C5aR在金黄色葡萄球菌LukS-PV诱导非小细胞肺癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨金黄色葡萄球菌杀白细胞素S组分(LukS-PV)通过活化补体5受体(C5aR)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞A549和H460凋亡的影响。方法:将敲低C5aR表达的慢病毒载体转染至A549和H460细胞中,qRT-PCR和Western blot检测C5aR敲低率,Annexin V/PI染色法检测敲低C5aR对细胞凋亡的影响。对敲低C5aR的细胞再加入LukS-PV,通过Annexin V/PI染色法和凋亡相关蛋白检测细胞凋亡情况。结果:与PBS对照组相比,LukS-PV可促进A549和H460细胞凋亡(P<0.05)。慢病毒载体转染A549和H460细胞敲低C5aR后,细胞C5aR表达水平降低(P<0.05)。在敲低C5aR基础上再加入LukS-PV,细胞凋亡受到抑制(P<0.05)。结论:敲低C5aR可抑制LukS-PV诱导NSCLC细胞的凋亡。

金黄色葡萄球菌PV杀白细胞素S组分体外诱导单核白血病细胞株THP-1巨噬细胞的研究

目的目前关于金黄色葡萄球菌PV杀白细胞素S组分(LukS-PV)体外诱导人源单核白血病细胞株THP-1巨噬细胞研究较少。文中主要探讨LukS-PV能否体外诱导人源THP-1巨噬细胞极化。方法佛波酯体外诱导THP-1为THP-1巨噬细胞,THP-1经佛波酯刺激48 h、72 h后,流式检测细胞表面标志物CD11b、CD14。采用0.1、0.2、0.4μmol/L的LukS-PV作用THP-1巨噬细胞,分别为0.1μmol/LLukS-PV组、0.2μmol/LLukS-PV组和0.4μmol/LLukS-PV组,另采用佛波酯诱导THP-1巨噬细胞为对照组。流式细胞术检测各组24 h、48 h CD80、CD206的表达,qRT-PCR检测细胞IL-12、TNF-α、TGF-β的mRNA表达水平。结果0.1μmol/LLukS-PV组、0.2μmol/LLukS-PV组、0.4μmol/LLukS-PV组细胞表面CD80表达量较对照组明显增高(P<0.01),0.2μmol/L LukS-PV组表达量最高(P<0.01)。0.2μmol/L LukS-PV组24h IL-12、TNF-αmRNA表达水平(7.32±0.91、5.29±0.51)较对照组(0.71±0.11、0.73±0.14)明显升高(P<0.01),48 h时IL-12、TNF-αmRNA表达水平(11.16±0.78、6.70±0.68)较对照组亦明显升高(P<0.01)。0.2μmol/L LukS-PV组24h、48h细胞表面CD80的表达较对照组明显升高(P<0.000)。结论LukS-PV能够刺激人源THP-1巨噬细胞向M1极化。

金黄色葡萄球菌所致肺部感染的耐药特点及其Panton-Valentine杀白细胞素基因的携带状况分析

目的分析金黄色葡萄球菌所致肺部感染的耐药性特点及其Panton-Valentine杀白细胞素基因的携带状况。方法回顾性调查了温州医学院第一附属医院2005年1月至2006年1月医院感染的金黄色葡萄球菌所致肺部感染患者132例,对其体外药敏试验进行分析;并利用多重PCR检测其PVL基因,应用多位点基因序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术对PVL基因阳性的菌株进行序列分型。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的SCCmec基因分型采用多重聚合酶链反应。结果致肺部感染的132株金黄色葡萄球菌的耐药现象较为严重,仅对万古霉素、呋喃妥因及复方新诺明等药物的敏感率较高;其中经多重PCR筛选出10株携带PVL基因的金葡菌,全部为MRSA菌株,3株为ST239-SCCⅢ,2株为ST398-SCCmecⅢ,2株为ST398-SCCmecⅣ,ST25-SCCmecⅢ、ST59-SCCmecⅠ和ST88-SCCmecⅢ各1株。结论肺部感染的金黄色葡萄球菌对多种抗生素耐药,呈多重耐药性;其携带PVL基因占一定比例。

