金合欢素调节NF-κB信号通路对幽门螺旋菌感染小鼠胃黏膜损伤的研究

目的:探讨金合欢素调节NF-κB信号通路对幽门螺旋菌(Hp)感染小鼠胃黏膜损伤的影响及机制。方法:C57BL/6小鼠以109 CFU/mL Hp(0.3mL)灌胃,并将建模成功小鼠随机分为Hp组、金合欢素低(金合欢素-L,30mg/kg)、高剂量(金合欢素-H,75mg/kg)组、阳性对照[奥美拉唑(400μg/kg)、克拉霉素(7.15mg/kg)及阿莫西林(14.25mg/kg)]组以及金合欢素-H+Prostratin(75mg/kg金合欢素+0.5mg/kg Prostratin)组,并以灌胃0.3mL生理盐水的小鼠为对照组,随后检测血清中胃肠激素[胃动素(MTL),胃饥饿素(Ghrelin),5-色羟胺(5-HT)]指标;分离胃组织,检测其病理学变化、评分,并检测组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平、闭锁蛋白(Occludin),闭锁小带蛋白(ZO-1)mRNA表达、细胞凋亡变化及凋亡蛋白Bax、Bcl-2、p-NF-kB p65、NF-kB p65表达。结果:与对照组相比,Hp组Ghrelin水平、IL-10水平、Occludin、ZO-1 mRNA表达、Bcl-2表达显著降低,MTL、5-HT水平、损伤评分、IL-1β、TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-NF-kB p65/NF-kB p65表达显著增加(P<0.05);与Hp组相比,金合欢素-L、金合欢素-H组、阳性对照组Ghrelin水平、IL-10水平、Occludin、ZO-1 mRNA表达、Bcl-2表达显著增加,MTL、5-HT水平、损伤评分、IL-1β、TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-NF-kB p65/NF-kB p65表达显著降低,不同金合欢素组间有差异(P<0.05);与金合欢素-H组相比,金合欢素-H+Prostratin组Ghrelin水平、IL-10水平、Occludin、ZO-1 mRNA表达、Bcl-2表达显著降低,MTL、5-HT水平、损伤评分、IL-1β、TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-NF-kB p65/NF-kB p65表达显著增加(P<0.05)。结论:金合欢素可通过NF-κB信号通路改善Hp感染小鼠胃黏膜损伤。

金合欢素调节Sirt1/AMPK/Nrf2信号通路对糖尿病白内障大鼠氧化应激损伤的影响

目的探讨金合欢素对糖尿病白内障(DC)大鼠氧化应激损伤的影响及其对沉默调节蛋白1(Sirt1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的调控作用。方法60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、金合欢素低剂量组、金合欢素高剂量组、金合欢素+Sirt1抑制剂(EX527)组,除对照组以外均构建DC大鼠模型,其中,金合欢素低剂量组、金合欢素高剂量组大鼠分别经颈部皮下注射10 mg·kg^(-1)、20 mg·kg^(-1)的金合欢素,金合欢素+EX527组大鼠经颈部皮下注射20 mg·kg^(-1)金合欢素,均为每天2次,同时金合欢素+EX527组大鼠经皮下埋入渗透微型泵每天泵入3.5 mg·kg^(-1)EX527,其余组别均泵入等量生理盐水,给药持续4周。给药结束后,测量血压和空腹血糖(FBG),裂隙灯照射法观察大鼠晶状体混浊状况,HE染色观察晶状体组织病理学变化,ELISA测定血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β的含量,Western blot检测Sirt1、p-AMPK、AMPK、Nrf2蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠晶状体上皮细胞呈片状、条索状,发生迁移性聚集,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均降低(均为P<0.05);与模型组比较,金合欢素低、高剂量组大鼠晶状体上皮细胞迁移性聚集现象改善,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均降低,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均升高(均为P<0.05);与金合欢素高剂量组比较,金合欢素+EX527组晶状体上皮细胞形态改变和聚集现象加重,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均降低(均为P<0.05)。结论金合欢素可能通过激活Sirt1/AMPK/Nrf2通路保护DC大鼠免受氧化应激损伤。

