人白细胞介素-6重组蛋白的制备

目的利用大肠杆菌原核表达系统制备人白细胞介素-6(IL-6)重组蛋白,并对蛋白进行纯化,为后期制备IL-6标准物质和质控品提供候选物质基础。方法以现有IL-6原核表达质粒6His-IL-6-pET-28a(+)为模板,通过PCR扩增目的片段,并在其N端添加His标签。通过酶切连接的方式,将该段基因克隆至pRSFDuet载体,随后转化BL21感受肽获得表达菌株。利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导,得到IL-6重组蛋白,利用镍柱亲和层析技术对蛋白进行纯化,并比对两个表达菌株的蛋白表达量,选择高表达菌株进行后续实验。结果成功构建6His-IL-6-pRSFDuet原核表达质粒,根据蛋白表达比对情况选择6His-IL-6-pET-28a(+)质粒进行后续实验,确定最适IPTG诱导浓度(0.2 mmol/L)、诱导温度(20℃)、诱导时间(20 h)等条件,在BL21中高效表达重组IL-6蛋白,纯化后的蛋白不仅可通过临床检测,且稀释倍数与检测结果之间呈线性关系。结论成功获得低成本、高浓度、高纯度的IL-6重组蛋白,为后续IL-6标准物质和质控品的制备奠定了基础。

玻璃体内注射原纤维蛋白-2(FBN2)重组蛋白对FBN2缺陷型视网膜病变的影响

目的探讨玻璃体内注射原纤维蛋白-2(FBN2)重组蛋白对FBN2缺陷型视网膜病变的影响。方法取SPF级C57BL/6J小鼠32只,随机分为4组:正常对照组、阴性对照组、FBN2敲减组、FBN2重组蛋白组,每组8只小鼠,取右眼作为实验眼。入组后,正常对照组小鼠不进行干预,阴性对照组小鼠玻璃体内注射3μL空载体(1 mg·L^(-1)),FBN2敲减组及FBN2重组蛋白组小鼠玻璃体内注射3μL腺相关病毒(AAV)(1 mg·L^(-1)),4周后FBN2重组蛋白组小鼠玻璃体内注射3μL FBN2重组蛋白(1 mg·L^(-1))。采用视网膜电图(ERG)视觉电生理仪和光学相干断层扫描(OCT)仪分别检测小鼠视网膜Rod-b、Max-a波振幅和视网膜结构变化;RT-PCR、Western blot检测小鼠视网膜中FBN2、微原纤维相关糖蛋白(MAGP-2)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)mRNA和蛋白表达变化。结果ERG检测结果显示,与阴性对照组和正常对照组相比,FBN2敲减组和FBN2重组蛋白组小鼠视网膜ERG Rod-b、Max-a波振幅均变小(均为P<0.05);与FBN2敲减组相比,FBN2重组蛋白组视网膜ERG Rod-b、Max-a波振幅均明显增加(均为P<0.05)。OCT检测结果显示,与FBN2敲减组相比,FBN2重组蛋白组小鼠视网膜色素上皮层组织结构恢复正常,光反射变规则。RT-PCR检测结果显示,与FBN2敲减组相比,FBN2重组蛋白组小鼠视网膜组织FBN2 mRNA表达明显升高,COL1、MAGP-2 mRNA表达均明显降低(均为P<0.05)。Western blot检测结果显示,与FBN2敲减组相比,FBN2重组蛋白组小鼠视网膜组织FBN2蛋白表达明显升高,COL1、MAGP-2蛋白表达均明显降低(均为P<0.05)。结论玻璃体内注射FBN2重组蛋白可以弥补FBN2缺陷型视网膜病变小鼠FBN2内源性缺失,通过调控COL1、MAGP-2表达可达到治疗疾病的作用。

