金莲花总黄酮腹腔注射对大鼠脑缺血再灌注损伤的治疗作用及其机制

目的观察金莲花总黄酮腹腔注射对大鼠脑缺血再灌注损伤的治疗作用并探讨其机制。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、金莲花总黄酮组、铁死亡抑制剂组,每组18只。除假手术组外,各组均采用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞模型;假手术组手术操作与模型组基本相同但未插线栓。金莲花总黄酮组、铁死亡抑制剂组在造模完成后分别腹腔注射金莲花总黄酮及铁死亡抑制剂Lip-1,假手术组、模型组腹腔注射等量生理盐水,连续给药3 d,每天1次。采用Longa评分法对大鼠的神经功能缺损进行评分,TTC染色测算脑组织梗死体积百分比,比色法检测脑组织氧化应激指标活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),Western blotting法检测脑组织铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、长链脂酰辅酶A合成酶(ACSL4)、转铁蛋白受体1(TFR1)、膜铁转运蛋白1(Ferroportin-1)。结果神经功能缺损评分、脑梗死体积百分比模型组>金莲花总黄酮组、铁死亡抑制剂组>假手术组(P均<0.05)。脑组织ROS、MDA含量模型组>金莲花总黄酮组、铁死亡抑制剂组>假手术组,GSH-Px含量假手术组>金莲花总黄酮组、铁死亡抑制剂组>模型组(P均<0.05)。脑组织GPX4、TFR1、Ferroportin-1蛋白表达模型组<金莲花总黄酮组、铁死亡抑制剂组、假手术组,ACSL4蛋白表达模型组>金莲花总黄酮组、铁死亡抑制剂组、假手术组(P均<0.05)。结论金莲花总黄酮腹腔注射对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的治疗作用,其机制可能与抑制脑组织铁死亡有关。

金莲花总黄酮下调miR-215-5p抑制PI3K/AKT信号通路影响AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和迁移

目的 探讨金莲花总黄酮对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖、迁移的影响和潜在机制。方法 不同浓度(0.2、0.4、0.8 mmol/L)的金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导CFs。细胞计数试剂盒检测细胞活力确定金莲花总黄酮使用浓度。Transwell实验、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞迁移、miR-215-5p表达水平。Western印迹检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。将miR-215-5p模拟物、抑制物分别转染CFs,检测上调或下调miR-215-5p对AngⅡ诱导的CFs增殖和迁移的影响。结果 金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导的CFs后,细胞活力、迁移能力、miR-215-5p、磷酸化(p)-PI3K和p-AKT蛋白表达显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著升高(P<0.05)。下调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达能够显著降低金莲花总黄酮对AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力及PI3K/AKT信号通路的影响(P<0.05)。结论 金莲花总黄酮能够降低AngⅡ诱导的CFs增殖和迁移,其机制可能与下调miR-215-5p表达和抑制PI3K/AKT信号通路有关。

阿尔泰金莲花总黄酮通过miR-23b-3p抑制RSV感染支气管上皮细胞凋亡和炎症反应的分子机制研究

目的:探讨阿尔泰金莲花总黄酮对呼吸道合胞病毒(RSV)感染支气管上皮细胞凋亡和炎症反应的影响及分子机制。方法:将人支气管上皮细胞16-HBE分为NC组、RSV组、RSV+低、中、高剂量组、RSV+miR-23b-3p组、RSV+miR-NC组、anti-miR-23b-3p+RSV+高剂量组和anti-miR-NC+RSV+高剂量组。细胞计数(CCK-8)试剂检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Westernblot法检测蛋白表达情况,ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1α水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-23b-3p表达水平。结果:RSV感染的16-HBE细胞活性、CyclinD1表达水平降低,凋亡率、CleavedCaspase-3、Bax表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1α水平升高,miR-23b-3p表达水平降低(P<0.01)。不同剂量阿尔泰金莲花总黄酮处理后,16-HBE细胞活性、CyclinD1表达水平升高,凋亡率、CleavedCaspase-3、Bax表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1α水平降低,miR-23b-3p表达水平升高(P<0.01)。过表达miR-23b-3p后,细胞活性、CyclinD1表达水平升高,凋亡率、CleavedCaspase-3、Bax表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1α水平降低(P<0.01)。抑制miR-23b-3p表达可以逆转阿尔泰金莲花总黄酮对RSV感染的16-HBE细胞活性,凋亡和炎症因子水平的影响。结论:阿尔泰金莲花总黄酮可能通过上调miR-23b-3p表达抑制RSV感染的支气管上皮细胞凋亡和炎症反应。

