处红柚和翡翠柚杂交后代叶片中柚皮苷和野漆树苷的检测与分析

为不同用途的柑橘育种及进一步从分子水平探明柑橘中类黄酮物质的合成与代谢情况提供参考,以浙江丽水市多年实生选种选育出的处红柚和翡翠柚优良株系及其杂交后代为材料,使用高效液相色谱法检测不同样品中类黄酮物质的含量,分析亲本与杂交后代的柚皮苷与野漆树苷积累情况及二者间的合成关系,促进柚皮苷及野漆树苷药用资源的综合开发利用。结果表明:样品中柚皮苷含量为20.75~3556.32μg/g,野漆树苷含量为64.90~585.00μg/g,杂交后代中野漆树苷含量和柚皮苷含量差异较大,其柚皮苷含量大多低于亲本,而野漆树苷含量大多高于亲本。柚皮苷含量与野漆树苷含量之间相关性不显著,二者的合成相对比较独立。

野漆树苷的生物活性研究进展

野漆树苷(rhoifolin)又名芹菜素-7-O-β新橙皮糖苷,是以芹菜素(apigenin)为母核的黄酮苷类化合物,它存在于多种来自芸香科柑橘属的植物或中药材中,还存在于多种药用植物,以及大麦、小麦、大豆等一些可食用植物中。目前已有研究报道野漆树苷具有抗氧化、保肝、抗炎、降血压、壮骨、神经保护、降糖、抗癌和抗病毒等多种生物活性。但相比于其苷元芹菜素,以及其他黄酮类化物,如柚皮苷(naringin)、橙皮苷(hesperidin)等,野漆树苷的相关研究文献要少得多。使用电子数据库(如PubMed、学术期刊和Springer Link)进行文献检索,对野漆树苷的生物学活性进行了综述。

近红外光谱法快速测定化橘红中柚皮苷和野漆树苷的含量

为了建立近红外光谱分别测定化橘红中柚皮苷和野漆树苷的定量模型快速检测方法,采用高效液相色谱法测定31批化橘红样品中柚皮苷和野漆树苷的含量并作为参考值,利用近红外光谱技术采集化橘红样品光谱图,2种成分的原始谱图分别经多元散射校正和一阶导数加矢量归一化预处理,结合偏最小二乘法和交叉验证法分析,将近红外光谱图与含量参考值进行关联,建立快速测定化橘红中柚皮苷和野漆树苷的定量模型。结果表明,建立的柚皮苷和野漆树苷含量校正模型的决定系数(R^(2))分别为92.08%和91.02%,校正集的内部交叉均方差(RMSECV)分别为0.247和0.050,建模谱段分别为6101.9~5446.2 cm^(-1)和6101.9~4597.6 cm^(-1),Rank均为10。该方法建立的定量分析模型测定速度快、预测精度高,操作简单、环保,可作为化橘红中柚皮苷和野漆树苷的快速检测方法。

化橘红中柚皮苷和野漆树苷含量同时测定方法的建立

目的建立同时测定化橘红中柚皮苷和野漆树苷的含量的方法。方法采用RP-HPLC法,GraceSmartRP C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水-冰乙酸,梯度洗脱;流速1.0 mL.min-1;检测波长330 nm;柱温室温。结果柚皮苷和野漆树苷浓度分别在0.96～28.80μg(r=0.999 9)和0.07～2.10μg(r=0.999 9)范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。平均加样回收率(n=5)分别为98.81%和98.73%。结论该方法简便、快速、准确,重复性好,可用于化橘红中柚皮苷及野漆树苷含量的同时测定。

