外周血指标对鼻息肉患者黏膜中IL-5和金黄色葡萄球菌肠毒素特异性免疫球蛋白E阳性表达的预测价值

目的借助外周血指标预测慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)2型生物标志物。方法收集2020年6月~2022年5月在北京同仁医院鼻科住院的CRSwNP患者临床资料,检测外周血中嗜酸粒细胞百分比(Eos%)、Eos计数、骨膜蛋白和总IgE以及CRSwNP黏膜中白细胞介素5(IL-5)和金黄色葡萄球菌肠毒素特异性免疫球蛋白E(Staphylococcus aureus enterotoxinimmunoglobulin E,SE-IgE)。应用受试者工作特征(ROC)曲线评估每个外周血指标对黏膜IL-5/SE-IgE阳性表达预测价值,利用Logistic回归筛选对黏膜IL-5/SE-IgE阳性有预测价值的外周血指标,构建诺模图模型。结果CRSwNP患者哮喘比例、血中Eos%、骨膜蛋白和总IgE在IL-5/SE-IgE阳性和阴性两组之间,均具有统计学差异。ROC曲线单因素分析显示血Eos%、Eos计数、骨膜蛋白和总IgE对黏膜IL-5和SE-IgE阳性预测的AUC分别波动在0.655~0.784和0.721~0.802,Logistic回归确认血中Eos%、总IgE和血中骨膜蛋白、总IgE可分别作为IL-5和SE-IgE阳性的独立预测因素。构建预测CRSwNP黏膜IL-5/SE-IgE阳性的诺模图模型,一致性指数(C-index)为0.804和0.81,提示具有很好的预测准确性。结论血中Eos%、总IgE和血中骨膜蛋白、总IgE分别构建的诺模图,对CRSwNP黏膜IL-5和SE-IgE阳性表达具有很好的预测价值,可以预判CRSwNP内型和表型严重性。

基于荧光生物传感技术检测牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素B

目的利用纳米金粒子(gold nanoparticles,AuNPs)荧光猝灭性能和核酸适配体的高亲和力,构建一种简便、灵敏的纳米金“Turn-on”型荧光生物传感方法检测牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxins B,SEB)的方法。方法以AuNPs作为荧光体的能量受体(猝灭剂),荧光素-单链DNA(fluorescein-ssDNA,FAM-ssDNA)作为荧光能量供体,冷冻法制备AuNPs-SEB适配体复合物,基于AuNPsSEB适配体复合物/SEB/FAM-ssDNA的竞争性结合,构建纳米金“Turn-on”型荧光生物传感检测方法。对缓冲体系pH和反应时间等条件进行优化,以牛奶为代表对方法检测性能进行验证。结果在优化好的实验条件(pH 7.5、反应时间15 min和反应温度25℃)下,在10^(-1)~10^(4)ng/mL范围内,荧光强度与SEB质量浓度之间呈现良好的线性关系,其相关系数为0.995,检出限为0.062 ng/mL。应用于牛奶样品中SEB的测定,方法回收率为91.2%~108.0%,相对标准偏差在2.6%~5.2%范围之间。结论该纳米金“Turn-on”型荧光生物传感检测技术具有简便、灵敏和准确等优点,可为食品中污染物的检测提供一种可行的新方法。

