新型酸性磷酸酶“Turn-on”型荧光底物

酸性磷酸酶(ACP)是前列腺癌、戈谢病、肾病等疾病的重要生物标记物,因此开发灵敏、高选择性的ACP检测方法具有重要的意义。目前,已发展出多种ACP检测方法,包括免疫法、光谱法、色谱法、电化学法等;其中,荧光检测方法因灵敏度高、选择性好、快速、准确等优点备受关注。通过席夫碱反应,利用2-氨基苯硼酸(2-APBA)二聚体和磷酸吡哆醛(PLP)合成了一种新型的ACP“Turn-on”型荧光底物APBA-PLP(ABPL)。反应后,PLP的—CHO基团和2-APBA二聚体的—NH 2基团的特征峰消失,同时ABPL的C N基团的特征峰出现;此外,^(1)H和^(1)H—^(1)H COSY核磁波谱的信号峰与ABPL的结构相对应。以上表征结果证实了ABPL的成功合成。进一步,将ABPL应用于ACP检测。我们发现向ABPL水溶液中加入ACP后,体系的荧光强度增强,机理为:2-APBA二聚体为聚集诱导发光增强(AIEE)分子,其AIEE特性源于2-APBA二聚体的高度有序堆积;当2-APBA二聚体分子上引入PLP后(即合成ABPL),分子的高度有序堆积结构被破坏;加入ACP后,PLP水解为吡哆醛并从2-APBA二聚体分子上脱落,2-APBA二聚体分子又可重新进行高度有序堆积,表现为体系的荧光增强。在0~5 U·L^(-1)活性范围内,376.5 nm处的相对荧光强度与ACP活性之间呈现出良好的线性关系(R 2=0.99)。此外,当ACP、果胶酶、木瓜蛋白酶和脂肪酶的活性分别为4、50000、80000和10000 U·L^(-1)时,四种酶对应的相对荧光强度分别为0.2、-0.006、0.03和0.05。该结果表明ABPL对ACP具有高选择性。ABPL分子易合成,对ACP具有线性和高选择性响应,为设计合成可用于ACP检测的新型高效荧光底物提供了新策略。

淫羊藿总黄酮对去势大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b的影响及与骨密度的相关性

目的:探讨淫羊藿总黄酮(TFE)对去势大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)及骨密度的影响。方法:10月龄雌性SD大鼠去卵巢法建立大鼠模型,随机数字表法分为空白对照组(N)、模型对照组(O)、TFE低(T_(L))、中(T_(M))、高(T_(H))剂量组,β-雌二醇(E)组各10只,灌胃干预90d。用抗酒石酸酸性磷酸酶试剂盒测定TRACP-5b含量,用小动物分析软件测定活体全身骨密度。结果:(1)TRACP-5b水平O组明显高于N组,具有显著性差异(P<0.01),T_(L)、T_(M)、T_(H)和E组TRACP-5b水平明显低于O组,具有显著性差异(P<0.01)。(2)与N组比较,O、T_(L)、T_(M)、T_(H)和E组腰椎骨密度均下降,唯有O组呈显著性差异(P<0.05);与O组比较,T_(M)、T_(H)组腰椎骨密度升高、呈显著性差异(P<0.05),E组腰椎骨密度升高、具有显著性差异(P<0.01)。(3)与N组比较,O、T_(L)、T_(M)、T_(H)和E组全身骨密度均下降,唯有O组差异有统计学意义(P<0.05);与O组比较,T_(L)、T_(M)、T_(H)和E组全身骨密度均升高,唯有E组呈显著性差异(P<0.05)。结论:TFE可以降低去势大鼠血清中TRACP-5b的含量,并与去势大鼠腰椎骨密度、全身骨密度呈一定的量效关系。