野漆树苷对LPS诱导的RAW264.7细胞的抗炎作用及机制探究

目的:探究野漆树苷(Rhoifolin,RHO)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞炎症模型释放炎性因子的影响,并探讨其作用机制.方法:用脂多糖(0.5μg·mL^(-1))刺激体外生长良好的RAW264.7细胞24h建立体外细胞炎症模型,以MTT法测定不同浓度RHO对RAW264.7细胞的毒性作用,用Griess试剂法检测一氧化氮(Nitric Oxide NO)的含量,RT-PCR法检测细胞中肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor,TNF-α),白介素1β(Interleukin-1β,IL^(-1)β),白介素6(Interleukin,IL-6)的含量,采用Western Blot法检测MAPK信号通路中相关蛋白的含量.结果:与空白对照组相比,在LPS诱导下,RAW264.7细胞分泌致炎因子NO,TNF-α,IL^(-1)β,IL-6(P<0.01);与模型组相比,25~100μmol·L^(-1)的RHO可明显下调LPS诱导的RAW264.7细胞释放炎症因子NO,TNF-α,IL^(-1)β和IL-6(P<0.05,P<0.01),并呈现良好的剂量依赖关系;野漆树苷还不同程度的抑制了Erk和JNK激酶的磷酸化.结论:RHO可以抑制LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应,减少炎症因子NO分泌,抑制TNF-α,IL^(-1)β和IL-6mRNA的合成,抑制JNK/SAPK及Erk信号通路可能是其抗炎作用机制之一.

化橘红中柚皮苷与野漆树苷的化学成分鉴别

【目的】建立化橘红中柚皮苷和野漆树苷的化学成分鉴别方法。【方法】采用二次展开薄层色谱法。【结果】化橘红中柚皮苷与野漆树苷在紫外光254nm下显示分开的暗斑点;经显色后柚皮苷斑点显紫红至橘红色,野漆树苷斑点显灰绿至灰红色;两者的Rf值在0.30～0.45之间。其分离度大于1.6。【结论】本法简便、快速、分离度高,可考虑用于化橘红中野漆树苷与柚皮苷的含量测定。

光谱法研究野漆树苷与人血清蛋白的结合作用

目的研究野漆树苷与人血清蛋白(HSA)的结合作用及机制。方法通过光谱法研究野漆树苷与HSA的作用机制。以能量传递原理及Lineweaver-Burk双倒数方程计算野漆树苷与HSA反应的结合常数和结合距离;以热力学参数判断其与HSA间的作用力类型;以同步荧光光谱考察野漆树苷对HSA构象的影响。结果野漆树苷与HSA反应的结合常数随温度的升高而降低;野漆树苷与HSA之间的结合距离为4.16 nm;野漆树苷与HSA的互相作用以氢键和范德华力结合为主;酪氨酸残基和色氨酸残基的特征荧光光谱峰随野漆树苷浓度的增加而产生猝灭。结论野漆树苷能与HSA结合,其荧光猝灭以静态猝灭为主。

反相高效液相色谱法测定化橘红中野漆树苷的含量

目的 对化橘红中野漆树苷进行含量测定研究。方法 采用反相高效液相色谱法,色谱柱为MACHEREY-NAGEL 100-5 C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇和水-乙酸(61:4),进行梯度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长345 nm。结果 在0.816～13.056μg范围内,野漆树苷与色谱峰面积呈良好的线性关系,r=0.9995,平均回收率为101.064％,RSD=3.10％(n=5)。结论 建立了测定化橘红中野漆树苷含量的HPLC法,该方法简便准确,重现性好;毛橘红和光橘红中野漆树苷含量有显著差异。

UPLC-Triple TOF-MS方法鉴定野漆树苷在大鼠体内的代谢物

目的：分析野漆树苷在大鼠体内的代谢产物结构。方法：大鼠灌胃给予野漆树苷96 mg/kg后,收集0~24h尿液及粪便样品,应用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱（UPLC-Triple TOF-MS）技术分析野漆树苷在大鼠体内的代谢产物。结果：共检测到了除原型药的4个代谢产物。经过对野漆树苷可能代谢产物的母离子和碎片离子的准确分子量及裂解规律的解析,并结合黄酮类化合物的可能代谢途径,推断出了这些代谢产物的结构。结论：上述实验结果将为血浆代谢产物的寻找提供靶标,为野漆树苷体内物质基础的确立以及体内代谢途径和代谢机制的研究提供重要的参考。

吡虫啉对化橘红野漆树苷含量的影响

目的:研究吡虫啉对化橘红重要指标成分野漆树苷含量的影响,为使用吡虫啉防治化橘红害虫提供实验证据。方法:在采收期,向化橘红果树基部注射不同浓度的吡虫啉,定期取样,烘干备用。野漆树苷用索氏提取法提取,高效液相色谱法检测。以甲醇-水-醋酸(48∶50.5∶1.5)为流动相;室温;流速:1.0ml/min;检测波长为345nm。结果:注射吡虫啉的化橘红样品与对照样品之间野漆树苷的量没有显著性差异。结论:吡虫啉对化橘红野漆树苷的含量没有显著影响,应用吡虫啉防治化橘红害虫的方法安全。