鸽屠宰加工环节金黄色葡萄球菌肠毒素、生物膜形成能力及其相关基因的检测

为了解鸽屠宰加工环节中金黄色葡萄球菌的肠毒素、生物被膜形成能力、肠毒素及生物被膜形成相关基因的情况。采用金黄色葡萄球菌肠毒素酶联免疫分析试剂盒和结晶紫染色法检测41株金黄色葡萄球菌的肠毒素含量和生物被膜形成能力,同时通过PCR方法扩增金黄色葡萄球菌12种肠毒素基因和10种生物被膜形成相关基因。41株金黄色葡萄球菌在肠毒素酶联免疫法检测中,有30株为产肠毒素的菌株。肠毒素基因的检测中,有35株菌含肠毒素基因,检出率为85.36%,且有携带一种或多种肠毒素基因的情况。经典肠毒素基因的检出率分别为:sea(29.27%)、seb(29.27%)、sec(4.88%)、sed(65.85%)和see(2.44%);新型肠毒素基因的检出率分别为:sel(36.59%)、seg(29.27%)、sem(17.07%)、seu(17.07%)、sei(14.63%)、seh(7.32%)和sek(0.00%)。结晶紫染色法测定菌株生物被膜形成能力弱、中等和强的检出率分别为39.02%、43.90%和17.07%。生物被膜形成相关基因的检测中,clfB、luxS和clfA的检出率最高均为100.00%,其次是sarA和ccp均为97.56%,sigB、cna、icaA、agrC的检出率分别为85.37%、65.85%、41.46%、2.44%,bap未检出。此外,所有菌株均有携带多种生物被膜相关基因的情况,以携带7种基因的菌株最多(15/41,36.59%)。鸽屠宰加工环节污染中金黄色葡萄球菌存在较多的肠毒素且生物被膜形成能力较高,预测该鸽屠宰加工环节中金黄色葡萄球菌具有致病性,存在引起食物中毒的潜在风险。

基于裁剪适配体的纳米金比色法用于金黄色葡萄球菌肠毒素A的可视化检测

目的:筛选适配体作为分子识别原件,基于纳米金的盐效应构建生物传感器,实现金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)的快速定量检测。方法:采用分子对接和分子动力学模拟对SEA适配体进行截短指导和结果预测,利用纳米金显色法验证模拟结果,对SEA适配体优化并将其作为分子识别原件,优化反应体系,探讨SEA质量浓度与吸光度比值间的关系,构建一种可视化的SEA快速检测分析方法,并对方法的准确度、精密度和特异性进行评价。结果:筛选出一条序列短、亲和力高、特异性强且稳定的SEA适配体,建立了一种基于纳米金比色的SEA可视化检测方法,检出限低,加标回收结果满意。结论:采用分子模拟能有效提高适配体筛选效率,本方法可用于SEA快速检测。

乌鲁木齐生牛乳中金黄色葡萄球菌的肠毒素检测及分离株同源性分析

探究乌鲁木齐生牛乳中金黄色葡萄球菌经典肠毒素携带情况及分离株同源性差异,为金黄色葡萄球菌的防控提供参考。对乌鲁木齐地区采集的131份生牛乳样品采用特异性选择培养基结合PCR方法分离鉴定金黄色葡萄球菌,并通过PCR方法检测金黄色葡萄球菌5种经典肠毒素(sea、seb、sec、sed、see)携带情况和根据测序结果对分离株进行同源性分析。结果显示,共分离鉴定到金黄色葡萄球菌13株,总分离率为9.92%(13/131);13株金黄色葡萄球菌经典肠毒素阳性菌株5株,阳性率为38.46%;13株金黄色葡萄球菌的同源性在93.7%~99.7%之间,遗传差异在0.3~6.6之间。研究表明,该地区生牛乳中存在一定金黄色葡萄球菌的污染,经典肠毒素阳性率较高,不同来源的分离株同源性高、差异性小。

新疆乌鲁木齐市周边乳源金黄色葡萄球菌的污染和致病力评价

为了评价新疆乌鲁木齐市周边乳源金黄色葡萄球菌污染和致病力,从奶牛养殖场和挤奶厅采集了414份样品,共分离鉴定出51株金黄色葡萄球菌(总分离率为12.3%),其中粪样、吸奶器拭子、体表拭子、乳样、饲料的分离率分别为8.4%、22.8%、14.8%、18.9%、9.8%。采用PCR检测毒力基因的携带情况,SEs的总检出率为60.8%,其中sec、seh和sel的检出率为51.0%、43.1%和23.5%。其他毒力基因hla和hlb、clfa的检出率为52.9%和84.3%、90.2%。菌株耐药率较高的抗生素是阿奇霉素(86.3%)、磺胺二甲嘧啶(84.3%)、万古霉素(49.0%)、环丙沙星(29.4%)、阿莫西林-克拉维酸钾(27.5%)。其中多重耐药有34株,最高可达6重耐药。乌鲁木齐市周边乳源金黄色葡萄球菌的污染较严重,且肠毒素基因携带率较高和耐药严重,需要重视金黄色葡萄球菌的污染和减少抗菌药物的使用。