金合欢素通过调节Sirt1介导的AMPK/Nrf2信号通路改善肺炎链球菌感染引起的肺泡上皮细胞损伤

目的:探讨金合欢素通过调节沉默信息调节因子相关酶1(Sirt1)介导的5'-磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路对肺炎链球菌(SP)感染引起的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法:SP感染体外培养的肺泡上皮细胞A549建立细胞损伤模型,采用终浓度分别为0、5、25、50、100、150、200μmol/L的金合欢素处理,CCK-8检测各处理组细胞活力并筛选金合欢素最佳作用浓度。体外培养的A549细胞随机分为5组:对照组、模型组、金合欢素(150μmol/L)组、EX527(Sirt1抑制剂,40μmol/L)组、金合欢素(150μmol/L)+EX527组(40μmol/L),对照组不进行处理,其余各组以SP感染建立细胞损伤模型,150μmol/L金合欢素和40μmol/L EX527分别处理,CCK-8、流式细胞术分别检测各组细胞活力与凋亡率;试剂盒检测各组细胞活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)水平及IL-10、IL-1β、TNF-α水平;免疫印迹法检测各组细胞增殖相关蛋白Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白caspase-9、Bax表达、Sirt1与AMPK/Nrf2信号通路蛋白p-AMPK/AMPK、Nrf2表达。结果:与对照组比较,模型组A549细胞活力、SOD、IL-10水平、p-AMPK/AMPK、Sirt1、Nrf2、Ki-67与PCNA蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、MDA、LDH、ROS水平、IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.05)。与模型组、金合欢素+EX527组分别比较,金合欢素组A549细胞活力、SOD、IL-10水平、p-AMPK/AMPK、Sirt1、Nrf2、Ki-67与PCNA蛋白表达均升高(P<0.05),凋亡率、MDA、LDH、ROS、IL-1β、TNF-α水平均降低(P<0.05);EX527组A549细胞活力、SOD、IL-10水平、p-AMPK/AMPK、Sirt1、Nrf2、Ki-67与PCNA蛋白表达均降低(P<0.05),凋亡率、MDA、LDH、ROS、IL-1β、TNF-α水平均升高(P<0.05)。结论:金合欢素可通过上调Sirt1表达激活AMPK/Nrf2信号,进而促进抗炎因子分泌,减少ROS和促炎因子产生,减轻炎症与氧化应激,最终缓解神经元损伤。

金合欢素调节IRS-1/PI3K/AKT信号通路对糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响

目的探讨金合欢素调节胰岛素受体底物-1(IRS-1)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路对糖尿病大鼠胰岛素抵抗(IR)的影响。方法选取6周龄,体质量220~235 g的SPF级SD雄性大鼠60只作为研究对象。随机选出12只大鼠作为对照组(NC组),其余48只大鼠构建2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,造模成功后随机分为糖尿病组、金合欢素组、MG53组、金合欢素+MG53组,每组12只。检测所有大鼠空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、甘油三脂(TG)水平。采用酶联免疫吸附试验检测空腹胰岛素(FINS)水平以及胰腺组织白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,计算胰岛素敏感指数(ISI)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);计算口服葡萄糖耐量实验曲线下面积(AUC);采用苏木精和伊红(HE)染色检测胰腺组织病理变化;采用Western blot法检测IRS-1/PI3K/AKT通路蛋白表达水平。结果与NC组相比,糖尿病组大鼠体质量、FBG、TC、TG、LDL水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与糖尿病组相比,金合欢素组大鼠体质量、FBG、TC、TG、LDL水平均明显下降,而MG53组均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与金合欢素组相比,金合欢素+MG53组大鼠体质量、FBG、TC、TG、LDL水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与NC组相比,糖尿病组FBG、FINS、HOMA-IR水平均明显升高,AUC明显增大,ISI水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与糖尿病组相比,金合欢素组FINS、HOMA-IR水平均明显下降,AUC明显减小,ISI水平明显升高,而MG53组FINS、HOMA-IR水平均明显升高,AUC明显增大,ISI水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与金合欢素组相比,金合欢素+MG53组FINS、HOMA-IR水平均明显升高,AUC明显增大,ISI水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。与NC组相比,糖尿病组TNF-α、IL-1β水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与糖尿病组相比,金合欢素组TNF-α、IL-1β水平均明显下降,而MG53组TNF-α、IL-1β水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与金合欢素组相比,金合欢素+MG53组TNF-α、IL-1β水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,NC组大鼠胰腺组织染色清晰,结构正常,可以观察到明显的外分泌腺泡和胰岛、小叶内导管和小叶间导管;与NC组相比,糖尿病组观察到血管充血、腺泡和小叶内导管聚集有炎症细胞;与糖尿病组相比,金合欢素组炎症细胞浸润现象减少,而MG53组小叶内和小叶间导管中观察到重度炎症细胞聚集;金合欢素+MG53组胰腺结构与糖尿病组相似。与NC组相比,糖尿病组p-IRS-1/IRS-1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白水平均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与糖尿病组相比,金合欢素组p-IRS-1/IRS-1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白水平均明显升高,而MG53组p-IRS-1/IRS-1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白水平均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与金合欢素组相比,金合欢素+MG53组p-IRS-1/IRS-1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白水平均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论金合欢素可能通过上调IRS-1/PI3K/AKT信号通路发挥减轻糖尿病大鼠IR的作用。