离体大鼠肠道菌群对野漆树苷的代谢研究

目的:研究大鼠肠道菌群对野漆树苷的体外代谢转化作用。方法:将野漆树苷与离体大鼠肠道菌群的孵育液在37℃厌氧条件下孵育,不同时间点取样经乙酸乙酯萃取后,采用HPLC-MS/MS对代谢产物进行定性和定量分析。结果:孵育4 h后野漆树苷已被肠道菌代谢完全,在代谢组的孵育液中发现了芹菜素和柚皮素两种代谢产物,以芹菜素为主,并且在4 h达到较高浓度,随后缓慢降解,24 h后消失。结论:在离体条件下,大鼠肠道菌群对野漆树苷具有显著的代谢转化作用,提示代谢产物为其生物活性成分。

LC-MS/MS测定大鼠血浆中的野漆树苷及其药代动力学研究

目的建立大鼠血浆中野漆树苷的LC-MS/MS测定方法,并研究静脉注射后野漆树苷在大鼠体内的药代动力学特征。方法大鼠血浆样品经乙酸乙酯萃取处理,用色谱柱Phenomenex C8（30 mm×2.00 mm,3μm）进行分离,以甲醇-水为流动相梯度洗脱,采用电喷雾离子源（ESI）,负离子模式,多反应监测（MRM）,选择离子分别为野漆树苷（m/z 577.6→269.1）,内标柚皮素（m/z 271.0→151.0）,将建立的方法应用于测定大鼠静脉注射野漆树苷后血浆的药物浓度,并采用DAS 2.0计算得主要药代动力学参数。结果大鼠血浆中野漆树苷在1~2000μg/L浓度范围内线性关系良好,日内、日间精密度（RSD）均〈10%,准确度（RE）在±7%之间,低、中、高3个浓度下提取回收率为86.8%~91.0%,无明显基质效应且稳定性良好。大鼠静注该药（5 mg/kg）后AUC0-t为（72627.8±18067.9）μg·min/L,t1/2为（52.1±14.3）min,CLz为（0.07±0.02）L/（min·kg）。结论该检测方法简单、快速、灵敏、准确,适用于野漆树苷血药浓度监测及其药动学研究。药代动力学参数表明大鼠静注该药后体内消除较快。

UPLC法测定饮品中鞣花酸和野漆树苷的含量

目的:建立超高效液相色谱法(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)同时测定饮品中鞣花酸和野漆树苷含量的方法。方法:采用Waters Acquity BEH C18液相色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(10∶90,V/V),流速为0.4 mL·min^(-1),柱温为30℃,检测波长分别为254 nm(鞣花酸)和203 nm(野漆树苷)。结果:鞣花酸和野漆树苷在各自浓度范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9985和0.9995,平均加标回收率分别在95.01%~104.59%和96.49~104.51%,均符合要求。结论:该方法便捷、可靠、重复性好,适用于测定饮品中鞣花酸和野漆树苷的含量。

野漆树苷对雷公藤甲素诱导肝损伤的保护作用

目的:研究野漆树苷对雷公藤甲素诱导肝损伤的保护作用。方法:采用DMEM培养基培养人系L02肝细胞,加入40μg/ml雷公藤甲素孵育,制备肝细胞损伤模型,继续培养24h后,分别加入75、150、300μg/ml不同剂量的野漆树苷,以及150、300μg/ml不同剂量的阳性对照药谷胱甘肽,继续孵育24h后,采用MTT法测定各组细胞存活率。小鼠随机分为6组,分别每天给予不同剂量药物:野漆树苷高、中、低剂量组(140、70、35mg/kg),阳性对照组给予70mg/kg的甘利欣,模型组及空白对照组分别给予等体积的蒸馏水。6d后,除空白对照组外,其余各组以0.625mg/kg剂量的雷公藤甲素灌胃1次,制备小鼠急性肝损伤模型,18h后眼眶后静脉取血检测血清ALT和AST,测定肝组织匀浆中SOD、MDA、GSH-Px和GST的活性及观察肝脏病理学变化。结果:野漆树苷300、150、75μg/ml剂量组均能显著提高雷公藤甲素损伤的人系L02肝细胞存活率。野漆树苷140、70、35mg/kg剂量组均能显著降低雷公藤甲素所致急性肝损伤小鼠血清ALT和AST活性,降低肝脏MDA含量,增强SOD、GSH-Px和GST活力,并能明显改善肝组织的病理学损伤。结论:野漆树苷对雷公藤甲素诱导的肝损伤具有很好的保护作用。