金莲花总黄酮对人甲状腺乳头癌K1细胞三叶因子3表达变化的影响

目的探讨金莲花总黄酮对人甲状腺乳头癌K1细胞增殖抑制作用及三叶因子3(TFF3)表达变化。方法不同浓度金莲花总黄酮作用于体外培养K1细胞24、48、72 h,MTT检测细胞生长抑制率,Western blotting和Real-time PCR检测不同浓度总黄酮对K1细胞TFF3蛋白及mRNA表达的影响。结果 MTT实验结果表明,同一时间总黄酮对K1细胞生长增殖抑制率随着药物浓度的增高而升高(P<0.05),同一浓度总黄酮对K1细胞抑制率随时间延长而升高(P<0.05)。Western blot及QPCR结果显示随着金莲花总黄酮浓度的升高K1细胞TFF3蛋白及mRNA水平下降(P<0.05)。结论金莲花总黄酮对人甲状腺乳头癌细胞具有抑制作用,并能抑制TFF3的表达。

过表达TFF3基因抵抗金莲花总黄酮对人甲状腺乳头癌K1细胞的凋亡作用

目的探讨高表达三叶因子3(trefoil factor 3,TFF3)的人甲状腺乳头癌K1细胞能够抵抗金莲花总黄酮促凋亡的作用及意义。方法慢病毒包装人TFF3 ORF序列质粒,病毒液转染人甲状腺乳头癌K1细胞,获得稳定过表达TFF3基因和蛋白的K1细胞(K1-TFF3)。2.4 mg/ml金莲花总黄酮作用于K1-TFF3细胞及对照组(K1-Vec)48 h,Western blotting检测细胞Bcl-2、ERK、p-ERK蛋白的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率变化。结果K1-TFF3细胞中TFF3基因及蛋白显著高于对照组(P<0.01),Bcl-2、ERK、p-ERK蛋白水平高于对照组(P<0.01),细胞凋亡率低于对照组(P<0.05);金莲花总黄酮作用后,K1-TFF3细胞中Bcl-2、ERK、p-ERK蛋白水平显著高于对照组(P<0.01),细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.01)。结论过表达TFF3通过激活ERK通路能够提高K1细胞的抗凋亡能力。

金莲花总黄酮对高糖诱导下HEPG_(2)细胞功能的影响

目的研究金莲花总黄酮对体外培养的HEPG_(2)细胞脂肪代谢及抗氧化性的影响。方法利用高浓度葡萄糖和不同剂量的金莲花总黄酮共同诱导培养HEPG 2细胞,考察金莲花总黄酮对于高糖诱导的HEPG 2细胞脂肪代谢及抗氧化性的影响。结果金莲花总黄酮通过调节脂肪代谢的相关因子而改善高浓度葡萄糖诱导的脂肪蓄积,且呈现出一定的剂量依赖的特点;可以通过调节氧化应激的关键因子的表达水平来降低ROS水平,金莲花总黄酮对于降低处于高浓度葡萄糖环境下HEPG_(2)细胞中的ROS水平有一定作用。结论金莲花总黄酮能够通过剂量依赖的方式,缓解脂肪蓄积,降低ROS水平。