凋落物和根系对沂蒙山区三种森林恢复方式土壤酸性磷酸酶动力学特征的影响

酸性磷酸酶动力学特征可反映不同底物供应下土壤磷转化状况。以人工恢复的引进种黑松人工林和本地种栓皮栎人工林以及自然恢复的天然次生林为研究对象,开展凋落物添加去除和根系去除对土壤酸性磷酸酶动力学特征的影响研究。结果表明:(1)三种森林恢复方式下土壤酸性磷酸酶活性和最大反应速度(V_(max))均为双倍凋落物>对照>去除凋落物>去除根系>无输入;(2)改变凋落物和根系输入对酸性磷酸酶的半饱和常数(K_(m))和催化效率(V_(max)/K_(m))影响不大;(3)酸性磷酸酶活性受速效磷含量的反馈调节;土壤氮可利用性和含水量显著影响酸性磷酸酶活性。改变凋落物和根系输入对引进种黑松人工林土壤有机磷转化能力影响最大,天然次生林次之,本地种栓皮栎人工林最稳定。根系对土壤酸性磷酸酶动力学特征的影响大于凋落物。其结果可为暖温带森林恢复,应对气候变化和森林防火、收集凋落物等管理措施提供理论依据。

高度糖基化终产物对破骨细胞酸性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶活性的影响

目的 观察高度糖基化终产物 (AGE)对破骨细胞酸性磷酸酶 (ACP)和抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRACP)活性的影响。方法 用人血清白蛋白和葡萄糖恒温孵育制备人AGE蛋白 ,应用酶消化法从人髂骨松质骨分离培养破骨细胞。将AGE蛋白与培养的破骨细胞共同孵育 ,通过酶动力学法测定培养液ACP和TRACP活性。结果 低浓度AGE蛋白 (50～ 2 0 0 μg ml)对破骨细胞ACP和TRACP活性无显著影响 ,而高浓度 (50 0～ 1 0 0 0 μg ml)则使ACP和TRACP活性显著增高 ,且ACP活性的增高主要来自TRACP活性的增高。结论 上述结果提示AGE蛋白可能促进破骨细胞的破骨功能。

模拟酸雨对土壤酸性磷酸酶活性的影响及机理

通过恒温恒湿连续培养的方法,研究了外源酸雨对土壤pH值、酸性磷酸酶活性的影响,同时运用紫外差光谱和荧光光谱对其机理进行了探讨.结果表明,酸雨通过改变土壤pH值而影响酶活性,pH6.66的近中性土壤酶活性呈现激活-抑制的变化过程;而pH4.61的酸性土壤酶活性持续下降.溶液构象研究表明,pH值是通过改变酶的肽链构象、氨基酸残基微环境而影响其活性的.

磷胁迫对不同杉木无性系酸性磷酸酶活性的影响

缺磷是限制目前农林业产量的一个重要因子,传统的农林业生产主要通过施肥和土壤改良来满足植物对 磷的需求,近年来人们开始发掘磷高效利用植物来替代传统方法提高磷的利用效率。杉木(Cunninghamia lanceola- ta)是我国亚热带地区最重要的造林树种之一,生长快、材质好、产量高,在中国人工林经营中占有重要地位。为揭 示磷素胁迫条件下杉木无性系酸性磷酸酶的变化规律和筛选磷高效利用杉木无性系,通过土培试验,设计4种磷 素处理水平(正常供磷16.mg·kg-1、轻度磷胁迫8 mg·kg-1、中度磷胁迫4 mg·kg-1、重度磷胁迫0 mg·kg-1),进行磷 素胁迫条件下不同杉木无性系酸性磷酸酶(APA)活性的比较研究。结果表明:缺磷条件下1年生杉木叶片和根际 的APA活性明显高于正常供磷处理。随缺磷时间的延长、不同杉木无性系酸性磷酸酶的变化规律不同,其中8号、 24号、37号无性系叶片和根际的APA活性明显高于正常供磷处理;5号、9号无性系根际APA活性虽然增幅较大, 但其叶片酶活性变化较小;3号、23号、34号无性系整体而言对磷胁迫不敏感,缺磷条件不对其叶片APA及根系 APA活性造成显著影响。在磷胁迫条件下,杉木无性系可通过叶片及根际酸性磷酸酶活性的增强来适应环境磷缺 乏,但不同杉木无性系对磷缺乏的适应性存在明显差异。