基于毕赤酵母制备的SARS-CoV2RBD-重组蛋白疫苗的免疫方案优化及不同佐剂对中和抗体滴度的影响

目的对基于毕赤酵母制备的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD重组蛋白疫苗的免疫方案进行优化并考察不同佐剂对中和抗体(NAb)滴度的影响,为SARS-CoV-2疫苗的持续优化研究提供参考。方法将RBD基因片段亚克隆至pPICZαA质粒,质粒经线性化转化后整合到毕赤酵母基因组中进行重组表达,将获得的重组蛋白疫苗联合不同的佐剂对小鼠进行免疫以评估其免疫原性。结果目标蛋白wtRBD和Delta RBD均能通过毕赤酵母系统获得满意过表达;与42 d间隔时间相比,28 d间隔时间的IgG抗体滴度增加了1.8倍(44923 vs.80507);间隔28 d的3剂免疫后,针对Delta变体的NAb几何平均滴度比间隔42 d高2.5倍(2191 vs.891);Delta RBD重组蛋白疫苗联合铝佐剂免疫后,针对Delta变体的NAb几何平均滴度达到了32255(2167~88084);在采用5μg或30μg Delta RBD免疫情况下,铝佐剂+CpG佐剂组的NAb滴度均为单独采用铝佐剂组的10倍左右;第3次免疫后,5μg抗原组与30μg抗原组中Delta RBD特异性IgG滴度差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于毕赤酵母制备的wtRBD或Delta RBD都可以用作有效的抗原,间隔28 d的3剂疫苗给药最有效,Delta RBD重组蛋白与铝佐剂+CpG佐剂的联合免疫能够获得更高滴度的NAb以对SARS-CoV-2及其变体发挥免疫作用,可为SARS-CoV-2疫苗的持续优化研究提供一定参考。

热处理对转基因秸秆中重组蛋白和重组DNA的降解作用

随着转基因作物种植面积的不断扩大,如何高效处理转基因秸秆成为了一个重要的科学问题。未经处理的转基因秸秆中的重组蛋白和重组DNA可以在土壤中存在很长时间,并对土壤生物多样性产生潜在负面影响。因此寻找一个既节约成本又对环境无害的秸秆处理方法非常重要。高温处理是降解转基因秸秆重组蛋白和重组DNA的有效手段,但目前对处理温度和处理时间的选择还缺乏系统的研究。本研究通过试纸条、聚合酶链反应(PCR)等方法检测不同温度和时间处理的转基因作物秸秆中重组蛋白和重组DNA的水平。结果表明,转基因大豆、棉花、玉米、水稻的秸秆在50℃处理3 h后,其体内的抗除草剂蛋白草胺膦乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase, PAT)等重组蛋白基本降解;但相同温度下,重组DNA的降解则需要4 d时间;提高处理温度可以在一定程度上缩短重组蛋白和重组DNA降解所需的时间。50℃处理4 d的条件在实际生产中通过堆肥就能实现。本研究从分子生物学的角度为转基因秸秆处理提供了依据。

鼠源抗VISTA重组蛋白单克隆抗体的制备

为了对VISTA抗体药物的研发奠定基础,试验利用真核表达系统表达VISTA胞外段重组蛋白,并采用Ni-NTA亲和层析法纯化该蛋白,用其作为免疫原免疫BALB/c小鼠后,经过细胞融合和杂交瘤单克隆筛选,制备VISTA单克隆抗体。结果:通过真核表达系统成功表达VISTA重组蛋白,其分子量约70 kD。用纯化VISTA蛋白免疫小鼠后血清效价达到1∶51200,通过杂交瘤技术获得1株可稳定分泌抗VISTA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞4H7,经抗体亚型鉴定,制备的VISTA单克隆抗体为IgG1亚型。结论:利用真核表达系统表达及纯化VISTA重组蛋白,并通过杂交瘤技术成功制备了鼠源抗VISTA单克隆抗体,纯度高,为IgG1亚型。

枸杞LbSPL6重组蛋白的纯化和复性

SPL(Squamosa promoter binding protein-like,SPL)是植物特有的转录因子,在植物花和果实的生长发育、次生代谢、调控植物适应性等过程中起着重要作用。SPL蛋白中含有高度保守的SBP功能结构域,通过特异性结合基因的启动子元件,调控相关基因的表达。对已获得的枸杞pET28a-LbSPL6融合蛋白进行诱导表达条件的优化,并对形成的包涵体蛋白进行纯化和复性。结果表明:诱导温度37℃、c(IPTG)=1 mmol/L诱导4 h后,LbSPL6蛋白的表达量最高;原核表达的LbSPL6蛋白,在各种诱导条件下的存在形式都为包涵体;通过超声破碎回收包涵体,并将沉淀在变性缓冲液中进行溶解复性,利用Ni-NTA柱亲和层析纯化蛋白,从而获得有活性的重组LbSPL6融合蛋白。蛋白免疫检测结果进一步证实纯化后的蛋白为LbSPL6重组蛋白。试验纯化得到的重组LbSPL6蛋白为进一步深入研究枸杞LbSPL6蛋白的功能奠定了基础。