金莲花总黄酮对T2DM大鼠血清炎症因子、脂代谢及氧化应激的影响

目的:探讨金莲花总黄酮(TFFTC)对T2DM大鼠血清炎症因子、脂代谢及氧化应激干预作用。方法:随机选择50只Wistar大鼠作为空白组(K),其余用高脂高糖饮食喂养4周。腹腔内注射STZ70mg/kg建立T2DM动物模型。将模型动物随机分为模型组(M)、盐酸二甲双胍组(Y)、金莲花总黄酮高剂量组(TFFTC-G)和金莲花总黄酮低剂量组(TFFTC-D)。每组动物通过灌胃法给予相应药物治疗6周,每2周测量1次空腹血糖,腹主动脉取血测定血清糖化血清蛋白(GSP)、胰岛素(INS)、胰岛素自身抗体(IAA)、血脂四项(总胆固醇-TC、甘油三酯-TG、高密度脂蛋白-HDL-C、低密度脂蛋白-LDL-C)、超氧化物气化酶(SOD)、丙二醛(MDA),总抗氧化能力(T-AOC)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)等指标影响。结果:与模型组比较,盐酸二甲双胍组及金莲花总黄酮高、低剂量组可不同程度降低模型大鼠血清动态血糖值,降低血清中GSP、IAA、TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β、IL-6及MDA含量,升高模型动物血清中INS、SOD、T-AOC含量,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:金莲花总黄酮可有效降低T2DM血清血糖水平,降低血清炎症因子表达及氧化应激反应发生,调节血脂功能紊乱,达到良好降糖效果。

金莲花总黄酮胶囊成型工艺研究

优选金莲花总黄酮胶囊成型工艺。以吸湿率、休止角为评价指标,筛选辅料种类。以休止角、吸湿率、颗粒成型率、堆密度为评价指标,正交试验优化成型工艺。结果显示,最佳实验条件是主药与辅料用量的比例为1∶4,可溶性淀粉与乳糖用量的比例为1∶2,乙醇浓度为70%,微粉硅胶的用量为20%。该方法合理可行,可为金莲花总黄酮胶囊的工业生产提供参考依据。

金莲花总黄酮对脂多糖诱导大鼠心脏炎症反应的抑制作用

目的探讨金莲花总黄酮对脂多糖诱导大鼠心脏炎症反应的影响及其分子机制。方法24只雄性SD大鼠随机分为4组,正常对照组(control),脂多糖组(LPS),金莲花总黄酮组(FTTF)和金莲花总黄酮+脂多糖组(FTTF+LPS),每组各6只。FTTF和FTTF+LPS组大鼠灌胃给予金莲花总黄酮100 mg/(kg'd),1周,cotrol和LPS组给予等量纯水。第7天灌胃2 h后LPS和FTTF+LPS组大鼠腹腔注射脂多糖(10 mg/kg),control和FTTF组给与等量生理盐水。注射脂多糖6 h后,取心肌组织,应用HE和CD68染色观察各组大鼠心肌炎症反应,ELISA观测心肌组织炎症因子IL-6,IL-1β及TNP-α水平,应用Western blot技术测定心肌NF-κB和STAT3及其磷酸化水平。结果与正常对照组相比,LPS组大鼠心肌细胞炎症细胞浸润明显,CD68表达明显增多(P<0.001),心肌组织IL-6,IL-1β及TNF-a水平明显升高(P<0.001),NF-κB和STAT3磷酸化水平升高(P<0.001,P<0.01)。金莲花总黄酮千预能够明显抑制CD68表达(P<0.05),降低炎症因子以及NF-K B和STAT3磷酸化水平(P<0.01,P<0.05)。结论金莲花总黄酮可通过抑制NF-K B和STAT3磷酸化减轻脂多糖诱导的心肌炎症反应。