酸性磷酸酶活性与大豆耐低磷能力的相关研究

在水培条件下研究了11个南方春大豆地方品种和育成品种对低磷胁迫反应的差异及其与酸性磷酸酶活性（APA）的相关关系。结果表明，不同大豆品种的地上部干重、根干重、植株全磷和全氮积累量差异极显著（P＜0.01），表现出品种间耐低磷的差异性。大豆品种地上部干重、根干重、植株全磷和全氮量与APA的相关性均达到显著或极显著水平。APA是大豆品种磷效率的一种机制，它可作为耐低磷品种筛选的一个生化指标。

棘尾虫酸性磷酸酶的定位及诱导表达

本文利用电镜对贻贝棘尾虫 (Stylonychiamytilus)体内酸性磷酸酶的定位进行了观察。发现其体内除含有溶酶体性的酸性磷酸酶 (ACPase)外 ,在纤毛内部还存在非溶酶体性的ACPase。另外 ,本文还利用光镜和酶细胞化学技术观察并比较了棘尾虫年轻态和衰老态个体体内ACPase在食物诱导下的表达量随时间发生的动态变化和差异 。

三丁基锡对文蛤鳃酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和Na^+,K^+-ATP酶活性的影响

在实验生态条件下,观察浓度分别为0.1、1.0和10ng/L的三丁基锡(TBT)暴露2、8、20d以及恢复7d和20d后对文蛤鳃酸性磷酸酶(aaciphosphatase,ACP)、碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AKP)以及Na+,K+-ATPase活性的影响。结果显示在暴露早期TBT不影响ACP、AKP活性,暴露时间延长则主要表现出诱导作用。TBT具有抑制Na+、K+-ATPase活性作用,可观察效应浓度为0.1ng/L。Na+、K+-ATPase可作为一种潜在的有机锡污染监测的生物标志物。

重金属汞对土壤酸性磷酸酶的影响及其机理

通过土壤培养试验、紫外吸收光谱和荧光光谱技术 ,研究了重金属汞对土壤酸性磷酸酶催化活性、动力学性质的影响及机理 .结果表明 ,汞对土壤酸性磷酸酶活性、酶促反应动力学性质均具有显著影响 .汞对土壤酸性磷酸酶的作用可能为非竞争与反竞争混合的抑制类型 .而汞对麦芽酸性磷酸酶的抑制作用为反竞争性抑制 .重金属汞通过改变土壤酸性磷酸酶分子色氨酸、酪氨酸残基的微环境致使酶活性中心的构象发生变化 。

温度骤升和窒息条件对青蛤酸性磷酸酶和溶菌酶的影响

试验结果表明，温度骤然升高后，青蛤肝胰腺中酸性磷酸酶（ACP）的比活力先升后降，3h达到最大值（522．28±20．46）U／g，15h后ACP的比活力基本恢复，达到对照组水平；温度骤然升高后，青蛤肝胰腺中溶菌酶（LSE）的比活力先降后升，9h达到最低值（1038．42±168．37）U／mg,窒息条件下，ACP的比活力出现2个峰值，其中最大值出现在15h，达到（225．50±5．92）u／g，0～3hLSZ的比活力显著下降，3～5hLSZ的比活力显著升高，之后酶的比活力缓慢下降，11h达到最低值（2725．6324±247．3382）U／mg，之后LSZ的活力又上升，并恢复到对照组水平。