HPLC测定山香圆含片中女贞苷和野漆树苷的含量

目的建立测定山香圆含片中女贞苷和野漆树苷含量的方法。方法采用LunaC18色谱柱，以乙腈-0．5％磷酸溶液（41：59）为流动相，流速1．0ml/min，柱温30℃，检测波长336nnl。结果女贞苷在0．016-0．32mg／ml（r=0．9997）；野漆树苷在0．006-0．11mg／ml（r=0．9998）浓度范围内有良好的线性关系，平均加样回收率分别为为99．O％、97．5％，RSD分别为1．83％、1．57％。结论本方法准确、简便，重复性好，可用于山香圆含片中女贞苷和野漆树苷的含量测定。

HPLC法同时测定山香圆片中女贞苷和野漆树苷的含量

目的:采用反相高效液相色谱法同时测定山香圆片中女贞苷和野漆树苷的含量。方法:使用Diamonsil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.5%磷酸(43∶57),流速1.0mL·min-1,检测波长336nm,柱温为30℃。结果:女贞苷、野漆树苷浓度分别在14.2～170μg·mL-1和7.24～86.9μg·mL-1范围内,线性关系良好;平均回收率(n=6)分别为101.2%和101.3%,RSD分别为1.2%和1.7%。结论:本法简便、准确,重复性好,可为山香圆片的质量控制提供实验依据。

从化州柚中提取的柚皮苷的杂质研究(英文)

目的:研究从化州柚中提取的柚皮苷中的杂质。方法:采用HPLC-PDA/ESI-MS/MS法,通过波谱分析鉴定化合物结构。采用加校正因子的主成分自身对照法对主要杂质进行含量测定。结果:柚皮苷样品中主要杂质为野漆树苷和新北美圣草苷,二者与柚皮苷的校正因子分别为1.82和1.02。对6批样品进行测定,野漆树苷的含量为0.742%～0.926%,新北美圣草苷的含量为0.335%～0.464%,总杂质含量小于1.5%。结论:该检测方法快速、准确,柚皮苷中杂质种类和含量稳定,为柚皮苷应用的安全性提供理论基础。

山香圆叶水提醇沉与颗粒制备工艺研究

为去除山香圆叶提取液的无效成分和杂质,对山香圆叶水提醇沉与颗粒制备工艺进行研究。基于正交实验L_(9)(3)^(4)优选山香圆叶提取液醇沉工艺,以浸膏女贞苷和野漆树苷的总量含量为考察指标。山香圆叶提取液最佳醇沉工艺为:提取液浓缩至料液比1∶1(g∶g),药液醇沉温度为20℃,药液含醇量60%,静置时间12h,醇沉效果好。山香圆叶提取液经醇沉后,去除了无效成分和杂质,制备的颗粒性状、外观、粒度、水分、溶化性、鉴别、女贞苷和野漆树苷的总量含量等各项指标均符合实验标准要求,优选的山香圆叶水提醇沉工艺重现性好,颗粒制备工艺操作简便,为山香圆颗粒的制备生产提供了参考依据。

化橘红药材外观颜色与柚皮苷含量相关性的探讨

化橘红为芸香科植物化州柚Citrus grandisTo-mentosa或柚Citrus grandis(L.)Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外层果皮.化州柚主产于广东广茂县,习称"毛橘红""毛七爪";柚主产于四川、重庆,习称"光橘红""光七爪".其具燥湿化痰、理气、消食之功效,主治风寒咳喘痰多、呕吐呃逆、食积不化,脘腹胀痛.主要含有柚皮苷、枳属苷、野漆树苷及挥发油等[1].