金莲花总黄酮解热作用及对TNF-α,IL-1β和PGE_2含量的影响

目的：观察金莲花总黄酮（Flavonoids from Trollius ledebouri Reichb，FTLR）解热作用。方法：选取连续3天基础体温在38.5-39.0 ℃ 的家兔，随机取6只作为正常对照组，其余家兔耳缘静脉注射细菌内毒素250 ng·kg^-1发热模型，取药后1.5 h体温上升〉1 ℃ 的家兔30只。按体温分层随机分为发热模型组、FTLR 200，100，50 mg·kg^-1剂量组，阿司匹林组100 mg·kg^-1组，灌胃给药，发热模型组ig等容积蒸馏水。药后1，2，3及4 h分别测体温1次。采用ELISAE法测定血清中TNF-α和IL-1β及脑脊液中PGE2表达水平。结果：FTLR 200及100 mg·kg^-1剂量组及阿司匹林组家兔各时间点的平均体温明显均低于模型对照组（P〈0.01）；50 mg·kg^-1组家兔药后2-4 h体温低于对照组（P〈0.05）；各给药组血清中TNF-α和IL-1β及脑脊液中PGE2的含量均低于模型对照组（P〈0.05或P〈0.01）。结论：FTLR有明显的解热作用，并有明显的剂量依赖关系。其解热作用机制与抑制细菌内毒素引起的TNF-α，IL-1β和PGE2等致热因子的合成或释放有关。

金莲花总黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的基于多聚(ADP-核糖)聚合酶-1(PARP-1)/p53信号通路探讨金莲花总黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。方法将人乳腺癌MCF-7细胞分为低、中、高剂量实验组、对照组,分别予以100,200,300μg·mL-1金莲花总黄酮和等量生理盐水。用CCK-8法测定人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制率;用平板细胞克隆形成实验观察人乳腺癌MCF-7细胞克隆形成情况;用蛋白免疫印迹法检测人乳腺癌MCF-7细胞PARP-1、p53蛋白的表达水平。结果干预48 h时,低、中、高剂量实验组人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率分别为(30.65±3.39)%,(44.28±3.76)%和(59.22±4.03)%;对照组、低、中、高剂量实验组克隆形成率分别为(84.52±3.11)%,(49.74±2.86)%,(37.21±3.59)%和(10.32±2.64)%;PARP-1蛋白相对表达量分别为0.92±0.08,0.85±0.05,0.28±0.12和0.09±0.06;p53蛋白相对表达量分别为0.93±0.07,0.73±0.11,0.49±0.10和0.26±0.08。上述指标,对照组分别与低、中、高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论金莲花总黄酮可显著抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与抑制PARP-1/p53通路的信号转导相关。

阿尔泰金莲花总黄酮对PM2.5致大鼠肺纤维化的防治作用研究

目的研究阿尔泰金莲花总黄酮(trollius altaicus flavonoids, TAF)对大气细颗粒物(PM2.5)致大鼠肺纤维化的防治作用。方法 60只Wistar大鼠随机分为正常对照组,PM2.5模型组,PM2.5模型+TAF低、中、高剂量组(125、250、500 mg/kg·bw),PM2.5模型+地塞米松(灌胃0.2 mg/kg·bw)阳性对照组,每组10只。除正常对照组与模型组外,各剂量组按设定剂量灌胃1次/d给予受试物,连续28 d。PM2.5暴露和给药同时进行,除正常对照组外,其余各组每周气管滴注PM2.5混悬液(50 mg/kg·bw)2次,染毒4周,共8次,建立肺纤维化大鼠模型。第29天,经腹主动脉采血、取肺组织、收集肺泡灌洗液(BALF),检测大鼠炎症反应水平、纤维化指标和氧化应激水平,观察肺组织病理学变化情况。结果与正常对照组比较,模型组大鼠外周血白细胞计数,血清和BALF中IL-1β、TNF-α、HYP、PINP和PIIINP含量升高(P<0.01),血清中LDH、MDA和NO含量升高(P<0.01),肺组织W/D升高(P<0.01),IL-10、SOD和GSH含量降低(P<0.01);病理结果显示,模型组大鼠肺组织大片实变、水肿、出血、肺泡结构破坏,肺间质炎细胞大量浸润,可见大量粉尘结节,肺实变区可见大量亮蓝色胶原纤维沉积。与模型组比较,TAF中、高剂量组大鼠外周血白细胞计数,血清和BALF中IL-1β、TNF-α含量降低(P<0.05或0.01),血清中LDH、MDA和NO含量降低(P<0.05或0.01),肺组织W/D降低(P<0.05或0.01),IL-10、SOD和GSH含量升高(P<0.05或0.01);TAF高剂量组各项检测指标与地塞米松组差异无统计学意义(P>0.05)。病理检查结果显示随TAF剂量增加大鼠肺组织形态结构破坏降低,肺实变、粉尘结节、炎症细胞浸润及胶原纤维沉积减少。结论 TAF对PM2.5致大鼠肺纤维化有一定的防治作用。