Wnt4重组蛋白对炎症状态下成骨细胞的影响

目的建立体外炎性环境,对比研究Wnt4重组蛋白在炎症状态下对成骨细胞分化及矿化能力的影响,初步探讨Wnt重组蛋白在炎症状态下调控成骨细胞分化的作用。方法通过酶消法从小鼠颅顶骨中提取成骨细胞,CCK8法检测不同浓度LPS、Wnt4重组蛋白对小鼠成骨细胞增殖分化的影响,设计浓度梯度,根据检测结果确定所需的最适浓度。体外成骨诱导培养,按是否添加LPS、Wnt4重组蛋白分为对照组、LPS组、Wnt4组、LPS+Wnt4组4个组。培养7 d后比较碱性磷酸酶(ALP)活性。培养21 d后应用茜素红染色法比较细胞矿化能力。结果经过分组培养7 d后,与LPS组比较,LPS+Wnt4组ALP活性明显升高,P<0.05。第21天的茜素红染色结果表明,LPS+Wnt4组矿化能力高于LPS组,P<0.05。结论Wnt4重组蛋白(0.05μg/mL)对炎症状态下的成骨细胞的分化具有正向调节的作用。

纳米脂质体与基因工程重组蛋白在抗皱化妆品中的应用及效果评估

针对传统抗皱化妆品活性成分渗透率低、稳定性差等问题,纳米脂质体和基因工程重组蛋白技术的应用为提升抗皱功效带来新契机。本文综述了纳米脂质体递送系统和重组人表皮生长因子等在抗皱化妆品中的应用研究进展,并通过临床试验数据客观评估了其抗皱效果与安全性。结果表明,上述技术可显著提高抗皱产品功效,但仍需警惕潜在风险,进一步开展长期验证。新技术的发展将推动化妆品行业革新,为消费者提供更优质的抗衰老方案。

基于重组蛋白新冠疫苗生产现场的检查要点分析

新冠疫情使人们普遍认识到疫苗对于公共卫生的重要性,重组蛋白疫苗作为重要的疫苗类型,因其保护效力和安全性的优势受到广泛关注。重组蛋白疫苗的生产一般包括种子库的建立和检定、原液生产、制剂生产、质量检验等过程。现场检查中需要重点关注蛋白生物活性的工艺控制,随着重组蛋白疫苗关注度的提升,生产现场检查规范的建立与完善成为一个重要课题。

氨基酸分析在重组蛋白类生物制品质量控制中的应用研究

本文综述了氨基酸分析基本原理和方法,指出了重组蛋白类生物制品在质量控制上面临的挑战,旨在利用氨基酸分析技术,优化重组蛋白生物制品的质量,从而有效提高相关产品的质量,促进生物医药行业不断向前发展。

全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术在重组蛋白疫苗电荷异质性分析中的应用

重组蛋白分子表征的稳定性是保证疫苗发挥免疫原性及抗原性的关键。重组蛋白疫苗与治疗性蛋白制品一样,因体外合成和纯化过程的复杂性而表现出异质性。其中,电荷异质性是重组蛋白质的关键质量属性之一。电荷异质性监测有助于推动生产工艺的优化,反映产品生产的一致性和稳定性等,对保证重组蛋白产品的安全和质量至关重要。开发可靠快速、灵敏稳健的电荷异质性分析方法一直是生物制药行业所追求的目标。经典的电荷异质性分析方法主要有离子交换色谱(IEC)、毛细管区带电泳(CZE)以及全柱成像毛细管等电聚焦电泳(WCID-CIEF)等,其中WCID-CIEF提供的等电点(pI)和峰形的生化指纹有助于对疫苗多蛋白成分的分析。基于以上该文将对WCID-CIEF的原理和特点及其在重组蛋白疫苗质量控制中的应用进行概述。