长期饥饿和再投喂对泥鳅不同组织糖原、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的影响

研究长期饥饿和再投喂对泥鳅肝、消化道和肌肉3种组织细胞糖原、酸性和碱性磷酸酶的细胞化学变化.对泥鳅进行饥饿处理,0～28 d不喂养食物,29～35 d恢复正常喂食.分别于0,7,14,21,28和35 d取材,利用显微石蜡切片、组织化学染色的方法检测其肝、消化道和肌肉细胞糖原、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(ALP)细胞化学特征.结果表明,随着饥饿程度的加深,糖原的量减少,碱性磷酸酶活性下降,酸性磷酸酶活性则增强,投喂后,糖原量、酸性和碱性磷酸酶活性都有不同程度的恢复.整个过程中,它们的变化存在组织差异.泥鳅中酸性和碱性磷酸酶均与长期饥饿条件下机体的应激反应有关.

长毛对虾酸性磷酸酶的纯化与性质

分别从健康和患病长毛对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｐｅｎｉｃｉｌａｔｕｓ）肌肉提取一种酸性磷酸酶（ＡＣ－Ｐａｅ，ＥＣ．３．１．３．２．），进一步用硫酸铵分级分离，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱纯化，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，并于ＢｅｃｋｍａｎＤＵ－８Ｂ紫外分光光度计扫描为单一区带酶液。该酶紫外吸峰在２８０ｎｍ处，荧光激发峰在２８４ｎｍ处，发射峰在３４７ｎｍ处。酶的分子量为７３０００道尔顿，等电点为４．７酶水解对硝基苯磷酸二钠（ＰＵＰＰ）最适ｐＨ为４．５，最适温度４０℃。健康虾与病虾酶的活化能分别为４１．０３ｋＪ／ｍｏｌ·Ｌ和４５．７８ｋＪ／ｍｏｌ·Ｌ，米多常数ｋｍ值分别为０．８０×１０－４ｍｏｌ／Ｌ和１．４３×１０－４ｍｏｌ／Ｌ。重金属离子Ｃｕ２＋，Ｈｇ２＋，有机溶剂甲醇，乙醇，乙二醇等对ＡＣＰａｓｅ有明显的抑制作用。

缺磷对不同耐低磷玉米基因型酸性磷酸酶活性的影响

【目的】酸性磷酸酶活性与土壤及植株体内有机磷的分解和再利用有着密切的关系。本研究以不同耐低磷玉米自交系为材料,研究低磷胁迫下玉米叶片、根组织内以及根系分泌酸性磷酸酶活性的变化及基因型差异,探讨酸性磷酸酶与玉米耐低磷之间的关系,以期更深入地了解玉米耐低磷的生理机制。【方法】以5个典型耐低磷自交系99180T、99239T、99186T、99327T、99184T和2个磷敏感自交系99152S、99270S为试验材料,采用营养液培养方法,设正常磷和低磷两种处理,分别于缺磷处理3、8和12 d时调查取样,测定地上部干重、根干重、叶片中无机磷(Pi)含量、根和地上部磷累积量、根系分泌APase活性以及叶片中APase活性,并于缺磷处理12 d测定根系内APase活性。【结果】1)缺磷使玉米地上部干重下降,根干重、根冠比增加,随着缺磷处理(3 d→8 d→12 d)时间的延长,根干重、根冠比增加幅度增大,且耐低磷自交系根干重增加幅度普遍大于敏感自交系。2)低磷条件下,玉米自交系磷吸收、利用效率存在基因型差异,耐低磷自交系99239T、99180T和99327T磷吸收效率较高,99186T和99184T磷利用效率高,敏感自交系99152S、99270S磷吸收和利用效率均较低。3)低磷处理使玉米自交系叶片无机磷(Pi)含量显著下降,耐低磷自交系99184T、99327T和99239T下降幅度较小,相对叶片无机磷含量较高。4)缺磷诱导玉米根系分泌的APase活性升高。耐低磷自交系99184T和99186T根系分泌APase活性升高幅度较大,其余3个耐低磷自交系未表现出明显优势。缺磷处理3 d、8 d,玉米根系分泌APase活性与磷累积量显著正相关,而12 d时相关性不显著;根系分泌APase活性与磷利用效率在缺磷处理12d时达显著正相关。说明玉米根系分泌APase活性与磷吸收、利用效率相关关系不稳定。5)缺磷处理12 d,各玉米自交系根组织内APase活性与根系分泌APase活性变化情况较一致,两者相关系数r=0.755(P<0.05)。6)缺磷条件下各玉米自交系叶片组织内APase活性均有升高趋势,并表现出明显的基因型差异。缺磷处理8 d,耐低磷自交系99184T和99239T叶片组织内APase活性升高幅度最大,其次是99327T和99186T,99180T、99270S和99152S升高幅度较小;缺磷处理12 d,各玉米自交系叶片APase活性仍继续增加,99239T、99184T、99327T和99186T的相对APase活性均较高,99270S和99152S的相对APase活性较低。相关性分析表明,缺磷条件下玉米自交系叶片中相对APase活性与叶片中相对无机磷(Pi)含量显著正相关,与磷吸收、利用效率不显著相关。【结论】低磷诱导玉米叶片、根组织和根系分泌APase活性升高,根组织和根系分泌APase活性的大小与玉米耐低磷能力不完全相关,叶片APase活性与玉米耐低磷能力有较好的一致性。