金合欢素调节Hippo信号通路对糖尿病视网膜病变大鼠血管生成的影响

目的探究金合欢素(Aca)调节Hippo信号通路对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠血管生成的影响。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、DR组、Aca低剂量组(10 mg/kg)、Aca中剂量组(20 mg/kg)、Aca高剂量组(30 mg/kg)、Hippo-yes相关蛋白(YAP)通路抑制剂Verteporfin组(Aca高剂量30 mg/kg+Verteporfin 0.8 pmol/kg),每组10只。除对照组外,采用链脲佐菌素和高脂饲料喂养构建DR模型,检测大鼠体质量和空腹血糖(FBG)水平,荧光素血管造影(FFA)观察视网膜血管新生和荧光素渗漏,酶联免疫吸附试验检测血清血管内皮生长因子(VEGF)、促血管生成素-2(Ang-2)水平,苏木素伊红染色观察视网膜组织病理形态变化,Western blot法检测VEGF、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)及Hippo信号通路蛋白表达。结果与对照组比较,DR组大鼠视网膜细胞排列混乱、松散,新生血管形成,大量荧光素渗漏,体质量、大肿瘤抑制激酶2(LATS2)、磷酸化YAP(p-YAP)表达降低,FBG、VEGF、Ang-2、HIF-1α、VCAM-1、YAP、转录调节因子(TAZ)、TEA结构域家族成员1(TEAD1)表达增加(P<0.05);与DR组比较,Aca低、中、高剂量组和Verteporfin组大鼠视网膜细胞排列整齐,新生血管形成和荧光素渗漏减少,体质量、LATS2、p-YAP表达增加,FBG、VEGF、Ang-2、HIF-1α、VCAM-1、YAP、TAZ、TEAD1表达降低(P<0.05),高剂量组效果更明显,但Verteporfin组与Aca高剂量组对DR大鼠各指标的作用效果差异无统计学意义。结论Aca能抑制DR大鼠血管生成,改善视网膜病理损伤,其作用机制可能与调节Hippo信号通路有关。