鲤IL-17B基因序列特征、表达模式、原核重组蛋白的获得及其促炎作用

为了解鲤白细胞介素17B基因(IL-17B)的功能,实验使用同源搜索和基因克隆技术在鲤基因组中挖掘到2个IL-17Bs基因(CcIL-17B1和CcIL-17B2),均有3个外显子和2个内含子,编码198个氨基酸,内含IL-17家族特有的由4个半胱氨酸形成的2个二硫键,蛋白序列一致性高达91.92%。共线性分析显示,在硬骨鱼类染色体加倍过程中,IL-17B及其附近基因出现了丢失,大部分硬骨鱼类有1个IL-17B、斑马鱼2个IL-17Bs均丢失,而鲤特有的染色体加倍致使存在2个CcIL-17Bs。实时荧光定量PCR(qPCR)结果显示,CcIL-17Bs在鲤受精卵发育早期(0~12 h)和成鱼性腺中高表达。使用大肠杆菌表达系统,获得了可溶的重组蛋白NusA-17B。肛灌不同浓度的NusA-17B,结果显示,高浓度(500μg/kg)组的1和3 d的鲤肠道组织肠绒毛缺损,出现大量的杯状细胞和炎性细胞,定量分析显示,炎症因子基因IL-1β、IFN-γ、IL-6、趋化因子CCL20和NF-κB的表达均显著上调;7 d时肠道组织结构和炎症相关基因的表达均得到恢复,与对照组无显著差异。低浓度(5μg/kg)和中浓度(50μg/kg)肛灌实验,除了中浓度1和3 d鲤肠道TRAF6的表达显著上调,其余被检测基因的表达均与对照组无显著差异。使用不同浓度(0.1、1.0、10.0和100.0 ng/mL)NusA-17B孵育鲤肾组织8 h,结果显示,IL-1β在0.1、1.0和100.0 ng/mL的NusA-17B刺激下显著上调,IFN-γ和NF-κB分别只在10.0和0.1 ng/mL的NusA-17B刺激下显著上调,IL-6及趋化因子CCL20能够在10.0和100.0 ng/mL的NusA-17B刺激下显著表达,TRAF6则在0.1、1.0和10.0 ng/mL的NusA-17B刺激下显著表达。体内和体外实验结果表明CcIL-17B参与了炎症反应。

马缨杜鹃查尔酮异构酶(RdCHI1)重组蛋白的制备及功能验证

【目的】制备马缨杜鹃(Rhododendron delavayi)查尔酮异构酶(Chalcone isomerase,CHI)基因表达的重组蛋白并验证其活性,为解析查尔酮异构酶功能提供理论依据,为改良植物花色、增加药用成分奠定基础。【方法】根据所获得的马缨杜鹃查尔酮异构酶RdCHI1基因的序列信息设计引物,构建其原核表达载体,优化RdCHI1可溶性重组蛋白最佳诱导表达条件,制备可溶性重组蛋白并检测其活性。【结果】成功构建RdCHI1原核表达载体,RdCHI1重组蛋白可在上清中表达,最佳诱导条件为:15℃、36 h,IPTG浓度0.35 mmol·L^(-1)。经镍柱纯化得到质量较好的RdCHI1重组蛋白,通过体外酶活反应确定,与对照组相比,RdCHI1可以更快地催化柚皮素查尔酮(Naringenin chalcone)反应生成柚皮素(Naringenin)。【结论】RdCHI1为I型CHI,可极大提高柚皮素查尔酮生成柚皮素的速率,增加黄酮类物质积累量。

斯氏艾美耳球虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白对兔的免疫保护效果评价

旨在评价斯氏艾美耳球虫重组蛋白Es-GAPDH对兔的免疫保护效果,为兔斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。利用相对荧光定量PCR分析Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫不同发育时期的转录水平,并对Es-GAPDH进行原核表达与蛋白纯化;然后将42只45日龄无球虫幼兔随机分为5组(空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEs-GAPDH免疫组),分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100μg pET-32a空载蛋白含1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1 mL 100μg rEs-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫。二免14 d后除空白对照组外,其余各组实验兔经口感染1×10^(4)个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊,攻虫后观察各组临床表现,每周定时采血、称重,感染21 d后剖检观察肝组织病理变化,并测定和统计每组的相对增重、料肉比、肝指数、卵囊排出量、生化指标、特异性IgG抗体以及细胞因子等。结果发现,Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫各个发育阶段均有转录,且转录水平存在差异,在孢子化卵囊阶段转录水平最高。免疫保护试验表明:感染后不免疫攻虫组出现兔肝球虫病典型症状,而rEs-GAPDH免疫组症状不明显。rEs-GAPDH免疫组的卵囊减少率达87.09%,相对增重率显著大于三个攻虫对照组(P<0.05),特异性IgG抗体水平、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β)水平均与不免疫攻虫组存在显著差异(P<0.05),组织病理切片也显示,免疫组相较不免疫攻虫组肝组织被破坏程度低,虫体数量较少。综上,斯氏艾美耳球虫重组蛋白rEs-GAPDH可减少增重损失和卵囊排出,能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答,具有一定免疫保护作用,可作为斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。