Cd Pb污染土壤中蛋白酶酸性磷酸酶脱氢酶活性的变化

通过现场采样及室内分析方法,研究了Cd、Pb严重污染的土壤中蛋白酶、酸性磷酸酶和脱氢酶活性的变化及其与土壤Cd、Cu、Pb、Zn含量和土壤基本性质之间的关系。通径分析表明,影响蛋白酶活性主要直接因素为土壤有效Cd、土壤有效Zn、砂粒和黏粒,其中土壤有效Zn刺激了酶活性而土壤有效Cd抑制了酶活性;影响酸性磷酸酶活性主要直接因素为碱解氮、速效磷、pH值,土壤有效Cu、土壤有效Cd、土壤有效Pb、土壤有效Zn对酸性磷酸酶的直接影响较小;影响脱氢酶活性主要直接因素为土壤有效Cd、土壤有效Zn、土壤速效钾,其中土壤有效Cd抑制了酶活性而土壤有效Zn刺激了酶活性。总体而言,4种重金属有效态对酶活性毒性大小依次为:Cd>Cu>Pb>Zn。综合简单相关分析结果可知,总体上Cu、Cd、Pb、Zn复合污染刺激了蛋白酶活性,抑制了脱氢酶活性,对酸性磷酸酶活性影响不大,脱氢酶可作为上述土壤重金属复合污染的指标。3种土壤酶活性变化是重金属与土壤理化性质综合作用的结果。

抗酒石酸酸性磷酸酶测定及在骨质疏松症诊断中的应用

目的 建立抗酒石酸酸性磷酸酶测定方法及在原发性骨质疏松症诊断中的临床应用。方法 以 1 -萘酚磷酸为基质 ,测定肝素抗凝血抗酒石酸 ,氟化物抑制酸性磷酸酶 ,并以双能 X线骨密度仪测定其腰椎 2～ 4的骨密度。结果 抗酒石酸酸性磷酸酶测定方法在本地区老年妇女的参考值为 2 .9～ 5.3U/ L,该方法的平均批内和批间变异分别为 2 .7%和 5.0 %。骨质疏松症该酶活性明显高于健康对照组 (P<0 .0 0 1 ) ,并与骨密度测定呈显著的相关性 (r=0 .82 )。结论 抗酒石酸酸性磷酸酶测定方法简便、快速 ,是早期原发性骨质疏松症的筛选、诊断及观察疗效的敏感指标。