一起餐馆疑似金黄色葡萄球菌肠毒素所致食源性疾病事件调查

目的:分析并查明一起由金黄色葡萄球菌肠毒素导致的餐馆食源性疾病事件,以期预防此类食品安全事件的发生,为临床治疗提供依据。方法:采用现场流行病学调查方法中的描述性研究方法,按照《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》(GB 4789.10—2016)进行检验,同时检测葡萄球菌肠毒素。结果:此次事件疑似为一起由金黄色葡萄球菌肠毒素污染不明食品引起4人出现腹泻、呕吐等症状的事件。结论:应加强餐饮行业人员卫生培训,餐馆卫生监督管理,避免该类事件再次发生,以保障食品安全。

鄂西北地区金黄色葡萄球菌临床分离株耐药及毒力基因分析

目的了解鄂西北地区医院临床标本中分离的金黄色葡萄球菌的耐药及毒力基因的携带情况。方法收集2019-2021年十堰市5家医院临床分离的金黄色葡萄球菌142株,采用微量肉汤稀释法检测耐药性,采用PCR法检测sea等9种肠毒素基因及mecA、杀白细胞素(PVL)毒力基因。结果142株金黄色葡萄球菌中检出44株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),检出率为30.99%(44/142)。MRSA对红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、四环素、庆大霉素的耐药率均高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),差异均有统计学意义(P<0.05)。肠毒素基因检出率为70.42%(100/142),其中经典肠毒素基因(sea~see)和新型肠毒素基因(seg~sej)检出率分别为47.18%(67/142)、42.25%(60/142);PVL毒力基因检出率为13.38%(19/142),其中MSSA和MRSA的检出率分别为9.18%(9/98)和22.73%(10/44),差异有统计学意义(P<0.05)。结论临床分离的金黄色葡萄球菌肠毒素及PVL基因检出率较高,在临床诊疗中应做好医院感染控制,及时采取有效的隔离措施并适时加强对PVL基因的监测。

金黄色葡萄球菌肠毒素中毒的免疫治疗策略

金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins,SEs)是由金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)分泌的一类具有呕吐活性的细菌外毒素,可引起严重的炎症反应和食物中毒。SEs具有超抗原活性,可与T细胞受体的可变区和MHC Ⅱ类分子形成三元复合物(TCR-SEs-MHC Ⅱ),直接刺激T淋巴细胞大量产生肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-2、IL-6和γ干扰素(interferon γ,IFN-γ)等细胞因子,从而导致中毒性休克综合征(toxicshocksyndrome,TSS)。在临床常见的SEs中,肠毒素A(staphylococcalenterotoxin A,SEA)和肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)是出现频率最高、毒性最大、危害最严重的两种。目前尚没有针对SEs中毒治疗策略的综述性研究。本文首先概述了SEs的分类、结构及毒性作用,重点围绕SEA和SEB,分析了TCR-SEs-MHC II类分子相互作用位点,最后总结了针对SEs中毒的主动免疫疗法和被动免疫疗法,本文为SEs的深入研究提供了必要信息。

