集的2020年9月至2021年9月贵阳市的308例疑似艾滋病(AIDS)检测者的临床资料,所有检测者均进行胶体层析法、酶联免疫吸附实验法及免疫印迹法检测HIV抗体,以免疫印迹法为金标准,分析胶体层析法、酶联免疫吸附实验法的检测结果、对HIV感染的诊断效能及酶联免疫吸附实验法阳性样本带型分布情况。结果 308例检测者中免疫印迹法检测出阳性有220例,阴性88例,酶联免疫吸附实验法检测出阳性219例,阴性89例,阳性检出率为71.10%(219/308),低于免疫印迹法阳性检出率的71.43%(220/308),但两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);胶体层析法检测出阳性有220例,阴性88例,阳性检出率为71.43%(220/308),与免疫印迹法阳性检出率71.43%(220/308)比较,差异无统计学意义(P>0.05);酶联免疫吸附实验法检测对HIV感染诊断的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值均显著高于胶体层析法检测(均P<0.05);由酶联免疫吸附实验法检测阳性样本带型分布情况可见,219例AIDS患者中gP160、gP120带型出现率最高,出现率为100.00%,P55出现率最低,出现率为32.88%。结论 酶联免疫吸附实验法与胶体层析法对于HIV感染的诊断均具有一定的检测价值,且酶联免疫吸附实验法在HIV抗体初筛中灵敏度、特异度、准确度较高于胶体层析法。

一种检测人类血小板因子4的定量酶联免疫吸附实验

背景血小板因子4（PF4）是体内和体外检测血小板激活和α-颗粒分泌的标记物。PF4同时也是保存期间释放的主要的CXC细胞因子。血小板保存期间释放的细胞因子是引起非溶血性输血反应的原因。PF4的定量测定需要一种既可靠又灵敏的实验。为了达到这个目的，作者利用商业用的抗人类PF4抗体研制出一种灵敏、经济的三明治酶联免疫吸附实验（ELISA）。研究设计及方法研制的ELISA法用于检测人类血小板或激活的血小板分泌的PF4。

影响酶联免疫吸附实验边缘效应的探讨

目的酶联免疫吸附实验（ELA）边缘效应对检测结果的影响.方法2011-2013年血液四项检测乙肝、丙肝、梅毒、艾滋的酶联免疫吸附实验（ELISA）检测结果发生边缘效应的14个血液样本用同一批号试剂进行双孔复查,与初次结果比较.结果14份标本中2号标本“灰区”判为有反应性,10号标本复查有反应性,其余标本复查结果无反应性,复查结果与初次结果比较P〈0.05具有显著性差异.结论酶联免疫吸附实验的全过程实施质量控制,避免边缘效应的发生,减小实验室工作人员的工作量,减少献血者的淘汰率,对建立固定无偿献血着队伍的归队具有重要意义.

酶联免疫吸附实验检测HIV抗体影响因素探讨

通过对酶联免疫吸附实验检测HIV抗体的检测前、检测中和检测后各相关影响因素的分析,探讨各因素对结果的影响,以便寻找解决的方法和加强质控管理,从而保证检测结果的准确性和精确性。

酶联免疫吸附实验在检测梅毒中的应用

目的探讨酶联免疫吸附实验在梅毒检测中的应用。方法采用酶联免疫吸附试验和明胶颗粒凝集试验。结果用两种方法检测标本360份,酶免法与明胶颗粒凝集实验检测出都为阳性标本78份,用两种方法检测都为阴性的标本276份。结果显示,酶免法与明胶颗粒凝集法检测没有差异。结论酶免法在检测梅毒的敏感性、特异性方面与明胶颗粒凝集法的符合率高,可用于梅毒检测和筛查。