国内杀白细胞素阳性金黄色葡萄球菌感染的研究现状

金黄色葡萄球菌是临床引起感染性疾病最常见的病原菌之一，它的致病性与其携带的多种毒素因子有关。携带毒素因子的金黄色葡萄球菌毒力更强，与感染后疾病的严重程度呈正相关，产毒素菌株所造成的感染重、病程长，加大治疗难度和护理难度，同时增加了患者的痛苦和经济负担。杀白细胞素（PVL）是金黄色葡萄球菌产生的一种重要外毒素，

杀白细胞素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性分析

目的了解杀白细胞素(PVL)基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药情况,指导临床合理用药。方法对临床收集的47株PVL基因阳性MRSA采用PCR法检测PVL基因,采用纸片扩散法进行药敏试验,并对结果进行分析。结果 47株MRSA的PVL基因检出率为46.8%,PVL基因阳性、阴性MRSA对β-内酰胺类抗菌剂均100.0%耐药,PVL基因阳性MRSA对氨基糖苷类、利福平、四环素、红霉素、环丙沙星、亚胺硫霉素等抗菌剂全部耐药,对盐酸克林霉素的耐药率为95.5%;PVL基因阴性MRSA对上述抗菌剂的耐药性虽比PVL基因阳性MRSA轻,但耐药率也在88.0%以上,2组间耐药性比较,差异有统计学意义(P<0.05)。对复方新诺明敏感率在90.0%以上,未发现对万古霉素耐药株。结论 PVL基因阳性MRSA在临床检出率已较高,耐药性严重并呈多重耐药特征,增加了临床抗感染治疗的难度。

表达Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)的金黄色葡萄球菌诱导人THP-1单核细胞自噬和凋亡

目的研究表达Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)的金黄色葡萄球菌诱导人THP-1细胞自噬和凋亡机制。方法在大肠杆菌中表达重组杀白细胞素(rPVL),并免疫家兔制备多克隆抗血清。采用反转录PCR和Western blot法鉴定表达PVL的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。分别使用表达PVL的MRSA(MRSA^(PVL+))和不表达PVL的MRSA(MRSA^(PVL-))感染THP-1细胞,于感染后1、3、6 h收集细胞,采用实时定量PCR检测自噬相关基因3(ATG3)、ATG4B、ATG5、ATG7、ATG12;Western blot法检测beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的AKT(p-AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、caspase-3的蛋白水平;二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针负载法检测细胞活性氧(ROS)水平;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功制备PVL多克隆抗体,鉴定出1株MRSA^(PVL-)菌和1株MRSA^(PVL+)菌。分别以两株菌与THP-1细胞共培养1 h,MRSA^(PVL+)组仅ATG7表达量显著高于MRSA^(PVL-)组和正常对照组;共培养3 h,MRSA^(PVL+)组ATG7和ATG12表达量高于MRSA^(PVL-)组和正常对照组,其他基因表达量变化不明显。感染1、3、6 h,MRSA^(PVL+)感染组细胞PI3K、AKT和mTOR磷酸化水平显著低于MRSA^(PVL-)感染组和正常对照组;感染1 h和3 h,MRSA^(PVL-)感染组细胞PI3K、AKT和mTOR磷酸化水平显著低于正常对照组;感染6 h,MRSA^(PVL-)菌感染组细胞mTOR磷酸化水平显著低于正常对照组。感染1、3、6 h,MRSA^(PVL+)组细胞ROS水平和凋亡率均高于MRSA^(PVL-)组和正常对照组,且随着感染时间的延长细胞ROS水平和凋亡率持续增加;MRSA^(PVL-)组细胞ROS水平和凋亡率也高于正常对照组。结论MRSA^(PVL+)对THP-1细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制作用更强,可促进ATG12/ATG7/ATG5自噬通路活化增加THP-1细胞自噬;同时,MRSA^(PVL+)诱导THP-1细胞ROS产生增加,促进细胞凋亡。

金黄色葡萄球菌杀白细胞素的研究进展

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA）普遍存在,是导致医院和社区感染的重要病原菌。MRSA最早出现在医院内呼吸道感染中,随着时间的推移,逐渐向院外扩散,社区相关性MRSA（communityassociated MRSA,CA-MRSA）成为院外感染的重要病原菌。有研究者发现,几乎所有CA-MRSA存在杀白细胞素（pantonvalentine leucocidin,PVL）[1-4]。