大型艾美耳球虫重组蛋白GAPDH对兔的免疫保护效果评价

本研究旨在评价大型艾美耳球虫重组蛋白(rEm-GAPDH)对兔的免疫保护效果,为大型艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。根据转录组数据筛选出Em-GAPDH基因,进行原核表达与蛋白纯化;将50只45日龄无球虫感染幼兔随机分为5组(空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEm-GAPDH免疫组),分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100μg pET-32a空载蛋白和1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1mL 100μg rEm-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫,二免14 d后每只兔经口感染1×10^(5)个大型艾美耳球虫孢子化卵囊,观察各组兔临床症状,每周固定时间采血和称重,感染14 d后宰杀剖检并测定和统计各组兔的卵囊排出量、相对增重、特异性IgG抗体和细胞因子等。结果成功表达了重组蛋白rEm-GAPDH,大小在59 ku左右,且大部分表达在包涵体。免疫保护试验表明:感染后不免疫攻虫组出现症状,而免疫组症状不明显。rEm-GAPDH免疫组的卵囊减少率达57.16%,相对增重率显著大于不免疫攻虫组(P<0.05),ACI值为144.96。特异性IgG抗体水平、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β)水平均与对照组存在显著差异(P<0.05)。大型艾美耳球虫重组蛋白rEm-GAPDH可以减少增重损失和卵囊排出,能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答,具有一定免疫保护作用,可以作为大型艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。

唾液酸糖表位类人源化N-糖基化修饰治疗性重组蛋白的研究进展

唾液酸化N-糖基化修饰重组蛋白能提高治疗性蛋白的理化性质,如延长半衰期、增强组织穿透性以及抑制炎症反应等。但迄今为止糖蛋白的N-糖基化修饰效率和唾液酸化效率都很难达到100%,这导致了唾液酸修饰糖基化重组蛋白的均质化、规模化生产非常困难。因而提高类人源化N-糖基化修饰治疗性重组蛋白的均质性仍是目前糖蛋白药物研发任务之一。该文围绕提高唾液酸糖表位N-糖基化修饰治疗性重组蛋白效率的方法及均质化类人源化唾液酸糖表位治疗性重组蛋白的生产途径展开综述。

非洲猪瘟病毒CD2v重组蛋白真核表达及单克隆抗体的制备

本研究目的为表达非洲猪瘟病毒CD2v蛋白作为抗原,制备鼠源性CD2v单克隆抗体。以ASFV-SY18分离株为模板合成EP402R基因,构建pcDNA3.1-His真核表达载体,通过Expi-CHO表达系统获得重组CD2v蛋白,应用细胞融合技术制备杂交瘤细胞并筛选出单克隆抗体细胞株。实验结果显示,截短EP402R基因成功克隆至表达载体,构建出pcDNA3.1-CD2v-His质粒,转染至CHO细胞后收获重组蛋白,使用镍亲和层析法纯化带有His标签的CD2v蛋白。经SDS-PAGE及Western blot确认,CD2v蛋白大小为55 kDa且与免疫小鼠血清反应良好。共筛选出3株杂交瘤细胞株分别命名为2D6、4B2及4G12。间接ELISA鉴定3株杂交瘤细胞所制备的腹水效价均高达1∶12800,Western blot及间接免疫荧光实验证明3株单克隆抗体均可特异性识别重组CD2v蛋白。本研究成功制备了CD2v重组蛋白及其特异性单克隆抗体,为开发竞争性ELISA诊断方法及ASFV野毒鉴定奠定了基础。