金合欢素对哮喘幼年大鼠的改善作用及机制

目的基于沉默信息调节因子1(SIRT1)/AMP活化蛋白激酶(AMPK)信号通路探讨金合欢素对哮喘幼年大鼠的改善作用及机制。方法将幼年SD大鼠随机分为对照组、哮喘组、金合欢素组(13.33 mg/kg,灌胃)、SIRT抑制剂EX-527组(1 mg/kg,腹腔注射)、金合欢素+EX-527组(13.33 mg/kg金合欢素,灌胃+1 mg/kg EX-527,腹腔注射),每组12只(雌雄各半)。除对照组外,其余各组大鼠以腹腔注射卵清蛋白致敏+雾化吸入卵清蛋白增敏的方式复制哮喘模型。造模后,各药物组大鼠灌胃或(和)腹腔注射相应药液,每天1次,持续2周。末次给药后,检测其支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、嗜酸性粒细胞数占比和白细胞介素5(IL-5)、IL-4、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,观察肺组织病理形态学变化和杯状细胞异常增生情况,检测肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,以及SIRT1、AMPK和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)蛋白的表达情况。结果与对照组比较,哮喘组大鼠肺组织中有大量的炎症细胞浸润和明显的杯状细胞异常增生;BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞数占比和IL-5、IL-4、TNF-α水平,肺组织过碘酸希夫染色(PAS)评分,以及肺组织中MDA水平均显著升高(P<0.05);肺组织中SOD水平、SIRT1、PGC-1α蛋白的表达水平和AMPK蛋白的磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。与哮喘组比较,金合欢素组大鼠肺组织的病理改变和杯状细胞异常增生均有所减轻,各定量指标均显著改善(P<0.05),而EX-527组大鼠肺组织的病理改变和杯状细胞异常增生均有所加重,各定量指标均显著恶化(P<0.05);联用EX-527可显著逆转金合欢素对哮喘幼年大鼠氧化应激及气道炎症的改善作用。结论金合欢素可抑制哮喘幼年大鼠的氧化应激和气道炎症,上述作用可能与激活SIRT1/AMPK信号通路有关。

金合欢素对幽门螺杆菌感染的胃上皮GES-1细胞凋亡的抑制作用

目的研究金合欢素对幽门螺旋杆菌(Hp)感染GES-1细胞凋亡的保护作用及潜在的作用机制。材料和方法体外用Hp和金合欢素处理GES-1细胞,CCK-8法检测细胞活力,创面愈合法评估细胞迁移及修复能力的变化,流式细胞术分析细胞凋亡率,western blots法检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果Hp可诱导GES-1细胞活力下降,抑制细胞迁移,使细胞凋亡比率增加,同时增加Bax、cle-caspase3的表达水平。而金合欢素处理可增强细胞活力,抑制Hp感染所致的细胞凋亡水平,并下调Bax、cle-caspase3的表达。讨论与结论金合欢素能增强GES-1细胞活性,通过抑制Hp感染的GES-1细胞凋亡,从而对胃黏膜上皮细胞具有保护作用。

金合欢素对丝裂原蛋白激酶p38α活性抑制作用的研究

目的探讨金合欢素对丝裂原蛋白激酶p38α(p38αMAPK)的抑制作用。方法应用分子对接软件Autodock Vina将金合欢素与靶酶三维晶体结构1KV2的活性位点进行分子对接,而后利用脂多糖诱导的小鼠RAW 264.7细胞炎症模型验证金合欢素对p38αMAPK的抑制作用。结果金合欢素可结合于1KV2的活性位点处而阻碍底物三磷腺苷的进入,对p38αMAPK的生物学功能产生抑制作用。与模型组相比,阳性对照药地塞米松和金合欢素不同浓度干预后可明显下调小鼠RAW 264.7细胞炎症模型细胞上清液中一氧化氮和肿瘤坏死因子-α水平(P<0.05)。结论金合欢素可能是通过作用于p38αMAPK活性位点而发挥抗炎的药理活性。

金合欢素抑制人肺腺癌A549细胞生长及其作用机制的初步研究

目的:探讨金合欢素对人肺腺癌A549细胞生长的影响及其可能的作用机制。方法:将A549细胞随机分组,采用CCK-8法计算不同浓度金合欢素作用下A549细胞的存活率。采用平板克隆实验反映金合欢素对增殖的影响。采用划痕实验检测金合欢素对A549细胞迁移的影响,采用Western Blot检测金合欢素作用下细胞中凋亡蛋白的表达。结果:CCK-8实验结果提示与对照组(0μmol/L)相比,A549细胞的存活率随着金合欢素浓度的升高而下降(P<0.05),差异有统计学意义;平板克隆实验结果发现与对照组(0μmol/L)相比,A549细胞的克隆数随着金合欢素浓度的升高而减少(P<0.05);划痕实验结果提示A549细胞的迁移率随着金合欢素浓度的升高而下降(P<0.05);Western Blot实验结果提示随着药物浓度的升高,与对照组(0μmol/L)相比,A549细胞中Bax蛋白的表达增多(P<0.05),Bcl-2蛋白和Survivin蛋白的表达减少(P<0.05)。结论:金合欢素可抑制A549细胞的增殖和迁移,诱导A549细胞凋亡。