产杀白细胞素金黄色葡萄球菌感染的研究现状

国外多数回顾性研究发现产杀白细胞素(PVL)金黄色葡萄球菌感染有着特有的临床表现,特别是产PVL金黄色葡萄球菌相关性坏死性肺炎可能为一新现的临床疾病,由此PVL在金黄色葡萄球菌感染中的致病研究日益受到重视。本文就目前对产PVL金黄色葡萄球菌感染的致病机制、流行病学、检测和防治等问题研究作一综述。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因亚型的流行及MLST分子分型

目的探讨临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)杀白细胞素(pvl)基因亚型的流行及MLST分子分型特征。方法收集非重复MRSA 287株,按照美国疾病预防控制中心的社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)定义分为医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HA-MRSA)和CA-MRSA两组。采用PCR方法扩增pvl基因,产物双向测序并分析核苷酸变异情况;pvl基因阳性(pvl^(+))菌株进行多位点序列(MLST)分型并采用eBURST软件进行克隆复合群(CC)分析。结果287株MRSA中,51株为pvl^(+)菌株(17.8%,51/287),其中29株为CA-MRSA(56.9%,29/51),22株为HA-MRSA(43.1%,22/51)。pvl^(+)菌株经双向测序共发现4个位点(527、663、1396和1729)存在核苷酸变异,根据527位点的差异分为H(H1和H2)和R(R1和R2)亚型。其中46株(90.2%,46/51)为H型(6株H1、40株H2),5株(9.8%,5/51)为R型(1株R1、4株R2)。H型主要属于CC59(ST59/ST388)(69.6%,32/46),其次为CC22(ST22)(10.9%,5/46),CC1(ST1/ST188)(6.5%,3/46)、CC88(ST88)(4.3%,2/46)、CC5(ST149)(4.3%,2/46)、CC9(ST9)(2.2%,1/46)和CC30(ST30)(2.2%,1/46);仅在CC59(ST59)、CC88(ST88)和CC5(ST25)型菌株中发现R型。CA株和HA株携带的pvl均以H亚型为主,分别占86.2%(25/29)和95.5%(21/22),两组差异无统计学意义。结论本地区临床分离MRSA携带的pvl以H亚型(H2)为主,主要克隆型别为CC59;CA-MRSA和HA-MRSA携带的pvl亚型没有明显差异。

74例金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因检测

杀白细胞素（panton-valentine leukocidin,PVL）是金黄色葡萄球菌的一种重要致病因子,可以引起毛细血管扩张、趋化效应、多形核白细胞渗出、核破裂、皮肤坏死等[1]。本文采用PCR法对临床分离的金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因进行检测,旨在探讨PVL的表达与临床感染的相关性。

鄂西北地区金黄色葡萄球菌临床分离株耐药及毒力基因分析

目的了解鄂西北地区医院临床标本中分离的金黄色葡萄球菌的耐药及毒力基因的携带情况。方法收集2019-2021年十堰市5家医院临床分离的金黄色葡萄球菌142株,采用微量肉汤稀释法检测耐药性,采用PCR法检测sea等9种肠毒素基因及mecA、杀白细胞素(PVL)毒力基因。结果142株金黄色葡萄球菌中检出44株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),检出率为30.99%(44/142)。MRSA对红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、四环素、庆大霉素的耐药率均高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),差异均有统计学意义(P<0.05)。肠毒素基因检出率为70.42%(100/142),其中经典肠毒素基因(sea~see)和新型肠毒素基因(seg~sej)检出率分别为47.18%(67/142)、42.25%(60/142);PVL毒力基因检出率为13.38%(19/142),其中MSSA和MRSA的检出率分别为9.18%(9/98)和22.73%(10/44),差异有统计学意义(P<0.05)。结论临床分离的金黄色葡萄球菌肠毒素及PVL基因检出率较高,在临床诊疗中应做好医院感染控制,及时采取有效的隔离措施并适时加强对PVL基因的监测。