食源性金黄色葡萄球菌分离株肠毒素及耐药性分析

目的:对92株食源性金黄色葡萄球菌分离株进行肠毒素及耐药性检测,以了解其致病性和耐药性。方法:采用酶联免疫吸附试验测定食源性金黄色葡萄球菌分离株肠毒素携带情况,利用VITEK®2 Compact全自动微生物分析系统对菌株进行药敏试验,采用聚合酶链式反应对菌株mecA耐药基因进行检测。结果:92株食源性金黄色葡萄球菌分离株肠毒素检出率为5.43%(5株),对青霉素、四环素、红霉素、克林霉素4种抗生素的耐药率较高,分别为100%、30.43%、19.57%、14.13%,检出3株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。结论:食源性金黄色葡萄球菌分离株产生的肠毒素不容忽视,多重耐药及MRSA的检出提示耐药形势比较严峻,加强对食源性金黄色葡萄球菌致病性和耐药性的监测,对降低食品安全风险有重要意义。

山东省部分地区奶牛金黄色葡萄球菌耐药性及毒力基因检测

在全球抗生素耐药性危机下,耐药性金黄色葡萄球菌的出现,严重威胁着公众健康。为调查山东省奶牛场金黄色葡萄球菌流行情况及耐药性和毒力基因携带情况,2022—2023年采集济南、德州、泰安和临沂4个地区奶牛养殖场乳腺炎病牛奶样520份进行金黄色葡萄球菌分离鉴定,对分离得到的金黄色葡萄球菌分别采用药物敏感试验和PCR检测其耐药性及相关耐药和毒力基因。结果显示:共分离到57株金黄色葡萄球菌,分离率为11.0%(57/520),其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分离率为1.3%(7/520);分离的金黄色葡萄球菌对青霉素(93.0%,53/57)和复方新诺明(80.7%,46/57)耐药率较高,对万古霉素、多西环素、利奈唑胺最敏感,而对其他抗生素均产生了不同程度的耐药性,其中多重耐药率为45.6%(26/57)。从2株MRSA分离菌中检测到mecA耐药基因,未检测到mecC基因;检测到seb、sec、sed 3种毒力基因。结果表明,山东省4个地区奶牛场中普遍存在致病性金黄色葡萄球菌流行,且产生了一定的耐药性,对公共卫生具有潜在威胁,需要加强奶牛场乳腺炎防控。

牛奶模拟样本中金黄色葡萄球菌肠毒素C含量的两种发光检测方法比较

目的 比较均相光激化学发光检测法(AlphaLISA)和磁微粒化学发光检测法(MP-CLIA)在检测牛奶模拟样本中金黄色葡萄球菌肠毒素C(SEC)含量的敏感性和精确性。方法 以山羊抗SEC多克隆抗体偶联受体微球、生物素标记的SEC单克隆抗体和链霉亲和素偶联的供体微球,构建AlphaLISA检测体系;以山羊抗SEC多克隆抗体偶联碱性磷酸酶、生物素标记的SEC单克隆抗体和链霉亲和素偶联磁珠,构建MP-CLIA检测体系。结果 AlphaLISA检测牛奶模拟样本中SEC含量的灵敏度为4.04 ng/L,变异系数(CV)为1.98%~9.82%;MP-CLIA的灵敏度为108.19 ng/L,CV为4.63%~20.40%。结论 与MP-CLIA相比,AlphaLISA检测牛奶模拟样本中SEC含量的敏感性和精确性更高。

金黄色葡萄球菌肠毒素C2的纯化与活性研究

目的:研究金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)的活性与病情的关系,进一步探索其在金黄色葡萄球菌感染中的作用机制。方法:选取2021年1月—2022年12月东莞市滨海湾中心医院收治的肠道感染患者30例作为研究对象。使用传统的培养方法从粪便样本中分离出金黄色葡萄球菌。使用离心技术获得细菌培养物,进一步纯化金黄色葡萄球菌SEC2。结果:金黄色葡萄球菌SEC2在经过一系列纯化步骤后,获得了高纯度的样品。从发酵液到超滤浓缩再到硫酸铵盐析、离子交换以及分子筛层析的过程中,目的蛋白质的含量逐渐减少,但蛋白质的纯度逐步提高。结论:金黄色葡萄球菌SEC2是金黄色葡萄球菌感染中的病原因子。通过成功纯化高纯度的SEC2样品,证实其具有明确的质量和结构特征,进一步证实了SEC2在金黄色葡萄球菌感染中的重要性。