HPLC同时测定药用白菊花中绿原酸、木犀草素、芹菜素和金合欢素

采用高效液相色谱法（HPLC）建立同时测定药用白菊花中绿原酸、木犀草素、芹菜素和金合欢素含量的方法，样品采用离子液体分散液相微萃法提取。采用PhenomenexC18色谱柱（250mill×4．6mm，5μm）；流动相：甲醇旬．2％冰醋酸溶液（65：35）；检测波长350nm；柱温35℃；流速0．8mL／min。绿原酸、木犀草素、芹菜素和金合欢素的质量浓度与峰面积分别在0．0005—100（r=0．9999）、0．00095—190（r=0．9999）、0．0008—160（r=0．9997）、0.00061—122μg／mL（r=0．9996）呈良好的线性关系；回收率分别为90．52％-100．44％、90．88％-98．58％、94．40％-98．82％、93．68％-100．54％。该方法快速，简便，重复性好，适合于同时测定药用白菊花中绿原酸、木犀草素、芹菜索和金合欢素的含量。

金合欢素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和迁移的影响及机制研究

目的探讨金合欢素(Aca)通过调节PTEN诱导激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(Parkin)通路介导的线粒体自噬对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法将肝癌HepG2细胞分为对照组(正常培养的HepG2细胞)、Aca组(10μmol/L Aca)、PINK1小干扰RNA阴性对照(si-NC)组(转染si-NC)、PINK1小干扰RNA(si-PINK1)组(转染si-PINK1)、Aca+si-NC组(转染si-NC后用10μmol/L Aca处理)、Aca+si-PINK1组(转染si-PINK1后用10μmol/L Aca处理)。CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移;透射电镜观察自噬小体的形成;Western blot检测细胞中自噬相关蛋白[Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅰ、LC3-Ⅱ]及PINK1/Parkin通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,Aca组HepG2细胞存活率、迁移细胞数目降低,凋亡率、自噬小体数量、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、PINK1、Parkin蛋白表达水平升高(P<0.05),si-PINK1组HepG2细胞存活率、迁移细胞数目升高,凋亡率、自噬小体数量、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、PINK1、Parkin蛋白表达水平降低(P<0.05);与Aca组、Aca+si-NC组比较,Aca+si-PINK1组HepG2细胞存活率、迁移细胞数目升高,凋亡率、自噬小体数量、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、PINK1、Parkin蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论Aca可能通过激活PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬抑制肝癌HepG2细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡。

基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨金合欢素对急性脑梗死大鼠神经功能的保护作用

目的:探讨金合欢素对急性脑梗死大鼠神经功能的保护作用及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad家族成员3(Smad3)信号通路的影响。方法:100只SD大鼠随机分为5组:正常对照组、模型组、丁苯酞组(20.0 mg·kg^-1)、金合欢素低、高剂量组(40.0,80.0 mg·kg^-1),每组20只。除正常对照组外,其余各组建立急性脑梗死模型。建模成功后,丁苯酞组、金合欢素低、高剂量组给予相应药物灌胃,每天1次,持续给予7 d,正常对照组、模型组给予等体积的生理盐水。实验结束后,测定大鼠神经功能评分,HE染色观察大鼠脑组织结构病理改变,同时实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、蛋白质免疫印迹(Western Blot)法测定大鼠脑TGF-β1、Smad3 mRNA及蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组逃避潜伏期时间、TGF-β1、Smad3 mRNA及蛋白表达水平显著升高,经过原平台位置次数、原平台象限停留时间显著降低(P<0.05);与模型组比较,丁苯酞组、金合欢素低、高剂量组逃避潜伏期时间、TGF-β1、Smad3 mRNA及蛋白表达水平显著降低,经过原平台位置次数、原平台象限停留时间显著升高(P<0.05),金合欢素各组呈剂量依赖性(P<0.05);金合欢素低剂量组与丁苯酞组比较差异有统计学意义(P<0.05)。模型组脑组织见大量坏死神经元,且神经细胞排列松散,细胞间隙增宽,呈缺血样病理改变,空泡样变性坏死数量较多;丁苯酞组和金合欢素高剂量组脑组织结构病理得到明显改善。结论:金合欢素对急性脑梗死大鼠表现出较强的神经保护作用;其机制可能与金合欢素通过抑制TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白的表达,进而抑制TGF-β1/Smad3信号通路有关。