应用酶联免疫吸附实验检测肠出血性大肠村菌Ｏ１５７：Ｈ７

目的：制备和纯化Ｏ１５７：Ｈ７抗原，免疫家兔和豚鼠，获得高效价的抗Ｏ１５７：Ｈ７免疫血清并进行纯化及酶标记。建立对Ｏ１５７：Ｈ７感染患者快速诊断方法，做到早期发现及时治疗，有效控制疫情的蔓延。方法：ＥＬＩＳＡ双抗休夹心法检测Ｏ１５７：Ｈ７抗原，步骤：包被特异性抗体，加处理后的粪便等标本，然后加入抗Ｏ１５７：Ｈ７酶结合物，最后加入底物显色。结果：本课题所研制的抗Ｏ１５７：Ｈ７呈阳性反应，而与其他相关细菌无交叉反应。结论：应用酶联免疫吸附试验（即双抗体夹心法）对肠出血大鼠肝菌Ｏ１５７：Ｈ７抗原的检测较常规法实验程序简捷、快速、敏感。临床和现场验证结果表明，其方法具有灵敏度高，特异性强操作简单等特点，为肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的鉴定及快速诊断提供了一种新的检测手段。

献血者血液标本酶联免疫吸附实验及核酸检测对乙型肝炎经输血传播风险发生率的影响

目的:研究献血者血液标本酶联免疫吸附实验(ELISA)及核酸检测(NAT)对乙型肝炎经输血传播风险发生率的影响.方法:选取我站2016年8月~2018年9月采集的无偿献血者血液标本35478份作为研究对象.所有血液标本均行ELISA检测,并对ELISA检测阴性者行NAT检测.统计ELISA、 NAT检测结果及乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)阳性标本乙肝两对半检测结果.结果: 35478份无偿献血者标本进行ELISA筛查,共发现乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性样本108份,阳性率为0.30%,对剩余35370份阴性样本进行NAT检测,其中34例为阳性,阳性率为0.10%;对34例HBV-DNA阳性者进行乙肝两对半检测,发现抗-HBe阳性者10例(29.41%),抗-HBc阳性者24例(70.59%);抗-HBe及抗-HBc同时阳性者8例(23.53%);全部阴性者5例(14.71%).结论:临床应联合ELISA及NAT检测技术对献血者血液标本进行筛查,以降低乙型肝炎经输血传播风险发生率.

酶联免疫吸附实验假阳性产生原因探讨

目的:探讨酶联免疫吸附实验假阳性产生原因。方法:分析总结ELISA法产生假阳性的原因。结果及结论:以严谨的工作作风检测每一分标本,必须排除各种影响因素的干扰才能为临床提供正确可靠的诊断依据。

基孔肯雅病毒免疫球蛋白G抗体酶联免疫吸附实验快检试剂盒的研制与应用

目的研制检测基孔肯雅热免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)抗体的酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)快检试剂盒,为流行病学调查及实验室诊断提供新的工具。方法以基孔肯雅病毒特异性原核表达抗原pMal-chik23为诊断抗原,以辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记抗IgG二抗为显色抗体,正交实验对诊断抗原、待检血清、二抗工作浓度进行优化,并对包被、封闭、孵育及显色等反应条件进行系统优化,在临床大样品评估的基础上,确定ELISA检测的临界值。在此基础上,对ELISA反应的特异性、灵敏性及稳定性进行评估,研制组装检测基孔肯雅热IgG抗体的ELISA快检试剂盒。结果经系统优化,研制、组装了检测基孔肯雅热IgG抗体的间接ELISA快检试剂盒,其最佳反应条件为:1.0μg/mL包被抗原经碳酸盐缓冲液4℃包被24 h,HBV封闭液37℃封闭4 h,待检样品1∶101稀释后,100μL/孔,37℃反应40 min,磷酸盐吐温缓冲液(phosphate buffered saline with tween 20,PBST)洗涤4次,HRP标记兔抗人IgG 1∶20000、HRP标记羊抗鼠IgG 1∶10000稀释后,100μL/孔,37℃反应30 min,PBST洗涤5次,TMB显色液100μL,37℃显色10 min,50μL 20%H2SO4终止反应,双波长450/630 nm测定A450 nm值。试剂盒性能评估结果表明,所研制试剂盒与所试阳性样品检测A450 nm值>0.43,阴性样品检测A450 nm值<0.04,S/N比值>10,与辛德毕斯、盖塔、罗斯河、登革等9种其他相近虫媒病毒均无交叉反应,并具较高稳定性,板内变异系数为0.76%~2.12%,板间变异系数为0.64%~1.85%,批间变异系数为0.83%~2.31%,均小于3%,4℃保存1年性能无明显下降。结论研制了检测基孔肯雅热IgG抗体的间接ELISA快检试剂盒,具备良好的灵敏性、特异性与稳定性。