金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)多克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)多克隆抗体并用金黄色葡萄球菌野生株对其进行验证,为进一步研究SEA在金黄色葡萄球菌致病机制中的作用提供基础。方法:PCR方法扩增肠毒素A基因(sea),构建原核表达载体p ET 30 a/sea,经PCR方法和测序鉴定后,阳性表达载体转化大肠杆菌表达宿主菌DH 5α,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western Bloting,WB)分析鉴定。蛋白经纯化后作为免疫原免疫新西兰大白兔,得到抗血清并纯化,采用sea基因阳性的金黄色葡萄球菌野生株S8和S 23株的菌体蛋白进行鉴定。结果:p ET 30 a/sea重组表达载体构建成功,目的蛋白在构建的原核表达系统中可实现高表达,纯化后得到高纯度的SEA蛋白,经临床分离金黄色葡萄球菌S 8和S 23株菌体蛋白验证,证实得到理想的兔抗SEA多克隆抗体。结论:通过基因重组技术,金黄色葡萄球菌SEA蛋白在构建的原核表达系统中得以成功表达,并获得了高纯度的目的蛋白及其多克隆抗体,为进一步研究金黄色葡萄球菌肠毒素A蛋白的生物学活性及抗体的保护作用奠定了基础。

金黄色葡萄球菌肠毒素在食源性微生物中的研究进展

由细菌污染引起的食源性疾病依然是影响人类公共健康和食品安全的最大问题之一。其中,金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌,引起许多严重感染。金黄色葡萄球菌属于革兰氏阳性球菌,广泛分布于自然界,是引起化脓性疾病的重要病原菌,也是引起食品污染和细菌性食物中毒的一种重要细菌。食品受金黄色葡萄球菌污染后,不仅会腐败变质,而且部分菌株产生金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal enterotoxins,SEs)而引起食物中毒,由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的首位。所以,对SEs的研究以及快速、精确的检测和筛查,成为关键环节。本文拟对金黄色葡萄球菌肠毒素生物学性状、致病性、检验方法等方面的研究进展进行综述。当然,对金黄色葡萄球菌及其主要致病因子肠毒素的研究有待进一步深入与发展。

食物中毒样品中金黄色葡萄球菌及肠毒素检测

[目的]对3个可疑食物中毒样品进行金黄色葡萄球菌及肠毒素检测。[方法]按照GB/T4789.10-2003进行金黄色葡萄球菌检测,同时设计4对引物,分别扩增金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc基因)和相关肠毒素基因(SEA、SEB、SECs),建立一种快速检测金葡菌和肠毒素的方法。[结果]3个样品通过增菌接种,均检出有完全溶血环、G+葡萄球菌,血浆凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌;Baird-Parker直接计数菌落结果分别为:9.6×107cfu/g、1.5×105cfu/g、1.7×108cfu/g;PCR检测3个样品均扩增出了金黄色葡萄球菌nuc基因(279bp)和肠毒素A(SEA)基因(288bp)。[结论]3个样品中均检出含有葡萄球菌肠毒素A的金黄色葡萄球菌,是引起该次食物中毒的主要原因。