金合欢素纳米混悬剂的制备及其体内药动学研究

目的制备金合欢素纳米混悬剂,并考察其体内药动学。方法高压均质法制备纳米混悬剂,测定粒径、Zeta电位、溶解度、体外溶出。以PVP K30占比、稳定剂用量、均质次数为影响因素,粒径为评价指标,Box-Behnken响应面法优化制备工艺。大鼠随机分为3组,分别灌胃给予金合欢素、物理混合物、金合欢素纳米混悬剂的0.5%CMC-Na混悬液(50 mg/kg),取血,HPLC-MS法测定金合欢素血药浓度,计算主要药动学参数。结果最佳条件为PVP K30占比47%,稳定剂用量215 mg,均质次数12次,粒径为214.7 nm,PDI为0.094,Zeta电位为-31.6 mV,溶解度提高至11.71倍,12 h内累积溶出度达95.82%。与原料药比较,纳米混悬剂t_(max)缩短(P<0.01),C_(max)、AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)升高(P<0.01),相对生物利用度提高至5.18倍。结论纳米混悬剂可改善金合欢素溶解度和溶出度,促进药物吸收。

HPLC法同时测定紫花地丁提取物中绿原酸、秦皮乙素、芦丁、金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素和木犀草素含量

目的:建立同时测定紫花地丁提取物中绿原酸、秦皮乙素、芦丁、金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素和木犀草素的HPLC法。方法:采用HPLC法,以Hypersil ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,以0.1%磷酸水(A)-甲醇(B)为流动相进行梯度洗脱,检测波长为345 nm,流速为1.0 ml·min^(-1),柱温为35℃。结果:绿原酸、秦皮乙素、芦丁、金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素和木犀草素分别在4.317 5~172.700 0 mg·L^(-1)、2.7350~109.400 0 mg·L^(-1)、6.980 0~279.200 0 mg·L^(-1)、3.720 0~148.800 0 mg·L^(-1)、4.135 0~165.400 0 mg·L^(-1)和3.395 0~135.800 0 mg·L^(-1)范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.06%,98.84%,98.77%,99.40%,98.53%和98.71%,测得紫花地丁提取物中绿原酸、秦皮乙素、芦丁、金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素和木犀草素的含量分别为1.629 0,1.191 0,4.585 0,2.281 0,3.179 0,1.971 0 mg·g^(-1)。结论:该方法准确、可靠,重复性好,可用于紫花地丁提取物的质量控制。

HTLCS与HPLC测定滁菊中木犀草素、芹菜素、金合欢素方法的建立与比较

以滁菊中木犀草素、芹菜素、合金欢素为测定指标,分别建立滁菊高效薄层扫描法(HTLCS)和高效液相色谱(HPLC)测定分析方法,并对每种方法线性关系和线性范围进行考察。结果表明:建立的HTLSC和HPLC法符合要求,线性关系良好,RE<3%,并且2种方法测定结果无显著性差异(P>0.05)。HTLCS法和HPLC法建立方法合理,能够采用HTLCS代替HPLC法进行滁菊中木犀草素、芹菜素、金合欢素3种成分的测定。