小麦不同磷效率品种对不同磷源的利用差异及酸性磷酸酶的作用

以小麦磷高效利用品种(03-2917)和低效利用品种(S-10-1)为材料,在水培条件下,测定其生物量、磷含量、根系分泌酸性磷酸酶、根系及叶片酸性磷酸酶活性等,研究不同磷素利用效率小麦品种有机磷吸收利用的差异。结果表明:(1)不同供磷条件下,磷高效品种干物质量、磷积累量较低效品种的大,而磷含量低于低效品种。小麦不同磷素利用效率品种均表现为无机磷处理下根冠比大于有机磷处理,磷高效品种在不同施磷处理下根冠比均较大。(2)不同磷效率小麦品种根系分泌酸性磷酸酶活性在低无机磷处理(0.05mmolP.L-1,Ⅳ)下最大,1/2无机磷+1/2有机磷处理(0.30mmolP.L-1,Ⅱ)大于正常有机磷处理。不同磷处理下,高效品种根系分泌酸性磷酸酶活性均大于低效品种。(3)不同磷效率小麦根系与叶片酸性磷酸酶活性呈现为正常无机磷(Ⅰ)<1/2无机磷+1/2有机磷(Ⅱ)<正常有机磷(Ⅲ)<低无机磷(Ⅳ)的处理,且低效品种大于高效品种。(4)无机磷总量在磷处理及品种间表现与酸性磷酸酶相反的趋势,正常无机磷(Ⅰ)>1/2无机磷+1/2有机磷(Ⅱ)>正常有机磷(Ⅲ)>低无机磷(Ⅳ)的处理,高效品种大于低效品种。

中医不同治法对骨质疏松症小鼠骨密度、碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶影响的实验研究

目的观察中医不同治法对骨质疏松症小鼠骨密度(BMD)、碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)变化的影响,探讨中医防治骨质疏松症的机制。方法除正常组外,将骨保护素(OPG)基因敲除小鼠随机分为模型组、补肾组、健脾组、活血组和福善美组。检测各组小鼠BMD及血清ALP、TRAP含量。结果 1.与正常组比较,模型组小鼠BMD显著降低(P<0.05);与模型组比较,补肾组与健脾组BMD显著升高(P<0.05)。2.与正常组比较,模型组小鼠血清ALP含量显著升高(P<0.05);与模型组比较,补肾组、健脾组和福善美组小鼠血清ALP含量显著降低(P<0.05)。3.与正常组比较,模型组小鼠血清TRAP含量显著升高(P<0.05);与模型组比较,补肾组与健脾组小鼠血清TRAP含量显著降低(P<0.05)。结论补肾和健脾方法能显著提高骨质疏松小鼠的骨量,明显抑制成破骨活性,使小鼠脱离高骨转换状态,起到治疗骨质疏松症的作用。

不育男性精浆酸性磷酸酶和锌与精液参数分析

目的:探讨不育男性精浆中酸性磷酸酶和锌水平与精子密度及精子活力的关系。方法:对21例正常生育男性、169例不育男性精浆中酸性磷酸酶和锌分别进行检测,并作白细胞染色计数。结果:①不论按精子密度分组或按精子活力分组,不育各组精浆中酸性磷酸酶含量明显低于正常对照组(P<0.01),但不育各组之间的差异无显著性意义(P>0.05);②不论按精子密度分组或按精子活力分组,不育各组精浆锌含量仅死精子症组低于正常对照组(P<0.05);③按精子密度分组,各组标本之间白细胞计数的差异用秩和检验分析,不育各组白细胞计数的平均秩次明显大于正常对照组(P<0.001);按精子活力分组,不育各组精浆白细胞计数均高于正常对照组(P<0.05),死精子症组除外(P>0.05)。④精浆中酸性磷酸酶及锌含量均与白细胞计数不相关(r=0.088,P=0.162;r=0.119,P=0.057)。结论:精浆中酸性磷酸酶水平下降和白细胞增多均可导致精子密度和精子活力降低,可作为男性不育的诊断指标;不育患者精浆中锌离子水平虽然低于正常对照组,但无显著性差异。