亚抑菌浓度的抗生素对金黄色葡萄球菌杀白细胞素表达及释放的影响

目的：观察亚抑菌浓度抗生素对金黄色葡萄球菌（金葡菌）杀白细胞素（PVL）表达的影响。方法利用 PCR筛选出8株 PVL 阳性金葡菌。常量稀释法测定克林霉素、替加环素、利奈唑胺和万古霉素最低抑菌浓度值（MIC）；荧光定量 PCR 测定前3种抗生素对 PVL 阳性金葡菌在1/8、1/4、1/2 MIC 作用下 PVL mRNA 相对变化。 ELISA 法测定4种抗生素1/4、1/2 MIC 时 PVL 蛋白含量。结果克林霉素、利奈唑胺和替加环素在1/8、1/4、1/2 MIC 时均可降低 PVL表达。 PVL mRNA 在3种抗生素作用下分别降低17%～82%、8%～85%和11%～78%；PVL 蛋白水平在1/4、1/2 MIC 克林霉素和利奈唑胺作用下，分别下降了65%和83%、40%和61%，替加环素仅1/2 MIC 时降低较明显，达64%。万古霉素不影响 PVL 表达。结论不同抗生素亚抑菌浓度时对 PVL 表达影响不同。克林霉素和利奈唑胺可明显降低PVL 表达，且呈剂量依赖性，替加环素只在较高浓度时抑制PVL 表达，万古霉素对 PVL 表达无影响。

影响金黄色葡萄球菌杀白细胞素ED转录表达的培养条件

为探讨影响金黄色葡萄球菌杀白细胞素ED(leukocidin ED,LukED)转录表达的最佳培养条件,采用定量反转录-聚合酶链反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测金黄色葡萄球菌Newman菌株lukE在TSB、BHI、YCP、MHB和LB培养基中不同生长阶段(对数生长早期、中期、晚期和平台期)的表达情况。以表达量较低的培养基为基础,分别加入表达量最高的培养基的不同成分,分析促进lukED表达的物质。结果显示,lukE mRNA水平在YCP培养基中生长至对数晚期时表达最高;YCP组分酵母浸出物、酪蛋白氨基酸及丙酮酸钠均能显著促进lukE转录表达,前两者效果更好。

金黄色葡萄球菌杀白细胞素ED的研究进展

杀白细胞素ED(leukocidin ED,LukED)是金黄色葡萄球菌产生的双组分成孔杀白细胞素之一,由共转录于一条mRNA的lukE和lukD两个基因编码。LukED可与趋化因子受体CCR5结合以杀伤巨噬细胞、T细胞和树突细胞,或与中性粒细胞、单核细胞和自然杀伤(natural kiler,NK)细胞上的表面受体CXCR1/2结合以促进金黄色葡萄球菌的致病性及系统性感染宿主的死亡。此外,LukED还可结合Duffy抗原趋化因子受体,使裂解红细胞释放血红蛋白,促进细菌的铁吸收和生长繁殖。LukED的表达受双组分信号转导系统附属基因调节子——毒素抑制子(Agr-Rot)通路和转录调节子RpiRc、SpoVG的调控。lukED基因在金黄色葡萄球菌中广泛流行,与金黄色葡萄球菌所致血流感染、脓疱病及抗生素相关性腹泻密切相关。这些进展对了解LukED的表达调控机制、临床意义及其在细菌致病机制中的作用,开发新的金黄色葡萄球菌感染抗毒素治疗药物具有重要意义。

金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素的表达及其对奶牛乳腺上皮细胞的损伤作用

研究产PV-杀白细胞素(PVL)金黄色葡萄球菌ATCC49775、pvl缺陷株△pvl 49775和相应的回补株C-△pvl 49775以及体外重组的PVL(rPVL)对奶牛乳腺上皮细胞的损伤作用,为系统研究金黄色葡萄球菌感染奶牛乳腺上皮细胞的机制提供依据。采用原核表达的方法构建金黄色葡萄球菌LukS-PV和LukF-PV重组质粒并分别转化大肠杆菌BL21,诱导表达纯化后对其进行Western blot鉴定;用Live/Dead细胞荧光染色和Annexin V-FITC/PI双染法检测ATCC49775、△pvl 49775、C-△pvl 49775和rPVL对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响。成功构建pET28a-LukS-PV、pET28a-LukF-PV重组表达载体,经诱导表达纯化后获得的LukS-PV浓度为0.6 mg·mL^-1,LukF-PV浓度为1.15 mg·mL^-1。rPVL主要诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡(P<0.01),金黄色葡萄球菌ATCC49775、△pvl 49775和C-△pvl 49775均能诱导奶牛乳腺上皮细胞明显凋亡和坏死,但pvl阳性菌株ATCC49775和C-△pvl 49775诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡率和坏死率明显高于△pvl 49775(P<0.05)。结果表明原核表达的rPVL对奶牛乳腺上皮细胞表现出较强的毒性;pvl缺陷株△pvl 49775诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡和坏死的能力比pvl阳性菌株ATCC49775和C-△pvl 49775低,说明PVL在金黄色葡萄球菌感染奶牛乳腺上皮细胞过程中有重要作用。