金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因的调查分析

目的检测临床分离的金黄色葡萄球菌(SA)肠毒素基因,了解肠毒素基因的携带情况与SA耐药的关系。方法采用聚合酶链反应检测SA mecA基因和肠毒素基因,了解肠毒素基因在SA中分布的状况,并对其进行耐药性分析。结果 67株甲氧西林耐药的SA(MRSA)和57株甲氧西林敏感的SA(MSSA)肠毒素基因携带率(100%vs 83.5%)无明显差异(χ2=0.203,P>0.05)。肠毒素基因检出率为93.5%(116株),其中SEA、SEB、SEC、SED和SEF的检出率分别为90.5%、6.9%、61.3%、5.2%和25.9%,未检测出SEE基因。同时检出2种及2种以上的肠毒素基因的菌株有78株(67.2%),以携带SEA+SEC、SEA+SEF和SEA+SEC+SEF基因为主,检出率分别为33.6%、7.8%和13.8%。与携带一种肠毒素基因的菌株耐药率相比,携带多种肠毒素基因的菌株耐药率呈上升趋势,其中携带SEA+SEC+SEF的菌株对复方新诺明的耐药率为75.0%,高于单独携带SEA(28.6%)、SEA+SEC(38.7%)的耐药率,具有统计学差异(P<0.05)。携带SEA+SEC+SEF、SEA+SEF、SEA的菌株对阿米卡星耐药率分别为75.0%、77.0%和21.5%,前两者与携带SEA的菌株相比有显著差异(P<0.05)。结论临床分离的SA中携带多种肠毒素基因的菌株在耐药率上高于只携带一种肠毒素基因的菌株,提示肠毒素在SA耐药中起重要作用。

食源性金黄色葡萄球菌肠毒素及其检测方法

金黄色葡萄球菌是一种重要的食源性致病菌,在自然界中广泛分布,其引起的食物中毒是世界性的公共卫生问题。金黄色葡萄球菌肠毒素是引起金黄色葡萄球菌食物中毒的主要致病因子。目前共发现22种金黄色葡萄球菌肠毒素或类肠毒素(SEA-SEE、SEG-SET、SElU、SElU_2和SElV),其中具有催吐活性的被定义为肠毒素,没有催吐活性或者尚待验证的被定义为类肠毒素(SEl)。传统肠毒素SEA^SEE被报道是引起金黄色葡萄球菌食物中毒的主要肠毒素类型,但是大多数新型肠毒素或类肠毒素与食物中毒的关系还没有被真正认识。本文对近几年关于金黄色葡萄球菌肠毒素与食物中毒的关系、肠毒素的表达调控以及肠毒素检测方法的研究进展进行了总结,以期更好地了解金黄色葡萄球菌新型肠毒素致病性,为今后金黄色葡萄球菌食物中毒的预防和控制提供依据。

荧光定量PCR检测牛乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因方法的建立

为建立检测牛乳中金黄色葡萄球菌(S.aureus)肠毒素A基因(SEA)定性定量的检测方法,本研究针对S.aureus SEA基因片段设计1对引物,将构建的重组质粒作为阳性对照,建立了S.aureus SEA DNA的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法。结果显示,特异性产物Tm值为78.2℃～78.5℃,最低可检测到49.5 fg/μL(16.5拷贝)的阳性质粒。标准曲线的相关系数为0.99。与其他常见的产SEB的S.aureus、产SEC的S.aureus、无乳链球菌、大肠杆菌、嗜热链球菌、伤寒沙门氏菌、大肠杆菌DH5α及JM109均无交叉反应。该检测方法具有较好的特异性和敏感性,为牛乳中S.aureus的快速检测提供了新的技术手段。

RT-PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素A基因

金黄色葡萄球菌是引起细菌性食物中毒的重要病源菌之一,尤其是肠毒素。国内外由金黄色葡萄球菌肠毒素引发的食物中毒屡屡发生。目前,国内检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素仍采用传统的方法,其操作繁琐、检测时间较长,通常需要3-5 d才能完成,且灵敏度较低。本研究缩短食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测时间,针对PCR检测的灵敏性、特异性,建立了检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法,为检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素提供了技术支持。分别采用TRIZol法和热酚法提取金黄色葡萄球菌总RNA并进行比较研究,在此基础上反转录获得cDNA,用特异引物对sea基因进行扩增,并优化PCR反应条件,获得理想的sea基因阳性扩增条带。结果表明,热酚法在总RNA提取方面优于TRIZol法,改进PCR反应时间和循环次数,最终初步建立RT-PCR检测金黄色葡萄球菌A基因的方法。