用酶联免疫吸附实验法检测不同海拔水平大鼠垂体组织匀浆中ACTH的含量

目的:观察不同海拔下大鼠腺垂体远侧部促肾上腺皮质激素(ACTH)的变化,探讨ACTH在机体对高原应激反应中的调节作用。方法:大鼠随机分为1700m、3100m、4050m3组,分别运到高原相应海拔12天后,用酶联免疫吸附实验法分别检测不同海拔水平大鼠垂体组织ACTH的含量。结果:ACTH含量随海拔的下降而降低,海拔4050m组大鼠组织ACTH的含量高于3100m和对照组,但无统计学差别(P>0.5)。是因免疫系统和下丘脑-垂体细胞产生的激素在细胞内无储存,而是在反应后产生并发挥作用。结论:急性缺氧可引起肾上腺皮质功能分泌增加,可能主要是通过外周化学感受器的刺激,反射性引起下丘脑释放ACTH增多,而使肾上腺皮质激素分泌增加。提示ACTH可能是与高原低氧应激反应的重要生理和病理体液因子,并在短期高原低氧应激反应中有重要的作用。

一种适用于教学的酶联免疫吸附试验的抗原抗体系统制备

目的:探讨设计一种教学成本低、便于教学使用、有助于培养医学生综合实验设计能力和提高实验基本操作技能的酶联免疫吸附实验抗原抗体系统。方法:以提纯的人IgG免疫家兔获取兔抗人lgG抗体,再用其包被酶标反应板,以人血清(人IgG)作抗原,用酶标记羊抗人IgG抗体结合抗原及催化底物显色反应。结果:该双抗体夹心法,底物显色反应清楚肉眼即可作出判定,非特异干扰极小。结论:我们设计的酶联免疫吸附实验——双抗体夹心法原理清晰、便于理解和掌握、教学成本较低、结果易于观察、便于教学大量使用。

应用酶联免疫吸附试验检测肠出血性大肠杆菌O157:H7

目的制备和纯化O157:H7抗原,免疫家兔和豚鼠,获得高效价的抗O157:H7免疫血清并进行纯化及酶标记。建立对O157:H7感染患者快速诊断方法,做到早期发现及时治疗,有效控制疫情的蔓延。方法ELISA双抗体夹心法检测O157:H7抗原。步骤:包被特异性抗体,加处理后的粪便等标本,然后加入抗O157:H7酶结合物,最后加入底物显色。结果本课题所研制的抗O157:H7酶结合物只对O157:H7呈阳性反应,而与其他相关细菌无交叉反应。结论应用酶联免疫吸附试验(即双抗体夹心法)对肠出血性大肠杆菌O157:H7抗原的检测较常规法实验程序简捷、快速、敏感。临床和现场验证结果表明,其方法具有灵敏度高,特异性强操作简单等特点,为肠出血性大肠杆菌O157:H7的鉴定及快速诊断提供了一种新的检测手段。

人甲状腺球蛋白测定酶联免疫吸附试验方法的建立及应用

目的建立一种简便、快速、灵敏、可靠的测定甲状腺球蛋白的酶联免疫吸附试验方法。方法在纯化甲状腺球蛋白 (TG)的基础上 ,制备出 TG单克隆抗体 ,并用纯化的 TG多抗包被 ,酶标记单克隆抗体 ,建立双抗体夹心 EL ISA。结果经临床 5 0例健康人测定 ,其范围在 9～ 16 μg/ L。方法的批内变异为 7.76 %～ 9.6 9% ,批间变异为 12 .3%～ 12 .6 %。检测低限为 0 .13μg/ L,可定量报告低限为 1.0 μg/ L。结论人甲状腺球蛋白 EL