抗VASN-EGFFN3重组蛋白的单克隆抗体的制备

目的:通过大肠杆菌表达系统表达和纯化VASN-EGFFNN3重组蛋白,免疫小鼠制备抗VASN-EGFFN3单克隆抗体。方法:构建p ET30a(+)-VASN-EGFFNN3重组载体,以大肠杆菌BL21(DE3)为载体表达VASN-EGFFNN3重组蛋白。用镍离子亲和层析柱纯化VASN-EGFFNN3重组蛋白。利用纯化后的VASN-EGFFN3重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,用杂交瘤技术制备抗VASN-EGFFN3单克隆抗体。结果:成功构建pET30a(+)-VASN-EGFFNN3重组原核表达质粒,诱导的重组VASN-EGFFNN3蛋白主要以包涵体的形式存在。纯化蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的血清抗体效价大于1∶2187000,免疫效果良好。利用杂交瘤技术获得2株杂交瘤细胞株。结论:成功利用大肠杆菌表达系统制备并纯化VASN-EGFFNN3重组蛋白,通过杂交瘤技术成功制备小鼠抗VASN-EGFFN3单抗。

基于T7转录系统的谷氨酸棒杆菌重组蛋白高效表达系统的创建

本研究以前期构建的大肠杆菌-谷氨酸棒杆菌穿梭载体pAU2为基础,通过添加T7 RNA聚合酶编码基因及人工合成的克隆表达区,构建了1个新的谷氨酸棒杆菌分泌型基因高效表达载体pAU29KS。pAU29KS载体克隆/表达盒使用T7启动子作为目的基因的启动子,通过载体序列中T7 gene 1基因编码的T7 RNA聚合酶与T7启动子互作来进行目的基因的高效转录;启动子区下游使用谷氨酸棒杆菌核糖体结合位点RBS保守序列(gaaagga)来高效起始目的蛋白合成;克隆/表达盒RBS与多克隆位点MCS之间使用谷氨酸棒杆菌强信号肽cgl_2070编码序列来进行目的蛋白的胞外高效分泌。以嗜热脂肪土芽孢杆菌的α-淀粉酶AmyF作为报告蛋白,进行谷氨酸棒杆菌C.glutamicum/pAU29KS表达系统的蛋白分泌生产能力检测。透明圈法检测结果显示,工程菌株C.glutamicum/pAU29KS-amyF能够在淀粉平板上产生清晰可见的透明圈;培养物上清液的SDS-PAGE考马斯亮蓝染色和Western Blotting检测结果都显示出清晰的特异性条带,与AmyF预测分子量相一致;淀粉酶活性检测结果显示,培养物上清液呈现高淀粉酶活力,而细胞裂解上清液未检测到淀粉酶活力,说明高效表达的α-淀粉酶在强信号肽cgl_2070的介导下完全分泌到胞外培养基中。本研究构建的基于T7转录系统的C.glutamicum/pAU29KS能够对目标蛋白进行高效分泌生产,是一套新的谷氨酸棒杆菌分泌型重组蛋白表达系统。

活动性肺结核患者血清Fad D9重组蛋白、sCD14-ST及单核细胞P糖蛋白水平及其临床意义

目的探讨活动性肺结核(APTB)患者血清Fad D9重组蛋白、可溶性白细胞分化抗原14亚型(sCD14-ST)、单核细胞P糖蛋白(Pgp)表达及其临床意义。方法选取96例APTB患者(APTB组),按照肺部病灶有无空洞和病灶肺叶数分亚组。同期选择体检健康且经γ干扰素释放试验检测阴性者(健康对照组,HC组)及阳性者(结核潜伏感染组,LTBI组)各48例。比较各组血清Fad D9重组蛋白、sCD14-ST、Pgp水平。评估Fad D9重组蛋白、sCD14-ST、Pgp诊断APTB和鉴别APTB、LTBI的价值。结果Fad D9重组蛋白、sCD14-ST、Pgp水平APTB组>LTBI组>HC组,且有空洞者高于无空洞者,病灶肺叶≥3个者高于<3个者(P<0.05)。Fad D9重组蛋白、sCD14-ST、Pgp对APTB诊断和APTB、LTBI鉴别有良好效能(P<0.05)。结论APTB患者血清Fad D9重组蛋白、sCD14-ST及Pgp明显升高,且与肺部病灶的严重程度有关。