金莲花黄酮类成分抗菌及抗氧化活性研究

目的比较研究金莲花总黄酮及其黄酮主成分荭草苷和牡荆苷的体外抗菌活性及抗氧化活性。方法体外抗菌活性试验采用管碟法对9个菌株(大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变异链球菌、链霉菌、红酵母、黑曲霉、白色念珠菌)进行体外抑菌圈测定;采用连续稀释法和活菌计数法测定最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);分别采用邻苯三酚法-超氧阴离子清除能力测定试验、水杨酸法-羟基自由基清除能力测定试验和DPPH清除能力试验评价3种样品的抗氧化活性差异。结果在体外抗菌活性试验中,金莲花总黄酮、荭草苷、牡荆苷对革兰阳性菌的抑菌效果明显,对革兰阴性菌和真菌无明显抑菌作用;3种药物对金黄色葡萄球菌表现出较好的抑菌活性,其抑菌作用强弱为荭草苷=总黄酮>牡荆苷,其中荭草苷和总黄酮的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度分别为0.15625 mg·mL^(-1)和0.625 mg·mL^(-1);3种药物对变异链球菌也表现出较好的抑菌活性,其抑菌作用强弱为荭草苷>总黄酮>牡荆苷,其中荭草苷的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度分别为0.15625 mg·mL^(-1)和0.625 mg·mL^(-1)。在抗氧化活性测定中,金莲花总黄酮对3种自由基均表现出较强的清除能力。结论金莲花总黄酮、荭草苷和牡荆苷对革兰阳性菌表现出明显的抑制作用,也表现出较好的抗氧化活性。荭草苷的杀菌效力及抗氧化活性整体上优于牡荆苷,可能是其清热解毒的主要成分。

短瓣金莲花提取物抗炎及抗内毒素作用的实验研究

目的：观察短瓣金莲花提取物（总黄酮）抗炎及内抗毒素作用;方法：采用小鼠腹腔毛细血管通透性实验;大鼠足跖腱膜下注射100%新鲜鸡蛋清（0.1m L/只）和注射1%甲醛足肿胀实验观察提取物3个剂量组的抗炎作用。采用内毒素1.5mg/kg引起小鼠休克实验,观察短瓣金莲花提取物3个剂量组的抗内毒素作用。结果：短瓣金莲花提取物高、中、低剂量均能显著抑制醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高（P〈0.01）;高剂量可显著抑制药后1、2小时的蛋清性足肿胀（P〈0.05、0.01）,中剂量可显著抑制药后2、3小时的蛋清性足肿胀（P〈0.01）,低剂量可抑制药后2小时的蛋清性足肿胀（P〈0.05）;3个剂量对大鼠甲醛性足肿胀在致炎后1~4天均有明显的抑制作用（P〈0.01）,高剂量使内毒素引起小鼠死亡率明显减少（P〈0.01）,中、低剂量对内毒素引起小鼠死亡的保护作用不明显（P〉0.05）。结论：短瓣金莲花提取物具有很好的抗炎及抗内毒素作用。