一名10岁男童因金黄色葡萄球菌产生Panton Valentine杀白细胞素引起的坏死性肺炎和关节炎

Staphylococcal necrotizing pneumonia producing the Panton Valentine leukotoxin (PVL) has been described for many years. The french reference center for staphylococcal toxaemia defined it with precision in 1999. A 10- year- old child, died in 36 hours from respiratory distress and shock. Staphylococcal pneumonia was suspected then confirmed: S. Aureus producing PVL was isolated in lung, blood and articulations.

金黄色葡萄球菌毒素基因的检测及临床应用

目的:了解医院获得性金黄色葡萄球菌(HA-SA)和社区获得性金黄色葡萄球菌(CA-SA)所携带肠毒素、表皮剥脱性毒素(ETs)、中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)及杀白细胞素基因(PVL)的特点。方法:应用PCR法检测肠毒素A、B、C、D、E基因,ETs A、B基因,TSST-1以及PVL。结果:116株金黄色葡萄球菌中,85株为HA-SA,检出肠毒素A基因6株,肠毒素C基因1株,肠毒素D基因1株,PVL2株;31株为社区获得性金黄色葡萄球菌,检出肠毒素A基因1株,肠毒素B基因1株,肠毒素D基因1株,PVL7株;所有菌株均未检测到肠毒素E、ETs A、B和TSST-1基因。CA-SA PVL检出率显著高于HA-SA,两者比较差异有统计学意义(P<0.005),而肠毒素、ETs和TSST-1基因检出率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:金黄色葡萄球菌可分泌多种毒素,在分离金黄色葡萄球菌的同时,应注意其毒素检测。

皮肤软组织及创伤感染金黄色葡萄球菌分离株的毒素基因检测

目的了解皮肤软组织及创伤感染的金葡菌携带的杀白细胞素(Panton—Valentine Leukocidin,PVL)基因、表皮剥脱性毒素(ETs)基因、中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)的tst基因的特点。方法对连续收集的皮肤软组织感染中分离的90株金葡菌,采用多重PCR同时检测金葡菌特异性16SrRNA基因、mecA基因、PVL基因,采用PCR法检测TSST-1及EtsA、B基因。结果金葡菌mecA基因阳性47株(占金葡菌52.2%)为耐甲氧西林金葡菌(MRSA)。有1株MRSA的EtsB基因阳性,1株MRSA的TSST-1阳性,有7株金葡菌携带PVL基因,其中3株为mecA基因阳性株(MRSA)。结论金葡菌可分泌多种毒素,携带PVL毒素的金葡菌常可以引起严重的侵袭性感染,尤其对产毒的MRSA感染引起足够的重视,是防控的重点。

产PVL毒素的金黄色葡萄球菌感染与坏死性肺炎

随着越来越多的国家相继出现金黄色葡萄球菌相关性坏死性肺炎的报道,其相关致病因子也日益引起医学界关注。多项研究表明,Panton-Valentine杀白细胞素与金黄色葡萄球菌性坏死性肺炎之间存在着明显的相关性。本文就PVL阳性金黄色葡萄球菌pvl基因和PVL蛋白、流行病学、坏死性肺炎及其致病机制作一综述。

ST59型社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力因子研究

了解ST59型社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(community-acquired methicillin-resistant Staphy-lococcus aureus,CA-MRSA)携带毒力因子的情况。用PCR方法扩增ST59型CA-MRSA PSMα、PVL、SEA、SEB、SEC、SED、SEE、TSST-1、ETA、ETB基因。5株CA-MRSA全部检出PSMα基因和PVL基因,均未检出SEA、SEB、SEC、SED、SEE、TSST-1、ETA、ETB基因。PSMα和PVL基因是ST59型社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌常见的毒力因子。