金合欢素-7-O-葡萄糖苷与BSA相互作用的荧光光谱法研究

应用荧光光谱法研究了生理条件下金合欢素-7-O-葡萄糖苷与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。结果表明,其对BSA荧光的猝灭机制属于形成复合物的静态猝灭过程,并求得结合常数Ka为8.57×104L.mol-1,结合位点数n为1。根据热力学参数确定了其与BSA之间的主要作用力类型为静电作用力。采用同步荧光考察了药物对BSA构象的影响。此外,讨论了共存离子Cu2+,Al3+,Zn2+,Mg2+对药物与BSA结合作用的影响。

金合欢素磷脂复合物介孔二氧化硅纳米粒制备及其体内药动学研究

目的制备金合欢素磷脂复合物介孔二氧化硅纳米粒,并考察其体内药动学。方法以大豆磷脂用量、水浴温度、搅拌时间为影响因素,复合率为评价指标,Box-Behnken响应面法优化磷脂复合物处方,X射线粉末衍射进行晶型分析,测定油水分配系数。溶剂挥发法制备介孔二氧化硅纳米粒,测定体外释药、包封率、载药量、粒径、PDI、Zeta电位,在扫描电镜下观察微观结构。18只大鼠随机为3组,分别灌胃给予金合欢素、磷脂复合物、介孔二氧化硅纳米粒的0.5%CMC-Na混悬液(30 mg/kg),于0、0.17、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12 h采血,UPLC-MS/MS法测定金合欢素血药浓度,计算主要药动学参数。结果最优处方为大豆磷脂用量140 mg,水浴温度46℃,搅拌时间4 h,复合率接近100%。原料药以无定形状态存在于磷脂复合物中,油水分配系数明显升高。介孔二氧化硅纳米粒呈球形,平均包封率为87.48%,载药量为5.67%,粒径为168.27 nm,PDI为0.073,Zeta电位为0.043 mV,240 min内累积释放度约为90%。与原料药、磷脂复合物比较,介孔二氧化硅纳米粒t_(max)缩短(P<0.01),C_(max)、AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)升高(P<0.01),相对生物利用度增加至7.90倍。结论磷脂复合物介孔二氧化硅纳米粒可促进金合欢素口服吸收。

金合欢素聚乳酸纳米粒的制备及体内药动学评价

目的:制备金合欢素聚乳酸纳米粒,研究其在SD大鼠体内的药动学情况。方法:以聚乳酸为载体,采用改良的自乳化溶剂挥发法制备金合欢素聚乳酸纳米粒,并对其粒径、Zeta电位和体外释放进行表征。以金合欢素混悬液为对照组,进行SD大鼠口服金合欢素聚乳酸纳米粒的体内药动学研究。结果:金合欢素聚乳酸纳米粒包封率为(81.43±1.27)%,载药量为(6.08±0.32)%;平均粒径为(213.62±3.89)nm;Zeta电位为(-33.16±0.17)mV;并且体外溶出试验表明其具有明显的缓释特征。体内药动学研究结果表明,金合欢素聚乳酸纳米粒的相对生物利用度提高了2.28倍。结论:聚乳酸纳米粒可显著改善金合欢素的药动学行为,提高了口服吸收生物利用度。

金合欢素-7-O-β-糖苷的合成与表征

天然黄酮金合欢素具有多种生物活性,但其水溶性差,生物利用度低。对金合欢素进行糖基化修饰:以葡萄糖为原料经乙酰化、溴代得到的溴代葡萄糖,和以葡醛内酯为原料经开环、乙酰化、溴代得到的溴代葡萄糖醛酸,这两种糖基供体分别与金合欢素进行糖苷化反应,并对该反应进行了条件优化,最后进行脱保护基,合成了3个目标化合物,产率为40%~71%,其中两个化合物的合成方法未见文献报道。所有化合物结构均经ESI-MS、1^HNMR、13^CNMR表征。

金合欢素对大肠杆菌感染小鼠肠道的保护作用

探索金合欢素对感染大肠杆菌肠道小鼠肠道的保护作用,观察小鼠肠道HE染色情况,用药前后的体重对比、白细胞的变化,对比单一肠道感染大肠杆菌的小鼠,实验表明金合欢素对小鼠肠道黏膜有保护作用。